乳腺癌新辅助化疗前后Ki67变化对疗效及预后的意义

目的：探讨乳腺癌新辅助化疗（NACT）前后Ki67表达变化对疗效和预后预测的临床意义。方法：回顾性分析汕头大学医学院附属肿瘤医院2009年12月—2013年9月期间收治的104例乳腺癌NACT后手术的患者。采用免疫组织化学评估配对的化疗前穿刺活检标本和手术切除标本中Ki67的表达情况。根据NACT前后Ki67的变化分为Ki67下降组和Ki67未下降（不变或升高）组,并对两组的临床病理学资料进行比较和生存分析。结果：NACT后Ki67下降组占62.5%（65/104）,未下降组占37.5%（39/104）。NACT前高表达Ki67的患者经NACT后Ki67显著下降（63/91,P < 0.01）。Ki67下降组更容易获得有效的临床效果即达到临床完全/部分缓解（59/65,P=0.005）,且NACT后Ki67下降值与临床疗效相关（r=0.302,P=0.002）。NACT后Ki67下降组的无病生存率明显高于Ki67未下降组,差异有统计学意义（P=0.027）;Ki67下降组的总生存率高于Ki67未下降组,但差异无统计学意义（P=0.171）。结论：乳腺癌NACT后Ki67表达下降可能是疗效和预后的预测因子。     

miR-34a及其下游基因在铁超载大鼠非酒精性脂肪肝发生过程中的作用

目的：探讨miR-34a及其下游基因在铁超载大鼠非酒精性脂肪肝（NAFLD）发生过程中的作用。方法：将36只5周龄雄性SD大鼠随机分为对照组（基础饲料）、高铁组（含1% FeSO₄的基础饲料）、高脂组（脂肪供能比为35%的高脂饲料）和高脂高铁组（含1% FeSO₄的高脂饲料）。干预12周后,称取大鼠体质量;肝脏油红O染色观察大鼠肝脏中脂质堆积程度;测定大鼠血清中丙氨酸氨基转移酶（ALT）和天门冬氨酸氨基转移酶（AST）含量;实时荧光定量PCR（qPCR）检测大鼠肝脏中miR-34a、沉默信息调节因子1（SIRT1）及过氧化物酶体增殖物激活受体α（PPARα）的mRNA表达水平,并用Western blot方法检测SIRT1和PPARα的蛋白表达水平。结果：与对照组相比,高脂组和高脂高铁组大鼠体质量、血清ALT及miR-34a表达水平均显著增加（P均 < 0.05）,SIRT1及其下游PPARα的mRNA和蛋白表达水平均降低（P均 < 0.05）,肝脏脂质堆积程度加重;与高脂组比较,高脂高铁组SIRT1和PPARα的mRNA和蛋白表达水平均显著降低（P均 < 0.05）。结论：高脂高铁联合作用,可进一步激活miR-34a的表达,进而抑制其下游基因的表达,从而加重NAFLD大鼠肝脏脂代谢紊乱。     

SOX30基因敲除对雄性小鼠睾丸组织结构及激素分泌的影响

目的：分析SOX30基因敲除后对雄性小鼠睾丸组织结构及激素分泌的影响,探讨SOX30基因在雄性生殖系统中的作用。方法：采用基因重组方法构建SOX30基因敲除小鼠模型,并根据基因型鉴定结果将小鼠分为野生型（WW）、杂合型（KW）和纯合型（KK）共3组,分别称取各基因型小鼠（2.5月龄）体质量和各脏器质量并计算脏器系数。HE染色后观察各基因型小鼠睾丸及附睾病理改变并测量统计睾丸曲细精管直径。酶联免疫吸附法（ELISA）检测睾丸组织匀浆液中睾酮（T）和抑制素B（INH-B）激素水平。免疫荧光法检测睾丸组织中支持细胞和间质细胞特异性蛋白SOX9和3β-HSD的表达变化。结果：与WW型和KW型比较,KK型小鼠睾丸脏器指数显著降低（P < 0.05）,曲细精管内生精细胞排列紊乱,可见巨细胞及空泡变性,精子数量显著减少（P < 0.05）,曲细精管外间质增生明显,附睾内未发现成熟精子。与WW型比较,KK型小鼠曲细精管管腔直径缩小（P < 0.05）。与WW型和KW型比较,KK型小鼠睾丸组织匀浆液中T和INH-B水平显著降低（P < 0.05）。WW型和KK型小鼠睾丸组织中SOX9蛋白表达阳性细胞数量无明显差异,而KK型小鼠睾丸组织中3β-HSD蛋白表达阳性细胞数量较WW型明显升高（P < 0.05）。结论：SOX30敲除可导致睾丸组织出现明显的病理损伤,SOX30参与调控小鼠睾丸T和INH-B激素合成,在维持睾丸的正常功能方面具有重要作用。     

