环胞菌素A治疗再生障碍性贫血对骨髓细胞凋亡的影响

目的探讨环胞菌素A(CsA)治疗对再生障碍性贫血(再障)患者骨髓单个核细胞Fas(CD95)抗原表达及调亡的影响作用.方法应用流式细胞仪测定24例再障患者CsA治疗前后骨髓单个核细胞(MNC)Fas表达率及凋亡率,其中急性再障7例,慢性再障17例;同时以20例正常人作对照.结果应用CsA治疗再障3个月时的总有效率58.3%.再障患者Fas表达率及凋亡率均高于正常对照(P＜0.05);急性再障Fas表达率及凋亡率高于慢性再障,但差异无显著性(P＜0.05).用CsA治疗后,再障患者骨髓单个核细胞凋亡率明显低于治疗前(P＜0.05).结论CsA治疗可降低再障患者骨髓MNC的凋亡率,骨髓MNC的Fas表达率和凋亡率增高与再障发病有关.     

再障患者血清体外诱导正常骨髓造血细胞凋亡的研究

目的 :了解再障患者血清的造血抑制和诱导凋亡活性 ,及对造血细胞膜上Bcl -2蛋白、Bax蛋白表达的影响。方法 :应用甲基纤维素体外培养法、电镜、TUNEL法、流式细胞术分析、间接免疫荧光标记法对 13例再障患者血清体外抑制正常人骨髓造血细胞增殖及促进正常人骨髓集落细胞凋亡的作用 ,以及共同培养后对集落细胞膜表面的Bcl-2蛋白、Bax蛋白表达的影响。结果 :再障患者血清在体外均可明显抑制正常人BFU -E及CFU -GM的增殖 ,再障组骨髓集落细胞中有较多细胞呈现凋亡形态 ,凋亡率明显高于正常 (P <0 .0 1) ,重型再障 (SAA)组血清的造血抑制活性和诱导凋亡活性均强于非重型再障 (NSAA)组 (P <0 .0 5 )。SAA、NSAA组、和正常组的集落细胞胞膜上表达一定量的Bcl-2蛋白、Bax蛋白 ,不高于阴性对照 ;表达Bcl-2蛋白、Bax蛋白的量与相应集落细胞的凋亡率无相关性。结论 :再障患者血清具有造血抑制活性和诱导凋亡活性 ;再障患者血清作用后Bcl-2蛋白、Bax蛋白在造血细胞膜上的表达无明显的改变。     

再生障碍性贫血血清抑制物诱导脐血造血细胞凋亡

目的研究再生障碍性贫血血清抑制物诱导人脐血造血细胞凋亡作用。方法提纯的再障血清抑制物加到人脐血造血细胞培养体系中,采用形态学观察及TUNNL法测定细胞凋亡。结果20例脐血造血细胞与0．1μ／ml,1μg／ml,10μg／ml的再障血清抑制蛋白组分共同培养后,凋亡细胞发现率分别为3．5±1.6％（P＞0.06）,41±9．8％（P＜0.01）,60.3。18.2％（P＜0.01）而对照组为2.6±1.5％。结论再降血清抑制蛋白组分量与脐血造血凋亡细胞数量呈正相关。证明再障血清抑制蛋白组分与造成血细胞凋亡有一定的量效关系,推测造血细胞凋亡增加可能是再障发病的主要机制。     

复方苦参注射液对人食管鳞癌EC9706细胞凋亡及生长抑制的影响

目的 探讨复方苦参对人食管癌细胞株EC9706的生长抑制和诱导凋亡作用.方法 体外实验分为复方苦参25.00 μl/ml组、6.25 μl/ml组及对照组.采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活性,SP法检测增殖细胞核抗原(PCNA)表达.流式细胞仪测定细胞周期及细胞凋亡,Western印迹检测细胞半胱氨酸蛋白酶(caspase)-3、Bc1-2及Fas蛋白的表达.平板克隆形成实验测定细胞克隆形成率.裸鼠移植瘤实验检测复方苦参的体内抑瘤作用,分为200μl／d治疗组、25μl／d治疗组及生理盐水对照组.SP法检测移植瘤PCNA及Bc1-2的表达,原位末端标记(TUNEL)法检测细胞凋亡.结果 体外实验中25.00 μl/ml组细胞48、72、96h增殖活性均低于对照组(均P＜0.01);PCNA表达水平及体外克隆形成率均低于对照组(均P＜0.05);细胞凋亡率、激活型caspase—3表达及Fas表达均高于对照组[(25.2±7.3)％比(3.4±1.5)％、(21.3±4.4)％比(1.8±0.6)％、(30.2±8.3)％比(5.4±1.6)％,均P＜0.01],Bc1-2表达低于对照组(P＜0.01).动物实验200μL／d治疗组瘤体质量低于生理盐水对照组[ (987±386) nmg比(1935±838) mg,P＜0.01],凋亡指数高于生理盐水对照组[(33.8±8.7)％比(5.3±1.4)％,P＜0.01].结论 复方苦参能够抑制EC9706细胞增殖,诱导细胞凋亡,阻止移植瘤生长.诱导凋亡机制可能与EC9706细胞周期阻滞、Bc1-2表达下调、Fas表达上调及caspase-3激活有关.     

