CK20mRNA和hTERTmRNA表达与胃癌患者外周血微转移的研究

目的:检测胃癌患者外周血中CK20mRNA和hTERTmRNA的表达,探讨其能否作为判断外周血微转移及预后的分子生物学指标.方法:采用RT-PCR技术检测40例胃癌患者、19例胃良性病变患者和20例健康体检者外周血中CK20mRNA和hTERTmRNA定性和半定量表达.结果:1)CK20mRNA和hTERTmRNA在胃癌患者中阳性率分别为52.50%(21/40)和65.00%(26/40),相对系数分别为0.81±0.17和0.78+0.17;在胃良性病变患者阳性率均为5.26%(1/19),相对系数分别为0.12和0.11;在健康体检者中均为0.胃癌患者与胃良性病变患者、健康体检者相比,两项指标均有统计学差异(P＜0.01).2)CK20mRNA、hTERTmRNA阳性率和相对系数与临床分期、淋巴结转移、远处转移均有关(P＜0.05),阳性者生存率低于阴性者(P＜0.05).3)CK20 mRNA、hTERT mRNA与CEA、CA199表达呈正相关(P＜0.05),其阳性率高于CA199(P＜0.05).结论:胃癌患者外周血中存在CK20mRNA和hTERTmRNA表达,与临床分期及患者生存密切相关,提示两项指标能预测外周血微转移和判断预后,其诊断外周血微转移优于CAl99.     

胃肠道癌外周血CK20 mRNA的表达及临床意义

背景与目的:检测上皮组织特异性标志物,如CK19、CK20、多形上皮粘蛋白的核心蛋白(MUC1)及CEA等,在外周血、淋巴结及骨髓中的表达,是诊断早期胃肠道癌微转移的重要手段之一。本研究通过检测手术前、后胃肠道癌患者外周血细胞角蛋白20信使核糖核酸(CK20mRNA)的表达,了解胃肠道癌血行播散转移情况及在围手术期综合治疗中的意义。方法:采用巢式逆转录-聚合酶链式反应(Nest-RT-PCR)检测62例胃肠道癌患者手术前后外周血CK20mRNA的表达状况。结果:62例样本中,34例(54.3%)术前CK20mRNA检测为阳性,31例(50.0%)术后CK20mRNA检测为阳性,对照组10例正常人及12例良性胃肠病患者CK20mRNA测定均为阴性。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期患者外周血CK20mRNA阳性率依次为37.5%、36.3%、66.7%、100.0%。Ⅰ、Ⅱ期患者与Ⅲ、Ⅳ期患者比较,两者间CK20mRNA的阳性率(分别为36.9%和83.3%)有显著性差异(P<0.05)。胃肠道癌的分化程度及癌栓的形成与外周血CK20mRNA的表达无关。有局部淋巴结转移患者与无淋巴结转移患者的阳性表达率有显著性差异(P<0.01)。手术前后外周血CK20mRNA阳性率差异无显著性(P>0.05)。结论:外周血CK20mRNA检测可作为胃肠道癌微转移的判断指标之一,对临床正确分期及治疗起指导作用。     

胃癌患者外周血及骨髓微转移检测的临床意义

目的:探讨检测胃癌患者外周血和骨髓CK20 mRNA表达的敏感性、特异性及临床意义.方法:采用RTPCR技术,同时对照检测49例胃癌患者、5例胃良性病变患者及5例健康志愿者骨髓与外周血中的CK20 mRNA表达.结果:49例胃癌患者中,骨髓和外周血CK20阳性表达率分别为49.0%(24/49),32.7%(16/49),二者差异有统计学意义(P＜0.05).其中2例外周血CK20表达阳性,骨髓表达阴性.健康志愿者及良性病变患者外周血及骨髓中未检测到CK20表达.本实验中CK20 mRNA RT-PCR技术的灵敏度为10～-5.胃癌的微转移状况与组织分化程度和肿瘤TNM分期有关.结论:应用RT-PCR法以CK20为标志物检测胃癌微转移细胞特异性高.骨髓检测胃癌微转移较单次采血更敏感,但外周血检测仍能提供一些有价值的资料.     

