裸小鼠高致瘤性K562-n细胞系的生物学特性研究

目的：探讨高致瘤性K562－n细胞系在胸腺缺陷裸小鼠体内致瘤的细胞生物学机理。方法：通过极限稀释法建立K562－n细胞系致瘤率不同的克隆株，并以K562细胞为对照，对各克隆株进行裸小鼠体内外生物学特性的比较研究，结果：高致瘤性的T562－B、K562－C、K562－E克隆株（致瘤率≥5／6），其软琼脂培养集落形成率，特别是大集落形成率，较对照K562细胞显著增高，（P＜0．01），而无致瘤性或低致瘤性的K562－A、K562－D克隆株（致瘤率≤2／6），其集落形成率与对照无显著差别（P＞0．05）；超微结构观察提示高致瘤性克隆株，常染色质成分增多，异染色质少见，胞浆内微丝增多且排列紊乱；流式细胞仪细胞周期分布分析显示高致瘤性的克隆株S期细胞比例增加。实验结果还表明裸小鼠NK细胞对高致瘤性克隆株的杀伤活性显著低于对照的K562细胞（P＜0．01），而低致瘤性克隆株与对照无显著差别（P＞0．05）；组织病理观察显示低瘤性的克隆株及对照K562细胞，所成裸小鼠肿瘤组织内有大量的炎性细胞浸润，大量肿细胞被杀伤，血供丰富区尤甚，而高致瘤性克隆株所致肿瘤组织内炎性细胞浸润少见，肿瘤组织增殖旺盛，结论：K562－n细胞系的裸小鼠高致瘤机理在于：1．软琼脂集落形成率增高，2．细胞增殖和DNA合成活跃，涉及细胞周期调节因素和细胞骨架成分的改变，3．对裸小鼠NK细胞杀伤的耐受性增强，所接种宿主的免疫力受到抑制，形成肿瘤组织内炎性细胞浸润减少。     

裸鼠高成瘤性多药耐药白血病细胞系基因表达谱变化分析

目的通过对差异表达的基因进行聚类分析,研究裸鼠高成瘤性的多药耐药白血病细胞系K562-n／VCR的耐药机制。方法采用含12800余条基因的基因芯片技术,对K562-n／VCR和K562-n细胞进行表达谱差异的研究,分析基因表达特征,从基因表达水平探讨耐药机制的发生。结果在12800条基因中,K562-n和K562-n／VCR细胞在3次实验中均有差异表达的基因有58条,其中K562-n细胞表达上调的有57条,表达下调的有1条。在这58条基因中,有46条已在GeneBank中登录,12条为未知功能基因。已知功能的37条基因可分成10类,即耐药相关基因、细胞周期蛋白、信号传导基因、转录因子基因、代谢相关基因、细胞骨架基因、凋亡相关基因、转录后加工基因、热休克蛋白基因及癌基因。结论K562-n／VCR的耐药机制是复杂的,涉及多个基因的表达变化。除已知的耐药相关基因外,部分基因表达改变符合多药耐药细胞的生物学行为,部分基因高度怀疑在耐药的发生中具有重要作用,但确切的机理尚待进一步深入研究。     

ODC反义RNA转染细胞的肿瘤相关基因表达及其致瘤性

鸟氨酸脱羧酶(ODC)是多胺生物合成途径中的限速酶，其活性的异常升高和继之引起的多胺堆积与肿瘤的发生、发展及转移密切相关。我们曾自行构建人ODC反义RNA真核表达质粒，并转染人肺鳞癌细胞，观察到稳定转染细胞株的生长速度减慢；大分子生物合成受到抑制；ODC mRNA表达减少和ODC活性降低等。     

苦参碱对K562细胞UCHT基因表达的影响

[目的]利用凋亡相关基因芯片研究苦参碱对K562细胞基因表达谱的影响，以揭示苦参碱抗肿瘤作用的分子机制。[方法]苦参碱0．4mg/ml作用K562细胞48h后，分别提取对照组和处理组细胞总RNA，采用Superarray公司GEArray Q Series Human Apoptosis Gene Array（HS-002）芯片（含96个凋亡相关基因）筛选出苦参碱作用细胞后的差异表达基因．并用RT-PCR验证其中的LIGHT基因表达的变化。[结果]0．4mg／ml苦参碱作用K562细胞48h后，芯片结果显示37个基因的差异表达在2倍以上，其中表达下调为32个，表达上调为5个。RT-PCR验证了苦参碱对LIGHT基因表达上调的影响。[结论]苦参碱作用K562细胞可上调LIGHT基因的表达。     

