应用AFLP法检测小鼠黑色素瘤B16基因组的变异

目的 应用AFLP技术检测小鼠黑色素瘤B16的遗传改变。方法 肿瘤及正常组织基因组DNA经限制性内切酶酶切,连接特异性接头,采用20条与接相识别的引物进行扩增,扩增产物经含溴化乙锭的1．5％琼脂糖凝胶电泳,紫外透视仪分析,照相。结果 20条引物均扩增出清晰条带,20条引物扩增结果显示B16瘤细胞株与移植瘤基因组间无差异。17条引物扩增结果显示肿瘤与正常组织间无差异,3条引物扩增结果显示肿瘤与正常组织间有差异,表现为扩增带的丢失或增加。结论 黑色素瘤的发生可能与基因组不稳定性有关。     

小鼠肝癌H22细胞克隆株的RAPD分析

目的应用随机扩增多态性DNA（RAPD）技术检测小鼠肝癌H22细胞克隆株的遗传变异。方法用47条引物对小鼠肝癌H22细胞的4个克隆株H22-H8D8,H22-H2G4,H22-H2E10,H22-H2C4基因组DNA进行RAPD分析。结果47条引物均能扩增出明显的条带,条带数多为4~10条,片段大小在200~2000 bp之间。其中4条引物的扩增条带具有多态性,表现为带的有无、移动和强弱差异。结论RAPD技术可以用来检测小鼠肝癌H22细胞克隆株基因组之间的差异。     

Zmu-1:DHP豚鼠的随机扩增多态性DNA分析

目的：研究Zmu-1：DHP豚鼠基因组DNA的遗传多态性及其遗传概貌，探讨随机引物PCR(RAPD—PCR)在豚鼠遗传质量检测中运用的可行性。方法：用RAPD—PCR法，对新培育的Zmu—1：DHP豚鼠和对照品系DHP豚鼠的基因组DNA进行PCR扩增。结果：从40条随机引物中，筛选出2条呈多态性的引物，分别是第S1202号和第S1219号引物。Zmu—1：DHP品系的扩增产物无多态性变化，而且其条带与多数DHP品系的个体相同。少数DHP品系的个体呈多态性变化，并找到该品系增加和缺失的特征性条带各一种。结论：Zmu—1：DHP品系的基因纯合性及个体一致性较DHP品系高。二个品系的DNA序列存在较少差异，说明豚鼠品系间遗传结构比较接近。一旦选定具有多态性的引物，RAPD—PCR法可以区分豚鼠品系，适用于豚鼠遗传质量检定。     

红鲫C1HD近交系RAPD标记的建立

目的建立红鲫C1HD近交系的RAPD标记。方法从80条随机引物中筛选出20条扩增效果和多态性较好的引物,对8尾红鲫C1HD近交系和8尾普通红鲫基因组DNA进行RAPD扩增。结果S333引物扩增出一条特异性条带,大小约为2.1 kb。结论S333引物扩增出的特异性条带可以作为区分普通红鲫与红鲫C1HD近交系的分子遗传标记。     

淋球菌RAPD分型的引物筛选与应用

目的为了研究不同淋球菌菌株的基因多态性,了解不同菌株之间的亲缘关系,选择适当的随机引物。方法以淋球菌基因组DNA为模板,对淋球菌进行RAPD扩增,选择多态性好、重复性好、稳定性强的随机引物,并用S38号引物对不同淋球菌基因组DNA进行指纹图谱区分。结果从Sagon公司50条RAPD随机引物中筛选出8条扩增效果良好的引物,经RAPD扩增出的淋球菌指纹图谱间有明显不同的DNA多态性,可对不同菌株进行聚类分析。结论利用RAPD技术对淋球菌进行随机引物的筛选,可为今后淋球菌的分子流行病学研究奠定基础。     

人源细粒棘球蚴的RAPD分析体系建立

目的建立PCR—RAPD反应体系，提升细粒棘球蚴随机扩增多态性DNA（RAPD）遗传多态性研究的稳定性，为研究细粒棘球蚴的分类学以及包虫病的分子流行病学奠定基础。方法采用改进的酚-氯仿抽提法提取细粒棘球蚴基因组DNA，用单因素筛选方法建立PCR—RAPD分析体系。结果采用改进的酚／氯仿抽提方法提取细粒棘球蚴基因组DNA质量高，适用于PCR—RAPD扩增分析；在25μL体系中，RAPD—PCR扩增反应各成分的最佳浓度为：dNTP0．2—0．3mmol／L、Taq酶2．5U、随机引物0．8—1．4μmol／L，模板为60ng。PCR扩增最佳条件为：95℃预变性5min；94℃变性30s、32℃退火45s、72℃延伸1min、共35个循环；最后72℃延伸10min；初步从20条引物中筛选出11条带型丰富的随机引物。结论酚-氯仿适用于提取细粒棘球蚴基因组DNA，优化的RAPD反应体系和筛选出的随机引物适合进行细粒棘球蚴RAPD遗传多态性分析。     