退变腰椎间盘组织细胞凋亡及相关基因Fas和Bcl-2蛋白的表达

目的 观察髓核组织Fas和Bcl-2蛋白的表达,探讨其在腰椎间盘退变过程可能发挥的作用.方法 采用原位DNA片断末端标记(TUNEL)和免疫组织化学方法,检测20例退变腰椎间盘(退变组)及6例正常腰椎间盘(对照组)髓核组织的细胞凋亡状态及凋亡相关基因Fas和Bcl-2的表达.结果 退变组及对照组髓核组织细胞凋亡指数(AI)分别为(50.23±13.36)和(28.32±6.67)(P＜0.05),Fas蛋白阳性细胞百分比(74.26±10.15)%和(41.72±4.62)%(P＜0.01),Bcl-2蛋白阳性细胞百分比(55.37±13.65)%和(27.17±5.17)(P＜0.01).凋亡细胞越多,Fas和Bcl-2的表达越强.结论 Fas和Bcl-2蛋白均参与腰椎间盘组织中细胞凋亡的调节,可能在腰椎间盘退变中发挥重要作用.     

不同剂量顺铂对宫颈癌SiHa细胞周期和凋亡影响的研究

目的 检测不同剂量顺铂(DDP)对人宫颈癌SiHa细胞增殖、凋亡及周期的影响,探讨DDP治疗宫颈癌的作用机制. 方法 采用WST-8方法 检测DDP对人宫颈癌SiHa细胞增殖的影响;Hoechst 33258荧光染色法检测细胞凋亡形态;用流式细胞仪检测药物作用前后细胞凋亡和周期变化. 结果 DDP对SiHa细胞增殖的抑制作用,一定程度上呈浓度依赖性和时间依赖性,但0.01～1.00 μg/ml的DDP作用24 h和0.01～0.10 μg/ml的DDP作用48 h对细胞的抑制增殖作用不明显(P＞0.05).5.00 μg/ml 的DDP作用24 h时,Hoechst 33258荧光染色可见典型的凋亡细胞形态;1 μg/ml 的DDP作用SiHa细胞24 h时,使SiHa细胞产生明显的S期阻滞,S期细胞比率为(53.17±7.50)%,与对照组、DDP 5.00 μg/ml组比较差异均具有统计学意义(P＜0.05),致凋亡作用不明显(P＞0.05);而5.00 μg/ml DDP作用24 h时,细胞早期凋亡率、晚期凋亡和坏死率分别为(5.88±1.64)%和(5.18±1.26)%,与对照组、DDP1 μg/ml组比较差异均具有统计学意义(P＜0.05). 结论 DDP抑制宫颈癌SiHa细胞增殖,但对小剂量DDP存在一定的耐药,其耐药机制可能与S期阻滞有关;高剂量DDP抗宫颈癌细胞作用机制主要表现为致凋亡作用.     

越橘提取物对宫颈癌Hela细胞凋亡及其作用机制的研究

目的:越橘提取物具有抑制肿瘤生长的作用,但其对宫颈癌生长的影响鲜有报道.探讨越橘提取物对Hela细胞Bcl-2、Bax、Fas及FasL表达的影响. 方法:用浓度为0、0.025、0.25、2.5和25μg/ml的越橘提取物处理Hela细胞24 h后,采用Hoeehst33342/PI染色、DNA ladder法和Annexin V/PI双染观察越橘提取物对Hela细胞凋亡的诱导作用,并采用Western blot法检测Bcl-2、Bax、Fas及FasL蛋白表达. 结果:0.25～25 μg/ml的越橘提取物处理组细胞呈现明显的凋亡形态学改变和凋亡特异性条带,细胞凋亡率依次为(4.13±0.63)%、(5.41±0.77)%、(8.74±1.27)%和(12.05±1.03)%.同时Western blot结果显示越橘提取物处理组细胞中bax、Fas及FasL蛋白表达增加,而Bcl-2蛋白表达减少. 结论:越橘提取物通过调节一些与凋亡相关蛋白的表达诱导Hela细胞的凋亡.     

