紫草素对人肝癌HepG2细胞生长的影响及机制研究

目的:研究紫草素对人肝癌HepG2细胞生长的影响并探讨其可能的作用机制。方法:以不同浓度紫草素(0.3、0.5、0.7μg/ml)和顺铂(40μg/ml)分别干预对数生长期人肝癌HepG2细胞;采用MTT比色法测定细胞增值抑制率,通过流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡状况,采用RT-PCR法检测细胞中Bax mRNA、Bcl-2 mRNA表达并计算Bax/Bcl-2比值,采用Western blotting技术检测Caspase-3蛋白表达。结果:经紫草素干预48 h能够显著提高HepG2细胞增殖抑制率,延长细胞周期G_0/G_1期并缩短G_2/M期,提高细胞凋亡率(Apoptosis Index,AI),上调Bax mRNA表达并下调Bcl-2 mRNA表达、提高Bax/Bcl-2表达比值,上调Caspase-3蛋白表达,上述作用均具有一定的剂量依赖性。结论:紫草素能够通过抑制增殖并促进凋亡而对人肝癌HepG2细胞生长起到一定抑制作用,其机制可能与紫草素能够调节细胞周期以及调节凋亡相关基因、蛋白表达有关。     

开口箭皂苷诱导肿瘤细胞凋亡研究

目的:研究开口箭皂苷对肿瘤细胞凋亡的影响,并对其机制进行研究。方法:采用MTT法检测开口箭皂苷对体外培养的肿瘤细胞系HepG2、A549和SGC-7901增殖的影响,利用荧光染色技术及流式细胞术研究开口箭皂苷对HepG2细胞周期和细胞凋亡的影响,利用Western blotting技术检测Bax、Bcl-2、P53蛋白的表达情况。结果:开口箭皂苷对HepG2肝癌细胞具有显著的抑制作用,其24、48及72 h对HepG2细胞的半数抑制浓度(IC50)分别为13.99μg/ml、11.78μg/ml和10.01μg/ml,且呈一定的量效关系和时效关系;对A549肺癌细胞的72h的IC50为23.68μg/ml,而对SGC-7901胃癌细胞的增殖无明显抑制作用。流式细胞仪检测结果显示,HepG2细胞经浓度为10、15和20μg/ml的开口箭皂苷处理24h后,S期细胞的比例分别为28.81%、34.96%、46.57%;凋亡细胞的比例分别为30.06%、30.32%和40.34%。Western blotting结果显示,随着开口箭皂苷浓度的增加,Bax、P53蛋白的表达量增加,而Bcl-2的表达量减少。结论:开口箭皂苷可抑制HepG2和A549细胞的增殖并诱导HepG2细胞凋亡,其机制可能与开口箭皂苷上调P53蛋白表达,从而影响Bax和Bcl-2表达,使细胞阻滞于S期,并最终导致细胞凋亡。     

氯化两面针碱诱导人肝癌细胞HepG2凋亡及机制研究

目的 研究氯化两面针碱(NC)在体外诱导人肝癌细胞HepG2凋亡的作用与机制.方法 通过MTT法测定NC细胞毒作用,光镜及吖啶橙染色观察细胞形态学变化,琼脂糖凝胶电泳法、流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期.结果 NC作用于细胞后,呈浓度依赖性抑制HepG2细胞的生长,作用48 h的半数抑制浓度(IC50)为(3.52±0.23) μmol/L;吖啶橙荧光染色可见细胞出现明显的凋亡形态学改变,琼脂糖凝胶电泳出现典型的DNA lader NC各剂量组(0.75,1.5,3 μmol/L)对细胞周期的影响表现为G2/M期阻滞,作用肝癌HepG2细胞24 h后的凋亡指数分别为(17±1.23)％、(25.2±3.52)％、(35.9±3.19)％,明显高于生理盐水(NS)对照组(0.29±0.1 1)％.结论 NC对HepG2细胞有明显的生长抑制作用,NC抗肿瘤作用的机理可能是:阻滞细胞于G2/M期,诱导肿瘤细胞凋亡.     

