羟基喜树碱纳米晶体抗肿瘤作用及其机制评价

目的:观察羟基喜树碱纳米晶体(hydroxycamptothecine nanocrystals,HCPT-NCs)与羟基喜树碱注射液(hydroxycamp-tothecine injection,HCPT-I)比较的体外抗肿瘤作用并作出评价。方法:应用MTT法检测HCPT-NCs对肝癌细胞SMMC-7721的增殖抑制作用;流式细胞术分析细胞凋亡率,RT-PCR方法检测survivin基因表达的变化。结果:HCPT-NCs与HCPT-I相比,对SMMC-7721细胞的抑制作用,有较明显差异的剂量和时间依赖性,在促进SMMC-7721细胞凋亡和下调survivin表达方面亦存在显著性差异(P0.05)。结论:HCPT制成纳米晶体后提高了对SMMC-7721肿瘤细胞的抑制和杀伤作用。     

白英乙醇提取物诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡及其对凋亡相关基因表达的影响

目的:探讨白英乙醇提取物对人肝癌SMMC-7721细胞凋亡及凋亡相关基因survivin和caspase-3表达的影响。方法:用MTT法检测细胞增殖抑制率,TUNEL法检测细胞凋亡率,半定量RT-PCR检测survivin和caspase-3 mRNA表达。结果:与正常对照组相比,白英提取物各浓度组细胞抑制率显著上升(P<0.001),细胞凋亡率明显升高(P<0.01),Caspase-3 mRNA表达显著上升(P<0.05或P<0.01),Survivin mRNA表达显著下降(P<0.05或P<0.01)。结论:白英乙醇提取物通过上调caspase-3和下调survivin基因表达,诱导细胞凋亡,从而抑制SMMC-7721细胞增殖。     

熊果酸诱导人肝癌SMMC-7721细胞株凋亡机制的研究

目的:研究熊果酸(ursolic acid,UA)对人肝癌SMMC-7721细胞增殖抑制作用及诱导凋亡的相关机制。方法:MTT法测定UA对SMMC-7721细胞的生长抑制作用;Wright-Giemasa染色和Hoechst33258荧光染色法观察细胞的形态学变化;流式细胞仪检测细胞的凋亡率;RT-PCR检测细胞凋亡相关基因p53和Fas的表达。结果:UA对SMMC-7721细胞生长有明显的生长抑制作用,呈明显的时间-效应关系和浓度-效应关系,24 h的半数抑制浓度(IC50)为45.72μmol/L。Wright-Giemasa染色、Hoechst荧光染色证实了UA可以通过凋亡途径诱导SMMC-7721细胞发生死亡。流式细胞仪结果进一步证实了UA可以诱导SMMC-7721细胞凋亡,而且凋亡率增加呈一定的量效和时效关系。RT-PCR结果显示UA能够上调p53和Fas基因的表达。结论:UA在体外对SMMC-7721细胞具有抗增殖和诱导凋亡的作用。其机制可能与p53和Fas基因的变化有关。     

四君子汤合膈下逐瘀汤对人肝癌细胞株HepG2和SMMC体外作用的实验研究

目的:观察四君子汤合膈下逐瘀汤对人肝癌细胞Hep G2和SMMC-7721的影响。方法:倒置显微镜观察中药组、阴性对照组、氟尿嘧啶组中He PG2及SMMC-7721细胞生长情况。采用MTT法检测3组细胞生长的抑制率,流式细胞仪(FCM)检测人肝癌Hep G2和SMMC-7721细胞凋亡情况及细胞周期。结果:倒置显微镜下观察阳性对照组及中药组中人肝癌Hep G2和SMMC-7721细胞生长明显受抑制,MTT法测定细胞增殖抑制率。中药对Hep G2和SMMC-7721细胞的增殖均有明显的抑制作用,与阴性对照组比较差异有统计学意义(P0.05)。FCM检测中药对Hep G2、SMMC-7721细胞凋亡具有一定的诱导作用,与对照组比较差异有统计学意义(P0.05)。结论:四君子汤合膈下逐瘀汤具有抑制人肝癌Hep G2和SMMC-7721细胞增殖,促进其凋亡的作用。     

