检测血清p185糖链凝集素酶联免疫吸附试验的建立及初步应用

目的 建立检测血清p185糖链的凝集素酶联免疫吸附试验（ELISA），并初步应用于乳腺癌的临床诊断。方法 用改良过碘酸钠氧化法制备c—erbB-2单克隆抗体-辣根过氧化物酶结合物（A18-HRP），经棋盘滴定确认A18-HRP、生物素化麦胚凝集素（Bio—WGA）及链霉亲和素（SA）的最适浓度（或稀释度），建立了检测p185糖链的凝集素ELISA，用所建立的方法检测血清p185糖链，免疫组化方法检测组织p185蛋白表达。结果 乳腺癌患者血清p185糖链水平明显高于乳腺增生和正常对照（P〈0．01），免疫组化阳性和阴性的乳腺癌患者血清p185糖链水平均高于乳腺增生和正常对照（P〈0．01），乳腺增生患者血清p185糖链与正常对照相比差异无显著性（P〉0．05）。血清p185糖链诊断乳腺癌的敏感度为86．7％，特异度为94，6％，准确度为91．9％。结论 本实验建立的凝集素ELISA检测血清p185糖链诊断乳腺癌与病理学诊断符合率高，临床具有实用价值。     

血清p185糖链改变对乳腺癌与乳腺增生鉴别诊断的意义

对血清p185糖链改变对乳腺癌与乳腺增生鉴别诊断的意义探讨如下。 1对象和方法 1．1对象30例乳腺癌患者术前血清、26例乳腺增生患者术前血清、30例正常对照血清，由吉林省肿瘤医院提供。正常对照血清为健康查体者血清。     

血清p185糖链检测在乳腺癌诊断中的应用

c-erbB-2是与乳腺癌关系最密切的一种癌基因，p185是其编码的跨膜糖蛋白受体，乳腺癌细胞中某些糖链加工酶基因表达改变，导致p185糖链结构改变，p185的胞外部分从乳腺癌细胞脱落。p185蛋白也可随着肿瘤细胞的崩解而释放入血。因此，检测血清p185糖链对乳腺癌的早期诊断及乳腺癌与乳腺良性增生的鉴别诊断具有重要价值。     

免疫PCR检测乳腺癌患者血清p185蛋白抗体

目的 为乳腺癌诊断提供血清学新标志.方法 免疫PCR方法检测血清抗p185蛋白抗体,酶免疫组化方法检测组织p185蛋白表达.结果 乳腺癌患者血清抗p185蛋白抗体阳性率为30%,而非癌患者和正常人血清抗p185蛋白抗体均为阴性,乳腺癌患者血清中抗p185蛋白抗体显著高于非癌患者和正常人(P<0.01).p185蛋白阳性表达的乳腺癌患者抗p185蛋白抗体阳性率为69.2%,明显高于p185蛋白阴性表达组,血清p185抗体测定与p185蛋白表达密切相关(P<0.01).结论 检测血清抗p185蛋白抗体是检测组织p185蛋白理想的替代工具.抗p53蛋白抗体可以作为乳腺癌血清学诊断新标志,用于乳腺癌的普查和早期诊断.     

免疫PCR检测乳腺癌患者血清p185对其诊断及预后的价值

目的 为乳腺癌诊断提供血清学新尝试,评价免疫PCR方法在乳腺癌血清学诊断以及预后中的价值.方法 免疫PCR方法检测血清p185蛋白,酶免疫组化方法检测组织p185蛋白表达.结果 乳腺癌患者血清p185蛋白阳性率为41.1%,而非癌患者和正常人血清p185蛋白均为阴性,乳腺癌患者血清中p185显著高于非癌患者和正常人（P〈0.01）.组织p185蛋白阳性表达的乳腺癌患者血清p185阳性率为84.6%,明显高于组织p185蛋白阴性表达组,血清p185测定与组织p185蛋白表达密切相关（P〈0.01）.结论 检测血清p185是检测组织p185蛋白理想的替代方法,对乳腺癌患者的诊断以及预后有重要意义.抗p53蛋白抗体可以作为乳腺癌血清学诊断新标志,用于乳腺癌的普查和早期诊断.     

