冠心病患者血小板PKC、PKCI及红细胞PKC活性变化的研究

目的：研究蛋白激酶C（PKC）在冠心病的发生、发展中的作用。方法：测定87例心绞痛（AP）患者、91例急性心肌梗死（AMI）患者、90例健康对照（HC）者的血小板胞膜、胞浆PKC、胞浆蛋白激酶C抑制剂（PKCI）活性和红细胞膜、胞浆PKC活性。结果：AP组和AMI组血小板胞膜中PKC活性明显高于HC组,而胞浆中PKC活性明显低于HC组;AP组AMI组血小板胞浆中PKCI活性明显低于HC组;AP组和AMI组红细胞胞膜中PKC活性明显高于HC组,而胞浆中PKC活性低于HC组。结论：PKC可能参与冠心病的发病。     

大鼠急性脊髓损伤组织中PKC活性变化

目的探讨脊髓损伤后蛋白激酶C(PKC)活性变化规律及其参与神经元损伤的机制。方法采用Wistar大鼠改良Allen ' s法制备脊髓损伤模型观察脊髓损伤后PKC(参考TAKai法)变化的规律。结果脊髓损伤可以致膜性PKC活性明显增加,同时胞浆PKC活性明显下降。结论脊髓损伤可以致PKC移位激活。PKC移位激活参与脊髓损伤的机制可能与钙超载有关。     

PKCθ小分子抑制剂及其免疫抑制作用的研究进展

PKCθ主要大量分布在T细胞中,参与T细胞的激活,还对效应T细胞和调节性T细胞的分化和功能分别呈现促进和抑制的双向调节作用,因此被认为是新型选择性免疫抑制剂的理想作用靶点。目前已获得了多种化学结构类型的小分子PKCθ抑制剂。本文通过查阅中外文献、专利和临床试验等数据库,主要对临床试验的、合成的和天然产物来源的PKCθ小分子抑制剂及其免疫抑制作用进行了综述,并对存在的问题进行了探讨。未来的几年里,PKCθ抑制剂很可能作为新一代免疫抑制剂,为免疫性疾病患者带来福音。     

灯盏花素对慢性低氧大鼠PKC的影响

目的　探讨灯盏花素对慢性低氧大鼠PKC信号途径的影响。方法　将SD大鼠分为 :对照组 (A) ,低氧组 (B) ,低氧 +灯盏花素组 (C) ,低氧时间为 4wk。采用透射电镜、放射活性测定法、免疫组化等方法研究灯盏花素对慢性低氧大鼠肺动脉平均压 (mPAP)、左右心室重量比 (RV/LV +S)、肺细小动脉管壁面积 /管总面积 (WA/TA)、中膜平滑肌细胞核密度 (SMC)、肺细小动脉超微结构、肺组织PKC活性、肺细小动脉管壁PKC的影响。结果　 (1)B组mPAP、RV/LV +S明显高于A组 (P <0 0 1) ,C组mPAP、RV/LV +S明显低于B组 (P <0 0 1) ;(2 )光镜下B组WA/TA、SMC明显高于A组 (P <0 0 1) ,C组WA/TA、SMC明显低于B组 (P <0 0 1) ;电镜显示B组肺动脉中膜平滑肌细胞增生 ,胶原纤维丰富 ;C组肺动脉中膜平滑肌细胞、胶原纤维较B组明显减少 ;(3)B组肺组织PKC总活性 (PKCt)、胞膜PKC活性(PKCm)、胞质PKC活性 (PKCc)及胞膜PKC活性 (PKCm)占PKC总活性 (PKCt)的百分比明显高于A组 (P <0 0 1) ,C组PKCt、PKCm、PKCc及PKCm占PKCt的百分比明显低于B组 (P <0 0 1) ;(4 )免疫组化显示B组肺细小动脉 (直径约10 0～ 2 0 0 μm)PKC含量明显高于A组 (P <0 0 1) ,C组较B组明显为低 (P <0 0 1)。结论　灯盏花素抑制PKC信号途径可能是其抑制慢性低氧     

生物学靶标PKC在蒺藜皂苷抗心肌缺血中的作用

目的：探讨蛋白激酶C（PKCε）在蒺藜皂苷抗过氧化氢（H2O2）诱导新生大鼠心肌细胞凋亡中的作用及其机制。方法：新生大鼠心肌细胞原代培养，H2O2诱导建立心肌细胞缺氧模型，应用PKCε抑制剂Chelerythrine预处理，观察心肌细胞形态变化，MTT法检测蒺藜皂苷对缺氧心肌细胞存活力的影响，Hoechst33258染色观察凋亡心肌细胞核形态，     