早期宫颈癌患者外周血CK19和CK20mRNA的检测及临床意义

目的:研究早期宫颈癌患者外周血中CK19、CK20mRNA的表达及其临床意义。方法:采用RT-PCR法术前检测250例ⅠA~ⅡA期宫颈癌患者和50例妇科良性肿瘤患者及18名健康自愿者外周血中CK19、CK20mRNA的表达,并分析其与临床病理因素的关系。结果:250例早期宫颈癌患者外周血中CK19、CK20mRNA的阳性表达率分别为36%和24%,而在妇科良性肿瘤中分别为3.0%和0%,18例健康自愿者无一例表达CK19、CK20mRNA阳性(P<0.01);CK19、CK20mRNA的单独阳性表达率除与脉管瘤栓显著相关外(P<0.01),与宫颈癌的预后因素如分期、分化、组织类型、淋巴结转移、肿瘤大小均无关(P>0.05),而CK19、CK20mRNA双阳性表达与淋巴结转移和脉管浸润及近期盆腔外的转移显著相关(P<0.01)。结论:外周血中CK19、CK20mRNA的表达可以作为检测早期宫颈癌微转移的生物学指标,但对预后的意义有待于进一步研究。     

外周血CK19 mRNA在乳腺癌治疗中的意义

目的 探讨乳腺癌患者外周静脉血CK19 mRNA检测对判断乳腺癌微转移的应用价值.方法 采用RT-PCR法检测110例乳腺癌及45例乳腺良性疾病患者外周血中CK19 mRNA,并比较乳腺癌患者外周血CK19 mRNA阳性表达率与乳腺良性疾病患者的差异,以及不同分期及治疗前后乳腺癌患者外周血CK19 mRNA阳性表达率的差异.结果 乳腺癌患者外周血CK19 mRNA阳性表达率明显高于乳腺良性疾病者,Ⅲ、Ⅳ期乳腺癌患者阳性表达率明显高于Ⅰ、Ⅱ期患者;乳腺癌患者治疗前CK19 mRNA阳性表达率明显高于治疗后;有淋巴结转移者CK19 mRNA阳性表达率明显高于无淋巴结转移者,差异均有统计学意义(P<0.01).结论 外周血CK19 mRNA检测可以预测乳腺癌发生的远处转移及微转移.     

Hp感染与胃癌患者外周血中CK19和CK20表达的相关性研究

目的探究幽门螺杆菌(Hp)感染与胃癌微转移的相关性。方法选取2011年10月至2012年12月间甘肃省人民医院收治的64例胃癌患者和10例胃溃疡等良性病变患者,检测所有患者Hp,依结果分为Hp(+)组与Hp(-)组。采集患者外周血,使用流式细胞仪测定细胞因子CK19和CK20表达水平,并比较胃癌和胃溃疡等良性病变患者Hp(+)组与Hp(-)组外周血中CK19和CK20的表达水平。结果良性病变患者外周血中均未检出CK19和CK20。Hp(+)胃癌患者外周血中CK19阳性表达率为54.3%,CK20阳性表达率为51.4%,Hp(-)胃癌患者外周血中CK19阳性表达率为27.6%,CK20阳性表达率为34.5%,Hp(+)胃癌患者CK19和CK20表达均高于Hp(-)胃癌患者,但前者差异有统计学意义(P<0.05),后者差异无统计学意义(P>0.05)。结论 Hp感染使胃癌患者外周血中细胞因子高表达,可能促进胃癌微转移的发生。     

非小细胞肺癌患者外周血CK19 mRNA检测临床意义的探讨

目的:应用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)法检测肺癌外周血中的表达情况,并探讨其表达的临床意义。方法:用RT-PCR法检测98例肺癌患者外周血CK19 mRNA表达。结果:NSCLC组患者外周血CK19 mRNA的阳性率为77.55%(76/98),显著高于良性病变组的3.57%(1/28)和健康对照组的0,χ2=73.68,P<0.05;Ⅱ期〔87.50%(35/40)〕和Ⅲ期〔88.89%(24/27)〕NSCLC患者的阳性率显著高于Ⅰ期〔54.84%(17/31)〕患者的阳性率,χ2=13.453,P<0.05;淋巴结转移阳性和阴性患者的外周血中CK19 mRNA阳性率分别为89.55%(60/67)和51.61%(16/31),差异有统计学意义,χ2=17.523,P<0.05;而不同病理类型NSCLC患者外周血CK19mRNA阳性率之间差异无统计学意义,χ2=0.414,P>0.05。结论:肺癌患者外周血中CK19 mRNA表达较高可能与肺癌转移有关,检测CK19 mRNA对于早期判断患者转移和复发有一定的临床意义。     