血清异常IgA测定诊断IgA肾病的新方法

目的将糖生物学理论与免疫技术相结合,建立一种血清学检测诊断IgA肾病(IgAN)的新方法,以解决只能依靠肾活检穿刺术诊断IgAN问题.方法应用特异性识别糖链末端的凝集素,并结合抗人IgA特异抗体的酶联免疫吸附法(ELISA),检测血清中糖链异常的IgA的水平.结果采用该方法,对各组血清405nm吸光值测定结果表明正常对照组测定值0.22±0.10(n=156),IgAN确诊病人组0.68±0.17(n=22),两者差异有显著意义(P<0.001);IgAN疑诊病人组的测定值0.38±0.15(n=19),高于正常对照组.22份确诊的IgAN病人血清中,与病理诊断的阳性符合率为81.8%(19/22),而假阳性率仅为1.9%(3/156).结论血清中糖链异常IgA分子的凝集素亲和-ELISA检测方法,具有灵敏度高、特异性好的优点,对于IgAN的诊断具有一定的临床应用价值.     

乳腺癌患者NO、TNF-α水平变化特点及临床意义

目的探讨乳腺癌患者一氧化氮(NO)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平变化特点及临床意义.方法利用硝酸还原酶法对47例乳腺癌患者进行血清NO测定,利用双抗体夹心ELISA法进行了TNF-α的测定.结果乳腺癌患者血清NO水平显著高于正常对照组及乳腺小叶增生组(P＜0.01);血浆TNF-α水平亦显著高于正常对照组及乳腺小叶增生组(P＜0.01);乳腺小叶增生组NO、TNF-α水平与对照组相比无差别意义(P＞0.05).结论检测结果提示NO参与了抗肿瘤免疫,并可能由TNF-α所诱导.检测NO、TNF-α水平有利于乳腺癌的鉴别诊断,它的测定对乳腺癌的检测、随访和预后评估有帮助.     

HE4、CAl53联合检测在乳腺癌辅助诊断中的应用

目的研究血清人附睾上皮分泌蛋白4(HE4)、癌抗原153(CAl53)联合检测在乳腺癌辅助诊断中的价值。方法收集46例乳腺癌患者、52例乳腺良性疾病患者以及50名正常对照者血清,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清HE4含量、电化学发光法检测CAl53含量。采用受试者工作特征(ROC)曲线确定HE4和CA153的临界值。分别计算HE4和CA153单项检测和联合检测的敏感性和准确性并作比较。结果乳腺癌组HE4和CAl53水平分别是49.0(41.7～67.4)pmol/L和20.6(13.4～28.7)U/mL,均明显高于乳腺良性疾病组及正常对照组(P<0.01)。经ROC曲线确定HE4和CA153的临界值分别为62.5 pmol/L和21.6 U/mL,乳腺癌HE4、CAl53联合检测的敏感性为63.0%,准确性为82.4%,均高于单项检测。结论联合检测CAl53和HE4可以明显提高乳腺癌诊断的准确性及敏感性。     

血清γ-谷氨酰基转肽酶ELISA检测方法的建立及其在原发性肝癌诊断中的临床应用研究

目的建立可用于血清蔓陀罗凝集素(DSA)-γ-谷氨酰基转肽酶(GGT)检测的酶联免疫吸附法(ELISA),并探讨其在原发性肝癌(PHC)诊断中应用价值。方法制备抗DSA-GGT单克隆抗体(McAb),经蛋白G亲和层析柱色谱纯化后进行生物素标记,构建血清DSA-GGT生物素-链霉亲和素ELISA检测方法。用建立的方法对健康者、PHC患者和非PHC患者进行DSA-GGT检测,并进行方法学评价;采用受试者工作曲线(ROC曲线)确定DSA-GGT诊断PHC的临界值。结果所构建ELISA检测方法的最低检测限为2μg/L,平均批内、批间变异分别为8.9%和11.5%。健康者血清DSA-GGT水平呈正态分布,参考范围为(1.50±0.51)μg/L;经ROC曲线分析,确定其诊断PHC的临界值为3.25μg/L;其诊断PHC灵敏度为66.7%(28/40)、特异度为91.8%(112/122)。结论所建立的血清DSA-GGT生物素-链霉亲和素ELISA检测方法具有良好方法学性能,其诊断PHC的灵敏度、特异度良好,为PHC实验室诊断提供了新的方法。     