紫草素对人肝癌HepG2细胞顺铂增敏作用的研究

目的研究紫草素对人肝癌HepG2细胞顺铂增敏作用并初探其可能的作用机制。方法取对数生长期人肝癌HepG2细胞,设空白对照组、紫草素(0.5μg/ml)组、顺铂(40μg/ml)组和联合(紫草素0.5μg/ml+顺铂40μg/ml)组,均设10个复孔;检测细胞增殖抑制率,细胞周期和细胞凋亡状况,Bax mRNA、bcl-2 mRNA表达,caspase-3蛋白表达。结果与顺铂组比较,联合干预组HepG2细胞增殖抑制率显著升高,细胞周期G_0/G_1期显著延长,细胞凋亡率显著升高,Bax/bcl-2比值显著升高,caspase-3蛋白表达上调。结论紫草素具有提高人肝癌HepG2细胞顺铂敏感性的作用,其机制可能与紫草素阻滞细胞周期及调节凋亡相关基因和蛋白表达有关。     

甜菜碱对HepG2人肝癌细胞周期及凋亡的影响

目的 研究甜菜碱对HepG2人肝癌细胞周期及细胞凋亡的影响.方法 MTT法测定甜菜碱对HepG2的细胞毒作用;PI染色,流式细胞术观察甜菜碱对HepG2人肝癌细胞周期及细胞凋亡的影响.结果 甜菜碱对HepG2细胞的IC50为0.5mol/L;甜菜碱使HepG2细胞G2/M期比例下降;甜菜碱作用于HepG2细胞24h后,3个不同剂量组(0.1、0.2、0.4mol/L)诱导细胞凋亡率分别为(7.5±0.9)%、(11.5±1.1)%、(33.9±1.2)%,48h后凋亡率为(13.4±1.9)%、(20.9±1.4)%、(67.8±1.8)%.结论 甜菜碱可抑制人肝癌细胞HepG2的生长,阻滞细胞进入G2/M期进而诱导细胞凋亡.     

Survivin在槲皮素诱导肝癌细胞SMMC7721凋亡中的调节作用研究

目的研究槲皮素诱导肝癌细胞SMMC7721凋亡,探讨其诱导SMMC7721细胞凋亡与survivin蛋白表达和caspase-3活性的关系。方法采用MTT法检测槲皮素对肝癌SMMC7721细胞生长的抑制作用,Hoechst 33258荧光染色对细胞凋亡进行形态学检测,流式细胞术检测细胞周期变化,免疫细胞化学检测survivin蛋白表达,分光光度法检测caspase-3的活性变化。结果槲皮素抑制肝癌SMMC7721细胞增殖的作用明显,且呈浓度和时间依赖性,槲皮素处理48 h的IC50为84.24μmol.L-1。形态学检测显示出细胞凋亡的特征变化,流式细胞仪检测表明经槲皮素处理,肝癌SMMC7721细胞周期阻滞于G0/G1期,且SMMC7721细胞survivin蛋白表达下降,caspase-3活性升高。结论槲皮素能诱导SMMC7721细胞凋亡,其机制可能是使肝癌SMMC7721细胞周期阻滞于G0/G1期,并下调survivin蛋白的表达,直接激活caspase-3而诱导SMMC7721细胞凋亡。     

糖尿病肾病中医药研究进展

白首乌甙(AK)作用于体外传代培养的KB细胞,应用MTT法证实AK对KB细胞有杀伤作用,且有药物剂量-时间依赖效应;形态学观察可见50μg/ml浓度作用72h可诱导KB细胞出现核固缩等早期凋亡现象,经流式细胞仪测定表明药物作用72h可出现凋亡峰,凋亡百分率为41.9%,并将KB细胞周期阻滞于G0/G1期.结论AK抗肿瘤作用机理可能与诱导肿瘤细胞凋亡有关.     