新辅助化疗对Ⅲ期非小细胞肺癌骨髓中CK19表达的影响

目的:探讨新辅助化疗与Ⅲ期非小细胞肺癌骨髓微转移的关系.方法:应用RT-PCR技术,术中取肋骨骨髓检测新辅助化疗患者(化疗组)36例及直接手术患者(对照组)35例Ⅲ期非小细胞肺癌患者骨髓中CK19的表达情况.结果:化疗组CK19的阳性率为22.2%(8/36),对照组CK19的阳性率为45.7%(16/35),两组差异显著(P=0.026).新辅助化疗疗效与CK19的表达呈负相关(P=0.026),rs-0.372.COX模型分析提示,化疗疗效、CK19的表达是影响化疗组预后的独立指标.结论:新辅助化疗可减少Ⅲ期非小细胞肺癌骨髓微转移的发生,通过检测骨髓中CK19的表达可指导临床治疗.     

RT-PCR法检测非小细胞肺癌患者外周血CK19 mRNA的临床意义

目的:检测非小细胞肺癌患者外周血CK19 mRNA的表达情况,探讨其表达的临床意义.方法:采用逆转录PCR(RT-PCR)方法,分别检测非小细胞肺癌患者和对照组患者外周血中CK19 mRNA的表达.结果:43例非小细胞肺癌患者外周血中CK19 mRNA表达阳性率为56%,对照组阳性率为5%,两组外周血CK19 mRNA阳性率比较有显著性差异(P＜0.01);外周血CK19 mRNA阳性率与病理类型无相关性;淋巴结转移阳性和阴性患者的外周血中CK19 mRNA阳性率分别为66%(21/32)和18%(2/11),二者差异显著(x2=6.65,P＜0.05).随TNM分期上升,CK19mRNA阳性率增加(x2=18.03,P＜0.01).结论:CK19 mRNA可作为RT-PCR法检测非小细胞肺癌患者外周血微转移的分子标志物,该方法敏感性高,有助于早期诊断肺癌血行转移,指导临床分期和治疗.     

肺癌患者外周血中CK19-mRNA表达的检测

目的　检测肺癌患者外周血中CK 19 mRNA的表达情况。方法　采用逆转录PCR (RT PCR )方法 ,分别检测有明确肿瘤病灶的肺癌患者、肺部良性疾病患者和健康对照者外周血中CK 19 mRNA的表达。结果　 70例肺癌患者外周血中CK 19 mRNA表达阳性率为 3 7.14 % ,3 8例肺部良性疾病患者阳性率为 18.42 % ,3 7例健康对照者阳性率为 5 .41% ,肺癌组与肺部良性疾病组、健康对照组间阳性率均有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ,CK 19 mRNA表达阳性率与肿瘤分期及病理类型无相关性。结论　外周血中CK 19 mRNA作为肺癌的 1项分子检测指标 ,具有一定的临床应用价值 ,值得进一步扩大样本研究及随访 ,其检测的灵敏度及特异度尚有待提高     

细胞角蛋白20对膀胱癌早期诊断的前瞻性研究

目的：评估细胞角蛋白20（CK20）标志物作为膀胱癌早期诊断及临床监测的价值。方法：对62例患者的尿液进行尿脱落细胞学及CK20标志物免疫荧光检测的前瞻性研究。分析参数包括肿瘤数目、大小及WHO分级，术前或活检前尿脱落细胞学和CK20标志物。结果：病理活检证实15例移行细胞癌中，CK20为13例阳性，2例阴性；47例非膀胱癌中，CK20标志物2例假阳性。与尿脱落细胞学比较，CK20标志物对膀胱移行细胞癌诊断的特异性和阳性预报值更高，分别为96．0％比82．5％（U＝2．18，P＜0．05），86．7％比52．4％（U＝2．16，P＜0．05）；但两者在敏感性和阴性预报值间无显著性差异（U值分别为：0．91和1．02，P＞0．05）。CK20表达与肿瘤分级间无明显相关性。结论：CK20是诊断膀胱移行细胞癌的一种良好标志物，其特异性明显优于尿脱落细胞学。     

