复方藤梨根制剂体外对MDR细胞株K562/ADR和K562/VCR细胞积聚和外排阿霉素(ADR)的影响研究

目的:探讨复方藤梨根制剂(FFTLG)对肿瘤化疗增敏的作用机理。方法:以MTT法观察FFTLG对MDR细胞的逆转作用,以FCM技术测定FFTLG作用MDR细胞后对阿霉素的积聚和外排影响。结果:10mg/ml和2 0mg/ml的FFTLG对K5 6 2 /ADR的逆转倍数是7.5 3和10 .31倍(P <0 .0 5 ) ;2 0mg/ml的FFTLG对K5 6 2 /VCR的逆转倍数是6 .18倍;10mg/ml和2 0mg/ml的FFTLG可增加K5 6 2 /ADR和K5 6 2 /VCR细胞内ADR的积聚分别是77.6 % ,80 .1%和5 0 .9% ,4 5 .2 % ,且可减少ADR的外排。结论:FFTLG通过增加MDR细胞内的ADR积聚及减少外排机制而实现对化疗的增敏作用     

阿霉素纳米粒对白血病多药耐药细胞株K562/ADR耐药性的逆转作用

目的:研究阿霉素纳米粒对人白血病多药耐药细胞株K562/ADR耐药性的逆转作用.方法:采用MTT法测定药物的体外杀伤作用,应用流式细胞术测定细胞内药物浓度.结果:阿霉素纳米粒和阿霉素对K562细胞细胞毒作用相似,K562/ADR对阿霉素纳米粒较阿霉素敏感2.63倍,细胞内阿霉素浓度显著增加可能是关键因素.结论:阿霉素纳米粒通过增加耐药细胞内阿霉素浓度有效逆转多药耐药.     

洛美利嗪衍生物CJZ3对K562/DOX细胞阿霉素耐药的逆转作用

目的研究洛美利嗪衍生物CJZ3对K562/DOX细胞阿霉素耐药的逆转作用。方法应用流式细胞仪和MTT法观察了CJZ3对K562/DOX细胞P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)的抑制作用及对K562/DOX细胞阿霉素耐药的逆转作用。结果CJZ3能剂量相关性地增加K562/DOX细胞对罗丹明123(rhodamine123,Rh123)的摄取以及细胞内罗丹明Rh123的累计,明显抑制P-gp介导的Rh123外排,增强阿霉素对K562/DOX细胞的细胞毒作用,提高阿霉素诱导的K562/DOX细胞凋亡率,提高细胞Caspase-3活性,增加K562/DOX细胞内阿霉素水平。结论洛美利嗪衍生物CJZ3体外能明显抑制P-gp的外排功能,逆转P-gp介导的K562/DOX细胞的多药耐药性。     

复方当归注射液逆转K562/A02细胞多药耐药的研究

目的:研究复方当归注射液对人红白血病多药耐药(MDR)细胞株K562/A02MDR1、多药耐药相关蛋白(MRP)、拓扑异构酶Ⅱ(TopoⅡ)、谷光甘肽-S-转移酶-π(GST-π)基因及其相应蛋白表达的影响。方法:采用台盼蓝染色法检测复方当归注射液的细胞毒作用;采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹法分别检测复方当归注射液在非细胞毒浓度(IC10)作用下对K562/A02细胞上述基因及其表达的影响。结果:复方当归注射液作用后,K562/A02细胞中MDR1基因及P-gp表达降低(P<0.01);TopoⅡ蛋白表达增高(P<0.01),TopoⅡ基因表达无显著变化(P>0.05);MRP、GST-π基因及其蛋白的表达无明显变化(P>0.05)。结论:复方当归注射液能部分逆转K562/A02细胞的耐药性,其作用机制可能与下调K562/A02细胞MDR1mRNA的表达,导致细胞膜上P-gp的表达量减少及在蛋白水平上调K562/A02细胞TopoⅡ的表达有关。     

