MTT比色法检测人肿瘤细胞辐射敏感性的体外研究

目的 探讨MTT比色法在人肿瘤细胞辐射敏感性检测中的价值.方法 用1、2、4和8 Gy的γ射线照射肝癌细胞(HepG2)、食管癌细胞(EC-9706)和乳腺癌细胞(MCF-7),观察存活分数(SF)和平均致死剂量(D0).结果 γ射线剂量为2、4、8 Gy时,HepG2 和EC-9706的SF均显著低于MCF-7(P＜0.05、＜0.01);D0值HepG2 (2.36 Gy)＜EC-9706(2.70 Gy)＜MCF-7(3.95 Gy).HepG2 辐射敏感性最高,MCF-7最低.结论 MTT法检测人肿瘤细胞辐射敏感性简便、快捷且准确性较高,对指导临床个体化放疗有重要作用.     

硼替佐米对HCT8细胞增殖、凋亡及黏附能力的影响

目的: 观察硼替佐米对HCT8细胞增殖、凋亡及黏附能力的影响.方法: 不同浓度梯度(12.5-200 nmol/L)的硼替佐米作用于HCT8细胞后, 用MTT检测细胞增殖抑制作用; 25 nmol/L的硼替佐米作用48 h后, 流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率; Western blot检测E-cadherin、β-catenin、cyclinD1和NF-κB表达.结果: 硼替佐米对HCT8细胞的增殖抑制作用有时间和浓度的依赖性. 25 nmol/L的硼替佐米作用48 h诱导细胞的凋亡, 凋亡率为12.3%,显著高于对照组( P<0.05), 上调了E-cadherin和β-catenin蛋白的表达, 下降了NF-κB和cyclinD1蛋白的表达.结论: 硼替佐米可以抑制HCT8细胞的增殖,诱导细胞凋亡. 抑制NF-κB通路的激活有可能为其作用机制之一; 并有可能增加细胞之间的黏附, 降低肿瘤的远处转移.     

纳米羟基磷灰石人工心脏机械瓣膜对细胞毒性评价

目的用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测羟基磷灰石（HA）对人脐带内皮细胞可能存在的细胞毒性。方法用MTT比色方法评价材料的细胞毒性。设常温漫提液组和高温浸提液组。两组均设置各自对应的阳性和阴性对照组。将加入浸提液和材料并培养72h后的各组样品分别在倒置相差显微镜下观察细胞在浸提液中及在材料边缘的形态变化及生长状况,以细胞毒性实验来评价生物材料生物相容性。参照国际标准化组织（ISO）制定的细胞毒性实验的标准,即ISO10993—5：1992（医疗器械生物学评价细胞毒性实验体外法》之评价标准和要求。结果材料浸提液与细胞共培养组24h时观察常温浸提液、高温浸提液及阴性对照组的HUVEC细胞形态、数量,各实验组与阴性对照组差异无统计学意义。结论HA材料对人脐带内皮细胞生长抑制反应级别为1级或0级,无明显毒性作用,有良好的细胞相容性。     

氟化钠对血管平滑肌细胞增殖活性的影响

目的 研究氟对血管平滑肌细胞增殖活力的影响。方法 对大鼠胸主动脉平滑肌细胞采用组织块培养法。应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞增殖活性和生化方法检测细胞内蛋白和丙二醛(MDA)含量。结果 加氟培养胸主动脉平滑肌细胞48、72h时间段在1．0～15．0mgF^-/L组随着投氟量的增加，细胞增殖活性有所降低，且在25．0mgF^-/L组各时间段细胞增殖活性降低最为明显。在同一时间段：MDA含量随着投氟浓度的增加而增加，72h时间段的MDA含量较24h时间段的相同氟作用浓度下MDA明显下降。结论 随着氟作用时间的延长和浓度的增加对血管平滑肌细胞增殖活性降低显，且氧化应激在高氟情况下对细胞毒性中有重要作用。     

