大鼠脊髓缺血再灌注损伤后神经细胞凋亡及Caspase-1、Caspase-3的表达

目的观察大鼠脊髓缺血再灌注损伤后神经细胞凋亡及Caspase-1、Caspase-3的表达。方法 48只成年健康Wistar大鼠,采用Naslund腹主动脉阻断法制作脊髓缺血再灌注损伤模型。随机分为空白对照组(n=6)、假手术组(n=6)和损伤组(n=36),观察脊髓缺血再灌注损伤后,脊髓的病理变化、细胞凋亡及Caspase-1、Caspase-3的表达变化的规律。结果观察脊髓缺血再灌注损伤后Caspase-1阳性细胞在损伤后12h表达明显,1d损伤区域及周边出现表达高峰。Caspase-3阳性细胞在损伤后12h表达明显,2d损伤区域及周边出现表达高峰。TUNEL阳性细胞也在脊髓损伤后12h表达明显,2d出现表达高峰。空白对照组、假手术组:Caspase-1、Caspase-3免疫组化少有表达,少见TUNEL阳性细胞。结论脊髓缺血再灌注损伤后存在神经细胞凋亡,Caspase-1、Caspase-3均参与损伤的调节。     

大鼠脊髓全横断损伤后脊髓caspase-3的表达变化

目的观察大鼠脊髓全横断(SCT)后横断端细胞凋亡及caspase-3 mRNA、蛋白的表达变化并探讨其意义。方法SD大鼠90只,手术组(SCT组)动物选择在T10节段全横断脊髓,假手术组除不横断外其余步骤相同。TUNEL法检测脊髓横断端凋亡情况,免疫组织化学、RT-PCR、Western blot技术检测不同时间点caspase-3 mRNA、蛋白表达变化。结果SCT后横断端脊髓灰质白质均检测到凋亡细胞,caspase-3在损伤周围组织呈阳性,RT-PCR、Western blot显示1d组基因及蛋白均明显上调,3d、7d、14d、21d组mRNA逐渐下降,且3d组依然高于假手术组;3d、7d、14d组蛋白逐渐下降而21d组又略有回升,且3d、21d组依然高于假手术组。结论SCT后凋亡主要在早期出现,随时间进展呈逐渐下降趋势。     

重组Caspase-3基因的构建及其诱导胰腺癌细胞凋亡的观察

通过对Caspase—3(半胱氨酸蛋白酶3)大亚基(LS)，小亚基(SS)的重组，构建重组型Caspase—3基因(r—caspase—3)，并探讨r—Caspase—3基因诱导胰腺癌细胞凋亡的可能性，以寻求肿瘤基因治疗的新途径。采用分子生物学方法克隆Caspase—3的大、小亚基，体外进行重新排列组合，使大、小亚基原来的排序颠倒，构建出pcDNA3．1( )／r—Caspase—3真核表达质粒；利用脂质体瞬时转染人胰腺癌细胞PC—Ⅰ，RT—PCR检测r—Caspase—3mRNA的表达；流式细胞技术(FCM)检测转染胰腺癌细胞凋亡状况。结果显示：Caspase—3的大、小亚基被完整克隆，r—Gas—pase—3基因测序结果证实小亚基位于大亚基之前；RT—PCR扩增出894bp大小片段，流式细胞检测可见明显的凋亡峰出现。以上结果表明，重组r—Caspase—3基因其mRNA可在胰腺癌细胞中表达并自催化诱导细胞凋亡，可作为胰腺癌基因治疗的目的基因。     

慢病毒介导的RNA干扰下调IL-6抑制脊髓顿挫损伤后Caspase-3表达

目的通过慢病毒介导的RNA技术干扰IL-6的表达,探究脊髓顿挫损伤后Caspase-3的表达变化。方法Allen′s打击法制备脊髓顿挫伤(SCC)模型,BBB评分确认造模成功;免疫组织化学和Q-PCR技术定位和定量测定IL-6和Caspase-3的表达变化;Gene MANIA网站预测IL-6与Caspase-3的联系;慢病毒介导的RNA干扰技术构建IL-6干扰模型后,Q-PCR技术定量测定Caspase-3的表达变化。结果 SCC后SD大鼠BBB评分显著低于假手术组(P0.05);IHC结果显示:IL-6和Caspase-3均在在脊髓白质胶质细胞表达;Q-PCR结果显示:IL-6在损伤后12h表达显著增加,3d、28d表达持续下降;Caspase-3在损伤后12h、3d、28d表达持续下降。生物信息学分析结果:IL-6和Caspase-3在大鼠体内存在共定位关系。干扰组Caspase-3表达比空载组显著降低(P0.05)。结论在SCC后,抑制IL-6表达可降低Caspase-3表达水平。     

