痛痹颗粒对兔软骨细胞凋亡和细胞周期的影响

目的:观察中药复方痛痹颗粒对体外一氧化氮(NO)诱导的兔软骨细胞凋亡和细胞周期的影响。方法:采用流式细胞仪的Annexin V和DNA分析方法分别检测各组的细胞早期凋亡和细胞周期百分率。结果:硝普钠和痛痹颗粒混合培养的软骨细胞组的早期凋亡率与模型组(P<0.01)和空白对照组(P<0.05)比较显著下降,S期细胞百分率较模型组、空白组显著升高(P<0.05)。G0/G1期细胞百分率则显著低于模型组(P<0.01)。结论:痛痹颗粒能明显降低体外NO诱导的兔软骨细胞凋亡,并有促进软骨细胞增殖的作用。     

补肾强脊颗粒对细胞因子诱导下强直性脊柱炎成纤维细胞增殖、周期及凋亡的影响

目的探讨补肾强脊颗粒对强直性脊柱炎(AS)的作用机制。方法以体外培养的AS髋关节囊组织的成纤维细胞为实验对象,分正常组,AS对照组,AS诱导组,兔空白血清组,补肾强脊颗粒小、中、大剂量组和SASP对照组。在细胞因子骨形态发生蛋白(BMP)与转化生长因子-β(TGF-β)的诱导刺激下,观察补肾强脊颗粒对细胞因子诱导后的AS成纤维细胞增殖(样本5个,采用酸性磷酸酶法)、细胞周期(样本3个,采用PI法流式细胞术)及细胞凋亡率(样本3个,采用Annexin V法流式细胞术)的影响。结果补肾强脊颗粒含药血清作用后,对细胞因子诱导下的AS成纤维细胞增殖有明显的抑制作用(P<0.01);使细胞因子诱导下的AS成纤维细胞G0/G1期细胞比例显著增加(P<0.05),S期的细胞比例降低(P<0.01);促使细胞因子诱导下的AS成纤维细胞早期凋亡率、晚期凋亡率均有不同程度的增加(P<0.01)。结论补肾强脊颗粒可以通过抑制细胞因子对成纤维细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响而达到抑制成纤维细胞进一步向成骨型的分化。     

川芎嗪对骨关节炎兔软骨细胞增殖与凋亡的影响及其机制研究

目的探讨川芎嗪对骨关节炎兔软骨细胞增殖与凋亡的影响及其作用机制。方法选取12只兔建立骨关节炎动物模型,体外分离培养软骨细胞,并分为模型组、川芎嗪低剂量组、川芎嗪中剂量组、川芎嗪高剂量组,另选取3只正常兔体外分离培养软骨细胞作为正常对照组。模型组和正常对照组给予10%DMEM培养液进行培养,而川芎嗪低、中、高剂量组分别给予含10μg/m L、20μg/m L、30μg/m L川芎嗪注射液的培养液进行培养。采用流式细胞仪测定兔软骨细胞周期及增殖指数,采用TUNEL法检测细胞凋亡情况,采用MTT法检测软骨细胞活性,采用Western-blot法检测软骨细胞中bax、bcl-2、Caspase-3蛋白表达情况。结果模型组G0/G1期细胞所占比例及PI均明显低于正常对照组(P均<0.05),S期及G2/M期细胞所占比例均明显高于正常对照组(P均<0.05);川芎嗪中、高剂量组G0/G1期细胞所占比例、PI均显著高于模型组和川芎嗪低剂量组(P均<0.05),而S期及G2/M期细胞所占比例均显著低于模型组和川芎嗪低剂量组(P均<0.05)。川芎嗪中、高剂量组软骨细胞凋亡率均明显低于模型组(P均<0.05),川芎嗪高剂量组显著低于低剂量组(P<0.05),而川芎嗪高剂量组与正常对照组比较差异无统计学意义;川芎嗪中、高剂量组软骨细胞活性均显著高于模型组(P均<0.05),川芎嗪高剂量组显著高于低剂量组(P<0.05),而川芎嗪高剂量组仍然低于正常对照组(P<0.05)。模型组软骨细胞中bax及Caspase-3表达量均明显高于正常对照组(P均<0.05),bcl-2表达量显著低于正常对照组(P<0.05);而川芎嗪各剂量组软骨细胞中bax及Caspase-3表达量均明显低于模型组(P均<0.05),bcl-2表达量均明显高于模型组(P均<0.05),且川芎嗪高剂量组各指标改善情况均显著优于低剂量组(P均<0.05)。结论川芎嗪能够促进软骨细胞的增殖,同时还能通过上调抗凋亡因子bcl-2表达,下调软骨细胞促凋亡因子bax以及Caspase-3表达而抑制软骨细胞的凋亡。     