血清肿瘤标志物检测在乳腺癌诊断中的意义

目的:探讨血清糖类抗原153(carbohydrate antigen 153,CA153)、铁蛋白(serum ferritin,SF)、组织多肽特异性抗原(tis-sue polypeptide specific antigen,TPS)对乳腺癌诊断的意义。方法:用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)分别检测38例乳腺癌患者、28例乳腺良性肿瘤患者和20例正常健康女性血清CA153、SF、TPS水平。结果:血清CA153、SF、TPS水平在乳腺癌组中显著高于乳腺良性肿瘤组和正常对照组(P<0.01);SF、TPS水平随着乳腺癌临床分期的增加而增高;CA153、SF、TPS对乳腺癌诊断的敏感性分别为52.6%、60.5%、65.8%,三者联合检测对乳腺癌诊断的敏感性为86.8%。结论:CA153、SF、TPS对乳腺癌诊断有一定价值,TPS与CA153、SF联合检测有互补性,可提高对乳腺癌诊断的敏感性。     

乳腺病中血清层粘连蛋白含量的变化

利用ＥＬＩＳＡ法检测了乳腺小叶增生、良性纤维瘤和恶性浸润性导管癌患者血清层粘连蛋白的含量，比较了乳腺良恶性病患者及正常人之间ＬＮ的差异。结果表明，恶性肿瘤病人ＬＮ值之间有显著差异（Ｐ〈０．０１），良性病人与正常人之间无显著差异，（Ｐ〉０．０５），本文还发现纤维瘤与正常人之间ＬＮ有显著差异（Ｐ≤０．０５），但小叶增生与正常人，纤维瘤之间ＬＮ无显著差异（Ｐ〉０．０５），由于乳腺病从良性转变为恶性，患者     

高迁移率族蛋白B1单克隆抗体制备与竞争ELISA测定法的建立

目的制备高迁移率族蛋白B1(HMGB1)单克隆抗体和建立HMGB1的直接竞争ELISA测定方法。方法采用PEG细胞融合技术、有限稀释法和间接ELISA法制备和筛选杂交瘤细胞。直接竞争ELISA法测定大鼠血清HMGB1水平。结果共获得7株HMGB1特异性杂交瘤细胞株。建立的直接竞争ELISA方法的测定范围为1~320 ng/ml,回收率为97%~106%,变异系数为2.6%~7.3%。用该方法测定大鼠血清HMGB1水平发现,糖尿病大鼠模型HMGB1水平高于正常大鼠(P<0.001)。结论直接竞争ELISA可用于HMGB1的测定,该方法较双抗体夹心ELISA法更简便、快速。     

北京地区汉族女性人群SYK基因启动子区-803A>Trs290987单核苷酸多态性与乳腺癌易感性分析

目的 探讨脾酪氨酸激酶(spleen tyrosine kinase,SYK)基因启动子区-803A>T(rs290987)单核苷酸多态与汉族女性人群乳腺癌的相关性。方法 采用病例-对照研究,以聚合酶链反应(PCR)联合DNA直接测序法检测57例乳腺癌患者和60例与之年龄相匹配的健康对照者syk基因启动子区-803位点的基因型及等位基因频率。采用ELISA方法定量检测受试者血清SYK水平。结果 -803A>T多态T等位基因频率在乳腺癌组明显高于对照组(χ2=5.348,P=0.021)。与AA基因型相比(TA+TT)基因型可显著增加乳腺癌发病风险,OR值为2.87,95% CI=1.27～6.49。乳腺癌组血清SYK水平显著低于对照组(F=33.278,P<0.01)。结论北京地区汉族女性人群SYK基因-803位点基因型TA和TT是乳腺癌发病的危险因素。     

Relationships between the level of matrix metalloproteinase-2 and tumor size of breast cancer

BACKGROUND: The involvements of matrix metalloproteinase-2 (MMP-2) in the pathogenesis of breast cancers have been established. We determined the concentrations of MMP-2 in serum samples and tumor tissues of breast cancer patients. METHODS: Gelatin zymography and ELISA were used to measure MMP-2 and MMP-9 concentrations in 90 breast cancer patients, including 60 tissue samples and 30 serum samples. RESULTS: ProMMP-2, activated MMP-2, proMMP-9 and activated MMP-9 levels were significantly higher in tumor tissues than that of corresponding paired adjacent normal tissue of 60 breast cancer patients (p<0.01). Further linear regression analysis has showed that the tumor size positively correlated with MMP-2 level in tumor tissue samples (R=0.55, p<0.0001), as well as with that of in serum samples (R=0.398, p=0.032). In addition, further statistical analysis for clinic pathological parameters revealed that MMP-2 level was significantly increased in patients with metastasis (p<0.05). Furthermore, MMP-2 level was significantly different between tumor grades (p=0.006). CONCLUSIONS: MMP-2 levels in serum and tumor tissue might reflect the severity of invasion of breast cancer and various MMP inhibitors might be selectively used as potential anti-metastasis agents according to tumor size.     