大蒜素对K562细胞株及裸鼠移植瘤的抑制作用

目的探讨大蒜素对K562细胞株及裸鼠移植瘤的作用。方法利用MTT法检测不同浓度大蒜素对K562细胞的增殖抑制影响;Annexin V—FITC标记法检测K562细胞凋亡;建立K562细胞Balb／c裸鼠皮下移植瘤模型,荷瘤小鼠随机分成4组,分别用1．5、3、6mg／ml大蒜素和生理盐水对瘤体进行局部注射,每次0.1ml,隔日1次,连续7次,观察瘤体变化。结果不同浓度大蒜素对K562细胞均有抑制作用,呈明显的剂量依赖性,抑制率分别为21．5％、55．1％、81．6％（P〈0．05）;0．005mg／ml大蒜素诱导K562细胞凋亡作用最显著,0．025mg／ml大蒜素使K562细胞呈中毒反应,凋亡作用不明显;大蒜素组瘤体生长较对照组明显受到抑制,抑瘤率分别为18．5％、79．2％、91．6％。结论大蒜素具有显著抑制K562细胞增殖及促凋亡的作用．能有效抑制K562细胞Balb／c裸鼠移植瘤的生长．     

外源性SHIP基因对K562细胞周期及其相关蛋白表达的影响

目的:探讨SHIP基因对人白血病细胞系K562细胞周期的调控作用.方法:用携带野生型SHIP基因及绿色荧光蛋白 (green fluorescent protein,GFP)基因的慢病毒及空载体慢病毒转染人白血病K562细胞.FCM检测转染效率、细胞凋亡率及细胞周期变化,实时荧光定量PCR(real-time fluorescent quantitative PCR,RFQ-PCR)检测SHIP mRNA水平的变化,Western 印迹法检测SHIP、cyclin D1、p21WAF1/CIPI、p27KIP1蛋白表达水平的变化.结果:与转染空载体组和未转染组相比,转染野生型SHIP基因的K562细胞增殖减慢,凋亡率明显上升(P＜0.05);细胞周期显示,G0/G1期延长,G1期前出现亚二倍体的凋亡峰,S期和G2/M期比例降低;cyclin D1表达降低,p21WAF1/CIPI和p27KIP1表达增加.结论:转染野生型SHIP基因可使细胞周期阻滞在G0/G1期,抑制白血病细胞增殖,促进白血病细胞凋亡.     

p53基因对人胃癌细胞生长及致瘤性的抑制作用

p53基因异常是人类肿瘤中最常见的基因变异之一．是最有希望用于肿瘤基因治疗的目的基因。在人胃癌组织中有较高频率的p53基因缺失和突变，为探讨p53基因用于胃癌治疗的可行性，我们采用脂质体介导方法将外源性野生型p53基因转染一株p53基因有部分缺失的人胃癌BGC823细胞，获得较高的转染效率，对转染后细胞DNA，RNA和蛋白进行分析．结果表明外源性p53基因已整合人细胞并获稳定表达，表达有外源性野生型p53基因的细胞生长速度，软琼脂集落形成率及裸鼠致瘤性均有部分抑制。这一结果进一步证明p53基因在胃癌发生发展过程中起重要作用．本研究为采用野生型p53基因转染进行胃癌基因治疗提供了细胞学实验依据。     

转染 p53基因对肺腺癌细胞株裸鼠 移植瘤生长的影响

目的：探讨转染野生型 p53（ wt-p53）和突变型 p53（ mt-p53）基因对人肺腺癌细胞株 GLC-82裸鼠移植瘤生长的影响。方法：采用脂质体介导法,分别将 wt-p53和 mt-p53基因导入人肺腺癌细胞株 GLC-82,在裸鼠体内、体外实验中检测转导细胞的生长状况和裸鼠致瘤性。结果：转染 mt-p53 基因的细胞株 G418筛选的细胞集落数、 3H-TDR掺入实验、软琼脂平皿细胞集落数,以及裸鼠瘤组织重量和体积均高于对照组（ P<0.01）,而转染 wt p53基因的细胞株均显著低于对照组（ P< 0.01）,表明导入 wt p53基因的细胞株瘤细胞生长速度明显低于对照组细胞株和导入 mt p53基因的细胞株,即导入 mt p53基因的细胞株瘤细胞生长速度最快,而导入 wt p53基因的细胞株瘤细胞生长速度最慢。结论： wt p53基因能有效抑制人肺腺癌细胞生长; mt p53基因则可以明显地促进瘤细胞生长。     