六味地黄汤含药血清对软骨细胞增殖、凋亡影响的体外实验研究

目的:研究六味地黄汤含药血清对软骨细胞增殖、凋亡的影响。方法:取1月龄新西兰兔关节软骨经胶原酶Ⅱ消化,建立软骨细胞体外培养体系,随机分为3组,分别加入培养液、空白血清和中药血清继续培养72小时后,用MTT比色法检测其OD值变化,采用流式细胞仪检测软骨细胞凋亡及细胞周期的变化。结果:中药血清组的OD值显著高于正常对照组、空白血清组(P<0.05);流式细胞仪细胞周期检测显示中药血清能够刺激软骨细胞由G0/G1期进入S期和G2/M期,并呈现时间的依赖性,其G0/G1期细胞比例降低,S期与G2/M期细胞之和增加,与空白血清组对比有显著性差异(P<0.05)。结论:六味地黄汤能有效促进软骨细胞增殖、抑制软骨细胞凋亡。     

癌痛消颗粒影响大鼠移植性肝癌细胞凋亡的研究

目的:探讨癌痛消颗粒对实验大鼠肝癌细胞的影响。方法:采用Walker-256瘤株进行SD大鼠的移植型肝癌的造模,造模结束后药物治疗,最后处死动物取标本,检测细胞周期及细胞凋亡。结果:癌痛消颗粒组的肝细胞主要停留在细胞周期的G0/G1期,在S期的细胞明显减少,与模型组相比,差异均有非常显著性意义(P<0.01);癌痛消组细胞凋亡率明显提高,与模型组、正常组比较,差异均有非常显著性意义(P<0.01)。结论:癌痛消颗粒能使肝癌细胞周期停留在G0/G1期,阻止其进入S期;显著提高癌细胞凋亡率,促使癌细胞凋亡。     

复元胶囊对骨关节炎软骨细胞凋亡中JNK/Bax信号通路的影响

目的探讨复元胶囊对实验性骨关节炎软骨细胞凋亡影响的作用机制。方法体外培养人软骨肉瘤细胞(SW1353),给予白细胞介素-1β(interleukin-1 beta,IL-1β)刺激,复元胶囊含药血清和c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)的特异抑制剂SP600125干预,随机分为正常组、模型组、抑制剂组、复元胶囊组、复元胶囊+抑制剂组,流式细胞仪分别检测细胞周期百分率和细胞凋亡率,蛋白质印迹法(Western blot)检测细胞信号因子磷酸化c-Jun氨基末端活化蛋白激酶(p-JNK)和Bax的蛋白表达。结果 IL-1β诱导SW1353后,模型组G1期的百分比增加,S期及G2期的百分比减少,细胞凋亡率显著增高(P0.01);抑制剂组、复元胶囊组和复元胶囊+抑制剂组G1期的百分比减少,S期及G2期的百分比增加,细胞凋亡率显著降低,p-JNK和Bax表达明显减少(P0.05或P0.01),其中以复元胶囊+抑制剂组的各项指标变化最显著(与模型组比较,P0.01)。结论复元胶囊可抑制骨关节炎软骨细胞中p-JNK及下游信号因子Bax的活化和表达,抑制细胞凋亡并促进增殖,可用于防治骨关节炎。     

