心肌营养素-1在心肌成纤维细胞增殖中的作用

目的：探讨心肌营养素-1（CT-1）在高血压心室重塑中的作用。方法：3-4代心肌成纤维细胞用于实验，分为对照组、助溶剂（二甲亚砜，DMSO）组、CT-1反义寡核苷酸组（ASODN）、正义寡核苷酸对照组（SODN）、PD98059组、AG490组、LY294002组。利用自制压力培养装置，将各组细胞置于160 mmHg压力下培养8 h。 STAT3、ERK1/2和PI3-K的活性通过Western blotting分析测定；MTT测定心肌成纤维细胞增殖。结果：高静水压明显促进心肌成纤维增殖，CT-1表达上调，CT-1ASODN干预后，CT-1ASODN能抑制高静水压所致的细胞增殖（0.132±0.013 vs 0.154±0.011，P<0.05），STAT3、ERK1/2和 PI3-K蛋白表达水平明显低于对照组（2.09±0.25 vs 2.47±0.28,P<0.05)、(1.13±0.19 vs 1.61±0.22,P<0.05)、（1.25±0.23 vs1.71±0.25,P<0.05)。AG490组明显减弱高静水压的促增殖作用（0.118±0.018 vs 0.155±0.010，P<0.05）并且增加ERK1蛋白磷酸化（1.85±0.18 vs 1.45±0.23，P<0.05）;PD98059增强高静水压的促增殖（0.185±0.011 vs 0.155±0.010，P<0.05）并且增加STAT3蛋白磷酸化（1.83±0.23 vs 1.58±0.22，P<0.05）, PI3/K阻断剂LY294002干预后对高静水压的促增殖作用无影响（0.157±0.015 vs 0.155±0.010，P>0.05）；SOND (0.151±0.010 vs 0.154±0.011, P>0.05) 和DMSO组(0.141±0.017 vs 0.155±0.010, P>0.05)与对照组相比对心肌成纤维细胞增殖无明显差别。结论：高静水压下，心肌成纤维细胞增殖主要通过STAT3通路；ERK1/2通路通过抑制STAT3的活性起负向调节作用，可能在防止心肌成纤维细胞过度增殖起重要的作用；PI3-K没有参与这一作用。上述STAT3通路与ERK1/2通路之间的相互作用可能有助于防止诱导成纤维细胞过度增殖。     

心肌营养素-1诱导小鼠心肌细胞分化抑制因子基因的表达

目的 :CT - 1是新近发现的一种细胞因子 ,属IL - 6家族成员 ,能够引起心肌细胞肥大而且具有强大而广泛的心肌保护功能。在心肌细胞中CT - 1主要通过JAK/STAT3信号转导途径介导心肌肥大 ,通过p4 2 /p4 4MAPK信号转导途径介导心肌保护作用。为了进一步研究其在心肌中的功能 ,观察了CT - 1对分化相关基因Id1、Id2和凋亡相关基因Fas、Bcl - 2、Bax表达的影响。并对CT - 1诱导Id2基因表达的分子机制进行初步的探讨。方法 :应用胰酶消化法分离培养BALB/C乳鼠心肌细胞 ,加CT - 1(1nmol/L)处理心肌细胞不同时间。提取总RNA ,用RT -…     

心肌营养素1诱导骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞

目的: 探索心肌营养素1(CT-1)对小型猪骨髓间充质干细胞(MSCs)向心肌样细胞分化的影响。方法: 获取、扩增稳定的成体西藏小型猪MSCs,鉴定成脂、成骨潜能。分4组诱导向心肌样细胞分化,包括空白对照组、5-氮杂胞苷(5-Aza)组、CT-1组、5-Aza和CT-1合用组。取诱导后4周的细胞加肌动蛋白(α-actin)和心肌肌钙蛋白T(cTnT)抗体,进行免疫荧光染色,最后计数红色荧光阳性染色率。结果: 分组诱导分化结果,合用组的诱导分化心肌样细胞α-actin阳性率为29.90%±4.76%,明显大于5-Aza组(17.73%±2.35%,P<0.01)、CT-1组(6.63%±0.55%,P<0.01)和空白对照组(1.62%±0.09%,P<0.01);5-Aza组明显大于CT-1组(P<0.01)和空白对照组(P<0.01);CT-1组明显大于空白对照组(P<0.05)。cTnT红色荧光染色结果显示:合用组的诱导分化心肌样细胞cTnT阳性率为36.50%±4.09%,明显大于5-Aza组(14.37%±1.65%,P<0.01)、CT-1组(7.50%±0.61%,P<0.01)和空白对照组(1.12%±0.23%,P<0.01);5-Aza组明显大于CT-1组(P<0.01)和空白对照组(P<0.01);CT-1组明显大于空白对照组(P<0.01)。结论: 适宜浓度的5-Aza(10 μmol/L)和CT-1(0.1 μg/L)能够在体外诱导小型藏猪骨髓MSCs转化为心肌样细胞,诱导后的细胞获得部分心肌细胞特异性蛋白的表达。CT-1与5-Aza联合可明显提高诱导率。     

