肌醇对结肠癌HT-29细胞体外生长的抑制作用

目的 观察肌醇对人结肠癌HT-29细胞体外生长的影响,探讨肌醇对结肠癌细胞增殖及凋亡方面的作用。方法 采用MTT实验,检测不同浓度肌醇对结肠癌HT-29细胞的抑制率;免疫细胞化学实验测定增殖细胞核抗原(PCNA)的表达情况;流式细胞仪检测细胞周期变化及凋亡发生率。结果 MTT实验结果显示,随着肌醇剂量的增加,肌醇对结肠癌HT-29细胞的抑制率明显增高(F=682.048,q=8.293~44.146,P<0.05);免疫细胞化学实验显示,与对照组比较,肌醇干预组对PCNA的表达有显著抑制的作用(F=149.973,q=4.450~20.826,P<0.05);流式细胞仪检测结果显示,随着肌醇剂量的增加,HT-29细胞停留在G0/G1期比例增加,S期、G2/M期的比例减少(F=31.109~59.178,q=2.660~12.783,P<0.05);与对照组相比,各肌醇干预组HT-29细胞凋亡率均有明显升高(F=1 214.826,q=16.587~56.885,P<0.05),并且随着肌醇剂量的增大,各肌醇干预组细胞凋亡率逐渐升高。结论 肌醇通过阻滞HT-29细胞周期,抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡,从而发挥抑制结肠癌HT-29细胞生长的作用。     

锌α2糖脂蛋白通过调节ATP水平影响大肠癌HT-29细胞的侵袭能力

目的:锌α2糖脂蛋白(zinc-alpha-2-glycoprotein 1,ZAG)是新近发现的具有复杂功能的蛋白,ZAG参与受精?脂代谢及免疫调节等多种细胞生物学行为,本研究探讨ZAG在大肠癌演进过程中的作用?方法:本研究构建ZAG干扰质粒,并转染入HT-29结肠癌细胞株,免疫印迹与逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测转染前后ZAG表达的变化;检测转染前后细胞三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)含量的变化,以了解ZAG对细胞代谢的影响;利用小室实验检测转染前后HT-29细胞侵袭能力的变化?结果:ZAG干扰质粒成功转染入HT-29细胞并筛选出稳定转染细胞株;转染后的HT-29细胞ATP水平上调,且转染后的HT-29侵袭能力增强?结论:研究结果提示ZAG可能通过调节ATP水平增强大肠癌HT-29细胞的侵袭能力,为大肠癌治疗提供了有价值的新靶点?     

四君子汤与5-FU联用对结肠癌HT-29细胞生长的抑制效应

目的探索传统中药复方四君子汤与临床常用化疗药物氟尿嘧啶(5-FU)联用对体外培养的结肠癌HT-29细胞的生长抑制作用,为临床上应用四君子汤作为5-FU的增效剂联合治疗结肠癌提供实验依据。方法将体外培养的结肠癌HT-29细胞分成不含药血清对照组、5-FU组、高剂量四君子汤血清加5-FU组、中剂量四君子汤血清加5-FU组和低剂量四君子汤血清加5-FU组5组。将制备好的四君子汤含药血清和5-FU按所需的剂量分别加入到各组培养瓶中作用于细胞24h,应用基于酶标仪的MTT方法检测各组细胞的OD值,计算不同浓度药物处理对细胞生长的抑制率。结果四君子汤血清与5-FU联用能显著抑制结肠癌HT-29细胞的生长(均P0.01),且高剂量四君子汤血清与5-FU合用组细胞生长抑制率显著高于5-FU单用组(P0.01)。四君子汤血清与5-FU联用对结肠癌HT-29细胞周期的运行产生显著的影响。结论四君子汤可以增强5-FU对结肠癌HT-29细胞的生长作用和细胞周期的干扰作用。     

塞来昔布对大肠癌细胞株HT-29增殖和凋亡的影响

目的体外观察塞来昔布对大肠癌细胞株HT-29细胞增殖和凋亡的影响,探讨其可能的作用机制.方法采用噻唑蓝(MTT)比色法,流式细胞(FCM)、吖啶橙/溴化乙啶染色结合荧光显微镜、Western印迹法等技术,研究塞来昔布对HT-29细胞增殖的抑制和可能的机制.结果塞来昔布抑制HT-29细胞生长,呈浓度和时间依赖性.流式术检测出典型的亚二倍体"凋亡峰",凋亡率(7.31±2.37)%～(48.30±2.86)%;使G0/G1期细胞比例升高,S期和G2/M期比例缩小、细胞核固缩、凋亡小体形成等.凋亡比例呈剂量和时间依赖.塞来昔布降低细胞周期素依赖蛋白激酶CDK2和CDK4的表达、上调细胞周期素依赖蛋白激酶抑制因子p21WAF1/CIP1n蛋白表达.结论体外塞来昔布抑制HT-29细胞增殖,并诱导细胞凋亡;下调CDK2和CDK4蛋白表达,上调P21WAF1/CIPln蛋白表达.塞来昔布抑制HT-29细胞增殖、诱导凋亡可能与阻止细胞周期进展有关.     