QHF复方对肝癌细胞增殖的抑制作用及其机制

目的探索QHF复方对肝癌细胞增殖的抑制活性。方法选取人肝癌细胞株SMMC7721为受试对象,分别予以0(正常对照组)、QHF1、QHF2、QHF3、QHF4、QHF5、2.5μg/ml顺铂后培养24h、48h和72h,检测细胞光密度,计算增殖抑制率。以0(正常对照组)、QHF1、QHF2、QHF3、QHF4、QHF5、2.5μg/ml顺铂(阳性对照组)干预细胞72h后,检测细胞周期分布、凋亡率和Bax、Bcl-2基因表达水平。结果与正常对照组相比,QHF复方可显著抑制SMMC7721细胞的增殖,并呈现时间依赖性、剂量依赖性规律;该复方可显著增加受试细胞株G0/G1期、G2/M期细胞分布比例,阻止细胞DNA复制而促进凋亡;RT-PCR结果显示QHF复方可显著上调促凋亡蛋白Bax基因,而显著下调抑制凋亡蛋白Bcl-2基因。结论QHF复方可通过调控细胞周期分布和凋亡信号通路关键基因表达水平而实现对肝癌细胞增殖的显著抑制。     

灵芝孢子粉对HepG2细胞生长增殖和生长周期的影响

目的:观察灵芝孢子粉对人肝癌细胞株HepG2细胞生长增殖和生长周期的影响,并初步探讨其作用机制。方法:采用MTT比色法研究灵芝孢子粉对HepG2细胞生长抑制作用;通过流式细胞仪检测DNA含量,分析细胞周期的分布。结果:MTT实验结果表明高剂量的灵芝孢子粉对HepG2细胞具有直接的抑制作用,并呈剂量和时间依赖性,2500μg/m l的灵芝孢子粉作用于HepG2细胞72h后,对细胞生长的抑制率最高可达51.4%;流式细胞术实验结果表明,灵芝孢子粉浓度为3mg/m l时,可使肿瘤细胞生长G2期减小,浓度为6 mg/m l时,可使HepG2细胞出现明显的凋亡峰。结论:灵芝孢子粉具有直接抑制肿瘤细胞生长的作用,并可作用于细胞周期的G2期,高剂量的灵芝孢子粉还可使肿瘤细胞发生凋亡。     

开口箭皂苷体外抗肿瘤作用的初步实验研究

目的 通过体外细胞培养技术,探讨开口箭皂苷的细胞毒活性及其机制,为进行深层次研究提供依据.方法 MTT比色法检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡.结果 MTT结果显示,开口箭总皂苷、30%皂苷和70%皂苷对Hela和HepG2细胞的抑制作用显著,与阴性对照组相比有非常显著性差异(P<0.005).开口箭总皂苷、30%皂苷和70%皂苷和环磷酰胺对Hela细胞IC50分别为1 372.92,3 138.51,729.72,3 459.08 μg/ml;对HepG2细胞IC50分别为1 221.39,2 657.53,562.70,3 668.51μg/ml.流式细胞仪检测结果显示,开口箭总皂苷、30%总皂苷在浓度为2 500μg/ml时,70%总皂苷和环磷酰胺在浓度为1 250 μg/ml时主要将Hela细胞细胞周期阻滞于S期,且能够诱导肿瘤细胞凋亡.结论 开口箭皂苷对Hela和HepG2细胞较环磷酰胺具有明显的抑制作用,其中对HepG2细胞株较为敏感,且能将Hela细胞细胞周期阻滞于S期从而诱导Hela细胞凋亡.     

番茄红素对人肝癌HepG2细胞生长的影响及其机制

目的:研究番茄红素(Lycopene,LP)对人肝癌Hep G2细胞生长的抑制作用及其机制。方法:体外培养并取对数生长期人肝癌Hep G2细胞,分别给予不同质量浓度LP(5、10、20μg·m L~(-1))和顺铂(40μg·mL~(-1))进行干预,48 h后通过MTT比色法测定细胞增殖抑制率,通过流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡状况,采用Western blotting技术检测Bax、bcl-2、Cleaved Caspase-3蛋白表达。结果:经LP或顺铂干预48 h能够有效提高人肝癌Hep G2细胞增殖抑制率,延长细胞周期G_0/G_1期并缩短G_2/M期,提高细胞凋亡率(Apoptosis Index,AI),上调Bax表达、下调bcl-2表达、提高Bax/bcl-2比值,上调Cleaved Caspase-3蛋白表达,LP上述作用均具有一定的剂量依赖性。结论:LP能够通过抑制细胞增殖并促进其凋亡而对人肝癌Hep G2细胞生长具有一定的抑制作用,其机制可能与LP能够影响细胞周期进程并调节凋亡相关基因蛋白表达有关。     