再生障碍性贫血血清抑制物诱导脐血造血细胞凋亡

目的 :研究再生障碍性贫血血清抑制物诱导人脐血造血细胞凋亡的作用。方法 :提纯的再障血清抑制物加到人脐血造血细胞培养体系中 ,采用形态学观察及 TUNNL 法测定细胞凋亡。结果 :2 0例脐血造血细胞分别与 0 .1μg/m l,1μg/m l,10 μg/m l的再障血清抑制蛋白组份共同培养后 ,凋亡细胞发现率分别为 3.5± 1.6 % (P>0 .0 5 ) ,41± 9.8 (P<0 .0 1) ,6 0 .3± 18.2 (P<0 .0 1) ,而对照组为 2 .6± 1.5 %。结论 :再障血清抑制蛋白组分量与脐血造血凋亡细胞数量呈正相关。证明再障血清抑制蛋白组份与造成血细胞凋亡有一定的量效关系 ,推测造血细胞凋亡增加可能是再障发病的主要机制     

抗CXCR4单克隆抗体对与正常骨髓基质细胞共培养的HL-60细胞Bcl-2、PCNA、Fas蛋白表达的影响

目的　目前研究发现 ,骨髓基质细胞分泌的基质衍生因子 1(stromalcellderivedfactor 1,SDF 1)及其受体CXCR4可能参与髓内残留病变的形成。因此 ,本研究着重探讨了阻抑SDF 1活性对与正常骨髓基质细胞共培养的HL 60细胞增殖、生存的影响。方法　培养并共培养HL 60细胞。实验分为两组 ,实验组采用抗CXCR4单克隆抗体 12G5( 2 0ug/ml)阻断SDF 1生物作用 ,孵育 2 4小时后采用免疫组化染色检测HL 60细胞Bcl 2、PCNA、Fas蛋白表达。 结果　免疫组化染色显示 ,实验组中Bcl 2、PCNA及Fas阳性率分别为 ( 15 .7± 4.9) %、( 4 2 .1± 3 .9) %及 ( 3 9.7± 7 5 ) % ,而对照组分别为 ( 3 1.6± 5 .2 ) %、( 67.4± 8.5 ) %和 ( 2 4.1± 6.7) % ,t检验显示 12G5下调HL 60细胞Bcl 2及PCNA蛋白表达 ,上调Fas蛋白表达。结论　 12G5可在一定程度抑制HL 60细胞增殖 ,促进凋亡 ,影响其生存。     

Rab32对小鼠肝细胞系AML12细胞内脂质代谢的影响

目的 探讨调控Rab32蛋白表达对小鼠AML12细胞内脂质代谢的影响.方法 常规培养AML12细胞,通过转染FCD-EYFP-Rab32慢病毒表达载体构建Rab32过表达细胞系(过表达组) ,利用CRISPR/Cas9基因敲除技术构建Rab32敲除细胞系(敲除组) ,正常细胞设为对照组.Western blot检测各组细胞中Rab32蛋白表达水平;尼罗红染色后,激光共聚焦显微镜观测各组细胞内的脂滴数量和面积;定量试剂盒检测各组细胞内甘油三酯及总胆固醇水平,流式细胞术检测细胞凋亡水平.结果 与对照组比较,过表达组AML12细胞中Rab32蛋白表达水平显著上调,而Rab32敲除组细胞中Rab32蛋白表达水平显著下调(P＜ 0.01);过表达组AML12细胞内脂滴数量[过表达组vs对照组: (21.91 ±14.32) vs (33.89 ± 17.31) ,P＜ 0.01]及面积[过表达组vs对照组: (16.82 ± 14.37) μm2 vs (22.27 ±14.10) μm2,P＜ 0.01]显著减少,每毫克蛋白甘油三酯[过表达组vs对照组: (104.03 ± 12.28) nmol vs(130.94 ± 4.21) nmol,P＜ 0.01]及胆固醇水平[过表达组vs对照组: (46.92 ± 1.26) μg vs (81.11 ±0.65) μg,P＜ 0.01]显著降低;而Rab32敲除组细胞内脂滴数量[(58.23 ± 42.28) ]及面积[(53.31 ±36.33) μm2]较对照组显著增加(P＜ 0.01) ,其每毫克蛋白甘油三酯[(159.03 ± 8.85) nmol]及胆固醇水平[(93.38 ± 3.33) μg]显著增高(P＜ 0.01) .3组细胞凋亡水平差异无统计学意义(P＞ 0.05) .结论 Rab32促进小鼠肝细胞AML12胞内脂质代谢.