NADPH氧化酶亚单位nox-1在心肌细胞急性缺氧复氧损伤时的变化及心肌营养素-1的作用

目的： 探讨心肌细胞急性缺氧复氧损伤时NADPH氧化酶亚单位nox-1的变化及心肌营养素-1的作用。方法: 用改良的方法培养出生1-３ d的乳鼠心肌细胞,分为6组：(1)对照组;(2)缺氧复氧组;(3)缺氧复氧+CT-1组;(4)缺氧复氧+CT-1+LY294002组 (PIK3/Akt 阻断剂);（5）缺氧复氧+CT-1+PD98059组（ERK 阻断剂）;（6）缺氧复氧+CT-1+助溶剂DMSO组。 CT-1 的浓度为10 μg/L。MTS法测定心肌细胞的存活率,四氯四乙基苯丙咪唑基羰化青碘化物（JC1）检测心肌细胞线粒体膜电位(Δψm),二氯荧光黄双乙酸盐（DCFH-CA）检测细胞活性氧（ROS）,流式细胞仪检测心肌细胞凋亡率。Nox-1蛋白采用Western blotting检测。结果: 缺氧复氧培养后心肌细胞凋亡率及细胞内ROS较对照组明显增加,分别是(19.7%±1.4% vs 2.1%±0.5%, 14.07%±1.25% vs 3.54%±0.86%, P<0.05),而心肌细胞存活率显著降低,线粒体膜电位（Δψm）下降;nox-1表达明显升高。CT-1处理的心肌细胞,较缺氧复氧组心肌细胞存活率明显上升 (87.0%±7.3%),而心肌细胞凋亡率及细胞内ROS 显著减少,Δψm水平增加,nox-1蛋白表达下调。而CT-1的这些作用能被PIK3/Akt和ERK阻断剂抑制。结论: 心肌细胞急性缺氧复氧损伤时NADPH氧化酶亚单位nox-1表达上调,而心肌营养素-1能通过下调nox-1表达,发挥对心肌细胞保护作用。     

心肌营养素1对谷氨酸诱导神经干细胞凋亡的作用

背景：心肌营养素1属于白细胞介素6细胞因子家族,近年发现其可能对中枢神经系统有重要保护作用。 目的：探索重组腺病毒心肌营养素1对谷氨酸诱导神经干细胞凋亡的保护作用,为脑损伤提供新的治疗措施。 方法：取新生Wistar大鼠海马神经干细胞,第2代培养第5天用于实验,神经干细胞分为3组：谷氨酸组、重组腺病毒心肌营养素1组及对照组,利用四唑蓝比色了解细胞存活情况及原位缺口末端标记技术检测细胞凋亡。 结果与结论：谷氨酸组神经干细胞呈现明显形态改变,重组腺病毒心肌营养素1组未见类似改变,在谷氨酸暴露后12,24,48及72 h MTT吸光度值均低于心肌营养素1组,而细胞凋亡率均高于心肌营养素1组。与其他两组比较,对照组相同时间点A值增高,细胞凋亡率降低。提示,心肌营养素1对谷氨酸损伤的神经干细胞具有保护作用,可以抑制神经干细胞凋亡,促进其存活和增殖。     

白介素1信号转导研究进展

白介素 1(IL 1)是在局部和全身炎症反应中起核心作用的细胞因子 ,其信号转导机制极为复杂。最近几年发现了几条重要的信号转导途径。分别为 :IL 1受体相关激酶途径、磷脂酰肌醇 3 激酶信号转导途径、JAK STAT信号通路和离子通道。这些信号转导途径的发现为深入理解IL 1的信号转导机制提供了新的理论 ,并为炎症治疗开辟了新思路     