Genistein-磁性纳米微粒对胃癌细胞株SGC-7901生长及凋亡的影响

目的:探讨Genistein-磁性纳米微粒(Genistein-magnetic-nanoparticles.GEN-M-NPs)对胃癌细胞株SGC-7901生长及凋亡的影响.方法:利用化学共沉淀法制备GEN-M-NPs,透射电镜观察纳米微粒的形态,高效液相法测定包封率.以胃癌细胞株SGC-7901为实验对象,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法观察GEN-M-NPs和Genistein对其增殖活性的影响,采用流式细胞术检测细胞凋亡率,琼脂糖凝胶电泳观察DNA片段化改变情况.结果:GEN-M-NPs呈球形,粒径约105 nm,分布均匀.包封率约为10.3%.GEN-M-NPs对SGC-7901细胞生长有明显抑制作用,且呈剂量和时间依赖性(P＜0.05).与单药Genistein作用组相比,GEN-M-NPs具有缓释性(86.04%vs 67.11%.P＜0.05).流式细胞仪检测不同浓度GEN-M-NPs作用72 h后的细胞凋亡率分别是5.62%±2.04%(10 μmol/L)、13.46%±2.02%(20 μmol/L)、26.40%±3.84%(40μmol/L)、37.34%±4.68%(80 μmol/L)、49.43%±8.29%(100 μmol/L).阴性对照组的凋亡率为2.60%±1.34%.DNA凝胶电泳结果显示40 μmol/L组作用24 h可见明显的凋亡细胞形成的梯状条带.结论:GEN-M-NPs在体外能有效地抑制胃癌细胞增殖并诱导细胞凋亡,与Genistein相比,有缓释性.     

姜黄素对肝癌细胞株HepG-2的抑制作用

目的探讨姜黄素(CUR)对人肝癌细胞株(HepG-2)细胞增殖的影响及CUR在不同浓度和不同作用时间的体外抗肿瘤作用。方法将不同浓度的CUR(5,10,20,30,40,50 ug/ml)作用于HepG-2,以含0.1%二甲基亚砜的RPMI 1640培养基加细胞为空白对照,药物作用48 h后,利用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)法测定OD值,计算细胞增殖抑制率,利用集落形成试验检测药物对细胞生长增殖的抑制作用。结果姜黄素对HepG-2的增殖有抑制作用,抑制率有量效关系,并呈时间依赖性。药物作用48 h后,不同浓度CUR(5,10,20,30,40,50 ug/ml)的抑制率分别为:0.375,0.437,0.530,0.662,0.781,0.846。与空白对照组比较,CUR对HepG2有明显的抑制作用(P<0.05)。结论 CUR可以明显抑制HepG-2的生长,且存在剂量--时间的依赖性。     

抑制脂肪酸合成酶对大肠癌细胞生长的影响及其机制

背景:流行病学研究显示,大肠癌的发生、发展与饮食中脂肪酸的含量和种类有关,而目前有关脂肪酸代谢与大肠癌关系的研究较少。目的:探讨抑制脂肪酸合成酶（FAS）对人大肠癌细胞生长的影响及其作用机制。方法:在体外实验中应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法观察FAS抑制剂Cerulenin对大肠癌细胞LoVo生长的抑制作用,并通过流式细胞仪（FCM）对细胞周期变化和细胞凋亡进行检测。结果:Cerulenin可抑制LoVo细胞生长,其抑制作用具有剂量依赖性。2.5、5、10和20 mg/L Cerulenin作用48h的抑制率分别为3.6％±3.3％、7.8％±4.0％、38.5％±1.6％和58.7％±5.6％,与对照组比较有显著差异（P<0.05）。FCM测定显示,Cerulenin可引起LoVo细胞发生G2/M期阻滞。10mg/L Cerulenin作用48h可使68.2％±3.2％的LoVo细胞阻滞于G2/M期,与对照组比较有显著差异（P<0.05）。Cerulenin可诱导LoVo细胞发生细胞凋亡,10mg/L Cerulenin作用12、24和48h后上。LoVo细胞的凋亡率分别为1.3％±0.9％、4.7％±1.4％和39.0％±5.8％,后两组与对照组比较有显著差异（P<0.05）。结论:抑制FAS可抑制大肠癌细胞生长,其机制可能是诱导细胞发生G2/M期阻滞和细胞凋亡。     