细胞角蛋白基因13在鼻咽癌中的表达研究

目的　探讨细胞角蛋白基因 13(Cytokeratin 13,CK13)在人鼻咽癌 (NPC)中的表达。方法应用免疫组化检测了 40例NPC组织和 8例慢性鼻咽炎 (CINE)组织中CK13蛋白水平的表达 ,同时应用Northern杂交对其中 32例NPC和 8例CINE组织进行了mRNA水平检测 ,并分析了CK13表达与NPC临床特征的关系。结果　在NPC中 ,CK13在蛋白质水平和mRNA水平均较CINE显著降低 (P <0 0 1) ,且CK13表达与NPC颈淋巴结转移有显著相关性 (P <0 0 5 ) ,与肿瘤的T分期无显著相关性(P >0 0 5 )。结论　CK13基因的表达可能与NPC组织分化以及颈淋巴结转移有关。     

Clinical Usefulness of CYFRA Assay in Diagnosing Lung Cancer: Measurement of Serum Cytokeratin Fragment

We evaluated the diagnostic usefulness of measurement of the soluble cytokeratin 19 fragment, a new tumor marker, in 391 patients with lung cancer and in 424 patients with benign lung diseases. Serum concentrations of cytokeratin 19 fragment were measured by a sandwich ELISA (CYFRA). The cut-off value was defined as 3.5 ng/ml, which is associated with a specificity of 85% for benign lung diseases. CYFRA had a high sensitivity (57.5%) in all subjects with lung carcinoma, and had a higher sensitivity for squamous cell carcinoma (73.1%, n = 141) than squamous cell carcinoma-related antigen (61.0%). CYFRA was associated with a relatively high sensitivity (42.1%) in early-stage squamous cell carcinoma (stage I, based on the classification of the Japan Lung Cancer Society), but the CYFRA titer was higher in advanced squamous cell carcinoma than in early-stage squamous cell carcinoma. Our findings suggest that CYFRA is potentially useful for diagnosis and monitoring of lung carcinoma, especially for squamous cell carcinoma.     

Human Monoclonal Antibodies against Cytokeratin 18 Generated from Patients with Gastric Cancer

By co-culturing regional lymph node B-cells and HAT-sensitive mutant cells obtained from RPMI-1788 cells, no less than 20,000 Epstein-Barr (EB)-transformed colonies were obtained from 32 patients with gastric cancer. From B-cell cultures generating antibodies reactive with gastric cancer tissues as well as cultured gastric cancer cells, two EB-transformed cell clones termed C418–59 and C1218–39 were isolated. Both of them produced human IgM-class antibodies, termed Mab418–59 and Mab 1218–39, respectively. Both antibodies reacted with an antigen with a molecular weight of 45 kd existing in gastric cancer MKN-45, MKN-1, and Kato-III cells, and also with all of 4 adenocarcinomas of the stomach in paraffin sections. The antigen recognized by both antibodies was identified as a kind of cytoskeletal protein, cytokeratin 18, In this study, it was confirmed that B-cell clones generating autoantibodies against cytokeratin 18 were present in some patients with gastric cancer.     

Cytokeratin 8 silencing in human nasopharyngeal carcinoma cells leads to cisplatin sensitization

By comparing protein profiles of nasopharyngeal carcinoma HONE1 cells to transformed nasopharyngeal epithelial NP 69 cells, several clusters of differentially expressed proteins were identified. The increased expression of cytokeratin 8 (CK8) and pyruvate kinase M2 was a common feature in four NPC cell lines compared to the two transformed epithelial cell lines. Suppression of CK8 was associated with the sensitivity to cisplatin in HONE1 cells; while overexpression of CK8 provided resistance to cisplatin-mediated apoptosis; and this protection occurred through an enhanced phosphorylation of c-Jun NH(2)-terminal kinase (JNK). Our findings implicate an underlying molecular mechanism in which CK8 is required for cisplatin resistance.     

晨尿脱落细胞角蛋白CK-20基因表达的检测及其临床意义

目的：探讨尿脱落细胞角蛋白（CK－20）基因表达的临床意义。方法：采用逆转录－聚合酶链反应技术，检测73例膀胱移行上皮细胞癌（TCC）患者（研究组）、20例泌尿系统非恶性肿瘤疾病患者（对照组）和21例正常人（正常组）晨尿脱落细胞CK－20基因表达，同时行尿脱落细胞学检查。结果：研究组尿脱落细胞CK－20基因表达的检出率为86．3％（63／73），明显高于尿脱落细胞学检查对TCC的检出率[20.5%(15/73)];对照组检出率为20．0％（4／20）；正常组检出率为0（0／21）。G3级TCC患者尿脱落细胞CK－20基因表达的检出率为100．0％（20／20）明显高于G1、G2级患者的76．5％（26／34）和89．5％（17／19）；T2－T4期尿脱落细胞CK－20基因表达的检出率为93．1％（27／29），明显高于Tis-T1期的81．8％（36／44）。结论：尿脱落细胞CK－20基因表达的检测有望成为1种灵敏、特异的TCC标志物。     