蛇葡萄素诱导人胃癌细胞凋亡的研究

目的:研究蛇葡萄素对人胃癌细胞(SGC-7901)凋亡的影响。方法:MTT比色法测定细胞的增殖抑制率,流式细胞仪Annexin-V FITC/PI双染检测蛇葡萄素33.3,50,75 mg.L-1作用下SGC-7901细胞的凋亡及各细胞周期。结果:蛇葡萄素作用于SGC-7901 48 h后,可明显促进细胞早期凋亡,50,75 mg.L-1细胞凋亡率为(29.03±6.21)%,(43.43±1.00)%,明显高于空白组(11.83±4.67)%(P<0.05,P<0.01)且呈剂量依赖关系。蛇葡萄素33.3,50,75 mg.L-1作用于SGC-7901细胞48 h后,G1期细胞分别为(52.07±4.41)%,(57.07±2.70)%,(58.43±2.66)%明显高于空白对照组(42.00±3.04)%(P<0.05,P<0.01,P<0.01)。结论:蛇葡萄素能诱导SGC-7901细胞凋亡并使细胞周期阻滞在G1期。     

复方苦参胶囊对宫颈癌细胞增殖和细胞周期的影响

目的观察复方苦参胶囊对体外培养宫颈癌细胞增殖和细胞周期的影响。方法宫颈癌细胞经药物处理后,采用CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡。结果不同浓度的复方苦参胶囊处理宫颈癌Hela细胞24,48,72 h后,均呈现出显著的细胞增殖抑制作用,抑制作用具有时间依赖性和剂量依赖性,差异有统计学意义(P<0.01);流式细胞术结果显示不同浓度的复方苦参胶囊处理宫颈癌Hela细胞48 h后可显著增加宫颈癌细胞凋亡率,差异有统计学意义(P<0.01),并可增加G1期比例同时降低S期细胞比例,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论复方苦参胶囊可抑制体外培养宫颈癌细胞增殖并诱导其凋亡,该作用可能是通过抑制S期细胞比例,将细胞周期阻滞在G1期实现的。     

密蒙花方对缺氧状态下人血管内皮细胞细胞周期的影响

目的探讨密蒙花方对缺氧状态下人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vascular endothelialcell,HUVEC)细胞周期的影响。方法体外培养HUVEC,采用二氯化钴(CoCl2)建立细胞化学缺氧模型,采用流式细胞仪(flow cytometer,FCM)检测不同浓度密蒙花方水提液(10、20、40 mg/ml)对缺氧状态下HUVEC细胞周期的影响。结果①缺氧组较正常组G0/G1期细胞比例减少,S期细胞比例增高,差异具有统计学意义(P<0.01);②各密蒙花方组均较缺氧组G0/G1期细胞比例增高,S期细胞比例减少(P<0.01),组间具有浓度依赖关系(P<0.01);③密蒙花方组在G0/G1期前还出现了指示细胞凋亡的亚G1期凋亡峰,表明密蒙花方对缺氧状态下的HUVEC具有促凋亡作用。结论密蒙花方抑制HUVEC增殖的作用与阻滞细胞由G1期进入S期,促进细胞凋亡有关。     

冰茶栓对星形胶质细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响

目的:应用血清药理学观察冰茶栓(BCS)对体外培养星形胶质细胞(Astrocyte AST)增殖、凋亡及细胞周期的影响。方法:原代培养SD乳鼠大脑皮层AST,将纯化后的细胞经免疫细胞化学鉴定后,随机分为药物组(高、中、低剂量)和对照组,加入相应血清共培养48h后,MTT比色法观察AST的增殖情况,流式细胞仪检测AST的凋亡率和细胞周期的变化。结果:MTT结果显示,冰茶栓高、中剂量组较空白血清组细胞数量明显减少(P<0.01,P<0.05),低剂量组与空白血清组比较无显著差异;流式细胞仪检测结果显示,冰茶栓组细胞凋亡比例较对照组明显增加(P<0.01);冰茶栓组G1期细胞比例较对照组明显提高(P<0.01),S期和G2/M期细胞比例较对照组明显降低(P<0.01)。结论:冰茶栓对体外培养的星形胶质细胞增殖具有明显的抑制作用,并可诱导其凋亡,抑制其由G1期向S期和G2/M期的转化。     

