锰对PC12细胞的增殖抑制及其MAPKs活化表达的实验研究

目的　筛选锰对PC12细胞增殖抑制作用的时间及剂量效应关系 ,观察在此条件下细胞MAPKs信号通路活化表达的特点 ,探讨锰作为PD相关危险因子神经毒性作用的分子机制。方法　取对数生长期PC12细胞株 ,用 2 0 0、4 0 0、6 0 0、80 0 μmol LMnCl2 培养液分别培养 1、2、3、4天 ,噻唑蓝 (MTT)比色试验和平板集落形成实验筛选锰的毒性剂量 ,台盼蓝染色法绘制细胞生长曲线 ;western blot法检测p Erk ,p p38。结果　MTT和平板克隆结果显示 2 0 0～ 80 0 μmol LMnCl2 作用 1、2、3、4天对PC12细胞有抑制作用 ,且呈剂量和时间依赖趋势 ,6 0 0 μmol LMnCl2 作用 4天对PC12细胞的抑制率达 5 0 %以上。Western blot结果显示 6 0 0 μmol LMnCl2 作用 1～ 4天 ,p Erk2逐渐降低 ,作用 2天时较对照降低了 75 % (n =3,P <0 .0 5 ) ,2 0 0、4 0 0、6 0 0 μmol LMnCl2 分别作用 4天时 ,p Erk逐渐降低 ,4 0 0 μmol LMnCl2 作用 4天较对照降低了 78% (n =3,P <0 .0 1) ;6 0 0 μmol LMnCl2 作用 1～ 4天可见p p38逐渐升高 ,作用 3天时较对照组增加 6 .6倍 (n =3,P <0 .0 5 ) ,2 0 0、4 0 0、6 0 0 μmol LMnCl2 分别作用 4d时 ,p p38逐渐升高 ,当 4 0 0 μmol LMnCl2 作用 4天时较对照组升高了 4 .7倍(n =3,P <0 .0 5 )。     

锰对PCI2细胞的增殖抑制及其MAPKs活化表达的实验研究

目的 筛选锰对PCI2细胞增殖抑制作用的时间及剂量效应关系，观察在此条件下细胞MAPKs信号通路活化表达的特点，探讨锰作为PD相关危险因子神经毒性作用的分子机制。方法 取对数生长期PCI2细胞株，用200、400、600、800μmol／L MnCl2培养液分别培养1、2、3、4天，噻唑蓝(MTT)比色试验和平板集落形成实验筛选锰的毒性剂量，台盼蓝染色法绘制细胞生长曲线；western-blot法检测p-Erk，p-p38。结果MTT和平板克隆结果显示200-800μmol／L MnCl2作用1、2、3、4天对PC12细胞有抑制作用，且呈剂量和时间依赖趋势，600μmol／L MnC12作用4天对PCI2细胞的抑制率达50％以上。Western-blot结果显示600μmol／LMnCl2作用1-4天，p-Erk2逐渐降低，作用2天时较对照降低了75％(n=3，P＜0．05)，200、400、600μmol／LMnCl2分别作用4天时，p-Erk逐渐降低，400μmol／L MnCl2作用4天较对照降低了78％(n=3，P＜0．01)；600μmol／L MnCl2作用1-4天可见p-p38逐渐升高，作用3天时较对照组增加6．6倍(n=3，P＜0．05)，200、400、600μmol／L MnCl2分别作用4d时，p-p38逐渐升高，当400μmol／L MnCl2作用4天时较对照组升高了4．7倍(n=3，P＜0．05)。结论 锰的神经毒性可能是通过阻抑p-ERK通路上调p-p38引发细胞增殖抑制和诱导细胞凋亡实现的。     