血清Ⅰ型胶原吡啶交联终肽、骨钙素在肿瘤骨转移中的应用

目的探讨骨胶原吸收指标血清Ⅰ型胶原吡啶交联终肽（ICTP）和骨形成指标血清骨钙素（OC）二者在肿瘤骨转移的应用价值。方法收集我院肿瘤科经病理确诊的肺癌患者血清65例,乳腺癌患者血清36例,通过影像学诊断,将其分为骨未转移组和骨转移组两组。并征集我院健康体检人群41例作为健康对照组,分别定量测定血清ICTP、OC和碱性磷酸酶（ALP）浓度。结果血清ICTP在肺癌和乳腺癌骨转移组[（27．80&#177;11．14）μg／L和（122.33&#177;34．92）μg／L]均显著高于骨未转移组[（8．95&#177;3．81）μg／L和（8．40&#177;4．59）μg／L],差异有统计学意义（P〈0．01）,骨未转移组较健康对照组[（5．16&#177;1．76）μg／L]亦有极显著性差异（P〈0．01）,血清OC值在乳腺癌骨转移组[（69．31&#177;36．17）ng／mL]亦显著高于骨未转移组[（15．54&#177;6．09）ng／mL],差异有统计学意义（P〈0．01）,而肺癌骨未转移组血清OC值较健康对照组以及肺癌骨转移组较肺癌骨未转移组差异均无统计学意义（P〉0．05）。血清ICTP在诊断肺癌和乳腺癌骨转移中是特异性高、敏感度较好的指标,血清OC在诊断肺癌骨转移中单独使用敏感度不够,意义不大,但在诊断乳腺癌骨转移时特异度和敏感度均较好。两者联合诊断乳腺癌骨转移的敏感度为96．3％,特异度为96．7％,联合诊断肺癌骨转移的敏感度为80．3％,特异度为84．2％。结论可根据需要单独或联合应用血清ICTP和OC,作为除影像学外诊断肿瘤骨转移有用的实验室诊断指标。     

基质金属蛋白酶-2/9及其组织抑制剂比例失衡在高氧所致急性肺损伤中的作用

目的 探讨基质金属蛋白酶-2/9(MMP-2/9)及其组织抑制剂(TIMP-1/2)在高氧所致急性肺损伤(ALI)发病过程中的作用.方法 将54只小鼠置于含体积分数大于98%氧气的密闭室中,以18只呼吸正常空气的小鼠作为对照组.分别于暴露24、48和72 h活杀各组小鼠,取肺组织标本,测定肺湿/干重(W/D)比值、支气管肺泡灌洗液(BALF)中蛋白含量及胸腔积液,以评价肺损伤程度.用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定肺组织MMP-2/9和TIMP-1/2的mRNA表达;用酶联免疫吸附法(ELISA)测定BALF中MMP-2/9及TIMP1/2的蛋白含量.结果 高氧能引起ALI,各实验组的肺W/D比值、BALF中蛋白浓度及胸腔积液均明显高于对照组(P<0.05或P<0.01).RT-PCR结果显示,高氧组肺组织MMP-2/9及TIMP-1的mRNA表达均较对照组明显增高(P<0.05或P<0.01),TIMP-2 mRNA表达无明显变化;MMP-2/TIMP-2的mRNA比值在高氧组中均明显升高(P均<0.01).ELISA结果显示,高氧组BALF中MMP-2/9和TIMP-1蛋白含量较对照组明显升高(P<0.05或P<0.01),而TIMP-2蛋白含量同样无明显变化;MMP-2/TIMP-2的蛋白比值在高氧组中也明显升高(P均<0.01).结论 高氧能引起ALI伴MMP-2/9和TIMP-1的表达增高,而MMP-2/TIMP-2平衡失调导致细胞外基质降解在其发生过程中起重要作用.     