热休克蛋白90抑制剂17-AAG对K562/ADR耐药细胞株生长和凋亡的影响

目的研究热休克蛋白90抑制剂17-AAG对耐药白血病细胞生长的影响及其诱导的细胞凋亡作用,为白血病的治疗提供新的研究思路。方法采用MTT法检测17-AAG对细胞增殖抑制的剂量-时间-效应关系;激光共聚焦DA-PI染色法观察细胞形态学变化;流式细胞术检测细胞凋亡、周期及P-糖蛋白(P-gp)的变化,Western blot检测细胞凋亡相关蛋白的变化。结果 17-AAG能够明显抑制K562/ADR细胞的生长,大量细胞的核内DNA发生断裂,细胞核边缘化,加药组细胞凋亡率与对照组相比明显增高;加药后细胞被阻滞在G1期,procaspase-3和cleaved Caspase-3表达升高。结论 17-AAG可以通过诱导耐药细胞株K562/ADR的凋亡而抑制细胞生长。P-gp和Caspase-3的表达与凋亡事件的发生具有一定的相关性。     

补骨脂素逆转多药耐药细胞系K562/ADR耐药性研究

目的　研究补骨脂素对白血病细胞阿霉素耐药株(K5 6 2 /ADR)多药耐药 (multidrugresistance,MDR)性的逆转作用及其机制。方法　采用MTT法检测药物细胞毒性作用 ,高效液相色谱法检测细胞内阿霉素 (ADR)的浓度 ,流式细胞术测定细胞P 糖蛋白 (P gp)的表达。 结果　补骨脂素 (1～ 2 0 μmol·L-1)能不同程度地降低ADR对K5 6 2 /ADR细胞的IC50 。 2 0 μmol·L-1能显著提高ADR在K5 6 2 /ADR细胞内的浓度 ,降低K5 6 2 /ADR细胞P gp的表达。 结论　补骨脂素能逆转K5 6 2 /ADR细胞的MDR ,其机制与抑制P gp的功能及其表达 ,增加细胞内ADR的积累有关     

槲皮素体外逆转K562/ADM耐药的研究

近年来发现槲皮素(Quercetin,QUE)对肿瘤细胞具有耐药逆转作用备受人们关注。本实验以QUE作为逆转剂,通过观察其逆转后,K562/ADM对阿霉素(Adriamycin,ADM)的耐药性变化、逆转前后细胞内的GST含量的变化,为QUE在逆转白血病的应用上提供部分理论依据。1材料与方法1.1材料野生型人红白血病具有多药耐药表型的细胞株K562/ADM购自中国医学科学院天津血液学研究所,K562/ADM在含1.0 pg/ADM的RPMI1640培养液中连续传代培养,实     

钙调素拮抗剂小檗胺逆转K562／ADR细胞株多药耐药的研究

目的:研究钙调素拮抗剂小檗胺(BBM)抑制白血病细胞增殖并逆转细胞多药耐药的作用。方法:以四唑氮蓝(MTT)法测定小檗胺对K562细胞、耐阿霉素K562细胞(K562/ADR)的增殖抑制作用并求得其IC_(50);测定联合应用阿霉素和BBM后K562/ADR细胞对阿霉素的IC_(50)值及其增敏倍数。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测小檗胺作用前后K562/ADR细胞多药耐药基因(MDR)在mRNA水平的表达,应用免疫组织化学方法测定P170表达量。结果:小檗胺能显著抑制K562及K562/ADR细胞增殖,其IC_(50)值分别为5.32 μg·mL~(-1)和 10.97μg·mL~(-1)。联合应用阿霉素和1 μg·mL~(-1)小檗胺使K562/ADR细胞对阿霉素的IC_(50)由5.94 μg·mL~(-1)降低至2.93μg·mL~(-1),其增敏倍数为2.03倍。8 μg·mL~(-1)小檗胺作用K562/ADR细胞24 h后P170的表达量由85.45％降低至63.86％,72 h后MDR1mRNA的表达以β-actin为内参照的半定量比值也由处理前的1.625降至0.877。结论:小檗胺对K562、K562/ADR有显著的增殖抑制作用,小檗胺能部分逆转K562/ADR细胞对阿霉素的耐药,其作用是通过抑制MDR1在mRNA和P170水平的表达而实现的。     