RhoC-shRNA对结肠癌细胞HT-29细胞生物学行为的影响

目的探讨RhoC-shRNA对结肠癌细胞生物学行为的影响。方法构建RhoC-shRNA表达载体,以脂质体转染法将之稳定转染入HT-29结肠癌细胞株,Western blot检测转染细胞中RhoC蛋白表达的抑制情况,观察转染前后结肠癌细胞周期、凋亡和侵袭能力的变化。结果成功构建RhoC-shRNA真核表达载体,并且转染入结肠癌细胞后,细胞中RhoC蛋白表达水平明显受到抑制,并且抑制细胞增殖、促进细胞凋亡,降低肿瘤细胞侵袭能力。结论下调RhoC蛋白的表达可抑制结肠癌细胞HT-29的体外增殖和侵袭能力。     

姜黄素对结肠癌HT-29细胞生长增殖、细胞周期分布及CyclinD1基因表达的影响

目的 观察姜黄素对人结肠癌HT-29细胞生长增殖、细胞周期分布的影响,并探讨可能的机制.方法 培养对数生长的人结肠癌HT-29细胞,用不同浓度的姜黄素-1640培养基进行培养.选取24、48、72 h时间节点,观察细胞生长的形态学差异.四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测姜黄素对HT-29细胞的生存抑制率,流式细胞术检测加入姜黄素前后HT-29细胞的周期分布改变,并对药物处理前后的CyclinD1基因表达进行检测比较.结果 在加入姜黄素稀释液后,HT-29细胞生长明显变慢,形状由饱满变得细长,脱壁增多.MTT提示姜黄素能明显抑制HT-29细胞生长,并呈时间和浓度依赖性.流式细胞术显示姜黄素能诱导明显的G0/G1期阻滞,24、48、72 h时G1期比例分别为38.2％、44.6％、49.3％,相对对照组差异有统计学意义(P＜0.05).蛋白免疫印迹(Western blot)实验发现姜黄素能明显降低HT-29细胞中的CyclinD1基因表达,并随作用时间的延长,抑制作用更强.结论 姜黄素能明显抑制人结肠癌HT-29细胞细胞周期CyclinD1基因表达,并诱导细胞G1期阻滞.     

IPI-926对人结肠癌HT-29细胞增殖的影响及其机制

目的 观察IPI-926对人结肠癌HT-29细胞增殖的影响,并探讨在人结肠癌HT-29细胞增殖过程中IPI-926对Hedgehog (刺猬,Hh)信号通路因子表达的影响。 方法 常规体外培养人结肠癌HT-29细胞,随机分为对照组(空白培养基)和不同浓度IPI-926(10 nM、20 nM、30 nM)的实验组,培养HT-29细胞72 h后倒置显微镜观察各组细胞形态变化;MTT法测定各组培养72 h后HT-29细胞抑制率;RT-PCR和Western blot分别检测各组培养72 h后HT-29细胞Shh、Ptch、Smo和Gli-1 mRNA及其相关蛋白的表达;采用独立样本t检验进行组间比较,P<0.05为差异有统计学意义。 结果 对照组细胞生长状态良好;而用不同浓度IPI-926(10 nM、20 nM、30 nM)处理的HT-29细胞细胞凋亡增加,并随着IPI-926浓度的增加,凋亡率明显升高;10 nM、20 nM、30 nM浓度的IPI-926对人结肠癌细胞HT-29抑制率分别为(17.23±1.32)%、(38.34±1.82)%和(75.81±3.43)%,随着浓度的增加而升高,抑制率呈量效关系。空白对照组和IPI-926浓度为10 nM时Shh、Ptch、Smo和Gli-1的mRNA及其蛋白表达差异均无统计学意义,但在IPI-926浓度为20 nM和30 nM时,Shh、Ptch、Smo和Gli-1的mRNA及其蛋白表达均比空白对照组明显下调,并且IPI-926浓度为30 nM时的Shh、Ptch、Smo和Gli-1的表达明显高于20 nM时的mRNA表达。 结论 小剂量IPI-926不能有效抑制HT-29细胞的增殖,但当超过20 nM时则可以有效抑制HT-29细胞的增殖;其抑制的机制可能与Hh通路相关成员Shh、Ptch、Smo和Gli-1的表达有关。      