黄芩甙对HBsAg和HBeAg的体外抑制作用

目的：观察黄芩甙(Baicalin,Bai)对2．2．15细胞分泌HBsAg和HBeAg的影响，探讨黄芩甙的体外抗HBV作用。方法：通过四甲基偶氮唑盐(MTT)法观察黄芩甙对2．2．15细胞的影响，采用ELlSA法检测分析黄芩甙对2．2．15细胞分泌m6Ag、HBeAg的抑制作用。结果：黄芩甙在2．2．15细胞上半数毒性浓度大于15mg／ml，在该浓度下对HBsAg、HBeAg的抑制率分别达100％、88％以上，在黄芩甙浓度为0．94～15mg／ml时，对2．2．15细胞分泌HBsAg、HBeAg的抑制率高于70％，治疗指数分别为65．22和21．74。结论：黄芩甙有显著的体外抑制HBV作用，属低毒有效药物，具有潜在的抗HBV开发前景。     

Toll样受体9在食管鳞癌细胞的表达及作用

目的 观察Toll样受体9(TLR9)在食管鳞癌细胞的表达及作用.方法 用RT-PCR方法检测食管鳞癌细胞系TE10、TE30和TE70上TLR9的表达;流式细胞术检测TE10细胞上TLR9的表达;用TLR9的激动剂CpG寡脱氧核苷酸(CpG ODN) 10μg/ml分别作用TE10细胞12 h、24 h和48 h后,用MTT法检测细胞生长抑制率.结果 TE10细胞上有TLR9的表达;TLR 9激动剂CpG ODN作用于TE10细胞后不同时间均能明显促进TE10细胞生长(P＜0.01).结论 TLR9激动剂CpG ODN可促进食管鳞癌细胞的增殖,提示TLR9可能是食管鳞癌治疗的靶点之一.     

藤梨根提取物对肺癌A549细胞凋亡及细胞周期的影响

目的 观察藤梨根乙酸乙酯提取物对肺癌A549细胞生长增殖、细胞周期及凋亡的影响.方法 体外培养肺癌A549细胞,分别给予不同浓度的藤梨根乙酸乙酯提取物进行干预,台盼蓝计数活细胞绘制不同浓度药物作用后细胞的生长曲线;四甲基耦氮唑蓝(MTT)比色法测定不同浓度药物作用不同时间对A549细胞生长的抑制率;采用流式细胞术(FCM)测定肺癌细胞周期、凋亡率变化;采用透射电镜观察药物作用后细胞的超微结构变化.结果 台盼蓝计数活细胞及MTT实验结果 均显示当药物浓度在20～160 μg/ml之间时,体外藤梨根提取物可明显抑制肺癌A549细胞的生长,呈现出明显的时间和剂量依赖性.FCM检测显示药物作用后,Go/G1期细胞数目增多,S期和G2/M期细胞数目相应减少,细胞发生G0/G1期阻滞,细胞凋亡率亦明显增加,随药物浓度增加、作用时间延长,其细胞周期阻滞作用及凋亡诱导作用逐渐增强.药物处理48 h后各组A549细胞透射电镜下均可见不同阶段典型的凋亡细胞形态学变化.结论 藤梨根提取物对人肺癌A549细胞生长有明显的抑制作用,呈现时效-量效关系,其作用与使细胞周期发生阻滞和诱导细胞凋亡有关.     