锰对PC12细胞的增殖抑制及其Erk1/2活化表达

目的　探讨锰在细胞丝裂原活化蛋白激酶信号转导通路Erk1/2活化表达的作用及其相互之间的关系 ,研究其对基底神经节损伤作用的机制。方法　取对数生长期PC12细胞 ,用含 2 0 0、40 0、60 0、80 0 μmol/LMnCl2 的培养液 ,分别作用 1、2、3、4d ,噻唑蓝 (MTT)比色试验、平板集落形成实验和台盼蓝拒法筛选锰的细胞毒性剂量 ;免疫印记法 (Western blot)检测磷酸化Erk1/2 (p Erk2 )水平。结果　MTT和平板克隆形成实验检测结果显示 2 0 0～ 80 0 μmol/LMnCl2 作用 1、2、3、4d均对PC12细胞株有显著的抑制作用 ,且呈剂量和时间依赖效应关系 ,而且 60 0 μmol/LMnCl2 作用 4d对PC12的抑制率可达 5 0 %以上。Western blot结果显示 60 0 μmol/LMnCl2 作用 1、2、3、4d可见p Erk2逐渐降低 ,其中作用 2d时较对照明降低了 75 % (n =3 ,P <0 0 5 ) ,2 0 0、40 0、60 0 μmol/LMnCl2 分别作用 4d时 ,p Erk2亦逐渐降低 ,当 40 0 μmol/LMnCl2 作用 4d时较对照明降低了 78% (n =3 ,P <0 0 1)。结论　使用Erk通路MEK1/2特异性阻制剂PD980 5 9实验结果表明 :锰可能通过MEK1/2磷酸化下游的Erk1/2 ,下调p Erk。锰对PC12细胞的毒性作用可能是通过关闭胞外信号调节激酶(ERK)通路引发细胞增殖抑制     

锰致PC12细胞凋亡作用及与p-Erk关系

目的以鼠嗜铬神经瘤细胞(PC12)为模型,筛选锰对神经细胞增殖抑制作用的时间及剂量,观察锰作用下PC12细胞的细胞形态学、生化指标改变和磷酸化的胞外信号调节激酶(p-Erk)的表达。方法用200、400、600、800μmol/L MnCl₂的培养液,分别作用对数生长期PC12细胞1、2、3、4 d后,四甲基偶氮塞唑蓝(MTT)筛选锰的细胞毒性剂量;透射电镜观察细胞形态学变化;琼脂糖凝胶电泳检测MnCl₂对PC12细胞基因组DNA的影响。免疫印迹法(western blot)检测p-Erk。结果 MTT显示200～800μmol/L MnCl₂作用1、2、3、4 d对PC12有显著的抑制作用,呈剂量和时间依赖趋势,600μmol/L MnCl₂作用4 d对PC12的抑制率50%;600μmol/L MnCl₂作用4 d电镜可见细胞凋亡,同样条件下细胞DNA碎片化;Western blot显示600μmol/L MnCl₂作用1、2、3、4 d可见p-Erk2逐渐降低,其中作用2 d时较对照降低75%(n=3,P<0.05),200、400、600μmol/L MnCl₂分别作用4 d时,p-Erk亦逐渐降低,当400μmol/L MnCl₂作用4 d时较对照明降低78%(n=3,P<0.01);使用Erk通路MEK1/2特异性阻制剂PD98059实验结果表明:锰可能通过MEK1/2磷酸化下游的Erk,下调p-Erk。结论锰对PC12细胞的毒性作用可能是通过关闭胞外信号调节激酶ErK通路诱导细胞凋亡。     