吴茱萸次碱对三种肿瘤细胞体外增殖抑制作用的研究

目的:探讨吴茱萸次碱的体外抗肿瘤活性。方法:采用MTT法检测了不同浓度的吴茱萸次碱在不同的时间点对S180肉瘤细胞、H22肝癌细胞、人源Hep G2肝癌细胞的抑制情况。结果:吴茱萸次碱在浓度为64、32、16、8、4μg/ml时,对S180肉瘤细胞、H22肝癌细胞、人源Hep G2肝癌细胞均具有明显的抑制作用,随着药物浓度增加,抑制率逐渐增大,与阴性对照组比较作用极其显著。吴茱萸次碱作用细胞24h时,对三种肿瘤细胞的半数抑制浓度(IC50)分别为34.10、24.81和28.07μg/ml,对H22的IC50值最小(24.81μg/ml),生长抑制作用最好;作用48h时,对三种肿瘤细胞的半数抑制浓度(IC50)分别为19.35、20.62和27.81μg/ml,对S180的IC50值最小(19.35μg/ml),抑制作用相对最好;作用72h时,对三种肿瘤细胞的半数抑制浓度(IC50)分别为15.35、17.74和14.52μg/ml,对Hep G2的IC50值最小(14.52μg/ml),抑制作用最好。结论 :吴茱萸次碱对三种肿瘤细胞增殖均有明显的抑制作用。     

白及多糖体外抗肿瘤实验研究

目的探讨白及多糖的抗肿瘤作用。方法体外细胞培养的人胃癌细胞(sgc)、人卵巢癌细胞(A2780)和肝癌细胞(HepG2)经不同剂量白及多糖处理后,应用MTT法测定细胞的增殖情况,流式细胞仪测定白及多糖对3种肿瘤细胞周期的影响。结果白及多糖对sgc、A2780和HepG2的增殖抑制作用具有时间及剂量依赖性。流式细胞检测显示经200μg/mL白及多糖作用72 h后,sgc G0/G1期细胞增多,S期细胞无明显变化,G2/M期细胞减少;A2780 S期细胞增多,G2/M期细胞减少,G0/G1期细胞无明显变化;HepG2 G0/G1期细胞增多,S期细胞无明显变化,G2/M期细胞减少。结论白及多糖可通过抑制sgc、A2780和HepG2的生长增殖、细胞周期阻滞作用发挥抗肿瘤作用。     

蛇葡萄素钠协同卡铂体外诱导人肺腺癌GLC-82细胞凋亡研究

目的:考察蛇葡萄素钠单用及与卡铂合用对人肺腺癌GLC-82细胞增值的抑制作用,初步探讨蛇葡萄素钠抑瘤作用机制。方法:应用MTT法考察蛇葡萄素钠单用及与卡铂合用对人肺腺癌GLC-82细胞的细胞毒作用;使用流式细胞仪检测凋亡相关基因Bax以及Bcl-2表达。结果:MTT实验结果表明,蛇葡萄素钠单独应用及与卡铂联合应用对GLC-82细胞的增殖均具有浓度依赖性的抑制作用;流式细胞仪检测结果表明,蛇葡萄素钠(100、50、25μg/ml)单用组及与卡铂25μg/ml联合用药组作用于GLC-82细胞48 h后,Bax表达上调,且有浓度依赖性;AMP-Na 50μg/ml单独用药组、卡铂25μg/ml单独用药组以及AMP-Na(50、25、12.5μg/ml)与卡铂25μg/ml联合用药组作用于GLC-82细胞48 h后,Bcl-2蛋白的表达下调,但无浓度依赖性。AMP-Na各剂量组(100、50、25、12.5μg/ml)单用组及AMP-Na各剂量组与卡铂25μg/ml联合用药Bax/Bcl-2的比率增高,且有浓度依赖性。结论:蛇葡萄素钠单用对GLC-82细胞的增殖具有一定的抑制作用,与卡铂合用,对GLC-82细胞增殖具有协同抑制效应;蛇葡萄素钠可能是通过下调Bcl-2并上调Bax从而促进肿瘤细胞凋亡。     