甘肃产秦艽的DNA指纹图谱鉴别

目的 对产于我国甘肃省的中药秦艽的3种基源植物秦艽、麻花秦艽与小秦艽进行RAPD分析,建立具有鉴别意义的DNA指纹图谱.方法 采用RAPD分子标记对秦艽的基因组DNA进行PCR扩增,利用NTSYSpc 2.1和Popgene 3.2软件分析3种秦艽间的亲缘关系,构建树系图.结果 从80条RAPD引物中筛选出4条具有鉴别意义的多态性引物,在3种秦艽中共得到39个DNA条带,其中共有条带2条,多态条带37条.据此获得了能有效区别3种秦艽的多态性RAPD指纹谱.结论 甘肃产秦艽的3种基源植物遗传分化明显,RAPD方法能有效地将它们区分鉴别.     

南充野生半夏遗传关系RAPD分析

目的比较南充野生芍药叶型、竹叶型半夏的遗传关系。方法使用22条随机引物,对上述两种叶型半夏基因组DNA进行RAPD扩增,比较它们的差异条带。利用Nei,Li方法计算两种半夏之间的遗传相似系数和遗传距离指数。结果22条引物可对南充野生芍药叶型、竹叶型半夏扩增出清晰条带。芍药叶型半夏基因组DNA扩增出157条带,竹叶型半夏基因组DNA扩增出161条带,芍药叶型半夏基因组DNA扩增的差异带3条,竹叶型半夏基因组DNA扩增的差异带7条。它们的遗传相似系数为0.9686;遗传距离指数为0.0314。结论利用RAPD技术证实了野生芍药叶型、竹叶型半夏的遗传关系存在差异,为进一步利用该技术进行半夏分类鉴定等研究奠定了基础。     

非小细胞肺癌的随机扩增多态DNA分析

目的：用ＲＡＰＤ技术检测非小细胞肺癌组织的遗传改变。方法：选用４０条含１０个碱基的随机引物对１６例非小细胞肺癌进行ＲＡＰＤ扩增,扩增产物在含溴化乙锭的１．５％琼脂糖凝胶中电泳,紫外透视仪上观察照相。结果：４０条引物都能扩增出清晰的条带,其中２２条引物产生的条带在肿瘤与其相应正常组织间无差异,表现为单态性;１８条引物扩增出的ＤＮＡ序列在肿瘤与其相应正常组间存在差异,表现为带的缺失、增加、移动和带强弱     

应用AFLP法检测小鼠高、低转移性肝癌细胞株基因组的遗传差异

目的：应用AFLP技术检测小鼠高、低转移性肝癌细胞株基因组的遗传改变，以期发现与肿瘤转移相关的DNA片段或基因。方法：肿瘤组织基因组DNA经限制性内切酶酶切，连接特异性接头，采用25对与接头相识别的引物进行扩增，扩增产物经含溴化乙锭的1．5％琼脂糖凝胶电泳，紫外透视仪分析，照相，回收差异片段，克隆测序，结果：25对引物均扩增出清晰条带，21对引物扩增结果显示高低转移性肝癌无差异，4对引物扩增结果显示二者之间有差异，表现为扩增带的有无，4条回收片段中的1条片段克隆成功并测序，结论：AFLP技术适用于肿瘤易感基因的筛选，小鼠肝癌的转移可能与基因组不稳定性有关，所得差异片段是否与转移相关有待进一步鉴定。     

配对肝癌组织与非癌肝组织基因组差异的随机扩增多态性DNA分析

目的：研究同一肝癌患者配对肝癌组织与非癌肝组织基因组之差异。方法：应用随机扩增多态性ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）分析技术。结果：６例配对标本作基因组差异分析显示，与各自配对的非癌肝组织相比，所有肝癌组织基因组ＤＮＡ的ＲＡＰＤ指纹图谱均存在差异，其中３例配对肝癌基因组中均存在一相同的０．９ｋｂ的随机扩增片段。结论：ＲＡＰＤ技术为差异基因分析提供了一有效方法。     