Functional Analysis of PKC Phosphorylation Sites on Myelin Protein Zero

Objective To analyze the function of Protein kinase C(PKC) phosphorylation sites on mylelin protein zero (P0) at adhesion and myelination.Methods Mutations of p0 cyto-plasmic domain motif (RSTK) and adjacent sequence which are targeted by PKC were studied.Results The point mutations in this region or an adjacent serine residue could abolish P0 adhe-sion function. PKCα,along with the PKC binding protein RACK1,were associated with wild type P0.Inhibition of PKC activity abolished the P0 mediated adhesion.Point mutation in the RSTKtarget site that abolished adhesion did not alter the association of PKC with P0,but deletion of a 14 amino acid region,which included the PSTK motif,could abolish the association.Conclusion PKC mediated phosphorylation of specific residues within the cytoplasmic domain of P0 is neces-sary for P0 mediated adhesion.The alteration of this phoporylation can cause demyelinating neu-ropathy in human.     

PKC在Ca2+信号调节MPF活性中的作用

用Fura-2AM作为染料,用F-2000荧光分光光度计测细胞内Ca2+浓度的改变。用A23187-Ca2+载体提高细胞内Ca2+浓度,同时用PKC的特异性抑制剂calphostin C作用细胞来阻断PKC途径,观察MPF活性改变。结果表明:300nmol/L的Calphostin C可以最大限度地抑制PKC活性。Calphostin C不能影响A23187引起的细胞内Ca2+浓度的升高。A23187处理前加入300nmol/L光激活Calphostin C不能降低MPF的活性,而A23187单独却可以引起MPF的活性降低。与对照组相比,差异不显著,p<0.05。     

严重烫伤后小鼠腹腔巨噬细胞PKC的变化及调控

目的：观察小鼠烫伤后不同时相腹腔巨噬细胞的细胞膜及细胞质蛋白激酶C(PKC)的变化及应用特异性调控剂H 7后腹腔巨噬细胞内核因子 κB(NF κB)活性,从信号转导的角度阐明巨噬细胞功能紊乱的机制.方法：以15%体表面积Ⅲ度烫伤小鼠为模型,收集腹腔巨噬细胞,同位素掺入法测膜浆PKC活性,电泳迁移率改变分析法检测NF κB的活性.结果：烫伤后巨噬细胞细胞膜及细胞质PKC活性升高,其中胞膜PKC活性与TNF α mRNA的变化呈正相关.给予H 7后NF κB活性下降.结论：烫伤后小鼠腹腔巨噬细胞PKC、NF κB的活性明显被激活,PKC NF κB信号通路参与了TNF α表达的调控.     

电针对阿尔茨海默病大鼠海马PKC和GDNF表达的影响

目的探讨电针对阿尔茨海默病（alzheimer’s disease,AD）大鼠海马蛋白激酶C（protein kinase C,PKC）和胶质细胞源性神经营养因子（glial cell linederived neurotrophic factor,GDNF）表达的影响。方法Morris水迷宫筛选40只健康Wistar大鼠随机分4组。正常组不给予任何处理,其余3组大鼠采用链脲霉素（STZ）所致AD模型,造模后模型组不治疗,电针组针刺双。肾俞、双太溪、双足三里、百会、大椎等穴位治疗,西药组氢溴酸加兰他敏灌胃,疗程为4周。免疫组化法检测PKC和GDNF的表达。结果免疫组化显示模型组大鼠PKC和GDNF表达减少,电针组和西药组大鼠表达增加,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论电针可能通过对AD大鼠海马PKC和GDNF表达增强的影响,对神经元起到保护作用。     

铝暴露对海马LTP及PKC生物活力的影响

学习记忆能力是人类思维活动的基本环节,对人类智慧的形成、意识的产生、知识的积累和科学文化的发展都起着关键的作用,因此,对学习与记忆的研究已成为当今神经科学的热点问题之一。海马是学习记忆的关键部位之一,其突触传递长时程增强(long-termpotentiation,LTP)是研究学习记     