Hu联合GM-CSF对K562细胞生长-凋亡相关基因表达的影响

探讨羟基脲（ｈｙｄｒｏｘｙｕｒｅａ,Ｈｕ）及Ｈｕ联合粒系－巨噬系集落刺激因子（ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｉｃ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ ｃｏｌｏｎｙ－ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ ｆａｃｔｏｒ,ＧＭ－ＣＳＦ）对慢性粒细胞白血病（ｃｈｒｏｎｉｃ ｍｙｅｌｏｇｅｎｏｕｓ ｌｅｕｋｅｍｉａ,ＣＭＬ）细胞株Ｋ５６２细胞生长及凋亡相关基因表达的调节效应。方法：以Ｈｕ及Ｈｕ联合ＧＭ－ＣＳＦ培养Ｋ５６２细胞,采用逆转录－聚合酶     

慢性粒细胞性白血病瘤苗的研究

慢性粒细胞性白血病（GML)是一种致死性的骨髓增殖异常性疾病,其特征是存在特异性染色体异位,形成BCR-ABL融合基因,编码异常的融合蛋白P210^BCR-ABL。自体骨髓移植和干扰素治疗仅能延长CML患的生存期,迄今治愈CML的最有效的方法是异基因造血干细胞移植(Allo-SCT)。然而由于受干细胞来源及患年龄等因素限制,仅有少部分患能进行此治疗。目前,人们越来越重视免疫治疗、特别是T细胞介导的特异性免疫效应在CML治疗中的作用。异基因T细胞对Allo-SCT后CML复发能产生强力的保护作用;给Allo-SCT后复发的CML患输注同一供的淋巴细胞,可诱导疾病的再次缓解,这是细胞免疫介导的移植物抗白血病(GVL)作用的最直接证据。诱导和提高特异性T细胞免疫反应是根治CML的方向之一。     

DIFFERENTIAL EXPRESSION OF GENES INVOLVED IN METABOLISM BETWEEN TUMORIGENITIC HUMAN LEUKEMIA CELL LINES K562 AND K562－n

Objective: To study the molecular mechanism of different tumorigenicity in nude mice of human leukemia cell lines K562-n and K562. Methods: To analyze the genes differently expressed between K562 and K562-n cells by using cDNA microarray technique. Results: Among the 12800 genes detected, some genes involved in material metabolism and material transport were differently expressed between K562-n and K562 cells. These genes include homo sapiens placenta-specific ATP-binding cassette transporter gene, dihydrodiol dehydrogenase gene,hepatic dihydrodiol dehydrogenase gene, NAD-dependent methylene tetrahydrofolate dehydrogenase cyclohydrolase,lysophosphatidic acid acyltransferase, alpha gene,argininosuccinate lyase gene, mitochondrial isocitrtated ehydrogenase, adhesion protein SQM1 gene,dimethylarginine dimethylamino-hydrolase gene, M1 subunit of ribonucleotide reductase and farnesyl pyrophosphate synthetase gene. Conclusion: The high tumorigenicity of K562-n cells is related to the different expression of some genes concerned with cell metabolism and material transpoert.     

人白血病不同致瘤潜能细胞系的基因表达差异分析

目的 探索人白血病细胞系在裸鼠体内致瘤的分子生物学机制。方法 应用DNA芯片技术,检测K562和K562-n细胞的基因表达差异。结果 K562和K562-n细胞表达差异显著的基因有139条,其中在K562-n细胞中表达上调的有42条,表达下调的有97条。在这139条基因中,有85条已在GeneBank中登录,54条为新序列。这些基因可以划分为5个主要的功能群：(1)肿瘤相关基因,包括原癌基因和肿瘤抑制基因;(2)与转录调节、细胞周期、凋亡相关的基因;(3)与细胞骨架和细胞动力学相关的基因;(4)与物质代谢和转运相关的基因;(5)与免疫功能相关的基因。另外还有一些功能混杂的基因和功能未知基因的表达变化。结论 K562和K562-n细胞存在多方面基因的表达差异,人白血病细胞系K562-n在裸鼠体内的高致瘤性与其特异的基因表达谱有关。     