九香虫三氯甲烷浸提物对两种癌细胞增殖和周期的影响

目的研究九香虫三氯甲烷浸提物对胃癌细胞SGC-7901和肝癌细胞HepG2细胞增殖和细胞周期的影响。方法本研究采用冷浸法获得九香虫的三氯甲烷浸提物;MTT法分析三氯甲烷浸提物对两种癌细胞体外增殖的抑制作用;流式细胞术分析三氯甲烷浸提物对两种癌细胞的细胞周期的影响。结果九香虫三氯甲烷浸提物能抑制SGC-7901细胞和HepG2细胞的体外增殖并呈明显的剂量依赖性,IC50分别为1 193.52和964.34μg/mL;流式细胞术分析表明,三氯甲烷浸提物作用后HepG2细胞的S期和G2/M期细胞比例明显降低,G0/G1期细胞比例明显升高。结论九香虫三氯甲烷浸提物能抑制两种肿瘤细胞的体外增殖,对HepG2细胞抗肿瘤活性可能是由于通过其细胞周期的阻滞引起。     

灵芝三萜通过Wnt/β-catenin信号通路对肝癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 灵芝三萜通过Wnt/β-catenin信号通路对肝癌细胞增殖和凋亡的影响.方法 灵芝三萜(10、50、100 μg/mL)作用HepG2人肝癌细胞24、48、72 h,MTT和流式细胞仪检测细胞增殖和凋亡.100 μg/mL灵芝三萜作用HepG2细胞24、48、72 h,Western blot检测c-myc、cyclinD1、caspase-3、caspase-8、β-catenin、p-GSK-3β蛋白表达.分别以20 μmol/L XAV-939、20 mmol/L LiCl及100 μg/mL灵芝三萜联合20 mmol/L LiCl干预HepG2细胞,MTT和流式细胞仪分别检测细胞增殖和凋亡.结果 灵芝三萜(10、50、100 μg/mL)抑制HepG2细胞增殖(P<0.05),诱导细胞凋亡(P<0.05).100 μg/mL灵芝三萜作用HepG2细胞24、48、72 h,细胞caspase-3、caspase-8蛋白表达上调(P<0.05),而c-myc、cyclinD1、β-catenin、p-GSK-3β蛋白表达下调(P<0.05).20 μmol/L XAV-939干预能抑制细胞增殖并诱导细胞凋亡(P<0.05),20 mmol/L LiCl则能在一定程度上减弱灵芝三萜对HepG2细胞增殖的抑制和细胞凋亡的诱导作用(P<0.05).结论 灵芝三萜能够通过Wnt/[β-catenin信号通路调节c-myc、cyclinD1、caspase-3、caspase-8蛋白表达,抑制肝癌细胞增殖并诱导细胞凋亡.     

瑞香狼毒药效组分诱导人肝癌细胞凋亡及对细胞周期依赖性蛋白激酶CDK2的影响

目的:探讨瑞香狼毒药效组分Zp1111对人肝癌细胞的增殖抑制与诱导凋亡作用及机制。方法:MTT法比较瑞香狼毒药效组分Zp1111对体外培养的人来源肝癌细胞与正常肝细胞LO2抑制作用,采用流式细胞术检测用药前后BEL-7402细胞凋亡的变化并分析Zp1111对DNA周期分布的影响,荧光共振能量转移法检测Zp1111对细胞周期依赖性蛋白激酶CDK2的抑制作用。结果:Zp1111对体外培养的肝癌细胞HepG2、BEL-7402、SMMC-7721均有较好的抑制作用,IC50分别为37.75μg/ml、28.60μg/ml、29.22μg/ml,而对正常肝细胞LO2抑制作用不明显,在25μg/ml及以下的浓度对LO2细胞反而有一定促进作用。Zp1111能诱导BEL-7402细胞发生凋亡,一定药物浓度范围内凋亡率具有药物浓度依赖关系;Zp1111还能调控体外培养的BEL-7402细胞周期分布,显著下调S期的细胞比例,并且对CDK2具有较好的抑制作用。结论:瑞香狼毒药效组分Zp1111具有一定诱导凋亡作用,可使BEL-7402细胞周期阻滞在G1期,其作用机制可能与抑制CDK2有关。     