金匮肾气丸含药血清对体外兔BMSCs增殖细胞周期及凋亡的影响

目的:研究金匮肾气丸含药血清对体外兔骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells BMSCs)增殖,细胞周期及凋亡的影响。方法:使用全骨髓贴壁法分离兔BMSCs,通过MTT法检测金匮肾气丸含药血清对BMSCs活性的影响,通过流式细胞仪(Fow Cytometry FCM)检测金匮肾气丸含药血清对地塞米松(dexamethasone DEX)诱导的BMSCs的凋亡率和细胞周期的影响。结果:金匮肾气丸各组光吸收值(OD)高于空白对照组。金匮肾气丸各组与模型组比较,Go/G1期细胞比例降低,S期和G2/M期细胞比例升高,凋亡率降低,并呈一定的量效依赖关系。结论:金匮肾气丸含药血清体外能够提高兔BMSCs的活性,促进G0/G1期的BMSCs向S期和G2/M期转化,促进BMSCs的增殖,降低地塞米松所致的兔BMSCs的凋亡率。     

“双固一通”温针灸对实验性兔膝骨性关节炎软骨细胞凋亡的影响

目的:研究"双固一通"温针灸在预防兔膝关节骨性关节炎过程中对兔膝关节软骨细胞凋亡的影响。方法:24只日本大耳白兔随机分为"双固一通"温针灸组、模型组和正常组,每组8只。采用结扎股静脉法建立兔膝骨性关节炎模型,"双固一通"温针灸组在造模开始时采用"双固一通"温针灸法,对关元(CV 4)、足三里(ST 36)、内膝眼(EX-LE4)、犊鼻(ST 35)和阳陵泉(GB 34)等穴进行预防性治疗;正常组不做任何处理,正常喂养。在造模8周后,各组分别通过透射电镜观察兔膝关节软骨细胞的超微结构,TUNEL染色光镜下观察软骨细胞凋亡情况。结果:"双固一通"温针灸组兔膝关节软骨细胞超微结构接近正常组,模型组软骨细胞轮廓不清楚,胞膜坏死崩解,胞浆内细胞器消失,细胞裂解为致密颗粒样物质,细胞固缩、变形,甚至出现核分裂,染色质浓聚;"双固一通"温针灸组和模型组软骨细胞凋亡指数高于正常组(P<0.01),"双固一通"温针灸组软骨细胞凋亡指数低于模型组(P<0.01)。结论:"双固一通"温针灸可抑制实验性兔膝骨性关节炎软骨细胞过度凋亡,从而对兔膝骨性关节炎起防治作用。     

加味宫外孕Ⅰ号方含药血清对体外培养的输卵管妊娠滋养细胞凋亡率和细胞周期的影响

目的:运用血清药理学方法,观察加味宫外孕Ⅰ号方含药血清对体外培养的输卵管妊娠滋养细胞凋亡率和细胞周期的影响。方法:根据血清药理学的方法,用SD大鼠制备中药组(加味宫外孕Ⅰ号方含药血清),西药组(甲氨蝶呤含药血清)和对照组(正常血清),分别加入体外培养的滋养细胞培养体系中。培养72 h后,流式细胞法测定3组的细胞凋亡率和细胞周期。结果:中药组与对照组相比,滋养细胞凋亡率显著上升(P0.01),细胞周期发生阻滞,G0/G1期细胞百分比显著增多(P0.01);中药组与西药组相比,差异均无统计学意义(P0.05)。结论:加味宫外孕Ⅰ号方诱导滋养细胞凋亡,改变细胞周期进程可能是其发挥杀胚效应的机制之一。     

凋瘤丸诱导人乳腺癌细胞系MCF-7凋亡的实验研究

目的:观察凋瘤丸体外对MCF-7凋亡的影响,探讨凋瘤丸诱导MCF-7细胞凋亡的机制,为此药物的开发及临床应用提供实验依据。方法:采用血清药理学方法,以MCF-7为研究对象,应用含凋瘤丸、四君子汤、5-fluorouracil(5-Fu)、生理盐水的SD大鼠血清对MCF-7细胞体外培养,通过流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡率(APO)的变化。结果:含凋瘤丸血清对体外培养的MCF-7细胞生长有明显的生长抑制作用,这种抑制作用与剂量相关:含凋瘤丸血清可以阻滞MCF-7细胞生长有明显的生长抑制作用,这种抑制作用与剂量相关;含凋瘤丸血清可以阻滞MGF-7细胞周期在G2/M期,使进入S期细胞比率下降,与异生理盐水组比较有显著差异(P0.01);与四君子汤组比较有差异(P0.05);与5-Fu组无差异(P0.05)。含凋瘤丸血清可以诱导MGF-7细胞凋亡,与生理盐水组比较有显著差异(P0.01);与四君子汤组比较有差异(P0.05);与5-Fu组无差异(P0.05)。结论:含凋瘤丸血清可抑制MCF-7细胞增殖;含凋瘤丸血清可阻滞MCF-7细胞周期G2/M期,S期所占细胞比例下降,可诱导MCF-7细胞调亡。     