两种新型西地那非同系物对MCF-7/ADR细胞对阿霉素耐药的影响

目的探讨两种新型西地那非同系物对人乳腺癌MCF-7/ADR细胞耐阿霉素的逆转作用。方法采用GENMED磷酸二酯酶5（PDE5）活性酶测定试剂盒检测两种同系物对5型磷酸二酯酶（PDE5）的抑制作用,用MTT法检测西地那非、西地那非同系物、阿霉素以及西地那非同系物与阿霉素联合作用对人乳腺癌耐药细胞MCF-7/ADR和敏感株MCF-7的抑制率及IC50值,运用Western blot检测P-gp蛋白的表达。结果两种同系物与西地那非相比具有较低的PDE5抑制活性;10μmol·L^-1两种西地那非同系物对MCF-7/ADR细胞耐药性的逆转倍数分别是6.36和5.58,20μmol·L^-1两种西地那非同系物对MCF-7/ADR细胞耐药性的逆转倍数分别是11.83和13.47;两种同系物作用对P-gp蛋白的表达无明显影响。结论两种新型西地那非同系物具有较低的PDE5抑制活性,一定浓度的西地那非同系物可显著逆转MCF-7/ADR细胞对阿霉素的耐药。     

延长洛美利嗪作用时间可增加K562/A02细胞对阿霉素的敏感性

目的：研究洛美利嗪在高浓度、长时间作用于肿瘤细胞时，对多药耐药的逆转作用。探讨洛美利嗪逆转肿瘤细胞多药耐药的机制。方法：将不同浓度的洛美利嗪与人红白血病细胞系K562及其耐药细胞系K562／A02（耐阿霉素）共孵育24、48或72小时，然后分别向细胞中加入阿霉素，采用MTT法检测细胞毒作用；以流式细胞术测定两种细胞系内罗丹明123的潴留以反映P-糖蛋白的外排功能；利用Fluo-3／AM检测细胞内游离钙离子浓度。结果：细胞与洛美利嗪预温孵后，阿霉素对K562／A02细胞的IC50值减小，细胞内Rh123潴留增多，细胞内游离钙离子浓度明显升高。结论：洛美利嗪高浓度，长时间作用于K562／A02细胞，可以抑制细胞上P-糖蛋白的功能活性，使细胞对化疗药的敏感性增强，其机制可能与升高细胞内钙离子有关。     

克班宁对耐药细胞K562/HHT逆转作用的研究

目的　对克班宁 (CRE)逆转白血病耐药细胞系K5 6 2 /HHT的耐药性进行研究。方法　细胞毒试验采用MTT法 ,细胞内柔红霉素 (DNR)积累采用荧光分光光度法测定。结果　克班宁 5 μmol·L-1时显著增加高三尖杉酯碱(HHT)对K5 6 2 /HHT的细胞毒 ,细胞毒作用增强 13 0倍 ,同等条件下 8μmol·L-1维拉帕米为 19 4倍。克班宁能显著增加K5 6 2 /HHT细胞内DNR浓度。结论　克班宁通过增加多药耐药细胞内药物积累而调节多药耐药性     

Effect of curcumin on multidrug resistance in resistant human gastric carcinoma cell line SGC7901/VCR

AIM: To investigate the reversal effects of curcumin on multidrug resistance (MDR) in a resistant human gastric carcinoma cell line. METHODS: The cytotoxic effect of vincristine (VCR) was evaluated by MTT assay. The cell apoptosis induced by VCR was determined by propidium iodide (PI)-stained flow cytometry (FCM) and a morphological assay using acridine orange (AO)/ethidium bromide (EB) dual staining. P-glycoprotein (P-gp) function was demonstrated by the accumulation and efflux of rhodamine123 (Rh123) using FCM. The expression of P-gp and the activation of caspase-3 were measured by FCM using fluorescein isothiocyanate (FITC)-conjugated anti-P-gp and anti-cleaved caspase-3 antibodies, respectively. RESULTS: Curcumin, at concentrations of 5 micromol/L, 10 micromol/L, or 20 micromol/L, had no cytotoxic effect on a parent human gastric carcinoma cell line (SGC7901) or its VCR-resistant variant cell line (SGC7901/VCR). The VCR-IC50 value of the SGC7901/VCR cells was 45 times more than that of the SGC7901cells and the SGC7901/VCR cells showed apoptotic resistance to VCR. SGC7901/VCR cells treated with 5 micromol/L, 10 micromol/L, or 20 micromol/L curcumin decreased the IC50 value of VCR and promoted VCR-mediated apoptosis in a dose-dependent manner. Curcumin (10 micromol/L) increased Rh123 accumulation and inhibited the efflux of Rh123 in SGC7901/VCR cells, but did not change the accumulation and efflux of Rh123 in SGC7901 cells. P-gp was overexpressed in SGC7901/VCR cells, whereas it was downregulated after a 24-h treatment with curcumin (10 micromol/L). Resistant cells treated with 1 mumol/L VCR alone showed 77% lower levels of caspase-3 activation relative to SGC7901 cells, but the activation of caspase-3 in the resistant cell line increased by 44% when cells were treated with VCR in combination with curcumin. CONCLUSION: Curcumin can reverse the MDR of the human gastric carcinoma SGC7901/VCR cell line. This might be associated with decreased P-gp function and expression, and the promotion of caspase-3 activation in MDR cells.     