人食管癌顺铂耐药细胞系Ec9706/cDDP的建立及其生物学特征

目的:建立人食管癌顺铂耐药细胞系Ec9706/cDDP,探讨其生物学特征.方法:采用顺铂(cDDP)中等浓度、间歇作用方法历时9mo建立耐药细胞系Ec9706/cDDP,采用MTT法测定其对cDDP的耐药指数,观察冻存、撤药对耐药性的影响,比较耐药与亲本细胞生长曲线、群体倍增时间及贴壁率的不同,流式细胞仪测细胞周期,软琼脂实验测细胞的恶性增殖能力,罗丹明实验测其对药物的摄入、排出能力.结果:人食管癌顺铂耐药细胞系Ec9706/cDDP的耐药指数为15.7,冻存对耐药性影响不大,撤药培养可使耐药性降低,耐药细胞群体倍增时间延长(29.79±0.48hvs25.79±0.45h,P<0.05),生长缓慢,G0/G1、S期细胞比例增加(63.18%±5.21%vs52.81%±4.36%,P<0.05;36.49%±3.93%vs26.70%±2.62%,P<0.05),G2期细胞减少(0.33%±0.02%vs20.49%±3.71%,P<0.05),克隆形成率明显高于亲本细胞(69%vs24%,P<0.05),对罗丹明的摄入减少,排出增多.结论:成功建立了人食管癌顺铂耐药细胞系Ec9706/cDDP,且耐药性较稳定.     

CV11974阻断血管紧张素Ⅱ对培养心肌细胞活力的影响

目的　本研究应用新型的非肽类血管紧张素Ⅱ (ANGⅡ )受体拮抗剂CV1 1 974,特异性地阻断ANGⅡ受体(AT1 ) ,观察它对培养心肌细胞活力的影响 ,旨在探讨心肌细胞功能下降的细胞机理 ,为临床正确应用ANGⅡ受体拮抗剂提供实验依据。方法　本研究利用培养的乳鼠心肌细胞 ,根据活细胞线粒体在能量代谢过程中可作用于甲基噻唑基四唑 (MTT)产生蓝紫色结晶产物 (formazan)这一原理 ,应用比色法测定ANGⅡ对培养心肌细胞的活力的影响和CV1 1 974的干预作用。结果 :ANGⅡ在 1 2h之内使formazan产物的OD值逐渐上升 ,1 2h达到高峰 ,此后开始下降 ,至 2 4h已低于正常水平 ,它们的OD值之间均差异有极显著性意义 (P <0 .0 1 ) ,CV1 1 974可以显著地拮抗ANGⅡ对心肌细胞活力的影响 ,应用CV1 1 974后所有时相点MTT产物的OD值之间差异无显著性意义 ,(P >0 .0 5)。结论　该结果提示ANGⅡ在早期具有提高心肌细胞活力的效应 ,CV1 1 974可以显著地拮抗ANGⅡ对心肌细胞活力的影响。这一发现对了解ANGⅡ在心功能不全代偿和心衰发生中的作用及临床如何恰当使用ANGⅡ受体拮抗剂具有重要参考价值     

携带TRAIL基因的新型溶瘤病毒体外诱导肝癌细胞凋亡

目的: 评价携带TRAIL基因的肿瘤特异性增殖型腺病毒CNHK500-hTRAIL在人肝癌细胞株中介导TRAIL基因表达及对肝癌细胞的凋亡诱导作用.方法: CNHK500-hTRAIL感染人肝癌细胞株HepG2、Hep3B以及人正常肝细胞株WRL-68,通过增殖实验观察病毒的选择性增殖能力, 并进行酶联免疫吸附试验(ELISA)检测TRAIL蛋白的表达量, 四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测其杀伤肝癌细胞的功效, 流式细胞术(FCM)检测其对细胞早期凋亡的影响.结果: CNHK500-h TRAI L能选择性地在HepG2、Hep3B细胞内高效增殖; 感染72 h后HepG2、Hep3B细胞培养上清中TRAIL的表达量分别为167.4、173.22 ng/L; 在MOI = 0.1时, CNHK500-hTRAIL即可明显杀伤HepG2、Hep3B细胞, 并选择性地诱导细胞早期凋亡,均显著高于空病毒CNHK500及非增殖型腺病毒Ad-hTRAIL; 而对人正常肝细胞株WRL-68则无明显杀伤作用.结论: 携带TRAIL基因的肿瘤特异性增殖型腺病毒载体对肿瘤细胞的杀伤能力和目的基因的表达, 明显优于单纯的病毒载体及传统的非增殖型腺病毒载体, 应用前景广阔.     