珍珠梅黄酮纳米粒通过抑制Akt/mTOR信号通路诱导肝癌细胞凋亡的研究

目的探讨珍珠梅黄酮纳米粒对人肝癌SMMC-7721细胞体外生长的抑制作用及其作用机制。方法不同浓度的珍珠梅黄酮纳米粒(40,80,120μmol·L-1)处理SMMC-7721细胞后,采用MTT法检测珍珠梅黄酮纳米粒对SMMC-7721细胞增殖的抑制作用;Hoechst染色法观察SMMC-7721细胞凋亡的形态学变化;利用Annexin/PI双标记法检测细胞凋亡率;Western blot检测SMMC-7721细胞中Akt,m TOR,p-Akt,p-m TOR及active-caspase3蛋白表达。结果珍珠梅黄酮纳米粒能显著抑制SMMC-7721细胞增殖,诱导细胞凋亡,具有剂量依赖性;显著降低p-Akt和p-m TOR蛋白表达。结论珍珠梅黄酮纳米粒具有抑制人肝癌SMMC-7721细胞增殖及诱导凋亡的作用,其作用机制可能与抑制Akt/m TOR信号通路有关。     

白藜芦醇联合姜黄素对SMMC-7721肝癌细胞作用

目的:观察白藜芦醇联合姜黄素对体外人肝癌细胞SMMC-7721增殖和凋亡的影响及相关信号通路.方法:不同浓度白藜芦醇、姜黄素及两药联合干预SMMC-7721细胞,MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡、Hoechst 33258染色检测细胞凋亡形态变化,比色法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)-3,caspase-8,caspase-9酶活性,Western blot法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶切割底物(PARP).结果:与对照组相比,白藜芦醇、姜黄素单独或联合作用SMMC-7721细胞均可抑制SMMC-7721细胞增殖,两药联合后抑制作用更显著.白藜芦醇、姜黄素联合较单独用药可增强SMMC-7721细胞凋亡,呈现凋亡形态改变,白藜芦醇、姜黄素及联合组细胞凋亡率分别为( 17.39±1.41)％,(14.96±2.23)％,(25.36±2.68)％;同时提高SMMC-7721细胞caspase-3,caspase-8及caspase-9活性,促使PARP蛋白剪辑.结论:白藜芦醇、姜黄素联合使用可增强对人肝癌细胞SMMC-7721的抗癌作用,并可能与caspase-8,caspase-9/caspase-3/PA RP信号通路介导细胞凋亡相关.     

埃克特注射液体内外抗肝癌作用研究

目的:观察埃克特注射液对人肝癌细胞SMMC-7721细胞及小鼠移植性肿瘤H22的抑制作用。方法:用MTT法、细胞生长曲线实验研究不同浓度的埃克特注射液作用48h对SMMC-7721细胞的生长抑制作用,Hoechst 33258染色观察细胞凋亡,以了解该药物对肝癌细胞的体外增殖作用;同时建立小鼠H22肝癌移植性实体瘤模型研究埃克特注射液对肝癌的体内抑制作用。结果:埃克特注射液对SMMC-7721具有抑制作用,呈明显的量效关系,IC50为2.325mg/L;生长曲线提示埃克特注射液对SMMC-7721细胞的抑制作用呈明显时效和量效关系;Hoechst 33258染色后,给药组出现明显的细胞凋亡形态学变化;腹腔注射0.5、1、2mg/kg埃克特注射液对小鼠移植性肿瘤H22的抑制率分别为34.37%、42.36%、57.99%,呈剂量依赖性。结论:埃克特注射液对人肝癌细胞SMMC-7721细胞具有明显体外抗增殖作用,对小鼠移植性肿瘤H22有一定的抑制作用。     