CO_2气腹对胎鼠脑超微结构和Caspase-3表达的影响

目的探讨CO2气腹对胎鼠脑组织结构及脑组织Caspase-3表达的影响。方法选择不同CO2气腹压力,建立孕鼠的CO2气腹模型,于鼠孕17 d的24 h内取胎鼠脑组织分别进行HE染色、免疫组化、电镜制片,观察胎鼠脑组织结构变化和胎鼠脑组织Caspase-3表达。结果透射电镜观察显示随气腹压力的增加,胎鼠脑组织可见细胞轻微可逆性损害。Caspase-3在实验组与对照组间胎鼠脑组织表达无明显变化（P〉0.05）,同时组间Caspase-3的表达也无显著性差异（P〉0.05）。结论 CO2气腹压力升高对胎鼠大脑细胞产生可逆性轻度损伤。     

X染色体连锁的凋亡抑制蛋白和Caspase-3在上皮性卵巢癌中的表达及其临床意义

目的:探讨X染色体连锁的凋亡抑制蛋白(Xiap)和Caspase-3在上皮性卵巢癌中的表达变化及其临床意义.方法:采用免疫组织化学两步法检测Xiap和Caspase-3在40例上皮性卵巢癌、20例卵巢上皮性交界性肿瘤、15例卵巢良性肿瘤和15例正常卵巢组织中的表达.结果:Xiap在正常卵巢组织、良性卵巢肿瘤、交界性卵巢肿瘤组织和上皮性卵巢癌中的阳性表达率呈逐渐增高趋势,差异有统计学意义(P<0.01).Caspase-3在交界性卵巢肿瘤和上皮性卵巢癌中的阳性表达率明显低于正常卵巢组织和良件卵巢肿瘤(P<0.01).上皮性卵巢癌中Xiap的阳性表达与临床分期、组织分级和生存状况有关(P<0.01);Caspase-3的阳性表达与临床分期和生存状况有关(P<0.01).结论:XIAP、Caspase-3的表达在上皮性卵巢癌的发生、发展过程中起重要作用,可能是上皮性卵巢癌预后不良的因素.     

LY-294002对大鼠急性脊髓损伤后Caspase-3表达的影响

目的研究LY-294002对急性脊髓损伤大鼠Caspase-3表达的变化。方法选取104只成年健康SD大鼠,按Nystrom法建立大鼠脊髓(T8～9)急性压迫损伤模型,按随机数字表法分为假手术组8只、损伤组48只、LY-294002组48只。免疫组化和Western blot方法检测各组大鼠脊髓损伤部位Caspase-3的表达。结果免疫组化结果发现假手术组大鼠脊髓神经细胞中Caspase-3阳性细胞较少;在脊髓损伤后8 h时,Caspase-3阳性细胞数明显增多,3 d达高峰,7 d表达开始减弱。在经LY-294002处理后的各时间点大鼠脊髓损伤部位的Caspase-3阳性细胞明显少于相同时间点的脊髓损伤组大鼠。Western blot方法发现假手术组大鼠脊髓损伤部位的Caspase-3的表达量很少,而在脊髓损伤后8h时,Caspase-3蛋白表达量明显增多,3 d达高峰,7 d表达开始减弱,在经LY-294002处理后的各时间点大鼠脊髓损伤部位的Caspase-3蛋白表达则明显少于相同时间点的脊髓损伤组大鼠,与免疫组化结果一致。结论LY-294002能够下调急性脊髓损伤大鼠Caspase-3蛋白的表达。     

瘢痕疙瘩组织中Livin、Smac、Caspase-3的表达及其相关性

BACKGROUND: Currently, there is no effective treatment for keloids that often recur. Its pathogenesis is still entirely unclear, and fibroblast proliferation and apoptosis have become a research hotspot. OBJECTIVE: To investigate the expression of Livin, Smac and Caspase-3 in keloids and to analyze their relationship so as to preliminarily explore the significance of Livin, Smac and Caspase-3 in the pathogenesis of keloids. METHODS: RT-PCR and immunohistochemical methods were used to detect the mRNA and protein expressions of Livin, Smac and Caspase-3 in keloids (n=20) and normal skin tissues (n=20). RESULTS AND CONCLUSION: Compared with the normal skin tissue, the mRNA and protein positive expressions of Livin were significantly higher in keloids (P < 0.05), while the mRNA and protein positive expressions of Smac and Caspase-3 were lower in keloids (P < 0.05). There was a negative association between Livin and Smac, Caspase-3 protein expression in keloids. These findings indicate that the high mRNA expression of Livin may cause the imbalance between proliferation and apoptosis of fibroblasts by inhibiting the mRNA expression of Smac and Caspase-3, and eventually lead to the formation of keloid.      