当归促进大肠癌HCT-8细胞增殖及抑制5-氟尿嘧啶致凋亡的作用

1 材料和方法 1.1 材料 大肠癌HCT-8细胞为中国医学科学院药物研究所提供;5-氟尿嘧啶(5-Fu)注射液系天津氨基酸公司人民制药厂出品;当归注射液系北京第四制药厂出品;RPMI-1640培养基为Gibco BRL产品;小牛血清购自天津生化制品厂;胰蛋白酶购自天象人生物制品有限公司;DMSO系天津化学试剂六厂出品;PI(碘化丙啶)、RNAse(RNA酶)、MTT(四甲基偶氮唑盐)均为Sigma产品。     

藤梨根乙酸乙酯提取物对肺癌A549细胞增殖的影响

目的 探讨藤梨根乙酸乙酯提取物影响肺癌A549细胞生长增殖的作用机制.方法 体外培养肺癌A549细胞,分别给予不同浓度的藤梨根乙酸乙酯提取物进行干预,倒置显微镜观察藤梨根乙酸乙酯提取物作用后A549细胞形态学变化,四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)检测藤梨根乙酸乙酯提取物对A549细胞增殖活性的影响,集落形成实验观察藤梨根乙酸乙酯提取物对肺癌克隆原细胞增殖的影响,3H-掺入法检测藤梨根乙酸乙酯提取物对A549细胞DNA合成的影响,免疫组化SP法检测用药后A549细胞Ki-67抗原表达变化.结果 倒置显微镜下观察细胞形态学变化、MTT实验、集落形成实验结果均显示在体外藤梨根乙酸乙酯提取物在一定浓度下可以抑制肺癌A549细胞的生长,当药物浓度在20～160 μg/ml时,抑制呈现出明显的时间和剂量依赖性.并且A549细胞epm值及增殖指数随着药物剂量的增加和作用时间的延长而逐渐降低,仍以40、80、160 μg/ml组作用明显,与对照组比较差异显著,有统计学意义(P＜0.05).结论 藤梨根乙酸乙酯提取物可以明显抑制肺癌A549细胞的生长、增殖,其机制可能与抑制细胞DNA合成、降低Ki-67抗原表达有关.     

灵芝孢子粉对人肝癌细胞HepG2及裸鼠移植瘤生长的抑制作用

目的:研究灵芝孢子粉对人肝癌细胞HepG2生长的抑制作用.方法:运用MTT法研究灵芝孢子粉水溶性成份在体外对HepG2细胞的抑制作用,并利用裸小鼠的移植瘤模型研究灵芝孢子粉在体内对HepG2细胞的生长抑制作用.HE染色观察肝癌组织结构和细胞形态改变.结果:TMTT实验结果表明灵芝孢子粉对HepG2细胞的IC50值随作用时间增加而减小,72 h达到最低,为2.14 g/L.体内抑瘤实验结果显示灵芝孢子粉为2000 mg/kg时,对裸小鼠移植瘤的抑制率为57.0%.镜下观察灵芝孢子粉治疗组肿瘤坏死组织较多,细胞异型性较小.结论:高浓度及高剂量的灵芝孢子粉具有抑制肿瘤细胞生长的作用.     

血小板源生长因子诱导人胚胎肺纤维细胞增殖信号转导通路研究

目的研究血小板源性生长因子（PDGF）对人胚胎肺纤维细胞（HFL1）的增殖作用。方法采用四甲基偶氮唑蓝法检测不同浓度PDGF对HFL1的增殖作用,观察不同浓度细胞外信号调节激酶抑制剂PD98059、p38激酶抑制剂SB203580及PI-3K激酶抑制剂Wortmarmin（WMN）对PDGF诱导HFL1增殖作用的影响。结果PDGF 50μg／ml时对HFL1的诱导增殖作用明显,并呈剂量依赖性;PD980591μmol/L、WMN100nmol/L、SB2035805μmol/L可抑制PDGF诱导的HFL1增殖。结论PDGF诱导HFL1增殖是通过蛋白激酶和H4K信号转导途径实现的。     

