曲古菌素A诱导急性髓性白血病细胞表达共刺激分子CD80和CD86的研究

目的:研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古菌素A(trichostatin A,TSA)诱导急性髓性白血病细胞表达共刺激分子CD80和CD86。方法:流式细胞仪检测TSA诱导HL-60细胞、急性髓性白血病患者单个核细胞表达共刺激分子CD80和CD86及细胞活力;RT-PCR法分析CD80和CD86 mRNA的表达情况;75Gy(gray,Gy)照射TSA诱导的HL-60细胞后,采用CCK-8法检测共刺激分子表达增高后,HL-60细胞对健康人单核细胞的增殖作用。结果:TSA使HL-60细胞CD86的表达上调,也可急性髓性白血病患者单核细胞CD86的表达上调,TSA诱导HL-60细胞表达共刺激分子CD86后,可促进健康人单核细胞的增殖。结论:TSA诱导HL-60细胞、急性髓性白血病患者单核细胞共刺激分子CD86表达增高,促进健康人单核细胞的增殖。     

曲古菌素A抑制HL-60细胞端粒酶活性及hTERT的表达并诱导凋亡

目的研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古菌素A(trichostatin A, TSA)抑制HL-60细胞端粒酶活性及亚单位hTERT的表达并诱导凋亡的机制。方法采用MTT法和倒置相差显微镜观察不同浓度曲古菌素A对HL-60细胞的抑制作用,流式细胞仪检测600 nmol·L-1TSA作用后的细胞凋亡情况,TRAP-ELISA法检测端粒酶活性变化,RT-PCR分析端粒酶三个亚单位的mRNA表达情况。结果 TSA对HL-60细胞的抑制作用具有时间和剂量依赖性,AnnexinV/PI双染色法检测凋亡显示,600 nmol·L-1TSA作用48 h后,细胞凋亡率为42·6%。600 nmol·L-1TSA作用12、24和48 h后,端粒酶活性分别下降到1·95 ±0·25、1·73 ±0·12和1·52 ±0·09。RT-PCR显示,端粒酶逆转录酶hTERT表达下降,而端粒酶RNA模板(hTR)和端粒酶相关蛋白(hTP1)表达无明显改变。结论 TSA抑制HL-60细胞中端粒酶活性,并诱导凋亡,其机制可能与曲古菌素A下调hTERT转录水平有关。     

曲古菌素A抑制HL-60细胞端粒酶活性及亚单位hTERT的表达并诱导凋亡

目的研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古菌素A(tri-chostatin A,TSA)抑制HL-60细胞端粒酶活性及亚单位hTERT的表达并诱导凋亡的机制。方法采用MTT法和倒置相差显微镜观察不同浓度曲古菌素A对HL-60细胞的抑制作用,流式细胞仪检测600 nmol.L-1TSA作用后的细胞凋亡情况,TRAP-ELISA法检测端粒酶活性变化,RT-PCR分析端粒酶三个亚单位的mRNA表达情况。结果曲古菌素A对HL-60细胞的抑制作用具有时间和剂量依赖性,Annex-inV/PI双染色体法检测凋亡显示,600 nmol.L-1TSA作用48h后,细胞凋亡率为42.6%。600 nmol.L-1曲古菌素A作用12、24和48 h后,端粒酶活性分别下降为1.95±0.25、1.73±0.12和1.52±0.09。RT-PCR显示,端粒酶逆转录酶hTERT表达下降,而端粒酶RNA模板(hTR)和端粒酶相关蛋白(hTP1)表达无明显改变。结论曲古菌素A(trichosta-tin,TSA)抑制HL-60细胞端粒酶活性下降,并诱导凋亡,其机制可能与曲古菌素A下调hTERT转录水平有关。     

曲古菌素A抑制血管平滑肌增殖和诱导凋亡的研究

目的观察曲古菌素A(TrichostatinA,TSA)体外抑制血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和诱导凋亡的作用。方法采用MTT比色法和BrdU参入法观察TSA对血清诱导的VSMC增殖的抑制作用;采用流式细胞仪和检测细胞周期蛋白表达的方法观察TSA对VSMC细胞周期的影响;采用测定DNA片段和活化caspase-3表达的方法观察TSA诱导VSMC发生凋亡的作用。结果小剂量TSA抑制血清诱导的VSMC增殖而无明显的细胞毒作用,大剂量TSA激活caspase-3并诱导VSMC发生凋亡。TSA干预可延缓血清诱导VSMC进入S期,此效应与抑制cyclinD1和cyclinA表达有关。结论TSA能抑制血清诱导的VSMC增殖,使VSMC停滞于静止期,大剂量条件下诱导VSMC凋亡。TSA有望成为治疗血管增殖性疾病的新策略。     