铁超载对高脂饮食 诱导的非酒精性脂肪肝病大鼠脂代谢的影响

目的：探讨铁超载对非酒精性脂肪肝病（NAFLD）模型大鼠脂代谢的影响。方法：48只雄性SD大鼠随机分成空白对照组（基础饲料）、高铁组（含1% FeSO₄的基础饲料）、高脂组（高脂饲料）、高脂低铁组（含0.5% FeSO₄的高脂饲料）、高脂高铁组（含1% FeSO₄的高脂饲料）。干预20周后,称取大鼠体质量;肝脏油红O染色观察肝脏脂质堆积情况;测定肝脏内甘油三酯（TG）含量;实时荧光定量PCR（qPCR）和Western blot分别检测大鼠肝脏中脂肪酸合成酶（FAS）、肉碱酰基转位酶Ⅰ（CPT1）的mRNA和蛋白表达水平。结果：与对照组比较,高脂膳食20周使大鼠体质量、肝脏TG含量均明显增加（P均 < 0.05）,并促进TG在肝脏的沉积;且FAS的mRNA和蛋白水平均增加,CPT1的mRNA和蛋白水平均降低（P均 < 0.05）。与高脂组比较,高脂高铁组大鼠肝脏TG含量明显增加（P < 0.05）;FAS的mRNA和蛋白水平均显著增加,CPT1的mRNA和蛋白水平均降低（P均 < 0.05）。结论：铁超载能够促进NAFLD大鼠肝脏脂质堆积,加重脂代谢紊乱,促进NAFLD病程进展。     

SOX30基因敲除对雄性小鼠睾丸组织结构及激素分泌的影响

目的：分析SOX30基因敲除后对雄性小鼠睾丸组织结构及激素分泌的影响，探讨SOX30基因在雄性生殖系统中的作用。方法：采用基因重组方法构建SOX30基因敲除小鼠模型，并根据基因型鉴定结果将小鼠分为野生型（WW）、杂合型（KW）和纯合型（KK）共3组，分别称取各基因型小鼠（2.5月龄）体质量和各脏器质量并计算脏器系数。HE染色后观察各基因型小鼠睾丸及附睾病理改变并测量统计睾丸曲细精管直径。酶联免疫吸附法（ELISA）检测睾丸组织匀浆液中睾酮（T）和抑制素B（INH-B）激素水平。免疫荧光法检测睾丸组织中支持细胞和间质细胞特异性蛋白SOX9和3β-HSD的表达变化。结果：与WW型和KW型比较，KK型小鼠睾丸脏器指数显著降低（P < 0.05），曲细精管内生精细胞排列紊乱，可见巨细胞及空泡变性，精子数量显著减少（P < 0.05），曲细精管外间质增生明显，附睾内未发现成熟精子。与WW型比较，KK型小鼠曲细精管管腔直径缩小（P < 0.05）。与WW型和KW型比较，KK型小鼠睾丸组织匀浆液中T和INH-B水平显著降低（P < 0.05）。WW型和KK型小鼠睾丸组织中SOX9蛋白表达阳性细胞数量无明显差异，而KK型小鼠睾丸组织中3β-HSD蛋白表达阳性细胞数量较WW型明显升高（P < 0.05）。结论：SOX30敲除可导致睾丸组织出现明显的病理损伤，SOX30参与调控小鼠睾丸T和INH-B激素合成，在维持睾丸的正常功能方面具有重要作用。     