加味桃核承气汤不同提取方法大鼠含药血清对糖尿病VSMC细胞周期及细胞凋亡的影响

目的:探讨不同提取方法加味桃核承气汤含药血清对胰岛素(Regular insulin,RI)诱导兔血管平滑肌细胞(Vascular smooth muscle cell,VSMC)的细胞周期及细胞凋亡的影响.并探讨其可能的作用机制,寻找本方抗糖尿病动脉粥样硬化的最佳提取方法.方法:采用兔主动脉平滑肌细胞株,以RI诱导VSMC增殖,以不同提取方法制备桃核承气汤含药血清,采用碘化丙啶(Propidium Iodide,PI)单染色法,以流式细胞仪检测VSMC的凋亡率及细胞周期.结果:各组在各细周期的DNA含量比较,总体差异显著(P<0.01);模型组、美迪康组细胞凋亡最少;罗格列酮组、乙酸乙酯组细胞凋亡较多.罗格列酮组、乙酸乙酯组促进凋亡作用(Sub-G0期)较加味桃核承气汤全方组显著(P<0.01).结论:促进糖尿病VSMC凋亡的药物有效成分,更大的可能存在于罗格列酮组、乙酸乙酯组当中.在促进糖尿病VSCM凋亡的机制方面,罗格列酮组、乙酸乙酯组均可能与G0/G1、G2M期阻滞有关.     

银杏叶提取物对谷氨酸诱导的兔视网膜NO水平及细胞凋亡的影响

目的 :探讨银杏叶提取物 (extract of ginkgo biloba ,EGB)对谷氨酸诱导的兔视网膜NO水平及细胞凋亡的影响作用。方法 :利用谷氨酸兔玻璃体内注射 ,诱导视网膜细胞凋亡的模型 ,眼球后注射不同剂量的EGB ,采用分光光度法测定兔视网膜NO水平 ,琼脂糖凝胶电泳分析视网膜细胞DNA断裂。结果 :实验对照组视网膜的NO的水平与空白对照组相比显著增加 (P<0.001) ,EGB大剂量治疗组视网膜NO水平比实验对照组显著降低 (P<0.001) ,EGB小剂量治疗组视网膜的NO水平与实验组相比轻度降低 ,但无统计学差别。EGB大剂量治疗组和空白对照组视网膜细胞无DNA凋亡样断裂 ,而实验组和EGB小剂量治疗组视网膜细胞DNA凋亡样断裂。结论 :银杏叶提取物可能通过抑制谷氨酸诱导的兔视网膜NO自由基的产生而抑制细胞凋亡 ,对谷氨酸诱导的兔视网膜损伤具有重要保护作用。     

补肾活血方对大鼠软骨细胞凋亡增殖及MMP-13水平的影响

目的:探讨补肾活血方对大鼠体外培养软骨细胞凋亡增殖及基质金属蛋白酶-13(MMP-13)水平的影响。方法:采用SD大鼠切取关节软骨进行软骨细胞的体外培养,应用甲苯胺蓝染色及Ⅱ型胶原免疫组化染色进行鉴定。同步细胞后分为中药组、西药组和空白对照组分别处理。采用流式细胞仪进行细胞凋亡与增殖检测,采用放免法进行MMP-13水平检测。结果:成功进行了软骨细胞的培养及鉴定。流式细胞仪检测显示补肾活血方可减低软骨细胞的凋亡率,与空白对照组比较有显著性差异(P0.05),补肾活血方可促进细胞周期中G2与S期细胞比例,与空白组比较有非常显著性差异(P0.01)。补肾活血方还可以降低MMP-13水平,与空白组比较有显著性差异(P0.05)。结论:补肾活血方具有减少软骨细胞凋亡的作用,同时可以降低MMP-13水平。     