青藤碱对类风湿关节炎树突状细胞CD80mRNA、CD86mRNA表达的影响

目的观察中药单体青藤碱对体外培养类风湿关节炎(RA)树突状细胞CD80mRNA、CD86mRNA表达的影响。方法分离10例RA患者外周血单核细胞,分为青藤碱高、中、低剂量组和空白对照组,采用重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子和重组人白细胞介素-4联合刺激,半定量逆转录聚合酶链反应检测CD80mRNA、CD86mRNA表达的改变。结果与空白对照组比较,经青藤碱高、中、低剂量干预的树突状细胞CD80mRNA、CD86mRNA表达减少(P<0.01或P<0.05),青藤碱3个剂量组之间比较表达存在差异(P<0.05)。结论青藤碱可能通过抑制树突状细胞CD80mRNA、CD86mRNA的表达,阻断对其T细胞的协同刺激而达到治疗RA的作用。     

90例强直性脊柱炎活动期患者单核细胞中CD28、CD80、CD86表达的临床意义

目的探讨CD28、CD80、CD86在90例强直性脊柱炎患者外周血单核细胞中表达的临床意义。方法选择我院骨伤科2011年6月至2012年6月经相关检查确诊的强直性脊柱炎患者180例,其中活动期患者90例,稳定期患者90例,另选90例体健正常的人群做为对照组,提取外周血单核细胞,采用Taqman探针实时荧光定量PCR方法检测CD28、CD80、CD86的表达。结果强直性脊柱炎患者单核细胞CD28、CD80、CD86表达明显高于对照组,且活动期组患者高于稳定期组患者(P<0.01)。结论 CD28、CD80、CD86表达升高可增加强直性脊柱炎的发病率。     

曲古菌素A对人胃癌SGC-7901细胞凋亡及其DAPK1基因表达的影响

目的 探讨曲古菌素A(TSA)体外抑制人胃癌SOC-7901细胞凋亡及其死亡相关蛋白激酶1(DAPK1)基因表达的影响.方法 体外培养的胃癌细胞以不同浓度的TSA(37.5、150、600ng/ml)处理后.用Annexin V/PI检测细胞凋亡率.RT-PCR、Western blot分别检测DAPK1 mRNA和蛋白表达水平.结果 AnnexinV/PI检测发现,不同浓度TSA可显著诱导SOC-7901细胞凋亡,并呈浓度及时间依赖性(P<0.05);TSA干预前SGC-7901细胞DAPK1 mRNA和蛋白表达水平很低,不同浓度TSA处理SGC-7901细胞DAPK1 mRNA和蛋白表达水平明显上调,呈溶度及时间依赖性(P<0.05).结论 TSA诱导SGC-7901细胞凋亡可能与DAPK1基因的低乙酰化状态逆转有关.     

共刺激分子CD40在乳腺癌中的表达和生物学意义

TNF／TNFR超家族成员中的CD40／CD40L分子因其在特异性免疫应答中的重要作用和疾病的密切关系而备受瞩目,成为免疫学及肿瘤免疫研究中的热点。在人类的恶性肿瘤中,大多数的恶性淋巴细胞性肿瘤都表达CD40分子,但CD40在上皮性肿瘤细胞中的作用及其机制研究得很少,本文研究CD40在乳腺癌细胞株和乳腺癌组织中的表达及其生物学意义,进而探讨CD40作为靶分子在乳腺癌生物治疗中的可行性。     

卵巢癌细胞系SKOV3培养上清对巨噬细胞共刺激分子的影响

目的 研究卵巢癌细胞系SKOV3培养上清处理巨噬细胞后,巨噬细胞亚型的改变,以及CD80、CD86、CD40在不同巨噬细胞亚型上表达的差异.方法 Ficoll 密度梯度法分离健康成人外周血单个核细胞,GM-CSF诱导为巨噬细胞(M0)后,用对数生长期的SKOV3细胞培养上清处理14 d后,采用流式细胞术检测巨噬细胞亚型的改变及不同亚型细胞CD80、CD86和CD40的表达情况.结果 流式细胞术检测显示,用SKOV3细胞培养上清培养巨噬细胞14 d后,巨噬细胞主要向CD163-M2型巨噬细胞分化[M1/M2=(12.37±1.76)%/(22.23±2.21)%].CD163-M2型巨噬细胞CD40的表达较CD64-M1型显著降低,2组比较差异均有统计学意义(P<0.05);而CD80、CD86的表达无明显改变,2组比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 SKOV3细胞培养上清刺激后的巨噬细胞向不同巨噬细胞亚型分化;M2型巨噬细胞较M1型巨噬细胞共刺激分子表达下调,提示这些共刺激分子在巨噬细胞的活化及免疫应答过程中很重要,可能与肿瘤细胞的免疫逃逸有关.     