乙烯利对青春期前SD雌性大鼠性早熟的影响及其机制研究

目的：探讨乙烯利促进青春期前SD雌性大鼠性早熟的作用及相关分子机制。方法：先后两批SD雌性孕鼠自行产子后由亲鼠自养，雌仔鼠在出生15日龄（PND15）时，根据体质量，按窝别随机分为4组，分别为阴性对照组（蒸馏水）和低、中、高剂量（分别为134、269、538 mg/kg）乙烯利染毒组。各组动物均经口灌胃，每天1次，连续5 d。第1批动物用于观察阴道开口时间；第2批动物处死后取血液，下丘脑和垂体组织，后用酶联免疫吸附法（ELASA）检测血清FSH（）促卵泡生成素和LH（黄体生成素）水平，实时荧光定量PCR（qPCR）检测下丘脑－垂体－性腺轴（HPGA）相关基因KISS-1、GPR54、GnRH、GnRHR的mRNA表达水平。结果：与阴性对照组相比，乙烯利中剂量组阴道开口时间提前（P < 0.05）；高剂量组阴道开口时间明显延长（P < 0.05）。在qPCR检测结果中，与对照组相比，乙烯利中剂量组HPGA轴相关基因表达增加，高剂量组降低，且差异均有统计学意义（P < 0.05）。而血清中LH、FSH水平的变化无统计学意义（P > 0.05）。结论：中剂量时乙烯利具有促进青春期前SD大鼠性早熟的作用，其机制可能与影响HPGA轴相关基因表达有关。     

miR-95与胃癌细胞洛铂 敏感性的关系及 作用机制研究

目的：探讨miR-95与胃癌细胞洛铂敏感性的关系及作用机制。方法：收集30例手术切除的胃癌组织及癌旁组织标本,实时定量PCR（qPCR）法检测组织中miR-95的表达情况,CCK-8法检测洛铂对胃癌组织细胞的体外抑制率。采用miR-95抑制物（anti-miR-95）和miR-95模拟物（miR-95 mimics）分别转染人胃癌细胞株SGC7901,检测转染前后细胞对洛铂敏感性的变化;采用qPCR及Western blot法检测细胞耐药相关基因MDR1、GST-π、LRP、Survivin、xIAP、Bad mRNA和蛋白的表达。结果：qPCR检测结果显示,30例胃癌组织miR-95的相对表达水平（0.106±0.023）显著高于癌旁组织（0.046±0.025）（P < 0.05）。以miR-95表达均值为界将胃癌组织分为miR-95高表达组17例,低表达组13例。洛铂对miR-95表达水平高的胃癌细胞的抑制率低于miR-95低水平者（P < 0.05）。anti-miR-95转染后,SGC7901细胞对洛铂的敏感性明显增高（P < 0.01）,耐药相关基因MDR1、Survivin、xIAP mRNA和蛋白表达水平明显降低（P < 0.05）,而Bad mRNA和蛋白表达水平明显增高（P < 0.05）。miR-95 mimics转染后,洛铂对SGC7901细胞的抑制率明显增加（P < 0.01）,耐药相关基因MDR1、Survivin、xIAP mRNA和蛋白表达水平明显升高（P < 0.05）,而Bad mRNA和蛋白表达水平明显降低（P < 0.05）。结论：miR-95通过调节一些耐药基因的表达影响胃癌组织和细胞对洛铂的敏感性。     

预扩增qPCR方法检测少量小鼠早期胚胎细胞中DNA甲基化相关基因的表达

目的: 比较3种实时定量PCR(qPCR)方法对少量小鼠早期胚胎细胞中甲基化相关基因表达水平的检测效果,以期获得适合日常检测的方法。方法: 分别应用常规qPCR方法、基于等温预扩增的qPCR方法、基于PCR预扩增的qPCR方法3种方案对少量小鼠早期胚胎细胞样本中甲基化相关基因TET1、TET2、TET3、DNMT3A的mRNA表达进行检测。结果: 3种方法的灵敏度由高到低依次为基于等温预扩增的qPCR方法、基于PCR预扩增qPCR方法、常规qPCR方法。前两种方法均能在合适的循环数下对少量小鼠胚胎细胞中的多个甲基化相关基因表达进行定量。而基于PCR预扩增的qPCR方法比基于等温预扩增的qPCR方法更经济,适合日常检测。因此,我们选择应用基于PCR预扩增的qPCR方法,检测了小鼠卵细胞以及卵细胞受精后22 h甲基化相关基因表达的变化,结果发现该过程中TET1表达量很低,不易检测到;TET2表达呈降低趋势;TET3和DNMT3A表达显著升高(P<0.01),与文献报道基本一致。结论: 基于等温预扩增的qPCR方法检测少量细胞样品中甲基化相关基因的表达的灵敏度在3种qPCR方法中最高。而基于PCR预扩增的qPCR方法操作简单、灵敏度较高、成本相对低,适合少量细胞样本中多个相关基因表达的实时定量日常检测。     