白细胞介素-15研究进展

IL-15是近年来发现的一种较为重要的免疫因子。它与IL-2共享IL-2Rβ、γ亚基,因此二者有许多相似的功能:如激活T细胞和B细胞,诱导NK细胞的LAK活性等。本文对IL-15的墓因及蛋白结构、对免疫细胞的作用、信号转导途径,与IL-2的关系以及在一些疾病中的作用进行了综述。     

siRNA沉默HIF-1α对大鼠心肌细胞CT-1表达的影响

目的 研究低氧诱导因子-1α(HIF-1 α)在心肌细胞适应低氧环境中作用机制.方法 合成针对HIF-1α的siRNA片段,转染大鼠心肌细胞系H9C2.Real-time PCR检测HIF-1α和心肌营养素(CT-1) mRNA水平,Westernblot检测HIF-1α和CT-1蛋白水平.结果 低氧环境下,转染针对HIF-1α siRNA片段后HIF-1α mRNA水平、HIF-1 α蛋白质水平、CT-1 mRNA水平和蛋白水平均明显减低(P＜0.05).不进行转染时,CT-1 mRNA水平、HIF-1α蛋白和CT-1蛋白水平在低氧下比常氧下明显增高(P＜0.05).CT-1蛋白由对照组的0.34 ±0.05增至0.55 ±0.05(P＜0.05).结论 低氧情况下CT-1基因的调控作用有可能是通过低氧激活HIF-1α而诱导产生的,HIF-1α在心肌细胞适应低氧环境中具有重要作用.     

CT-1及TTC的GST融合蛋白表达质粒的构建及表达

目的 构建心肌营养素-1（CT-1）和破伤风外毒素C片段（TTC）重组融合蛋白表达质粒。方法 利用PCR、TA克隆等技术将CT-1及TTC基因克隆并连接到pGEX-4T-3，再做酶切鉴定、序列测定。在不同温度不同时间，通过IPTG诱导pGEX-CT-1／TTC在DH5α大肠杆菌中表达，SDS-PAGE分析表达量和可溶性蛋白GSY-CT-1／TTC比例。结果 构建的pGEX-CT-1／TTC酶切结果可见606bp、1356bp大小的片段，与预期结果一致，测序结果表明序列正确。通过IPTG诱导，发现35℃诱导4h，目的蛋白GSY-CT-1／TTC表达量占全菌的1／5，可溶性蛋白与包涵体比为2/5。结论 本实验成功构建了pGEX-CT-1／TTC重组融合质粒，为下一步将其用于脊髓损伤的治疗研究打下了基础。     

神经营养素-4研究进展

神经营养素-4(NT-4)能够促进多种神经元的存活,在神经系统发育、分化和损伤修复过程中具有重要作用。NT-4是NGF家族成员之一,它的受体和BDNF相同为TrkB。NT-4的神经营养作用为运动神经元疾病的临床治疗带来了新的希望。     

Wortmannin对糖尿病肾病大鼠肾组织IL-1与IL-6表达的影响

目的研究糖尿病肾病(DN)大鼠模型经静脉注射PI3K抑制剂Wortmannin后肾组织白介素-1(IL-1)与白介素-6(IL-6)表达的变化。方法成年健康清洁级SD雄性大鼠30只,随机分为假手术组(10)、模型组组(10)和Wortmannin处理组(10)。参照Anderson's方法制作糖尿病肾病大鼠模型。采用Western blot方法检测三组大鼠肾组织IL-1与IL-6蛋白的表达;RT-PCR方法检测三组大鼠肾组织IL-1m RNA与IL-6m RNA的表达。结果模型组与Wortmannin处理组肾组织IL-1与IL-6蛋白和m RNA的表达量均显著高于假手术组(0.05),而与模型组相比,Wortmannin处理组肾组织IL-1与IL-6蛋白和m RNA的表达量明显降低(0.05)。结论 PI3K抑制剂Wortmannin能够下调DN大鼠肾组织IL-1与IL-6的表达。     

雷帕霉素对糖尿病大鼠肝组织IL-1与IL-6表达的影响

目的研究糖尿病(DN)大鼠模型经静脉注射PI3K抑制剂雷帕霉素后肝组织白介素-1(IL-1)与白介素-6(IL-6)表达的变化。方法成年健康清洁级SD雄性大鼠60只,随机分为对照组(20)、糖尿病组(20)和雷帕霉素组(20)。采用高脂饲料喂养和小剂量链脲佐菌素(STZ)腹腔内注射方法,建立2型糖尿病合并非酒精性脂肪肝动物模型。评价各组大鼠血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、三酰甘油(TG)、总胆固醇(CHO)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的水平,采用免疫组织化学方法和Western blot方法检测三组大鼠肝组织IL-1与IL-6蛋白的表达。结果糖尿病组大鼠血清ALT、AST、TG、CHO、LDL-C水平比对照组显著升高,而雷帕霉素组比糖尿病组显著降低(P0.01)。糖尿病组大鼠肝组织IL-1与IL-6蛋白的阳性表达量比对照组显著升高,而雷帕霉素组比糖尿病组显著降低(P0.01)。结论雷帕霉素改善2型糖尿病大鼠肝功能可能与下调IL-1与IL-6的表达相关。     