贝壳杉烷二萜单体抗肝癌作用的体外实验研究

目的:研究一种圆滑番荔枝贝壳杉烷二萜单体化合物对人肝癌细胞SMMC-7721生长的抑制作用及其作用机制。方法:以MTT法检测SMMC-7721 细胞经圆滑番荔枝贝壳杉烷二萜单体作用后的活力,用荧光显微镜、扫描电镜观察其形态变化,用流式细胞仪分析细胞周期的变化及计算凋亡率。结果:圆滑番荔枝贝壳杉烷二萜单体对SMMC-7721细胞的抑制作用与浓度呈线性相关,72 h IC50为47.1μmol/L,其抑制作用呈时间依赖性,可使细胞周期阻滞于G0~G1 期,细胞凋亡率为24.98%。结论:圆滑番荔枝中贝壳杉烷二萜单体化合物对人肝癌细胞株SMMC-7721有显著的抑制作用,可诱导SMMC-7721癌细胞凋亡。     

大黄素对肝癌细胞SMMC-7721抑制作用及P53、C-myc蛋白的表达

目的 研究大黄素对肝癌细胞 SMMC-7721 的生长抑制作用和 P53、C-myc 蛋白的表达。方法 应用 MTT法观察大黄素、5-FU 对 SMMC-7721 的生长抑制作用,免疫组化法染色(SP 法)测定细胞凋亡时 P53、C-myc 蛋白的表达情况。结果 大黄素对肝癌细胞 SMMC-7721 有明显的生长抑制作用,其 IC50为 21.6 mol/L。大黄素对 SMMC-7721的抑制作用优于 5-FU(P<0.05);大黄素作用于细胞后,P53、C-myc 蛋白均有一定程度下调,而 C-myc 下调较 P53明显。结论 大黄素对 SMMC-7721 有明显的生长抑制作用,作用于 SMMC-7721 后 P53、C-myc 蛋白的表达均有下调。     

红花多糖对人肝癌SMMC-7721细胞增殖的抑制作用

目的:观察红花多糖(Safflower polysaccharide,SPS)对SMMC-7721肝癌细胞增殖的抑制作用。方法:不同浓度SPS处理体外培养的SMMC-7721细胞株,采用MTT法测定SPS对SMMC-7721细胞增殖的影响;倒置显微镜观察细胞形态学变化;吖啶橙(AO)染色荧光显微镜观测以及Annexin-V/PI双染流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况。结果:MTT法检测结果显示SPS对人肝癌SMMC-7721细胞体外增殖具有明显的抑制作用,该抑制作用呈明显的时间和剂量依赖性(P<0.05或P<0.01)。光镜下可见SPS组贴壁细胞数明显减少,细胞变小、变圆,折光性差,贴壁不牢,悬浮细胞增多。AO染色荧光显微镜下观察,24h部分细胞出现胞质浓缩,体积缩小,核固缩,染色增强,荧光更为明亮,形成致密浓缩的绿色荧光等;48h和72h部分细胞可见细胞核固缩为新月状。流式细胞术结果显示细胞凋亡率随药物浓度增加亦呈增长趋势。结论:SPS能显著抑制人肝癌细胞SMMC-7721生长且呈明显的量效和时效关系。SPS可诱导肝癌SMMC-7721细胞凋亡,具有一定的剂量依赖性。     

波罗蜜属药用植物单体化合物ACR-2 ACR-3抗肿瘤作用的实验研究

目的:采用Alamar blue法及MTT法观察波罗蜜属药用植物单体化合物(ACR-2、ACR-3)对人肝癌细胞(SMMC-7721)和胃腺癌细胞(SGC-7901)增殖的影响。方法:用Alamar blue法和传统MTT法检测ACR-2、ACR-3对细胞SMMC-7721、SGC-7901的增殖抑制作用。结果:ACR-2作用于细胞SMMC-7721和细胞SGC-7901的IC50(mmol/L)分别为0.013和0.059;ACR-3作用于细胞SMMC-7721和细胞SGC-7901的IC50(mmol/L)分别为0.029和0.169。其中ACR-2、ACR-3对细胞SMMC-7721的增殖抑制作用最强,对细胞SGC-7901也表现出较强的增殖抑制作用。时量曲线检测结果显示:ACR-2、ACR-3对细胞SMMC-7721、SGC-7901的增殖抑制作用具有时间和剂量依赖性,其增殖抑制作用以48h时最强。结论:波罗蜜属药用植物单体化合物ACR-2、ACR-3对人肝癌细胞SMMC-7721、胃腺癌细胞SGC-7901有明显的增殖抑制作用,且有时间和剂量依赖性。     