PKC和血管内皮细胞在15-HETE收缩肺动脉中的作用

目的探讨蛋白激酶C(PKC)、蛋白激酶A(PKA)信号转导途经及血管内皮完整性在15-羟基二十碳四烯酸(15-HETE)收缩肺动脉中的作用。方法采用组织浴槽血管环法与PKC、PKA抑制剂以及除去血管内皮细胞相结合的方法。结果用6·8mmol·L-1hypericin阻断PKC途径可使15-HETE收缩缺氧大鼠肺动脉量效曲线右移(P<0·01);用0·112mmol·L-1KT5720阻断PKA途径使15-HETE收缩缺氧大鼠肺动脉量效曲线右移不明显;除去血管内皮细胞可降低对照组和缺氧组肺动脉血管环对15-HETE的反应性。结论15-HETE收缩肺动脉的作用和PKC信号转导系统以及血管内皮细胞的完整性有关。     

丙烯酰胺对大鼠PKC、CaMKⅡ和PKA的影响

目的研究丙烯酰胺(ACR)对蛋白激酶的影响,探讨ACR中毒性神经病的发病机制。方法以20和40mg/kg ACR腹腔注射雄性Wistar大鼠8周,每周3次。利用试剂盒测定脊髓蛋白激酶C(PKC)、Ca2+-钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)和蛋白激酶A(PKA)活力。结果 PKC、CaMKⅡ和PKA的活力在40 mg/kg染毒组呈明显升高的趋势,并且与对照组相比,差异有统计学意义(P0.01)。结论在本试验条件下,脊髓PKC、CaMKⅡ和PKA的活力明显升高,提示Ca2+相关蛋白激酶活力的改变可能是ACR神经病的发病机制之一。     

甲壳胺体外对小鼠巨噬细胞PKC和DAG的作用研究

目的 观察甲壳胺体外对小鼠腹腔巨噬细胞蛋白激酶C(PKC)活性和二酰基甘油(DAG)合成的影响。方法分别采用反相离子对高效液相色谱法与放射免疫测定技术测定PKC活力和DAG含量。结果 ①甲壳胺剂量依赖性引起巨噬细胞中PKC活性明显增强并使之发生质膜转位,达峰时间为25min,1.5 h恢复到基础水平;②甲壳胺促进巨噬细胞中DAG的合成,达峰时间为30 s,3 min恢复到基础水平。结论 甲壳胺的免疫增强作用与其增强巨噬细胞中PKC活性和DAG合成有关,DAG/PKC信号途径参与了其对巨噬细胞的活化过程。     

脊髓背角PKC在慢性炎性疼痛中的作用及其机制

目的探讨蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)的抑制剂和激动剂对痛觉超敏的影响及其分子机制。方法小鼠后趾皮下注射完全弗氏佐剂(complete Freund's adjuvant,CFA)建立炎性疼痛模型;鞘内给予PKC抑制剂白屈菜赤碱(chelerythrine,CHE)或激动剂Phorbol 12-myristate 13-acetate(PMA)前后,测定小鼠缩足阈值;随后立即分离脊髓背角,免疫印迹法检测NMDA(N-methyl-D-aspartate)型谷氨酸受体的突触表达。结果 PKC抑制剂CHE在缓解炎性痛觉超敏的同时,明显翻转脊髓NMDA受体NR2B亚基的突触表达亢进;而正常小鼠鞘内给予PKC激动剂PMA,可模拟CFA的效应,即:诱发痛觉超敏,并特异性增加NR2B亚基的突触含量。结论 PKC通过调节脊髓NMDA受体NR2B亚基的突触表达,参与炎性疼痛的形成。     

染铅鼠脑海马PKC活性与LTP的相关性研究

染铅鼠脑海马ＰＫＣ活性与ＬＴＰ的相关性研究邢伟１孙黎光１时利德２刘素嫒１蔡葵２滕国玺２蔡原３郭纳新３刘秋芳３张颖花３奚奇３万伯健近年来铅对神经系统危害已有很多的研究，但机制仍不清楚。目前主要认为：铅在神经系统中可能模拟钙离子作用影响神经递质的释放；铅...     

Does PKC activation increase the homologous desensitization of μ opioid receptors?

BACKGROUND AND PURPOSE

This study examined the role of agents known to activate PKC on morphine-induced desensitization of μ-opioid receptors (MOP receptors) in brain slices containing locus coeruleus neurons.

EXPERIMENTAL APPROACH

Intracellular recordings were obtained from rat locus coeruleus neurons. Two measurements were used to characterize desensitization, the decline in hyperpolarization induced by application of a saturating concentration of agonist (acute desensitization) and the decrease in hyperpolarization induced by a subsaturating concentration of [Met]⁵enkephalin (ME) following washout of the saturating concentration (sustained desensitization). Internalization of MOP receptors was studied in brain slices prepared from transgenic mice expressing Flag-MOP receptors. The subcellular distribution of activated PKC was examined using a novel fluorescent sensor of PKC in HEK293 cells.