Caspase-3 mRNA反义核酸对γ-射线诱导的HL-60细胞凋亡及caspase-3表达的抑制

为进一步研究caspase-3在γ-射线诱导的HL-60细胞凋亡中的作用，探索细胞凋亡过度疾病基因治疗的新途径，本实验将我们初选的两条caspase-3 mRNA反义寡核苷酸(ASODN-1，针对5′-非编码区；ASODN-2，针对翻译起始区)用脂质体转染入HL-60细胞，10Gy γ-射线照射诱导细胞凋亡，     

神经节苷脂对急性脊髓损伤大鼠Caspase-3表达的影响

目的研究单唾液酸神经节苷脂(GM1)对急性脊髓损伤大鼠Caspase-3表达的变化。方法选取72只成年健康SD大鼠,按Nystrom法建立大鼠脊髓损伤模型,按随机数字表法分为假手术组、脊髓损伤组和M1组,每组各24只,脊髓损伤组和GM1治疗组依据脊髓损伤后的不同时间点再细分为1、7和14 d三个亚组。伤后第1、7和14天分别用BBB评分和斜板试验观察大鼠运动功能的恢复情况。免疫组化方法和Western blot方法检测三组大鼠脊髓损伤部位Caspase-3的表达。结果术后7和14 d,GM1治疗组BBB评分和斜板试验明显优于脊髓损伤组,差异有统计学意义(P0.05)。免疫组化检测发现假手术组大鼠脊髓仅有少量Caspase-3阳性表达细胞;在脊髓损伤后1 d时,Caspase-3阳性细胞数明显增多,7 d表达开始减弱(P0.05)。与相同时间点的SCI组比较,GM1组大鼠脊髓损伤部位的Caspase-3阳性细胞明显减少(P0.05)。Western blot结果与免疫组化结果一致。结论下调Caspase-3蛋白的表达可能是GM1治疗急性脊髓损伤的机制之一。     

桉叶油联合维甲酸对SD胎鼠脑组织Pax3和缝隙连接蛋白43表达的影响

目的探讨桉叶油联合维甲酸(RA)对SD胎鼠脑组织转录因子Pax3、缝隙连接蛋白43(Cx43)表达的影响。方法 SD孕鼠42只,随机分为6组,每组7只,正常对照组,RA组,溶剂对照组(花生油+RA),3个实验组(桉叶油高、中、低剂量+RA)。正常对照组自由摄食饮水,溶剂对照组于孕第7~14天每只花生油2ml灌胃,每天1次,孕第10天40mg/kg RA灌胃1次。桉叶油3个剂量组于孕第7~14天分别桉叶油300、200和100mg/kg灌胃,每天1次,孕第10天40mg/kg RA灌胃1次。RA组于孕第10天40mg/kg RA灌胃1次。各组于孕21天处死孕鼠取胚胎,Western blotting、免疫组织化学技术检测胎鼠脑组织的Pax3、Cx43蛋白的表达。Real-time PCR检测脑组织Pax3、Cx43 mRNA表达。阿利新蓝和茜素红进行骨骼染色,体视显微镜下观测椎骨发育,脊柱间隙。结果维甲酸灌胃各组胎鼠椎骨数量异常的胎鼠数与正常对照组比较差异无显著性,但在维甲酸灌胃各组中,胎鼠椎骨形态异常的异常率和胎鼠椎骨分裂的百分率最低值分别为55%(桉叶油高剂量+RA组)和45.8%(桉叶油低剂量+RA组),较正常对照组高(0)(P0.05)。在维甲酸灌胃各组中,桉叶油各组胎鼠椎骨形态异常的异常率和胎鼠椎骨分裂的百分率最高值分别为62.5%(桉叶油低剂量+RA组)和55.0%(桉叶油高剂量+RA组),较维甲酸组(73.7%,73.7%)和溶剂对照组低(68.2%,63.6%,P0.05)。与正常组胎鼠比较,维甲酸灌胃各组大脑组织的Pax3、Cx43蛋白及其mRNA的表达较正常组高(P0.05),在维甲酸灌胃各组中,桉叶油灌胃各组胎鼠脑组织Pax3、Cx43蛋白及其mRNA的表达较单纯RA灌胃组低,其差异有统计学意义(P0.05)。结论桉叶油对维甲酸引起胎鼠神经管缺陷有一定的拮抗作用。其机制可能与桉叶油拮抗维甲酸上调胎鼠神经组织的Pax3、Cx43蛋白过度表达有关     