抗虫耐除草剂玉米对大鼠的亚慢性毒性研究

目的：研究大鼠在90 d内经口重复喂饲含抗虫基因cry1Ab和cry3Bb、耐除草剂基因cp4epsps、高维生素基因ZmHPT和ZmTMT的玉米引起的毒性效应。方法：140只6周龄的Wistar大鼠,雌雄各半,按照不同饲料随机分为7组：基础饲料对照组,对照玉米低、中、高剂量组,转基因玉米低、中、高剂量组。分别喂饲含相应玉米的饲料90 d,观察体质量、进食量、血液生化指标、脏器系数及病理学检查。结果：各组大鼠试验周期内生长正常,部分转基因玉米组大鼠和对照玉米组大鼠体质量、进食、血液生化指标、脏器系数与基础饲料对照组大鼠比较,差异具有统计学意义（P < 0.05）,部分转基因玉米组大鼠体质量、进食、血液生化指标、脏器系数与对照玉米组大鼠比较,差异具有统计学意义（P < 0.05）,但是均无生物学意义。主要脏器组织病理学检查未发现明显异常。结论：在本实验条件下,未发现该转基因玉米对大鼠有亚慢性毒性作用。     

胸腔积液肺腺癌细胞中CXCR4、Ki67、MDM2、N-cadherin的表达及其与EGFR突变状态的关系

目的：研究胸腔积液肺腺癌细胞中趋化因子受体4(CXCR4)、增殖细胞核抗原Ki67、鼠双微体2(MDM2)和N-钙黏蛋白(Ncadherin)的表达与表皮生长因子受体(EGFR)突变状态的相关性。方法：收集46例晚期肺腺癌患者的胸腔积液,采用HE染色联合免疫细胞化学染色(ICC)法检测胸腔积液中是否含肿瘤细胞,突变扩增系统(ARMS)检测胸腔积液中癌细胞的EGFR基因突变状态,将癌细胞分为EGFR-TKI敏感突变组和EGFR野生型组。采用ICC法检测胸腔积液中肺腺癌细胞CXCR4、Ki67、MDM2和Ncadherin的表达,分析这些蛋白的表达阳性率和EGFR突变状态的相关性。结果：46例肺腺癌患者的恶性胸腔积液细胞中,31例(67.4%)存在EGFR-TKI敏感突变。CXCR4、Ki67、MDM2、N-cadherin表达阳性率与EGFR突变状态相关(r分别为0.452、0.428、0.417、0.524,均为P<0.05),且EGFR-TKI敏感突变组细胞CXCR4、Ki67、MDM2、N-cadherin表达的阳性率明显高于EGFR野生型组(P<0.05)。结论：EGFR突变状态与CXCR4、Ki67、MDM2和N-cadherin的表达相关,EGFR突变状态下,胸腔积液肺腺癌细胞的CXCR4、Ki67、MDM2和N-cadherin的表达阳性率高于非突变状态下的表达阳性率。     

Alteration of strain background and a high omega‐6 fat diet induces earlier onset of pancreatic neoplasia in EL‐Kras transgenic mice