薏苡仁脂肪酸类成分对人肝癌细胞株SMMC-7721细胞周期及细胞凋亡的影响

目的研究薏苡仁脂肪酸类成分对人肝癌细胞株SMMC-7721增值的影响及作用机制初探。方法采用MTT法考察不同给药剂量,不同给药时间下薏苡仁脂肪酸类成分对SMMC-7721细胞的增值抑制作用及其与时间、剂量的关系;碘化丙啶PI单染色法检测薏苡仁脂肪酸作用后,SMMC-7721细胞周期DNA水平变化;Annexin V-EGFP/PI双染法研究薏苡仁脂肪酸对SMMC-7721细胞凋亡率的影响。结果不同质量浓度的薏苡仁脂肪酸作用SMMC-7721细胞24、48、72 h后,均呈现出较好的细胞增殖抑制作用,且具有明显的时间-剂量-效应关系,差异有统计学意义(P<0.05);不同质量浓度的薏苡仁脂肪酸处理SMMC-7721细胞22 h后可显著增加肝癌细胞凋亡率,(P<0.001);作用36 h后,可显著降低G2/M期细胞比例,(P<0.001)。结论薏苡仁脂肪酸对人肝癌SMMC-7721细胞具有明显的抑制作用并可诱导其凋亡,其作用是通过抑制G2/M细胞周期实现的。     

贝母素乙诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的分子机制研究

目的:探讨贝母素乙对人肝癌细胞SMMC-7721凋亡的影响及其分子机制。方法:采用四甲基偶氮唑盐(methyl thiazolyl tetrazdium,MTT)法检测贝母素乙对人肝癌细胞SMMC-7721的抑制率;采用荧光染色和流式细胞术研究贝母素乙对细胞凋亡的影响;通过电子显微镜观察贝母素乙处理的人肝癌SMMC-7721细胞超微结构变化情况;Western blot方法检测贝母素乙处理后细胞凋亡相关蛋白的表达。结果:贝母素乙对肝癌SMMC-7721细胞的生长有显著抑制作用,24 h半数致死剂量(IC_(50))为0.625μg/mL。SMMC-7721细胞经不同浓度贝母素乙处理后早期凋亡和晚期凋亡细胞数量均升高。随着药物浓度的增加,细胞线粒体膜电位依次增大,SMMC-7721细胞的Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9的活性依次升高;经贝母素乙作用后Bcl-2的蛋白表达降低,Bax蛋白表达升高;procapas-3和procapas-8的蛋白表达降低,Caspas-3和Caspas-9的表达升高。结论:贝母素乙可通过线粒体途径诱导肝癌SMMC-7721细胞凋亡。     

镰形棘豆诱导人肝癌细胞SMMC-7721凋亡及初步的机制研究

目的:观察镰形棘豆总黄酮对人肝癌细胞SMMC-7721增殖的影响及初步的机制探讨.方法:不同剂量的镰形棘豆总黄酮处理SMMC-7721细胞24 h后,MTT法观察总黄酮对细胞增殖的抑制作用;应用光学和荧光显微镜观察总黄酮对SMMC-7721细胞形态的影响;应用流式细胞仪检测SMMC-7721细胞周期的变化;Annexin V-FITC/PI双染法检测总黄酮对SMMC-7721细胞凋亡的影响.结果:MTT实验结果表明,镰形棘豆总黄酮抑制SMMC-7721细胞的增殖,并呈现出一定的浓度依赖性.Hoechst33258染色结果显示,经镰形棘豆总黄酮处理的细胞出现了多种凋亡特征和超微结构的变化.镰形棘豆总黄酮作用SMMC-7721细胞后可观察到G1期细胞明显增多,凋亡细胞的比例升高,并且呈浓度依赖性.结论:镰形棘豆总黄酮抑制SMMC-7721细胞的增殖,与其诱导细胞周期阻滞和使细胞形态发生变化而引起细胞凋亡的活性有关.值得进一步深入研究和阐述镰形棘豆抗肿瘤的作用机制.     