维甲酸对胎鼠Vangl1及Vangl2基因表达的影响

神经管畸形的发生是由遗传因素与环境因素共同作用产生的。平面细胞极性途径（planar cell polarity，PCP）对脊椎动物神经胚形成非常重要。该途径基因的任何突变都可能导致神经管不能闭合，与人类的颅脊柱裂相似。但是，环境因素是否影响、如何影响PCP途径基因的表达到目前仍不清楚。目的研究维甲酸对胎鼠Vangl1及Vangl2基因表达的时空特征的影响。方法全反式维甲酸橄榄油混悬液按120mg／kg在BALB／C小鼠怀孕第9．5天（E9．5）（B组）或E10．5（C组）灌胃，A组仅用橄榄油灌胃。取E9．5、E10．5、E11．5、E13．5、E15．5、E17．5、E19．5胎鼠，Vangl1及Vangl2基因表达量采用逆转录酶PCR（RT—PCR）检测，其时空表达采用全胚胎原位杂交（WISH）检测。结果结果显示，正常情况下Vangl1及Vangl2基因在整个神经胚形成过程中都有强表达。而B组胎鼠从脑到后神经孔Vangl1及Vangl2基因表达显著下调。C组较复杂，二基因表达在全胚胎（从E11．5到E13．5）及神经管脊柱区（从E15．5到E19．5）显著下调并维持低表达，但在神经管的颅区（E15．5到E19．5）仅中度下调。结论：结果提示，维甲酸诱导的神经管畸形的发生与Vangl1及Vangl2基因转录子下调有关。     

督脉电针对早期受损伤的脊髓神经营养素-3表达的影响

目的 观察督脉电针对早期受损伤的脊髓神经营养素-3(NT-3)表达的影响及其细胞定位.方法 成年雌性大鼠分为损伤组和电针加损伤组.全横断损伤两组大鼠的脊髓1d后,开始对电针+损伤组大鼠进行督脉电针,损伤组大鼠不做督脉电针.电针加损伤组在电针后1、3和7d时间点取出脊髓损伤区组织,损伤组也在相应时间点取出损伤区组织,用ELISA方法检测损伤区组织NT-3水平.再取电针后7d大鼠脊髓损伤区及其邻近组织切片做NT-3的免疫荧光组织化学双标染色.结果 电针加损伤组和损伤组的脊髓损伤区组织NT-3表达在时间上基本一致;在前3 d,NT-3水平是下降的,在后3 d,NT-3水平是增高的.但是,与损伤组相比,电针加损伤组的NT-3水平是明显增高(P＜0.05).免疫荧光双标染色结果显示,神经元、星形胶质细胞、少突胶质细胞和巨噬细胞都有NT-3的表达.结论 督脉电针可以促进受损伤早期的脊髓组织细胞合成和分泌内源性NT-3,这可能是督脉电针促进急性脊髓损伤修复的适宜微环境因素之一.     

表没食子儿茶素没食子酸酯对大鼠脊髓损伤后神经细胞凋亡及Caspase-3表达的影响

目的观察表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对脊髓损伤(SCI)大鼠神经元凋亡和凋亡调控蛋白Caspase-3时间、空间表达的影响,探讨其脊髓损伤保护机制。方法 SD大鼠75只,分为假手术组、SCI组、EGCG组(n=25只);钳夹法制作脊髓损伤模型,EGCG组和SCI组损伤后即刻和1h后腹腔注射EGCG(50 mg/kg)和等量生理盐水;用结晶紫(CV)染色法、TUNEL和免疫组织化学方法,观察SCI后6h、12h、24h、3d和7d时间范围内,从损伤中心到头端0~5.00mm空间范围内,EGCG对脊髓神经元存活、凋亡以及相关调控蛋白Caspase-3表达的影响。结果 CV染色发现,SCI后6h~7d,在0~0.50mm空间范围内均未发现存活的神经元,在1.00~4.60mm范围内,EGCG和SCI组相比存活的神经元数明显增加(P0.01);TUNEL结果发现,SCI后6h~7d,在1.05~3.05mm范围内,EGCG与SCI组相比凋亡神经元数明显减少(P0.01);免疫组织化学发现,SCI后6h~7d,在1.10~3.10mm范围内,EGCG与SCI组相比Caspase-3阳性表达的神经元数明显减少(P0.01)。结论 EGCG在一定时间、空间范围内能下调Caspase-3表达,减少神经元凋亡,对继发性SCI有拮抗作用。     