小白菊内酯诱导耐药白血病细胞K562/ADR凋亡的研究

目的初步探讨小白菊内酯(PTL)对耐药白血病细胞K562/ADR细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法MTT法及LDH释放法检测小白菊内酯对K562和K562/ADR细胞增殖抑制作用,流式细胞术检测细胞凋亡和细胞内活性氧(ROS)的变化,Western blot法检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、caspase-3、caspase-9的表达变化。结果 PTL抑制K562/ADR细胞的增殖,呈剂量依赖,半数抑制浓度(IC50)值分别为(4.36±0.37)μmol.L-1、(10.6±2.81)μmol.L-1。10μmol.L-1PTL作用24 h诱导K562/ADR细胞的凋亡率为(31.21±0.40)%,其IC50值与凋亡率与K562细胞相比差异无显著性(P>0.05)。经10μmol.L-1PTL处理1 h,K562/ADR细胞内ROS增加;处理24 h,Bcl-2与Bax的比值降低、caspase-3、caspase-9酶源蛋白表达降低。用N-乙酰半胱氨酸(NAC)预处理细胞,能抑制细胞ROS水平升高和细胞凋亡。结论 PTL能诱导耐药白血病细胞凋亡,作用机制与其刺激细胞内ROS升高相关。     

洛美利嗪对人白血病细胞K562/ADM多药耐药的逆转作用

目的：研究洛美利嗪(lomerizine，Lom)对人白血病细胞K562／ADM多药耐药逆转作用及机制。方法：使用MTT法检测Lom对K562／ADM多药耐药细胞柔红霉素(DNR)细胞毒性的影响，使用荧光分光光度计和流式细胞术分析Lom对K562／ADM多药耐药细胞胞内P—糖蛋白(P—glycoprotein，P—gp)底物—罗丹明123(rhodamine 123，Rh123)的累积情况。结果：Lom能明显提高DNR对K562／ADM多药耐药细胞的细胞毒作用，并可使胞内Rh123的浓度增加。K562敏感细胞株则不受影响。结论：Lom能显地抑制：K562／ADM多药耐药细胞上P—gp的活性，提高P—gp底物的胞内浓度，并增强其他抗癌药的细胞毒作用。     

盐酸千金藤碱逆转K562/ADR细胞多药耐药性及其机制

研究盐酸千金藤碱(cepharanthine hydrochloride,CH)逆转K562/ADR细胞多药耐药性及其机制。采用MTT法检测多柔比星(adriamycin,ADR)单用及分别与CH、维拉帕米(verapamil,VER)合用的细胞毒作用;采用流式细胞仪,测定CH对细胞内ADR蓄积、罗丹明123(Rho123)蓄积和泵出及P糖蛋白(P-gp)表达的影响。结果表明,CH(4μmol.L1)使K562/ADR细胞对ADR的敏感性增加7.43倍,逆转活性是VER的3.19倍,但对K562敏感株基本无影响。同时CH浓度依赖性地增加K562/ADR细胞内ADR和Rho123的蓄积,减少Rho123的泵出,抑制P糖蛋白的表达,但对K562细胞均无明显影响。CH在体外逆转肿瘤细胞多药耐药性的作用可能与其抑制P糖蛋白的功能和表达有关。     

洛美利嗪逆转K562/ADM细胞多药耐药性

目的研究洛美利嗪(lomerizine,Lom)逆转K562/ADM细胞多药耐药性的作用及机制。方法MTT法检测细胞毒作用,流式细胞仪研究Lom对ADM和长春新碱(vincristine,VCR)的K562/ADM细胞凋亡诱导作用的影响及对罗丹明123(rhodamine 123,Rh123)外排和P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)表达的作用。结果Lom明显提高ADM对K562/ADM多药耐药细胞的细胞毒作用及ADM和VCR的凋亡诱导作用,3,10和30 μmol·L^-1 Lom使K562/ADM对ADM的IC₅₀值由79.03 μmol·L^-1分别降至28.14,8.16和3.16 μmol·L^-1。Lom增加胞内ADM的蓄积浓度并抑制Rh123外排;但作用72 h后对K562/ADM细胞P-gp表达无影响。结论Lom通过抑制P-gp的活性逆转K562/ADM细胞的多药耐药性。     