重组人肠三叶因子对结肠癌HT-29细胞移行能力的影响及其机制研究

目的 观察重组人肠三叶因子对HT-29细胞移行能力的影响并探讨其作用机制。方法 采用重组表达的人肠三叶因子(rhITF)作为细胞刺激药物, 以传代培养的人结肠癌HT-29细胞株为研究模型。用不同浓度(10、25和50μg/ml) rhITF刺激HT-29细胞, 采用Transwell法观察HT-29细胞移行能力的变化;用50μg/ml rhITF在不同时相点分别刺激HT-29细胞, 分为4、8、12和24h组。通过Western blot法观察黏附蛋白β-catenin、E-cadherin和磷酸化β-catenin的蛋白表达变化。结果 rhITF促细胞移行能力随其浓度的增加而增强, 50μg/ml rhITF组细胞数明显高于阴性对照组、10μg/ml rhITF组和25μg/ml rhITF组, 差异有统计学意义(P<0.01);β-catenin和E-cadherin的蛋白表达均受到rhITF抑制, 与其他组比较, 12h组蛋白表达明显减弱(P<0.05);12h组磷酸化β-catenin 的蛋白表达明显增强(P<0.05)。结论 ITF具有促进HT-29细胞移行的能力, ITF能促使β-catenin磷酸化并抑制β-catenin与E-cadherin的表达。     

雷替曲塞及其联合PD98059对HT-29细胞的影响

目的 研究雷替曲塞及其联合PD98059对结肠癌细胞HT-29增殖及凋亡的影响,并探讨其分子机制.方法 ① 在倒置显微镜下观察处理24 h后各组细胞的形态及数量变化;② 使用细胞计数法检测不同处理条件下的细胞数;③ 使用流式细胞术检测各处理组细胞的凋亡率;④ 使用RT-PCR法检测各组K-RAS、ERK1、ERK2 mRNA的相对表达量.结果 ① 倒置显微镜下观察可见与对照组相比,除PD98059组外,其他各组细胞数量均减少,形态均发生凋亡变化,且随雷替曲塞浓度增高,变化程度增加;联合组细胞形态及数量变化较对应雷替曲塞组程度更深.② 细胞计数法显示各组细胞数均明显低于对照组的细胞数,且随着雷替曲塞浓度的增加,细胞数呈递减趋势;联合组与其他各组间均存在明显差异;③ 流式细胞仪检测显示和对照组相比,各组凋亡率均明显上升,在雷替曲塞组中存在浓度依赖性;联合组与其他各组的细胞凋亡率均存在差异;④ RT-PCR结果显示:与对照组相比,PD98059组、雷替曲塞组及联合组在K-RAS、ERK1、ERK2 mRNA的表达上均未表现出明显的差异.结论 ① 雷替曲塞对结肠癌细胞HT-29增殖及凋亡的影响呈浓度依赖性;② 雷替曲塞联合ERK抑制剂对HT-29细胞具有协同作用;③ ERK抑制剂不是在基因表达水平影响细胞的增殖及凋亡.     

DNA甲基转移酶1基因沉默对HT-29细胞凋亡的影响

目的:观察DNA甲基转移酶1(DNMT1)基因沉默对结肠癌HT-29细胞凋亡的影响.方法:HT-29细胞分为3组:未处理组、对照siRNA组及DNMT1 siRNA组,后2细胞转染对照siRNA和DNMT1 siRNA,24 h后,通过RT-PCR和Western blot观察3组细胞DNMT1、Caspase-3/9、bcl-2及Bax mRNA和蛋白表达的变化,通过流式细胞术分析HT-29细胞凋亡,并测定Caspase-3/9的活性.结果:DNMT1 siRNA组中DNMT1 mRNA和蛋白的相对表达量为(0.273±0.016)和(1.127±0.019),低于未处理组[分别为(1.729±0.023)和(2.741±0.031)]和对照siRNA组[分别为(1.751±0.018)和(2.673±0.027)](F分别为5822.683和3656.560,P均<0.001).DNMT1 siRNA组细胞凋亡率为(22.65%±1.67%),高于未处理组(7.92%±1.29%)和对照siRNA组(8.13%±1.21%)(F=108.460,P<0.001).DNMT1 siRNA组细胞的Caspase-3/9活性[分别为(2671.83±57.63)和(2187.71±68.35)]高于未处理组[(196.47±16.73)和(511.35±34.90)]和对照siRNA组[(215.29±14.38)和(534.78±41.70)](F分别为4790.975和1089.891,P均<0.001).与未处理组和对照组相比DNMT1 siRNA组Bcl-2 mR-NA和蛋白的表达降低,但Caspase-3/9和Bax mRNA和蛋白的表达升高(P<0.05).结论:DNMT1的下调能诱导HT-29细胞凋亡,其可能的作用机制与caspase-3/9、bcl-2和bax表达的变化密切相关.     