Serum Cytokeratin 18 as a Potential Early Marker for Chemotherapy Response in Breast Cancer Patients: A Prospective Study

Background: Currently, it is well recognized that response to neoadjuvant chemotherapy is an important predictive factor for survival in breast cancer patients. However, it is still an area of research about which patient would respond to the neoadjuvant chemotherapy. Methods: Serum CK18 levels were measured using ELISA from 52 newly diagnosed breast cancer patients, at presentation and after first cycle of neo-adjuvant chemotherapy. Pre- and post-treatment CK-18 levels were correlated with several clinical and pathological parameters. At the end of neoadjuvant treatment, changes in serum CK18 levels were correlated with tumors’ response to therapy. Results: Significant elevation of pre-chemotherapy CK18 level was observed in patients who had progressive disease compared to those who had complete or partial response to therapy (P=0.006 and P<0.001, respectively). Significantly higher CK18 levels were observed post-chemotherapy in complete and partial responders, in contrast to patients with stable or progressive disease (P=0.012% and P=0.001%, respectively). The percent of change was significantly higher in complete responders compared to patients who had stable or progressive disease (P=0.043% and P=0.045%, respectively). Conclusion: Our results suggest that patients with increasing CK18 level following chemotherapy are potential responders to their neoadjuvant protocol. Thus, the measurement of serum CK18 early in the treatment course could be a simple, noninvasive way to predict tumor response to neoadjuvant chemotherapy.     

定量RT-PCR检测乳腺癌患者外周血中 CK19 mRNA表达的意义

目的:建立实时荧光定量逆转录-多聚酶链反应法(RT-PCR)检测乳腺癌患者外周血细胞角蛋白19(CK19)mRNA表达的状况,并探讨其临床意义.方法:70例经病理诊断的乳腺癌患者和30名健康对照者,以实时荧光定量RT-PCR检测其外周血CK19 mRNA的表达.结果:70例乳癌患者外周血CK19 mRNA表达的阳性率为32.9%(23/70),30例对照者的阳性率为3.3%(1/30),经统计学分析,两者差异具有显著性差异(P=0.002).在不同分期的乳腺癌患者中均存在不同程度CK19 mRNA的表达,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期患者外周血CK19 mRNA阳性率随分期增加而增高.结论:实时荧光定量RT-PCR方法可检测出各期乳腺癌患者外周血中CK19 mRNA的表达,具有较高的敏感性和特异性,提示循环肿瘤细胞可能存在于乳腺癌发展的各个阶段.     

细胞角蛋白亚型和TTF-1判断癌性体腔积液原发灶的价值

目的：评价细胞角蛋白亚型（CKs）和甲状腺转录因子-1（TTF-1）对判断癌性体腔积液原发灶的价值。方法：收集100例新鲜体腔积液，其中62例为癌性积液。5例非上皮性恶性体腔积液，33例为良性积液。采用石蜡包埋细胞块技术和免疫细胞化学技术对100例体腔积液标本检测CK5／6．CK7、CK18、CK19、CK20和TTF-1的表达状况。结果：CK5／6表达见于肺、子宫颈和食管来源的鳞癌细胞。CK18表达仅见于腺癌细胞。CK5／6（＋）／CK18（-）检测鳞癌细胞的敏感性为83.3％。特异性为100％。CK5／6（-）／CK18（＋）检测腺癌细胞的敏感性为89．8％，特异性为100％。CK7（-）／CK20（＋）仅见于大肠腺癌。肺腺癌细胞TTF-1表达阳性率为78．6％，小细胞癌阳性率为100％。TTF-1诊断肺腺癌细胞的敏感性为78．6％．特异性为97．1％。结论：单独的细胞角蛋白亚型检测对于判断体腔积液癌细胞来源具有局限性．采用组合细胞角蛋白各亚型和TTF-1对于判断体腔积液癌细胞来源仍有重要参考价值。