FAT对K562/A02细胞内GSH含量的影响

目的：探讨FAT对K562/A02细胞内谷胱甘肽（GSH）含量的影响,及其对白血病细胞代谢解毒系统介导的多药耐药（MDR）的逆转效果。方法：采用生化DTNB法测定细胞内谷胱甘肽水平。结果：K562/A02细胞内GSH含量（231.54μmol/106细胞）高于K562细胞内GSH含量（58.03μmol/106细胞）,为K562细胞的3.99倍;VRP（10μmol/L）、FAT（0.01、0.02、0.04、0.08mg/ml）作用48h后,K562/A02细胞内GSH含量从231.54μmol/106细胞分别减少到96.95μmol/106细胞、212.89μmol/106细胞、161.00μmol/106细胞、122.35μmol/106细胞。结论：细胞内GSH含量增加是K562/A02细胞产生MDR的机制之一;FAT降低K562/A02细胞内GSH的含量是FAT逆转MDR的机制之一。     

钙调素拮抗剂O-(4-乙氧基)-丁基-小檗胺增强阿霉素杀伤MCF-7/ADR细胞的机制研究

目的研究钙调素拮抗剂0-4-乙氧基-丁基-小檗胺(EBB)增强阿霉素诱导乳腺癌多药耐药细胞系MCF-7/ADR细胞的杀伤作用及其相关机制。方法用MTT法测定阿霉素、EBB单独及联合用药对阿霉素杀伤乳腺癌多药耐药细胞系(MCF-7/ADR)及其亲代细胞系(MCF-7)的作用的IC50值,用不同浓度EBB处理MCF-7/ADR细胞后用FACS法分析EBB对阿霉素诱导细胞凋亡及对mdr1mRNA和P-gp蛋白水平表达的影响,通过激光共聚焦显微镜观察EBB处理前后及用EBB预处理24和48h后MCF-7/ADR和MCF-7细胞内阿霉素浓度的改变。结果MTT结果显示EBB对MCF-7和MCF-7/ADR都具有抗肿瘤活性;EBB还能协同提高阿霉素的细胞毒作用,MCF-7组两药相互作用指数(CDI)值为0.73,MCF-7/ADR组CDI值为0.49,其对耐药细胞的协同作用更为明显。随EBB剂量增加,低剂量阿霉素诱导MCF-7/ADR细胞凋亡增加而且P-gp蛋白表达水平逐渐下降,细胞内阿霉素浓度逐渐提高,而且用EBB预处理MCF-7/ADR细胞24和48h后细胞内阿霉素和罗丹明浓度也逐渐提高。结论EBB是有效的肿瘤细胞化疗药物,它不但能直接抑制P-gp功能还具有下调P-gp蛋白表达的作用,从而有效逆转MCF-7/ADR细胞的耐药现象,协同增强化疗药物对耐药细胞的杀伤作用。     

新的四氢异喹啉类化合物CPUE1逆转K562/A02细胞的多药耐药性

目的 :研究新的四氢异喹啉类化合物CPUE1逆转K5 6 2 A0 2细胞多药耐药性的作用及机制。方法 :在CPUE1的作用下 ,用MTT法检测长春新碱(vincristine ,VCR)对K5 6 2 A0 2多药耐药细胞的细胞毒作用的变化 ,使用DNA分析和Annexin Ⅴ PI双染法研究CPUE1对VCR诱导K5 6 2 A0 2细胞凋亡的影响 ,流式细胞仪检测CPUE1对P 糖蛋白 (P glycop rotein ,P gp)外排罗丹明 12 3(rhodamine12 3,Rh12 3)的作用。结果 :CPUE1能明显提高VCR对K5 6 2 A0 2多药耐药细胞的细胞毒作用以及凋亡诱导作用 ,10 μmol·L-1的CPUE1能使K5 6 2 A0 2对VCR的IC50值由 6 0 .5 4μmol·L-1降至 4 .17μmol·L-1。CPUE1还能抑制Rh12 3外排从而增加细胞内Rh12 3的蓄积浓度。结论 :CPUE1通过抑制P gp的活性逆转K5 6 2 A0 2细胞的多药耐药性。