布氏镜检查丁酸钠影响HT-29细胞动态变化的研究

目的 观察丁酸钠对结肠癌HT-29细胞形态和生物学特性的影响.方法 多功能透射显微镜(布氏镜)动态观察丁酸钠作用前后HT-29细胞的生长状态、细胞运动及贴壁过程的变化.结果 丁酸钠5 mmol/L作用24 h后,HT-29细胞数量明显减少,细胞巢变小,巢内细胞数减少;细胞变成圆形,细胞大小趋于一致;细胞核内染色质呈块状聚集,折光性降低,呈现出凋亡细胞形态;贴壁过程明显变缓.结论 丁酸钠可以改变HT-29的生长状态,抑制其生长;布氏镜可以动态地观察药物作用前后培养细胞的形态、微细结构及运动的变化,是一项先进的、具有实用价值的检查技术.     

塞来昔布对大肠癌细胞株HT-29增殖和凋亡的影响

目的：体外观察塞来昔布对大肠癌细胞株HT-29细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制。方法 采用噻唑蓝（MTT）比色法,流式细胞仪（FCM）、吖啶橙/溴化乙啶染色结合荧光显微镜、Western印迹法等技术,研究塞来昔布对HT-29细胞增殖抑制的影响。结果：体外塞来昔布抑制HT-29细胞生长,呈浓度和时间依赖性。DNA直方图示典型的亚二倍体“凋亡峰”,凋亡率在（7.31±2.37）%～（48.30±2.86）%;塞来昔布使G0/G1期细胞比例升高,S期和G2/M期比例下降,呈一定剂量效应关系。典型的凋亡形态学改变：细胞体积缩小、细胞核固缩、凋亡小体形成等。凋亡比例呈剂量和时间依赖。塞来昔布下调细胞周期素依赖蛋白激酶CDK2,CDK4蛋白表达、上调细胞周期素依赖蛋白激酶抑制因子P21WAF1/CIP1蛋白表达。结论：塞来昔布抑制HT-29细胞增殖、诱导凋亡可能与阻止细胞周期进展有关。     

bcl-2和p53在丹皮酚诱导人结直肠癌HT-29细胞凋亡中的作用及其机制

目的 探讨bcl-2和p53在丹皮酚（paeonol，Pae）诱导入结直肠癌HT-29细胞凋亡过程中的作用及可能的作用机制。方法 应用透射电镜技术和原位末端标记（TUNEL）法观察不同浓度的Pae对HT-29细胞凋亡的诱导作用，应用免疫细胞化学技术检测用药前、后凋亡相关基因bcl-2及p53表达的变化，并与对照组比较。结果 透射电镜观察到Pae作用后HT-29细胞出现典型的细胞凋亡形态；Pae在15．63mg／L、62．50mg／L、250．00mg／L3种浓度下作用48h均可诱导HT-29细胞凋亡，TUNEL法显示各组凋亡指数（AI）间差别有显著性意义（P〈0．05）；免疫细胞化学染色显示Pae作用后HT-29细胞bcl-2及p53蛋白表达显著降低。结论 Pae能抑制HT-29细胞增殖并诱导其凋亡，其作用可能与下调bcl-2及p53蛋白的表达有关。     

肌醇六磷酸对结肠癌HT-29细胞分化的影响

目的 研究肌醇六磷酸(IP6)对结肠癌细胞株HT-29细胞周期的影响,探讨IP6诱导HT-29细胞分化的作用及其机制.方法 将HT-29细胞与不同浓度(0、1.8、3.3 mmol/L)IP6共同孵育24、48、72 h后,收集细胞,使用流式细胞仪检测细胞周期,并用透射电镜观察细胞结构的变化.结果 除1.8 mmol/L IP6作用24 h对HT-29细胞周期分布没有明显的影响外,其他各组G0/G1期细胞明显增多,S期、G2/M期细胞则相应减少.同时,IP6作用后细胞结构发生改变,出现核固缩、细胞器丰富、微绒毛增多等分化趋势.结论 IP6能够调节HT-29细胞周期,阻止细胞从G0/G1期进入S期,从而诱导细胞分化.     