疏肝、健脾、补肾复方对慢性束缚应激大鼠行为学和免疫功能的影响

目的　研究慢性束缚应激时大鼠行为学和免疫功能的变化以及疏肝、健脾、补肾三种中药复方对其影响。方法　用特制束缚架连续束缚 2 1d(或 7d) ,每天 3h的方法制作大鼠束缚应激模型 ,观察大鼠行为学和免疫功能的变化。结果　慢性束缚应激后 ,大鼠的行为学发生了明显的变化 ,血清IL - 1β 上升 ,IL - 2和IL - 6下降 ,并且随着束缚时间的延长变化越明显。结论　逍遥散、四君子汤和金匮肾气丸能改善大鼠行为学的变化 ,明显增强慢性束缚应激大鼠的免疫功能。     

BALB/c突变无毛小鼠特异性免疫功能的研究

选用9条随机引物，对Wistar,WKY,F344三个品系的近交系大鼠进行了随机扩增多态性DNA（RAPD）分析。结果显示同一品系大鼠不同个体之间的RAPD图谱都相同，表明所测的三个品系大鼠内部遗传背景均一，在不同品系大鼠之间的RAPD结果有差异。Wistar与WKY之间，Wistar与F344之间，WKY与F344之间的共享度分别为87.9%,98.5%和89.2%。RAPD方法可以作为一种检测近交系大鼠种群内的遗传变异及区分不同品系近交系鼠的遗传检测方法。     

应用RAPD引物区分小鼠品系

目的 用随机扩增多态DNA（Random amplidfed polymorphic DNA,RAPD）方法区分10个常用小鼠品系。方法 从120条随机引物中筛选出稳定性、重复性好的4条多态性引物对10个常用小鼠品系进行RAPD扩增。扩增产物在含溴化乙锭的1．5％琼脂糖凝胶中电泳,紫外透射仪上观察照相。结果 仅用这4条引物就可将10个品系小鼠完全区分开来,其中包括遗传背景或外观形态很相似的品系,如BALB／c与BALB／c-nu、KM与BALB／c也能区分出来。结论 筛选出的4条引物对实际工作具有指导意义,适用于小鼠常规遗传监测。     

应用RAPD标记技术对树鼩遗传多样性的分析

目的建立树鼩RAPD(random amplified polymorphic DNA)遗传标记分析方法,了解中缅树鼩种群的遗传多样性。方法采用PCR技术对40条随机引物进行优化,筛选出能有效用于树鼩群体遗传分析的RAPD位点,对48只树鼩个体的基因组DNA进行PCR扩增,并应用Popgene 1.32与RAPDistance Package Version 1.04等软件进行数据处理,分析树鼩的群体遗传特性。结果20个RAPD引物共检测到113个位点,平均每个引物可扩增出5.65个位点,其中多态位点数为69个(占61.1%)。个体间的遗传相似系数平均为0.8307,个体间遗传距离在0.09~0.27之间,平均遗传距离为0.1693。雄性群体的遗传多态度(H0)(0.1864)略高于雌性群体(0.1470),平均遗传多态度(Hpop)为0.1667;树鼩遗传多态度所占的比例在群体内为48.29%,而雌、雄群体间为51.71%。NJ法进行聚类分析得出T15、T33和T47号树鼩个体聚类成一大类,其余45只树鼩个体聚成另一大类,雌、雄个体呈相互交叉现象。结论实验所筛选的随机引物可有效用于中缅树鼩种群的遗传结构分析。本树鼩群体具有较好的遗传多样性。     

癌组织中的遗传不稳定性的RAPD分析

目的　检测肿瘤发生发展过程中DNA和染色体的不稳定性及筛选与新的癌基因或抑癌基因相关的分子标志.方法　用9个随机引物对5 种肿瘤共128个样本进行RAPD分析,检测其DNA和染色体的不稳定性.不稳定性的扩增带被切割回收纯化,克隆,然后被标记为探针作Southern和Northern印迹杂交分析,再进一步测序分析.结果　在所有的癌组织标本中胃癌样本5号和3号显示出最高的遗传变异.这5种癌组织中遗传不稳定性的平均检出率分别从42.2%到49.4%.每个随机引物的检测能力有极显著差异,分别从27%到68%不等.其中引物2最高达68%,引物8最低,为27%.图2中的B带为一个单拷贝片段经RFLP分析后发现其在胃癌和结肠癌中是缺失突变,测序后,经查询是一个新的序列并被Gene Bank收录（登录号AF151005）.进一步研究显示它可能是一个新抑癌基因的调控元件部分,含有一个顺式作用的"CACA"启动子,一个"GATA"家族序列的增强子和一个转录起始密码子.结论　RAPD与其他方法结合使用能检测肿瘤发生过程中DNA和染色体的不稳定性,并筛选与新的癌基因或抑癌基因相关的分子标志.