精杞胶囊对环磷酰胺诱导大鼠生精细胞凋亡的抑制作用

目的探讨精杞胶囊对环磷酰胺诱导大鼠生精细胞凋亡的抑制作用。方法40只SPF级SD雄性大鼠随机分成5组:正常组、模型组、精杞低剂量组[500 mg/(kg·d)]、精杞高剂量组[1000 mg/(kg·d)]和丙酸睾酮组[5 mg/(kg·d)],每组8只。给药组用药14 d后,除正常组外,其余各组腹腔注射环磷酰胺25 mg/(kg·d)连续5 d,造模期间各给药组延续给药,造模结束后次日处死全部大鼠。HE染色法观察睾丸组织形态;透射电镜观察生精细胞超微结构;ELISA法检测血清睾酮(T)、卵泡生成素(FSH)和黄体生成素(LH)含量及附睾管腔液中唾液酸(SA)的含量;流式细胞仪分析精子细胞凋亡和细胞周期。结果与正常组比较,模型组睾丸曲精细管内各级生精细胞含量较少,结构杂乱,生精细胞核崩解、坏死,线粒体肿胀空泡化,嵴断裂,高尔基复合体结构紊乱。与模型组比较,各给药组病理减轻。与正常组比较,模型组大鼠T、FSH、LH、SA含量及各期细胞存活率、G1期细胞比例降低,凋亡率及S期细胞比例增加(P<0.01)。与模型组比较,给药组T、FSH、LH、SA含量及各期细胞存活率、G2期细胞比例增高,凋亡率及S期细胞比例降低(P<0.05,P<0.01)。与丙酸睾酮组比较,精杞低剂量组的大鼠血清T、FSH、LH及SA含量降低(P<0.01),精杞低、高剂量组细胞存活率下降,早期凋亡率和总凋亡率增加(P<0.05,P<0.01)。结论精杞胶囊对环磷酰胺所诱导的大鼠生精细胞凋亡有抑制作用,其机制可能与调节生殖激素激素水平有关。     

针刀疗法对膝骨关节炎兔关节软骨细胞凋亡的影响

目的:观察针刀疗法治疗膝骨关节炎兔对其细胞凋亡的影响,探讨可能的作用机制。方法:正常新西兰兔随机分为:正常组、模型组、针刀组、中药组。左后膝伸直位石膏管型固定6周建立膝骨关节炎兔模型,原位末端标记(TUNEL)检测关节软骨细胞凋亡。结果:细胞凋亡指数正常组为(4.9±1.7),模型组为(25·2±4.3),针刀组为(11.6±3.1),中药组为(19.1±3.4)。模型组细胞凋亡指数显著升高,与正常组比较,经统计学处理,差异具有显著性意义(P<0.01)。针刀治疗和中药治疗均能降低细胞凋亡指数,两组比较,差异具有显著性意义(P<0.01)。结论:针刀疗法能抑制膝骨关节炎兔关节软骨细胞的凋亡,促进关节软骨形态恢复,这可能是针刀治疗膝骨关节炎的作用机制之一。     

紫草素诱导子宫内膜癌Ishikawa细胞凋亡及其机制的研究

目的:研究紫草素诱导体外培养的子宫内膜癌Ishikawa细胞凋亡作用及其机制。方法:流式细胞术分析细胞周期分布及凋亡率变化;免疫组化法(SABC法)检测Bcl-2、Bax蛋白的表达。结果:紫草素可诱导细胞凋亡,改变细胞周期分布,多数细胞周期阻滞于G1期,细胞凋亡率差异有统计学意义(P<0.05);紫草素可上调Bax和下调Bcl-2基因蛋白的表达,与空白组对照差异有统计学意义(P<0.05)。结论:紫草素能够诱导子宫内膜癌Ishikawa细胞凋亡,其凋亡机制可能与促进Ishikawa细胞中Bax上调,Bcl-2下调相关。