转染hEndostatin基因对CNE2细胞株裸鼠移植瘤生长的影响

背景与目的：肿瘤的生长、转移是血管生成依赖性的,血管生成抑制剂有望通过抑制肿瘤血管生成及诱导肿瘤细胞凋亡,有效地抑制肿瘤的生长和转移。本文旨在探讨转染人内皮抑素基因hEndostatin对人鼻咽癌细胞株CNE2裸鼠移植瘤生长的影响。方法：采用脂质体介导法,分别将pBlast-hIL-hEndostatin、pBlast-hEndostatin和pBlast-MCS质粒导入人鼻咽癌细胞株CNE2,MTT法在体外检测转导细胞表达的hEndostatin的活性,并在体内实验中观察转导的CNE2细胞在裸鼠上的致瘤性的差异。结果：转染pBlast-hIL-hEndostatin的CNE2细胞的上清能显著抑制血管内皮细胞ECV304的生长,其在裸鼠体内形成的瘤组织重量和体积均显著低于对照组（P＜0．01）,生长速度明显慢于对照组细胞。结论：转染hEndostatin基因能有效抑制CNE2细胞在裸鼠体内的生长。     

转染P~(53)基因对胶质瘤细胞株SHG44裸鼠致癌性的作用研究

探讨转染野生型P~(53)（wt一P~(53)）和突变型P~(53)（mtP~(53)）基因，对人胶质瘤细胞株SHG44裸鼠致瘤性的影响及意义。方法：采用质脂体介导法，分别将wt一P~(53)和mt一P~(53)基因导入人胶质瘤细胞株SHG44，体内外检测转导细胞的生长状况和裸鼠致瘤性。结果：转染mt一P~(53)基因的细胞株，G418筛选细胞集落数、软琼脂平皿细胞集落数以及裸鼠瘤组织重量和体积，均显著高于对照组（P＜0．01）；而转染Wt一P~(53)基因的细胞株均显著低于对照组（P＜0．01），表明导入wt一P~(53)基因的细胞株，瘤细胞生长速度明显低于对照细胞株和导入。mt一P53基因的细胞株，即导入mt一P~(53)基因的细胞株瘤细胞生长速度最快，而导入Wt-P~(53)基因的细胞株瘤细胞生长速度最慢。结论：Wt一P~(53)基因能有效地抑制人胶质瘤细胞生长；mt一P~(53)基因则可以明显地促进瘤细胞生长。     

脂质体转染survivin反义寡核苷酸对K562细胞增殖及凋亡的作用

目的:观察脂质体转染survivin反义寡核苷酸(ASODN)对白血病细胞K562的增殖及凋亡的影响。方法:人工合成survivin硫代ASODN,通过脂质体转染K562细胞,倒置显微镜下观察细胞形态学变化;用MTT法观察转染前后对细胞增生的影响;用细胞凋亡检测法(POD)观察细胞凋亡;RT-PCR检测survivin mRNA的表达。结果:(1)survivin ASODN抑制K562细胞增殖呈时间和剂量依赖性;(2)survivin ASODN可诱导K562细胞的凋亡,凋亡指数呈浓度依赖性;(3)survivinASODN处理组K562细胞survivin mRNA的表达水平显著下降。结论:脂质体转染survivin ASODN能够明显抑制K562细胞增殖,且能诱导细胞凋亡。survivin可能成为肿瘤基因治疗的一个新靶点。     

苦参碱K562细胞早期原癌基因表达的影响

背景与目的：苦参碱具有抗癌活性,我们前期的研究也证明苦参碱对K562细胞有增殖抑制与诱导分化作用。但苦参碱诱导K562细胞多向分化的分子机制尚不清楚。我们拟对其分子机制进行初步研究。方法：采用RT-PCR半定量技术分别检测0.2mg/ml苦参碱对K562细胞原癌基因c-myc、c-jun、H-ras、p21和肝细胞核转录因子HNF-1α表达的影响。结果：经苦参碱处理3h后K562细胞c-myc、c-jun、NHF-1αmRNA表达明显降低,而H-ras、p21mRNA表达明显增高。结论：0.2mg/ml苦参碱引起的K562细胞相关癌基因表达变化可能与K562细胞的增殖抑制和诱导分化有关。