Diets containing omega‐6 (ω‐6) fat have been associated with increased tumor development in carcinogen‐induced pancreatic cancer models. However, the effects of ω‐6 fatty acids and background strain on the development of genetically‐induced pancreatic neoplasia is unknown. We assessed the effects of a diet rich in ω‐6 fat on the development of pancreatic neoplasia in elastase (EL)‐Kras^G12D (EL‐Kras) mice in two different backgrounds. EL‐Kras FVB mice were crossed to C57BL/6 (B6) mice to produce EL‐Kras FVB6 F1 (or EL‐Kras F1) and EL‐Kras B6 congenic mice. Age‐matched EL‐Kras mice from each strain were compared to one another on a standard chow. Two cohorts of EL‐Kras FVB and EL‐Kras F1 mice were fed a 23% corn oil diet and compared to age‐matched mice fed a standard chow. Pancreata were scored for incidence, frequency, and size of neoplastic lesions, and stained for the presence of mast cells to evaluate changes in the inflammatory milieu secondary to a high fat diet. EL‐Kras F1 mice had increased incidence, frequency, and size of pancreatic neoplasia compared to EL‐Kras FVB mice. The frequency and size of neoplastic lesions and the weight and pancreatic mast cell densities in EL‐Kras F1 mice were increased in mice fed a high ω‐6 fatty acid diet compared to mice fed a standard chow. We herein introduce the EL‐Kras B6 mouse model which presents with increased frequency of pancreatic neoplasia compared to EL‐Kras F1 mice. The phenotype in EL‐Kras F1 and FVB mice is promoted by a diet rich in ω‐6 fatty acid.     

胰腺癌组织中Ki67、p53的表达及其与高剂量少分次放疗生存时间的关系

目的:分析Ki67、p53在胰腺癌组织中的表达水平,及其与患者接受高剂量少分次放疗生存时间的关系。方法:回顾性收集55例胰腺癌患者接受高剂量少分次放疗前的活检病理组织,采用免疫组化SP法检测Ki67及p53在胰腺癌组织中的表达水平,并采用Log-rank检验比较不同表达水平组间生存时间的差异,Cox模型行多因素分析统计。结果:Ki67、p53蛋白在穿刺组织中的表达率分别为41.8%、47.3%,单因素生存分析显示Ki67、p53阴性表达组的生存时间在统计学上明显长于阳性组（P均<0.05）,多因素分析提示Ki67、p53及远处转移均是胰腺癌患者接受高剂量少分次放疗生存时间的独立预后影响因素。结论:放疗前活检病理组织中Ki67、p53蛋白表达水平是预测胰腺癌高剂量少分次放疗生存时间的重要指标。     

阿霉素联合他莫昔芬对人子宫内膜癌裸鼠移植瘤的抑制作用

目的：分别研究阿霉素、他莫昔芬及两者联合用药对人子宫内膜癌裸鼠移植瘤的生长抑制作用及相应机制;方法：建立裸鼠活体二次移植肿瘤的动物模型,并随机分为4组,每组5只.分别为阿霉素用药组、他莫昔芬用药组、阿霉素他莫昔芬联合用药组及对照组;用药处理裸鼠移植瘤模型3周.对照组予以注射生理盐水3周.计算各组移植瘤体积、抑瘤率及裸鼠体重情况,肿瘤组织标本进行免疫组化检测Ki67蛋白的表达,并用TUNEL法检测细胞凋亡情况.结果：联合用药组与单独用药组及对照组的瘤体积比较差异均有统计学意义（P＜0.05）;用药前各组裸鼠体重差异无统计学意义（P＞0.05）,用药后对照组与单独用药组及联合用药组的体重比较差异均有统计学意义（P＜0.05）;联合用药组与单独用药组及对照组的抑瘤率比较差异均有统计学意义（P＜0.05）;用药组的Ki67表达阳性率明显低于对照组,联合用药组Ki67表达最低;TUNEL法检测联合用药组肿瘤细胞凋亡率为（32.33 ±3.68）％,明显高于阿霉素组（17.40±2.58）％、他莫昔芬（15.40±6.05）％和对照组（3.50±1.50）％,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论：阿霉素、他莫昔芬均可抑制人子宫内膜癌裸鼠移植瘤的生长,两者联合应用较两药单独应用对人子宫内膜癌裸鼠移植瘤的抑制作用更为显著.     