灵芝孢子在预防维甲酸诱导胚胎小鼠发生神经管畸形过程中对Cdk4表达的影响

目的探讨预先服用灵芝孢子在降低维甲酸诱导胚胎小鼠发生神经管畸形过程中对依赖细胞周期蛋白激酶4(cyclindependentproteinkinase4,Cdk4)表达的影响。方法于孕期小鼠E0d时给予灵芝孢子组的孕鼠胃饲灵芝孢子溶液,8g·kg-1·d-1。实验对照组的孕鼠胃饲等量溶剂。于E7.75d时,两组孕鼠一次性胃饲维甲酸,剂量为50mg/kg体重。正常对照组孕鼠胃饲等量灵芝孢子溶剂,但是在E7.75d时,仅给予维甲酸溶剂。空白对照组孕鼠常规饲养不作任何处理。在孕期E10.5d时取出4组孕鼠的胚胎,应用免疫荧光组织化学染色和Westernblot检测胚胎神经管神经上皮Cdk4表达情况。结果实验对照组孕鼠胚胎神经管神经上皮细胞Cdk4的表达明显降低,而灵芝孢子组胚胎表达Cdk4的强度明显高于实验对照组。正常对照组与空白对照组相比Cdk4的表达无统计学意义(P>0.05)。结论灵芝孢子可能是通过增强神经管神经上皮细胞表达Cdk4降低维甲酸诱导胚胎小鼠神经管畸形的发生。     

Human fetal spinal cord xenografts survive in the eye of athymic nude rat hosts

Summary Human fetal spinal cord tissue was recovered from elective abortions and grafted to the anterior chamber of the eye of adult athymic nude rats. The transplants slowly became vascularized from the host iris during the first months. There was a clear cut stage-dependent survival and growth along a more human time-table. Fetal spinal cord tissue from embryos younger than gestational week 8 showed a much better survival and growth than tissue from older stages. Using laminin immunohistochemistry blood vessels could be visualized in the grafts. The pattern of vascularization was, however, clearly abnormal; there were fewer vessels which had abnormally thick walls as compared to those in the normal spinal cord. Similar to rat spinal cord allografts the human spinal cord xenografts displayed a relative gliosis and were surrounded by a glial layer visualized with antibodies against glial fibrillary acidic protein. Neurofilament-immunoreactive fibres were found inside the glial layer. A variety of neurons were found including large polygonal motoneuron-shaped cells, albeit with CGRP and AChE negative cell bodies. Both Substance P and enkepha-lin-immunoreactive cells and fibres were found. It is concluded that xenografted fetal human spinal cord survives, grows and may provide a useful model for experimental studies of human spinal cord development and connectivity.     

小鼠囊胚细胞凋亡和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达与维甲酸的诱导作用

背景：细胞凋亡是维甲酸导致早期胚胎异常发育的原因之一,而半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3介导的细胞凋亡是细胞凋亡的主要途径。 目的：观察维甲酸对体外培养小鼠囊胚细胞凋亡的影响,以及对囊胚细胞中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达的改变。 方法：获取妊娠3.5 d小鼠囊胚,分别在含0,1和10 μmol/L维甲酸的M199培养基中培养24 h,用带有荧光标记的原位末端标记法观察维甲酸对小鼠囊胚细胞凋亡的效应;并用免疫组织化学S-P法检测维甲酸对小鼠囊胚半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3的表达。 结果与结论：所有组均观察到囊胚细胞凋亡和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达,高剂量维甲酸组中囊胚细胞凋亡荧光值,半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达的平均吸光度值和阳性面积率均显著升高(P < 0.01)。结果提示维甲酸可促进体外培养小鼠囊胚细胞凋亡和及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达,证实了维甲酸对小鼠胚胎的发育的细胞毒性作用。