β-榄香烯对HepG2和HT-29细胞体外抗癌作用的实验研究

目的 探讨β-榄香烯对肝癌和结肠癌的作用,为临床上利用β-榄香烯治疗肿瘤提供理论依据.方法 体外培养HepG2肝癌细胞和HT-29结肠癌细胞,用生长曲线和MTT法观察β-榄香烯对两种细胞生长的影响.结果 β-榄香烯组在培养的第6d,第7d、第8d能显著抑制HT-29细胞增殖;β-榄香烯在培养的第6d能显著抑制Hep02细胞增殖;在第2d,在第3d、在第4d,与对照组相比,β-榄香烯对HT-29和HepG2细胞增殖的抑制作用显著(P<0.05).结论 β-榄香烯能明显抑制体外培养的HT-29和HepG2细胞生长.     

丁酸钠对HT-29结肠癌细胞增殖及ICAM-1表达的影响

目的 观察丁酸钠对HT-29结肠癌细胞株增殖的影响,并检测丁酸钠对HT-29细胞表面ICAM-1表达的影响,探讨丁酸钠影响结肠癌增殖的作用机制。方法 使用MTT法观察丁酸钠对HT-29细胞增殖活力的效应;利用流式细胞术检测丁酸钠对HT-29细胞周期分布、细胞凋亡以及细胞表面ICAM-1的表达。结果 丁酸钠能够明显抑制HT-29细胞的增殖,提高G0/G1细胞比例,降低S期细胞比例和增殖指数,并诱导HT-29细胞凋亡,且这些作用呈现明显的浓度和时间依赖性。同时,丁酸钠还能够显著下调HT-29细胞表面ICAM-1的相对表达量。结论 丁酸钠具有抑制HT-29结肠癌细胞增殖的作用,其机制可能与阻遏细胞周期、诱导细胞凋亡及下调HT-29细胞表面ICAM-1的表达有关。     

β-榄香烯对HepG2和HT-29细胞体外抗癌作用的实验研究

目的探讨β-榄香烯对肝癌和结肠癌的作用,为临床上利用β-榄香烯治疗肿瘤提供理论依据。方法体外培养HepG2肝癌细胞和HT-29结肠癌细胞,用生长曲线和MTT法观察β-榄香烯对两种细胞生长的影响。结果β-榄香烯组在培养的第6d、第7d、第8d能显著抑削HT-29细胞增殖;β-榄香烯在培养的第6d能显著抑制HepO2细胞增殖;在第2d、在第3d、在第4d,与对照组相比,β-榄香烯对HT-29和HepG2细胞增殖的抑制作用显著（P〈0．05）。结论β-榄香烯能明显抑制体外培养的HT-29和HepG2细胞生长。     

健脾清肠散结方及其拆方对肠癌HT-29细胞株增殖作用的影响

目的:观察健脾清肠散结方及其拆方对肠癌HT-29细胞株增殖作用的影响,并探讨其关键成分及可能的作用机制。方法:将培养的HT-29细胞随机分为:空白对照组,健脾清肠散结方及其拆方健脾益气方、清肠散结方高、低剂量组,共7组。24 h后换无血清培养液,分别加入不同浓度药物(0、2、20、200μg/ml),用噻唑盐比色法(MTT)分析测定各组在不同浓度及不同作用时间点对HT-29细胞生长抑制率。结果:在浓度为2～200μg/ml时,健脾清肠散结方及其拆方对肠癌HT-29的增殖均有一定的抑制作用,呈现浓度依赖和时间依赖性;其中拆方健脾益气方对肠癌HT-29抑制增殖效果与全方一致。结论:健脾清肠散结方对人大肠癌细胞株HT-29细胞增殖有一定的抑制作用,其关键成分可能是健脾益气药。     

白花蛇舌草提取物对结肠癌HT-29细胞bcl-2和bax表达的影响

目的 观察白花蛇舌草提取物在体外对结肠癌HT-29细胞株增殖和bcl-2和bax表达的影响.方法 采用人结肠癌细胞HT-29细胞常规体外培养,随机设空白组和不同浓度白花蛇舌草提取物组,干预24 h,倒置显微镜观察细胞形态变化;MTT法测定不同浓度药物对HT-29细胞增殖的影响;RT-PCR检测药物作用后的bax和bcl-2的表达.结果 白花蛇舌草提取物干预后,HT-29的细胞密度明显减少,细胞变小;抑制HT-29细胞增殖,并呈现出量-效作用;bax的表达随药物剂量增加而增加,bcl-2的表达随药物剂量增加而减少.结论 白花蛇舌草提取物能显著抑制人结肠癌HT-29细胞的增殖,通过上调bax和下调bcl-2的表达来诱导细胞凋亡,起到抗HT-29细胞的作用.