高脂饮食对结肠癌肝脏转移的影响及作用机制

目的 探讨高脂饮食对结肠癌肝脏转移的影响及其作用机制。方法 30只NSI第三代免疫缺陷裸鼠脾脏种植结肠癌细胞DLD1构建移植瘤裸鼠模型,分别喂养普通饲料（对照组）、高脂饲料（高脂饮食组）和高脂饲料并腹腔注射CXCR4拮抗剂AMD3100（高脂饮食+AMD3100组）,每组10只。12周后颈椎脱臼处死,称量各组裸鼠体重、肝脏重量,统计肝脏中肿瘤转移灶数目,并采用Western blot和RT-qPCR检测肿瘤组织中SDF-1、CXCR4的蛋白和mRNA表达水平。结果 12周后,高脂饮食组裸鼠体重、脂肪重量、肝脏重量及血清瘦素浓度高于对照组和高脂饮食+AMD3100组（P<0.05）。对照组、高脂饮食组和高脂饮食+AMD3100组裸鼠发生肝脏转移的比例分别为30.0%、80.0%和40.0%。高脂饮食组裸鼠的肿瘤体积及肝脏转移灶数量均明显高于对照组［（3.83±0.42） mm³  vs （1.00±0.15） mm³,P<0.001;（4.33±0.58） 个 vs （1.33±0.58） 个,P=0.002］和高脂饮食+AMD3100组 ［（3.83±0.42） mm³  vs （1.96±0.15） mm³,P<0.001;（4.33±0.58） 个 vs （2.33±0.58） 个,P=0.002］。Western blot和RT-qPCR检测结果显示,高脂饮食组结肠癌组织中的SDF-1、CXCR4的蛋白和mRNA表达水平均较对照组和高脂饮食+AMD3100组明显上调（均P<0.05）。结论 高脂饮食可通过促进结肠癌癌组织中SDF-1和CXCR4的表达水平而增强结肠癌的肝脏定向转移。     

Maspin和Ki67在子宫内膜癌中的表达及其相关性分析

目的:探讨在正常子宫内膜、子宫内膜增殖症(非典型)和子宫内膜癌中Maspin和Ki67的表达、相关性及与临床病理特征的关系.方法:采用免疫组织化学方法检测Maspin和Ki67在30例正常增生期子宫内膜、40例子宫内膜增殖症(非典型)和72例子宫内膜癌中的表达.结果:在子宫内膜癌中,Ki67表达分别显著高于正常子宫内膜和子宫内膜增殖症(P =0.043;P =0.020),Maspin表达分别显著高于正常子宫内膜和子宫内膜增殖症(P ＜0.05);Ki67与子宫内膜癌的组织学分级和分期有统计学差异(P＜0.05),Maspin与子宫内膜癌的组织学分级、分期和淋巴结转移有统计学差异(P＜0.05),Maspin和Ki67表达呈正相关(r=0.231,P =0.005).结论:在子宫内膜癌中,Maspin和Ki67的表达提示两者可能成为子宫内膜癌的预后因子.     

Inactivation of Smad4 accelerates Kras(G12D)-mediated pancreatic neoplasia

Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) is one of the most fatal human malignancies, with an overall 5-year survival rate of <5%. Genetic analysis of PDAC patient samples has shown that specific disease-associated mutations are correlated with histologically defined stages of neoplastic progression in the ductal epithelium. Activating mutations in KRAS are almost uniformly present in early-stage disease, with subsequent inactivating mutations in p16(INK4A), p53, and SMAD4 occurring in more advanced lesions. In this study, we have tested whether the loss of Smad4 would cooperate with an activating Kras(G12D) mutation to promote progression to PDAC using the Pdx1-Cre transgenic system to activate Kras(G12D) and delete Smad4 in all pancreatic lineages including the ductal epithelium. Analysis of double-mutant mice showed that loss of Smad4 significantly accelerated the progression of pancreatic intraepithelial neoplasias (mPanIN) and promoted a high incidence of intraductal papillary mucinous neoplasia and active fibrosis compared with Pdx1-Cre;Kras(G12D) or Pdx1-Cre;Smad4(lox/lox) mice. Occasionally, double-mutant mice progressed to locally invasive PDAC with little evidence of metastases by 6 months of age and without the detectable loss of p53 or p16(Ink4A) expression or function. The loss of Smad4 only seemed to promote disease progression in the presence of the activated Kras(G12D) allele because we observed no abnormal pathology within the pancreata of 23 Pdx1-Cre;Smad4(lox/lox) animals that were analyzed up to 8 months of age. This indicates that Smad4 is dispensable for normal pancreatic development but is critical for at least partial suppression of multiple Kras(G12D)-dependent disease-associated phenotypes.     