环氧化酶-2选择性抑制剂抑制人食管癌细胞的生长及其诱导凋亡

目的:探讨NS-398对食管癌细胞的生物学效应及可能的作用机制.方法:常规方法培养食管癌Eca-109和TE-13细胞,以不同浓度NS-398(5,10,20,40,80 μmol/L)处理24,48,72 h.采用四甲基唑蓝法(MTT)检测NS-398对Eca-109和TE-13细胞生长的抑制作用;流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡及COX-2,Bcl-2,Bax蛋白的表达;TUNEL法检测2种细胞凋亡情况;用放射免疫分析(RIA)检测培养液上清中前列腺素E2(PGE2)含量.结果:NS-398可抑制2种细胞的生长,并随药物浓度的增高及作用时间的延长抑制率逐渐增高,并使2种细胞产生的PGE2明显降低.NS-398使2种细胞G0/G1期细胞显著增多,S期细胞显著减少(Eca-109:F=22.39,P＜0.01;TE-13:F=46.99,P＜0.01),并引起了明显的细胞凋亡.NS-398使2种细胞COX-2和Bcl-2表达显著减少,而Bax表达显著增高.COX-2和Bcl-2的表达呈显著正相关(Eca-109:r=0.925,P＜0.01;TE-13:r=0.925,P＜0.01),COX-2和Bax表达呈显著负相关(Eca-109:r=-0.937,P＜0.01;TE-13:r=-0.703,P＜0.01)、Bax和bcl-2表达呈显著负相关(Eca-109:r=-0.926,P＜0.01;TE-13:r=-0.753,P＜0.01).结论:NS-398可抑制食管癌细胞的增殖并可诱导其凋亡,应用COX-2选择性抑制剂对食管癌进行化学预防或辅助治疗具有可能性.     

三七总皂甙对血管平滑肌细胞增殖及c-myc基因表达的影响

目的探讨三七总皂甙对血小板源生长因子刺激的血管平滑肌细胞增殖的影响及其可能机制。方法运用血小板源生长因子刺激兔体外血管平滑肌细胞增殖模型,通过四甲基偶氮唑盐比色法、流式细胞术及免疫细胞化学法观察三七总皂甙对其增殖活性、细胞周期及c-myc蛋白表达的影响。结果血小板源生长因子显著刺激血管平滑肌细胞增殖,三七总皂甙呈浓度依赖性抑制血管平滑肌细胞增殖,对血小板源生长因子诱导的血管平滑肌细胞增殖亦具有显著抑制作用;三七总皂甙作用下血管平滑肌细胞处于G1/G0期的细胞数增多,而G2/S期的细胞数显著减少,c-myc蛋白的表达亦降低。结论三七总皂甙对基础状态下及血小板源生长因子诱导的血管平滑肌细胞增殖均具有显著抑制作用,部分机制与其阻滞血管平滑肌细胞G1/G0期向S期转化以及下调c-myc基因表达有关。     

三氧化二砷对肺成纤维细胞株NIH3T3增殖和凋亡的影响

目的 探讨三氧化二砷（As2O3）的抗肺纤维化（PF）作用及其机制。方法将对数生长期成纤维细胞株NIH3T3随机分为对照组及观察1组、观察2组,分别用含0、2、4μmol／LAs2O3的DMEM培养液处理24h和48h,采用四甲基偶氮唑蓝（MTF）法检测细胞增殖抑制率（IR）,流式细胞术检测细胞周期分布,透射电镜和Hoechst染色方法观察细胞超微结构及细胞核形态变化。结果 观察1组和观察2组细胞增殖IR均显著高于对照组,尤以作用48h时和观察2组为著（P均〈0.01）;观察1组和观察2组G0／G1,期细胞显著多于对照组,而G2／M期细胞显著少于对照组,尤以观察2组为著（P均〈0.01）;观察1组和观察2组细胞具有早、中期凋亡形态学特征（细胞膜结构完整、细胞质浓缩、染色质边集、固缩）。结论As2O3可抑制肺成纤维细胞株NIH3T3增殖并促进其凋亡,此为临床PF治疗提供了新思路。