羟基喜树碱对人胰腺癌细胞PANC-1生长的抑制作用

目的 研究羟基喜树碱对人胰腺癌PANC-1细胞生长的抑制作用及其作用机制.方法 MTT法测定羟基喜树碱对PANC-1细胞生长的抑制作用;流式细胞仪检测羟基喜树碱对PANC-1细胞周期、凋亡率和Caspase-3活性的影响.结果 羟基喜树碱能抑制PANC-1细胞生长,并呈剂量依赖关系,其半数抑制浓度(IC50)为51.52 μg/ml;流式细胞仪检测显示低浓度羟基喜树碱处理后可将细胞先后阻滞于S 期和G2/M 期,高浓度的羟基喜树碱则诱导细胞凋亡;细胞凋亡率和Caspase-3活性随药物浓度升高和处理时间延长而逐渐递增.结论 羟基喜树碱能抑制人胰腺癌PANC-1细胞的生长,其抗肿瘤作用机制与阻断细胞周期、诱导细胞凋亡和激活Caspase-3活性有关.     

京大戟提取物pekinenin D通过PI3K/AKT/mTOR信号通路诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡

目的:通过观察京大戟提取物pekinenin D对肝癌SMMC-7721细胞体外生长的抑制作用,初步探讨其诱导凋亡的可能机制。方法:采用MTT法分析不同剂量的pekinenin D对体外培养SMMC-7721细胞增殖的影响;原位末端标记法(TUNEL)和Annexin V/PI双染法检测对细胞凋亡的作用;应用流式细胞术分析对细胞周期的影响;采用RT-PCR检测pekinenin D对PI3K/AKT/m TOR mRNA的影响;应用生物膜干涉技术(BLI)分析pekinenin D与PI3K启动子是否存在相互作用。结果:MTT结果显示3.988ug/ml的pekinenin D可显著抑制SMMC-7721细胞的增殖,抑制率过半,并且呈剂量依赖性。Annexin V/PI双染法结果显示,随着pekinenin D剂量的增加,SMMC-7721细胞的凋亡率明显增加,与对照组比较,差异具有明显统计学意义。TUNEL法检测结果表明,0.249、0.997、3.988 ug/ml的pekinenin D作用于SMMC-7721细胞后均可诱导肝癌细胞凋亡,凋亡指数(AI)随着药物浓度的升高明显增加。流式细胞术分析显示,0.249、0.997、3.988 ug/ml的pekinenin D均可使细胞被阻滞于S期,RT-PCR显示pekinenin D显著下调SMMC-7721细胞中PI3K,AKT,m TOR的mRNA表达量。采用BLI技术分析发现pekinenin D与PI3K的启动子存在一定亲和力。结论:pekinenin D具有抑制肝癌细胞增殖及诱导凋亡的作用,显著下调SMMC-7721细胞中PI3K,AKT,m TOR的mRNA表达,其机制可能是与PI3K的启动子相结合从而抑制PI3K/AKT/m TOR信号通路有关。     

PUMA在EGCG调节肝癌细胞生长中的作用

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对人肝癌细胞株SMMC-7721生长的影响及其可能作用机制。方法采用不同浓度的EGCG处理SMMC-7721细胞,以四唑氮蓝还原法(MTT)观察处理后细胞的生长情况,流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡情况,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测抑癌基因PUMA mRNA表达水平的变化,Western-Blot检测PUMA蛋白水平的表达。结果 EGCG处理后SMMC-7721细胞生长明显抑制,并且呈现时间、剂量依赖性,凋亡细胞比例明显上升。抑癌基因PUMA的mRNA水平和蛋白表达水平随着EGCG浓度的增加而升高。结论 EGCG可以明显抑制人肝癌SMMC-7721细胞的生长,诱导其凋亡;其可能机制为上调抑癌基因PUMA的表达水平,从而促进细胞凋亡。     