乳腺导管原位癌伴微浸润与浸润癌患者的临床特征对比分析

目的:分析乳腺导管原位癌伴微浸润（ductal carcinoma in situ with microinvasion,DCIS-MI）与乳腺浸润性导管癌（invasive ductal carcinoma,IDC）患者的临床特征、治疗方式等。方法:回顾性分析55例乳腺导管原位癌伴微浸润及508例乳腺浸润性导管癌患者的临床资料,包括两组患者的年龄、月经情况、雌激素受体（estrogen receptor,ER）、孕激素受体（progestrone receptor,PR）、人表皮生长因子受体（human epidermal growth factor,HER-2）、肿瘤细胞增殖活性标志物（Ki67）的表达情况、分子分型、治疗方式及预后。结果:DCIS-MI组和IDC组患者在年龄上的差异不具有统计学意义（P＞0.05）,DCIS-MI组在已绝经及淋巴结转移阳性比例均低于IDC组（P＜0.05）;DCIS-MI组Ki67阳性表达率显著低于IDC组（P＜0.05）,ER、PR及HER-2阳性表达率与IDC组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。DCIS-MI组Luminal A型比例高于IDC组,而Luminal B(HER-2-)型比例低于IDC组,且差异均具有统计学意义（P＜0.05）。其余分子分型差异不具有统计学意义。DCIS-MI组患者单纯乳房切除术比例（10.9%）显著高于IDC组（0.8%）（P＜0.05）。DCIS-MI患者主要采用的手术方式为乳腺癌改良根治术和全乳切除+腋窝淋巴结清扫,其比例分别为60.0%、16.4%,与IDC组患者采用相同手术方式的比例（67.3%、19.9%）无显著差异。DCIS-MI组化疗比例、放疗比例均低于IDC组（P＜0.05）,而两组患者在内分泌治疗、靶向治疗及中药治疗方面差异不具有统计学意义（P＞0.05）。DCIS-MI组和IDC组患者的5年无病生存（disease-free survival,DFS）率分别为97.0%和81.0%,差异具有统计学意义（Log-rank,χ2=4.962,P=0.026）。结论:与IDC患者相比,DCIS-MI组患者绝经前状态比例高、淋巴结转移阳性率及Ki67阳性率更低,Luminal A型比例更高而Luminal B(HER-2-)型比例更低;DCIS-MI组患者行单纯乳房切除术比例更高,放疗及化疗比例更低,其预后更好。     

Effects of high fat diet and cholecystokinin receptor blockade on pancreatic growth and tumor initiation in the hamster

The mechanism by which high-fat diet potentiates pancreaticcancer is not known, but trophic hormones may be involved. Inpreliminary growth studies, hamsters fed a high fat diet (17.5%lard, 17.5% corn oil) for 14 days showed a 16.3% increase (P< 0.01) in pancreatic weight compared to controls on lowfat diet (2.5% lard, 2.5% corn oil). A significant increasewas also seen at 28 days. Similar increases were seen in pancreaticDNA (29%, P < 0.01) and pancreatic RNA (22%, P < 0.05)at 14 days. Plasma cholecystokinin (CCK) levels at 14 days were2.5 fold higher in the animals fed high fat (P < 0.01). Infusionof the CCK antagonist MK329 (25 nmol/kg/h) completely abolishedthe increase in pancreatic weight, pancreatic DNA and pancreaticRNA. The effect of CCK receptor blockade during the initiationperiod of carcinogenesis was investigated in hamsters fed thesame diets used in the growth studies. One hundred animals receiveda single injection of N-nitrosobis(2-oxopropyl)amine, (BOP,20 mg/kg). Half of the hamsters in each diet group receiveda 2 week infusion of MK329 (25 nmol/kg/h), beginning 8 daysbefore carcinogen administration. At the time of death, 55 weeksafter carcinogen administration, non-fasting plasma CCK levelswere 31% higher in the high fat fed hamsters than in the lowfat fed animals (P < 0.01). The high-fat diet group had a3-fold increase in total cancer incidence and a 5-fold increasein advanced lesions (adenocarcinomas). Tumor incidence and yieldwere not changed in either diet group by CCK-receptor blockadeduring the initiation period. Cholecystokinin appears to mediatethe short-term trophic effect that high-fat feeding has on thepancreas. However, potentiation of pancreatic cancer by high-fatdiet in the hamster cancer model does not appear to be influencedby endogenous cholecystokinin at the time of tumor induction.     