血清卵泡抑素水平检测用于卵巢癌诊断的研究

目的探讨卵泡抑素在卵巢癌患者血清中的水平变化及其临床意义。方法采用ELISA法检测肿瘤患者及健康对照者血清FS水平;免疫组织化学染色观察卵巢癌组织FS表达情况。结果卵巢癌患者血清FS水平明显高于健康对照组,统计学比较差异显著,P0.01;乳腺癌和肺癌患者血清FS水平也高于健康对照组,P0.05;胃癌和肾癌患者血清FS水平与健康对照组比较无显著性差异,P0.05。肿瘤诊断阳性率依次为卵巢癌(60%)乳腺癌(40%)肺癌(30%)胃癌(20%)肾癌(0%)。免疫组织化学染色显示,卵巢癌组织表达FS与肿瘤类型有关,染色强度依次为粘液性癌子宫内膜样癌透明细胞癌鳞癌浆液性癌。结论卵巢癌患者血清FS水平升高,其诊断阳性率与卵巢肿瘤类型有关;血清FS检测对卵巢癌诊断具有重要价值。     

血清TK1、TPS、CA15-3联合检测在乳腺癌诊断中的临床价值

目的 探讨血清胸苷激酶1(TK1)、特异性组织多肽抗原(TPS)、糖类抗原15-3(CA15-3)联合检测在乳腺癌诊断中的临床价值.方法 采用免疫印迹-增强化学发光法对乳腺癌组(69例)、乳腺良性疾病组(52例)、健康对照组(48例)血清TK1进行检测,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)对血清TPS进行检测,采用化学发光法对血清CA15-3进行检测,并对检验结果进行统计学分析.结果 乳腺癌患者血清TK1、TPS、CA15-3水平均显著高于乳腺良性疾病组与健康对照组(P＜0.01),3项指标联合检测的敏感性显著高于单项检测或2项联合检测(P＜0.05).结论检测血清TK1、TPS、CA15-3水平,对乳腺癌的诊断具有重要的价值,3种标志物联合检测能明显提高乳腺癌诊断的敏感性.     

C-erbB2 oncoprotein and its soluble ectodomain: a new potential tumor marker for prognosis early detection and monitoring patients undergoing Herceptin treatment

c-erbB-2 oncoprotein (or p185) coded by c-erbB-2 oncogene can be extracted with detergent from cell membrane of breast tissue and breast tumor cell line. The ectodomain of p185 can be cleaved proteolytically from the transmembrane receptor and released into solution. In blood circulation, only the ectodomain can be found, whereas only p185 exists in the extracts of tissue and cell line. p185 can also be quantified in the fine-needle aspirate biopsies and the concentration of p185 from the biopsies of malignant breast tissue is much higher than that of the normal and benign tissue. Measuring the ectodomain of the c-erbB-2 oncoprotein not only is useful to identify breast cancer patient who will benefit from Herceptin treatment but also can be used to monitor patients during the treatment. Overexpression of p185 and the elevation of circulating ectodomain is usually associated with poor prognosis. Overexpression of p185 in breast cancer patients with positive estrogen receptor identifies a subgroup of patients who will not respond to the endocrine therapy. Activation of p185 appears to be an early event in tumorigenesis for some cancers. It is possible that the ectodomain could be used as an early tumor marker detecting benign disease.     

血清p53抗体与肺癌早期诊断、判定疗效、预测复发及预后

目的　通过对肺癌患者血清p5 3抗体水平与肺癌的临床指标、病理特征及p5 3抗体在治疗过程中动态变化的研究 ,探讨血清p5 3抗体在肺癌早期诊断、疗效判定及预测预后中的临床意义。方法　对 76例肺癌患者应用ELISA法检测血清p5 3抗体滴度 ,经酶联免疫检测仪测定吸光值E450 ,计算p5 3抗体指数。结果　 76例中有 37例阳性 ,阳性率 4 8.6 8% ;在早期 (Ⅰ期 )肺癌中 ,阳性率为 6 5 .2 1% ;手术治疗、化疗及未接受治疗的三组肺癌患者的p5 3抗体水平分别呈现动态降低或升高变化 ,显示p5 3抗体与肿瘤负荷、病程及病情恶化程度密切相关 (P <0 .0 1及P <0 .0 5 )。结论　检测血清p5 3抗体有助于肺癌的早期诊断 ;其动态变化有助于监测病情、判断疗效及预测预后。