漆树黄酮对人肝癌细胞株HepG2增殖、生长周期和细胞凋亡的影响

目的 观察漆树黄酮对人肝癌细胞株HepG2细胞生长增殖和生长周期的影响,并初步探讨其作用机制.方法 采用 MTT比色法研究漆树黄酮对人肝癌细胞株HepG2细胞生长抑制作用;通过流式细胞仪检测DNA含量,分析细胞周期的分布.结果 MTT实验结果表明较高浓度的漆树黄酮对人肝癌细胞株HepG2细胞具有直接的抑制作用,并呈剂量和时间依赖性,200 μmol·L-1 的漆树黄酮作用于人肝癌细胞株HepG2细胞72 h后,对细胞生长的抑制率最高可达53.78%,同对照组相比(P<0.01);流式细胞术实验结果表明,不同浓度的漆树黄酮作用于人肝癌细胞株HepG2 12 h后,可使G1期肿瘤细胞增多,引起G1期阻滞,作用时间为24 h、48 h时,则可引起S期阻滞;同时,不同浓度的漆树黄酮在不同的时间点都可使HepG2细胞出现明显的凋亡峰.结论 漆树黄酮具有直接抑制肿瘤细胞生长的作用,其机制可能与引起细胞周期阻滞和诱导凋亡有关.     

表儿茶素对增生性瘢痕成纤维细胞增殖及ERK1/2 MAPK信号通路影响的研究

目的:研究表儿茶素对增生性瘢痕成纤维细胞增殖及ERK1/2 MAPK信号通路的影响。方法:取4例增生性腹部瘢痕组织,分离成纤维细胞并鉴定和培养,根据表儿茶素对成纤维细胞增殖抑制的半数抑制浓度(The median inhibition concentration,IC50)确定表儿茶素的浓度,用表儿茶素分别作用24 h、48 h、72 h,用MTT法检测细胞抑制情况,Western Blot法检测细胞外信号调节激酶1/2 (Extracellular-signal-regulated kinase1/2,ERK1/2)、磷酸化细胞外信号调节激酶1/2 (p-ERK1/2)和CyclinD1蛋白表达水平,流式细胞术检测细胞周期。结果:表儿茶素对成纤维细胞的24 h IC50为20.47 mg/mL,故选择浓度为20.00 mg/mL进行后续实验。随着表儿茶素作用时间的增加,抑制情况增加越显著(P 0.05);表儿茶素对成纤维细胞ERK1/2蛋白表达影响不显著;与表儿茶素作用0 h比较,作用24 h、48 h和72 h后成纤维细胞p-ERK1/2、CyclinD1蛋白表达和G0/G1期降低,成纤维细胞G2/M期增加(P 0.05);随着作用时间的增加,成纤维细胞p-ERK1/2、CyclinD1蛋白表达和G0/G1期降低越显著,G2/M期增加越显著(P 0.05)。结论:表儿茶素对增生性瘢痕成纤维细胞增殖有抑制作用,其机制可能与抑制ERK1/2磷酸化,阻滞细胞周期有关。     

九香虫粗提物对SGC-7901和HepG2细胞增殖及细胞周期的影响

目的 研究九香虫粗提物对人胃癌SGC-7901细胞和肝癌HepG2细胞体外增殖和细胞周期的影响.方法 以乙醇为溶剂采用冷浸法获得九香虫的粗提物;利用倒置显微镜观察给药后两种癌细胞的形态变化;MTF法分析粗提物对两种癌细胞体外增殖的抑制作用;流式细胞仪分析粗提物对两种癌细胞周期的影响.结果 九香虫粗提物对SGC-7901和HepG2细胞生长有抑制作用,并呈明显的剂量依赖性;九香虫粗提物作用24 h后,对SGC-7901和HepG2细胞的半数抑制浓度(IC50)分别为1 281.62μg/ml和582 μg/ml;流式细胞仪分析结果显示,与对照组细胞相比,HepG2细胞在细胞周期的分布上呈现显著的变化,即S期和G2/M期细胞比例明显降低、G0/G1期细胞比例明显升高.结论 乙醇粗提物能抑制两种肿瘤细胞的体外增殖,对HepG2细胞抗肿瘤活性可能是由于通过其细胞周期的阻滞引起.