Atorvastatin inhibits pancreatic carcinogenesis and increases survival in LSL‐KrasG12D‐LSL‐Trp53R172H‐Pdx1‐Cre mice

There are several studies supporting the role of HMG‐CoA reductase inhibitors such as atorvastatin against carcinogenesis, in which inhibiting the generation of prenyl intermediates involved in protein prenylation plays the crucial role. Mutation of Kras gene is the most common genetic alteration in pancreatic cancer and the Ras protein requires prenylation for its membrane localization and activity. In the present study, the effectiveness of atorvastatin against pancreatic carcinogenesis and its effect on protein prenylation were determined using the LSL‐Kras^G12D‐LSL‐Trp53^R172H‐Pdx1‐Cre mouse model (called Pan^kras/p53 mice). Five‐week‐old Pan^kras/p53 mice were fed either an AIN93M diet or a diet supplemented with 100 ppm atorvastatin. Kaplan–Meier survival analysis with Log‐Rank test revealed a significant increase in survival in mice fed 100 ppm atorvastatin (171.9 ± 6.2 d) compared to the control mice (144.9 ± 8.4 d, P < 0.05). Histologic and immunohistochemical analysis showed that atorvastatin treatment resulted in a significant reduction in tumor volume and Ki‐67‐labeled cell proliferation. Mechanistic studies on primary pancreatic tumors and the cultured murine pancreatic carcinoma cells revealed that atorvastatin inhibited prenylation in several key proteins, including Kras protein and its activities, and similar effect was observed in pancreatic carcinoma cells treated with farnesyltransferase inhibitor R115777. Microarray assay on the global gene expression profile demonstrated that a total of 132 genes were significantly modulated by atorvastatin; and Waf1p21, cyp51A1, and soluble epoxide hydrolase were crucial atorvastatin‐targeted genes which involve in inflammation and carcinogenesis. This study indicates that atorvastatin has the potential to serve as a chemopreventive agent against pancreatic carcinogenesis. © 2012 Wiley Periodicals, Inc.     

石蒜碱调控G3BP1/TGF-β/Smad信号通路抑制食管癌细胞增殖

目的:探讨石蒜碱对食管癌细胞增殖的影响,并分析其机制。方法:细胞计数8（cell counting kit-8,CCK-8）法分析细胞增殖抑制率,Western blot法分析GTP酶激活蛋白-Src同源结构域3-结合蛋白1［GTPase activating protein（SH3 domain)binding protein 1,G3BP1］、转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、p-Smad2/Smad2、p-Smad3/Smad3水平。敲低或过表达G3BP1,观察其对细胞增殖抑制率以及G3BP1、TGF-β1、p-Smad2/Smad2水平的影响。裸鼠成瘤实验验证石蒜碱对裸鼠体内瘤体的瘤重、瘤体积及G3BP1、TGF-β1、p-Smad2/Smad2水平的影响。结果:2~64 μmol/L石蒜碱抑制ECA109细胞增殖,石蒜碱48 h IC50为（16.21±2.35）μmol/L。4、8、16 μmol/L的石蒜碱能下调G3BP1、TGF-β1、p-Smad2/Smad2、p-Smad3/Smad3的水平。敲低G3BP1的表达能明显提高石蒜碱对ECA109细胞增殖的抑制作用,促进石蒜碱降低G3BP1、TGF-β1、p-Smad2/Smad2水平（P＜0.05）;上调G3BP的表达能明显下调石蒜碱对ECA109细胞增殖的抑制作用,抑制石蒜碱降低G3BP1、TGF-β1、p-Smad2/Smad2水平（P＜0.05）。体内实验显示,与模型对照组比较,25、50、100 mg/kg石蒜碱能降低瘤体体积、瘤体质量,下调瘤体G3BP1、TGF-β1、p-Smad2/Smad2水平（P＜0.05）。结论:石蒜碱能抑制ECA109细胞的增殖,对裸鼠体内ECA109细胞移植瘤抑瘤效果明显,其机制与调控G3BP1/TGF-β/Smad 信号通路有关。