KEY RESULTS

The phorbol esters (PMA and PDBu) and muscarine increased acute desensitization induced by a saturating concentration of morphine and ME. These effects were not sensitive to staurosporine. Staurosporine did not block the decline in hyperpolarization induced by muscarine. PDBu and muscarine did not affect sustained desensitization induced by ME nor did phorbol esters or muscarine change the trafficking of MOP receptors induced by morphine or ME. The distribution of activated PKC measured in HEK293 cells differed depending on which phorbol ester was applied.

CONCLUSIONS AND IMPLICATIONS

This study demonstrates a distinct difference in two measurements that are often used to evaluate desensitization. The measure of decline correlated well with the reduction in peak amplitudes caused by PKC activators implicating the modification of other factors rather than MOP receptors.

LINKED ARTICLES

This article is part of a themed section on Opioids: New Pathways to Functional Selectivity. To view the other articles in this section visit http://dx.doi.org/10.1111/bph.2015.172.issue-2     

慢性染铝大鼠海马 PKC、MAPK活力与LTP的相关性

目的研究慢性铝暴露引起大鼠海马蛋白激酶C(PKC)、有丝分裂激活蛋白激酶(MAPK)活力的变化,对海马齿状回(CAI区)产生长时程增强(LTP)幅值改变的调节作用,探讨铝暴露对学习记忆功能的影响。方法选择断乳后Wistar大鼠,随机分4组(1个对照组,3个染毒组),每组20只,染毒组大鼠分别喂食质量浓度为0.2%、0.4%和0.6%氯化铝的水,饲养3个月后,测量大鼠海马LTP,用改良的Takai法测定PKC、MAPK活力的变化。结果3个浓度的染铝,PKC的活力均依浓度依赖方式被抑制,细胞浆比活力的倍数分别为:4.95±0.76、5.31±0.90、5.50±1.46(P<0.01);细胞膜为9.84±3.84、8.35±2.327、.56±2.06(P<0.01)。MAPK活力依浓度依赖方式被抑制,比活力的倍数分别为:3.43±0.91、2.53±1.21和2.64±0.55(P<0.05)。结论慢性铝暴露引起PKC及ERK活力降低,导致大鼠海马LTP幅值下降。     

PKC和MMPs在枸杞籽油抗动脉粥样硬化中的作用和机制

目的 研究枸杞籽油抗动脉粥样硬化的功效及其可能的作用机制.方法 高脂膳食制备家兔动脉粥样硬化实验模型,观测其血浆中TC、TG、LDL-C、HDL-C、ApoA、ApoB的变化;56 d后,测定血清SOD、GsH-Px、T-AOC活性和MDA的含量;石蜡切片进行病理学检测;免疫印迹检测PKC、MMP-2、MMP-9在血管中的表达.结果 枸杞籽油可增加实验家兔血浆中HDL-C、ApoA的含量,降低血浆中TC、TG、LDL-C、ApoB的含量,增强血清中SOD、GSH-PX、T-AOC的活性,降低血清中MDA的含量;降低PKC、MMP-2、MMP-9在血管中的表达.结论 枸杞籽油具有显著的抗动脉粥样硬化效应.其机制可能是通过PKC途径,减少MMPs的分泌、抑制SMC的增生、分泌胶原、降血脂和抗氧化等.     

Amphetamine-induced ERM Proteins Phosphorylation Is through PKCβ Activation in PC12 Cells

Amphetamine, a synthetic psychostimulant, is transported by the dopamine transporter (DAT) to the cytosol and increases the exchange of extracellular amphetamine by intracellular dopamine. Recently, we reported that the phosphorylation levels of ezrin-radixin-moesin (ERM) proteins are regulated by psychostimulant drugs in the nucleus accumbens, a brain area important for drug addiction. However, the significance of ERM proteins phosphorylation in response to drugs of abuse has not been fully investigated. In this study, using PC12 cells as an in vitro cell model, we showed that amphetamine increases ERM proteins phosphorylation and protein kinase C (PKC) β inhibitor, but not extracellular signal-regulated kinase (ERK) or phosphatidylinositol 3-kinases (PI3K) inhibitors, abolished this effect. Further, we observed that DAT inhibitor suppressed amphetamine-induced ERM proteins phosphorylation in PC12 cells. These results suggest that PKCβ-induced DAT regulation may be involved in amphetmaine-induced ERM proteins phosphorylation.