小G蛋白与心肌肥厚的研究进展

小分子量鸟苷酸结合蛋白 (小G蛋白 )家族包括五个家族成员 ,作为分子开关调控着许多细胞反应过程。体内体外实验证实其介导的信号转导通路能诱发心肌细胞肥厚基因的表达及细胞骨架重排 ,在心肌肥厚和心力衰竭的发生发展中发挥重要的调控功能。了解其信号转导通路 ,可为治疗心肌肥厚、防治心力衰竭提供新的药物靶点。     

髓细胞白血病—1基因及其产物研究进展

髓细胞白血病-1(myeloid cell lekemia-1,MCL-1)基因是高度可调节的分化早期活化基因,属于抗凋亡基因家族成员,其编码产物Mcl-1蛋白与正常和异常造血细胞的生存及分化有密切关系.细胞外调节蛋白激酶通路、Janus激酶/信号转导与转录活化因子(JAK/STAT)通路、磷酸肌醇3-激酶(PI3K)/丝氨酸/苏氨酸激酶Akt通路等多个信号转导途径参与了正常和异常造血细胞内MCL-1表达的调控.     

神经营养素受体p75NTR介导的信号转导

神经营养素 (neurotrophin, NT)受体具有低亲和力的Mr为 75 000NT受体(75KDNTreceptor, p75NTR)和高亲和力的原肌球蛋白受体激酶(tropomyosinreceptorkinase, Trk)受体家族两类。二者均为跨膜蛋白受体, 参与调节以神经元为主的某些细胞的生长、分化、存活、修复以及凋亡等多种生物学效应。研究表明, 二者间的信号转导及生物学效应既相互协同又彼此拮抗, 既紧密联系又有显著区别。Trk受体一般介导“正性”信号, 如促进神经元生长、维持其存活; 而p75NTR则具有多种生物学效应, 除可促进神经元存活、生长外, 还可诱导神经元凋亡、抑…     

低氧诱导因子—1与恶性肿瘤的研究进展

肿瘤发生、发展是一个克隆性选择的结果 ,癌基因的激活突变或抑癌基因的失活突变 ,导致HIF 1α的表达和 /或其活性升高 ,后者介导细胞对低氧的适应性反应 ,包括刺激新生血管形成和促进糖酵解过程 ,最终导致细胞在不断增生的同时获得转移和浸润的能力。     

癫痫大鼠血清和脑组织IL-1β、IL-6和TNF-α水平变化

目的:探讨白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对癫痫的神经免疫调节作用及卡马西平(CBZ)对它的影响。方法:180只Wistar大鼠随机分为对照组、红藻氨酸(KA)组和CBZ组,后两组再按癫痫发作后的不同时点分为6个亚组(1h、4h、12h、24h、48h和72h);以KA建立癫痫模型,采用放射免疫分析(RIA)测定IL-1β、IL-6和TNF-α的水平变化。结果:癫痫发作后72h内,血清和脑匀浆液中IL-1β、IL-6和TNF-α的水平变化不同;在不同时点,KA和CBZ组的三者水平均明显高于对照组(P<0.01或P<0.05),同时,CBZ组的三者水平明显低于KA组(P<0.01)。结论:癫痫大鼠免疫系统处于活化状态,细胞因子水平的失衡可能参与了癫痫的免疫病理过程;CBZ对癫痫具有一定的免疫抑制作用。     

α1-肾上腺素受体的研究进展

α1 肾上腺素受体介导了机体内源性儿茶酚胺的大多数反应 ,参与了机体的许多基本生理过程 ,诸如交感神经传导、心脏收缩、血管张力、肝脏代谢以及泌尿生殖系统平滑肌活动的调控。本文综述了近年来关于α1 肾上腺素受体的亚型、分布及信号转导等方面的进展 ,以期为α1 肾上腺素受体的药理、生理及病理生理学作用提供更深入的认识。     

1，6—二磷酸果糖治疗新生儿重度窒息后心肌损害的临床观察

本文对60例新生儿重度窒息患儿使用1,6－二磷酸果糖治疗窒息后心肌损害作为观察组,同时设对照组,选用血清CKP－MB值作为判定心肌损害的特异指标。临床研究发现,观察组总有效率为90％,明显高于对照组75%,两者有显著差异（P＜0．01）,因此,对围产期重度窒息患儿应密切注意心肌损害情况并早期使用1,6－二磷酸果糖,意义重大。