锰诱导PC12细胞凋亡与P53、MDM2蛋白表达

目的 探讨锰对嗜铬细胞瘤细胞(PC12cells)凋亡的诱导作用及与抑癌基因P53、原癌基因MDM2蛋白表达的关系.方法 以PC12细胞作为多巴胺能神经元的模型细胞,取对数生长期的PC12细胞,用含200,400,800μmol/LMnCl2的培养液分别染毒培养24,36,48h.四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法检测细胞的生长情况,流式细胞仪(FMC)和原位缺口末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡状况;用免疫细胞化学法检测细胞P53、MDM2蛋白表达强度.结果 氯化锰可呈时间和剂量依赖性抑制PC12细胞的增殖和诱导细胞凋亡,抑制率为11.8%～73.6%,凋亡率为8.72%～53.60%.免疫化学法检测结果显示,随锰浓度的增高,P53蛋白的表达增加(P<0.01),而MDM2蛋白表达下降,差异有统计学意义(P<0.01),且呈剂量依赖关系.结论 锰可诱导PC12细胞凋亡,上调P53基因的表达和下调MDM2基因的表达可能在其诱导PC12细胞凋亡中起着重要的作用.     

电磁辐射诱导PC12细胞凋亡中丝裂原活化蛋白激酶的差别激活

目的探讨丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号转导系统的差别激活与电磁辐射诱导PC12细胞凋亡的关系。方法以65mWcm2电磁波辐照离体培养PC12细胞20min,分为辐照后即刻及3、12、24h共4个观察时相点,采用流式细胞仪检测PC12细胞凋亡率,采用蛋白质免疫印迹法检测ERK12、JNK、P38MAPK蛋白质磷酸化水平。结果电磁波辐照后即刻PC12细胞凋亡开始增加;3h后凋亡细胞进一步明显增多,凋亡率约为23.5%;12h后细胞凋亡率与3h相比,差异无统计学意义(P>0.05);24h后细胞凋亡再次明显增加,并达到高峰。电磁辐射后PC12细胞ERK12和JNK蛋白质磷酸化都明显增加,但ERK12的增加持续到3h,JNK蛋白磷酸化水平增高一直持续到12h,24h后两者都较对照组明显降低。P38MAPK蛋白质磷酸化水平在辐照后一直处于较高水平,其变化趋势呈双峰状,即在3h和24h出现2次磷酸化高峰。结论电磁辐射可以激活MAPK信号转导系统,但ERK12、JNK、P38MAPK表现为差别激活。MAPK信号转导系统可能参与了电磁辐射诱导的PC12细胞凋亡,正是MAPK这种差别激活才导致PC12细胞出现特有的凋亡变化形式。     

p38MAPK信号转导通路与细胞凋亡研究进展

丝裂原活化蛋白激酶(mitogen2activated protein kinase, MAPK)级联是细胞内广泛存在的丝/苏氨酸蛋白激酶超家族,是将细胞质的信号传递至细胞核并引起细胞核发生变化的重要物质.     

p38丝裂原活化蛋白激酶与细胞凋亡关系研究

p38丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPKs)信号通路除了参与基因转录调控外,p38 MAPK还参与细胞凋亡、细胞因子生成、细胞骨架重构等生物事件并发挥作用,被认为是细胞信息传递的交汇点和共同通路。本文就p38 MAPK的特征和作用、p38 MAPK信号转导途径与细胞凋亡的关系及相关研究方法进行了综述。     

金属诱导细胞凋亡及与MAPKs的关系

本文综述了金属诱导细胞凋亡的研究概况,并概要描述了细胞凋亡的发生发展过程过程与丝裂素活化蛋白激酶家族成员间的可能关系。主要内容包括：（１）国内外关于金属（镉、锌、铅、镁 、铜、镍、汞等）诱导细胞凋亡的情况,镉、镁、铬、铜、汞可诱导多种类型的细胞凋亡,且具有剂量时间,效应关系;锌可诱导也可抑制细胞凋亡,与剂量有关,镍可抑制细胞凋亡。（２）丝裂素活化蛋白激酶家族成员及其在细胞凋亡中的可能作用。大量文献     