熊果酸抑制人肝癌SMMC-7721细胞生长及凋亡的实验研究

目的:探讨熊果酸对人肝癌细胞株SMMC-7721的抑制作用.方法:将不同浓度的熊果酸分别与人肝癌细胞SMMC-7721共同培养24,72 h后,采用中性红染色法测定吸光度(A),评定熊果酸对肝癌细胞株的增殖抑制作用;流式细胞术测定其对肝癌细胞凋亡及细胞周期的影响.结果:不同浓度熊果酸对SMMC-7721细胞的增殖有明显的抑制作用(P＜0.05或P＜0.01),呈时间和剂量依赖关系;24,72 h的半数抑制浓度(IC50)为12.59,8.32 mg·L-1.流式细胞仪检测结果表明,熊果酸12.5 mg·L-1对肝癌SMMC-7721细胞凋亡率14.07％,凋亡率随药物浓度的增加而上升;SMMC-7721细胞阻滞S期,作用与药物剂量呈正相关.结论:熊果酸对肝癌细胞株SMMC-7721增殖有明显的抑制作用,抗肿瘤作用机制可能与诱导细胞凋亡及细胞周期阻滞于S期有关.     

乳香挥发油抑制人肝癌SMMC-7721细胞株增殖及诱导凋亡的作用

目的探讨乳香挥发油体外抑制人肝癌SMMC-7721细胞株增殖及诱导凋亡的作用。方法使用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察乳香挥发油对SMMC-7721的增殖抑制作用;通过吖啶橙染色,观察SMMC-7721的形态学变化;使用琼脂糖凝胶电泳法检测乳香挥发油对细胞DNA降解的影响;利用流式细胞术分析乳香挥发油诱导SMMC-7721凋亡的凋亡率及对细胞周期的影响;应用间接免疫荧光法观察凋亡调控基因bax和bcl-2蛋白的表达变化。结果乳香挥发油浓度为0.7、0.07、0.007、0.0007、0.00007mg.mL-1作用24h时,能抑制SMMC-7721的生长,并呈浓度依赖性。在浓度为0.07mg.mL-1时,作用48h或72h,电泳结果显示了DNA梯状条带,流式细胞仪检测到凋亡峰,且细胞被阻滞于G1期。间接免疫荧光法的结果表明,促凋亡蛋白bax的表达增强,抗凋亡蛋白bcl-2的表达无明显变化。结论乳香挥发油能抑制肝癌细胞株SMMC-7721的增殖,并可能通过上调线粒体内bax/bcl-2的表达比例诱导SMMC-7721细胞的凋亡,而且其诱导的凋亡具有细胞周期依赖性。     

健脾化瘀方对人肝癌细胞SMMC-7721增殖和凋亡的影响

[目的]探讨健脾化瘀方对人肝癌细胞系SMMC-7721的抑制率及药物浓度和作用时间对细胞抑制率的影响,以及IC_(50)药物浓度下对SMMC-7721凋亡的影响。[方法]采用MTT法,观察不同浓度的健脾化瘀方对人肝癌细胞株SMMC-7721增殖的影响及与药物作用时间之间的关系。用AnnexinV/PI双染色法,用流式细胞仪检测健脾化瘀方对肝癌细胞株SMMC-7721凋亡的影响。[结果]健脾化瘀方浓度在5mg/mL时,对SMMC-7721细胞的增殖有明显的抑制作用,呈剂量依赖和时间依赖效应关系。健脾化瘀方对人肝癌细胞SMMC-7721作用24h后,肝癌细胞凋亡率升高,并有一定的浓度依赖性。[结论]健脾化瘀方有抑制SMMC-7721细胞的增殖,能诱导人肝癌细胞株SMMC-7721的凋亡。