JNK通路在MPP~+诱导PC12细胞凋亡中的作用

目的研究1-甲基-4-苯基-吡啶离子(MPP+)对PC12细胞的毒性作用及其机制。方法 PC12细胞体外培养,以100、300、500μmol/L MPP+进行染毒。Western blot法检测JNK1/2磷酸化水平;使用JNK通路阻断剂SP60012预处理细胞,TUNEL法观察其对MPP+诱导的细胞凋亡的影响。结果 MPP+染毒可以引起细胞JNK1/2的磷酸化水平增高,使用JNK通路阻断剂SP600125可以抑制MPP+诱导的PC12细胞凋亡。结论激活JNK通路可能是MPP+诱导PC12细胞凋亡、产生多巴胺能神经毒性的重要分子机制。     

锰对多巴胺能神经细胞PC12的毒性及其机制研究

为探讨锰 (Mn)抑制神经细胞增殖的机制 ,体外培养神经细胞株PC12 ,培养基分别含有 10 0、2 0 0及5 0 0mmol LMnCl2 ,作用 2 4、48、72h后 ,用四唑盐比色实验 (MTT)和平板克隆形成实验检测细胞的存活和生长 ;台盼蓝拒染法绘制生长曲线 ;DTNB法测定谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH -Px)的活性、丙二醛比色法测定丙二醛 (MDA)的含量 ;DNA凝胶电泳检测神经细胞凋亡。结果显示 ,MTT和平板克隆形成实验检测结果显示10 0～ 5 0 0mmol L的Mn均对PC12细胞株有显著的抑制作用 ,且呈剂量 效应关系。GSH Px活性降低 ;MDA的活性升高。DNA凝胶电泳结果显示锰能够诱导PC12细胞凋亡。提示锰对神经细胞PC12的增殖具有显著的抑制作用 ,其机制是通过降低过氧化物酶的活性、干扰神经细胞的DNA代谢和诱导神经细胞凋亡     

丝裂原活化蛋白激酶信号转导通路在电磁辐射诱导PC12细胞凋亡中的作用

目的 探讨丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号转导系统的差别激活与电磁辐射诱导PC12细胞凋亡的关系.方法 经MAPK特异性抑制剂SB203580、U0126预处理的PC12细胞接受65mW/cm2电磁波辐照20min,在辐照后3、24h2个观察时相点,采用蛋白质免疫印迹方法检测ERK1/2、JNK、P38 MAPK蛋白质磷酸化水平,采用Annexine-V-FITC标记流式细胞仪检测PC12细胞凋亡率.结果 电磁辐射后,PC12细胞ERK1/2的激活可以被U0126明显抑制,而SB203580对其无抑制作用.U0126和SB203580对辐照后JNK的活性无明显影响.SB203580可以明显抑制P38 MAPK的激活,而U0126对P38 MAPK激活的抑制作用不明显.SB203580可以明显减轻电磁辐射诱导的PC12细胞凋亡,而U0126预处理对细胞凋亡无明显影响.结论 电磁辐射诱导PC12细胞凋亡主要通过P38 MAPK信号通路的激活调控,而ERK通路对电磁辐射诱导的细胞凋亡无明显影响,JNK可能对辐照后早期的细胞凋亡有一定促进作用.     

2,5-己二酮诱导的PC12细胞损伤和凋亡

目的建立2,5己二酮诱导的PC12细胞凋亡模型。方法以PC12细胞为神经元的细胞模型,将2,5己二酮(30、40、50mmol/L)加入培养的PC12细胞中,四甲基偶氮唑盐检测细胞活性,Hochest33258观察细胞核变化,琼脂糖凝胶电泳检测DNA断裂、流式细胞仪检测细胞凋亡率,比较各组间的差异。结果随2,5己二酮浓度增加,细胞存活率下降(P<0.01);荧光显微镜观察有特征性的凋亡细胞核;琼脂糖凝胶电泳有明显的DNAladder;流式细胞仪检测凋亡率随2,5己二酮浓度的增大而增加(P<0.05)。结论一定浓度的2,5己二酮有导致PC12细胞损伤和凋亡的作用。