CD40单克隆抗体佐剂诱导的T细胞应答

以纯化重组蛋白为免疫原的疫苗均有免疫原性不强的缺点，传统铝盐佐剂是弱佐剂，只能增强部分抗原的免疫原性，且主要诱导TH2型免疫应答，不能对细胞内感染产生有效的免疫应答，因而需要探索能够诱导TH1型免疫应答的新型佐剂。     

卵巢上皮癌组织中HLA抗原和CD80的表达

目的：了解卵巢上皮癌（EOC）中HLA、CD80的表达及其临床意义。方法：应用免疫组化法检测HLA I和HLA Ⅱ的表达,用RT－PCR检测CD80mRNA的表达。结果：44份EOC中,HLA I、HLA Ⅱ的阳性表达率分别为59．09％和43．18％;CD80mRNA的表达率为9．09％。HLAI类分子的阳性表达在Ⅲ-Ⅳ期显著低于I－Ⅱ期（P＜0．05）,有淋巴结转移组显著低于无淋巴结转移组（P＜0．05）,肿瘤复发组显著低于未复发组（P＜0．01）。HLAⅡ类分子的表达在有淋巴结转移组显著低于无淋巴结转移组（P＜0．05）,HLAⅡ表达组较不表达组复发率有降低趋势,但差异未达显著水平（P＝0．074）。CD80mRNA阳性者4例均未复发,而CD80mRNA阴性者复发率为57．5％,两组有显著性差异（P＜0．05）。HLAI与HLAⅡ、HLAI与CD80同时缺乏时,患者复发率分别较HLAI与HLAⅡ、HLAI与CD80共表达时显著升高（P＜0．01）。结论：EOC可能通过HLAI的降调、CD80的缺乏多种途径逃避机体的免疫监视,检测上述调节分子的表达,可能对判断患者预后及指导免疫治疗有一定的意义。     

CD40和CD86在慢性阻塞性肺疾病患者诱导痰中的变化及意义

目的 检测慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者诱导痰中CD40和CD86水平的变化,分析CD40和CD86在COPD发病机制中的作用.方法 以COPD患者为研究对象,并以无COPD者健康人作为对照,采用沙丁胺醇加高渗盐水超声雾化吸入方法诱导排痰,以流式细胞技术(FCM)检测痰液中CD40及CD86水平.同时,常规方法测定肺...     

Evaluation of CD86 expression and MHC class II molecule internalization in THP-1 human monocyte cells as predictive endpoints for contact sensitizers

The aim of this study was to explore the usefulness of a human monocyte cell line in the development of in vitro models for predictive testing of contact sensitizers. Several studies have shown that contact sensitizers induce CD86 expression and enhanced internalization of MHC class II molecules in dendritic cells (DCs). We used THP-1, a human monocyte cell line, as a replacement for DCs for evaluation of these phenotypical alterations as predictive endpoints for contact sensitizers. Known sensitizers and irritants were evaluated. After 24-h exposure to samples, the expression of CD86 on THP-1 cells was measured by flow cytometry. Sensitizers such as dinitrochlorobenzene (DNCB), 2-mercaptobenzothiazole (MBT), eugenol, p-phenylenediamine (PPDA) and ammonium tetrachloroplatinate (Pt) enhanced CD86 expression on THP-1 cells, while nickel sulfate, cobalt sulfate and irritants such as methylsalicylate (MS), sodium dodecyl sulfate (SDS) and dimethyl sulfoxide (DMSO) did not augment CD86 expression. A synergistic effect was observed when DNCB and IFN- were added simultaneously to a culture of THP-1 cells. Furthermore, internalization of MHC class II molecules was observed when the cells were treated with some of sensitizers for 2 h. The inducing effects of chemicals on the two phenotypical alterations were the same. These results suggest that these test systems can be used to predict contact-sensitizing ability of chemicals as an in vitro sensitization assay.     

调节性T淋巴细胞在HCV感染者病程不同阶段的表达

目的探讨CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)在HCV感染者病程不同阶段的表达及其意义。方法收集非活动性HCV感染33例(A组)、活动性HCV感染32例(B组)、慢性丙型肝炎56例(C组)、HCV相关性肝硬化47例(D组)、HCV相关性肝癌45例(E组)和健康对照者60例(F组),采用流式细胞术检测外周血CD4+T细胞中CD4+CD25+Treg的表达频率,并进行统计学分析。结果 B、C、D、E组外周血CD4+T细胞中CD4+CD25+Treg的表达频率均明显高于F组(P<0.01)。组间比较,A组患者外周血的CD4+CD25+Treg细胞表达频率明显低于B、C、D、E组(P<0.01),D、E组表达频率明显高于B、C组(P<0.01)。结论 HCV感染导致CD4+CD25+Treg细胞的增殖与活化,使机体对其的免疫清除不完全,从而促进HCV感染者疾病的进展和肝癌的发生。     

跌打膏对小鼠外伤瘀血模型巨噬细胞CD16/32、CD80表达的影响研究

目的 :研究在外伤瘀血情况下应用跌打膏对小鼠体内巨噬细胞CD16/32、CD80分子表达的影响。方法 :将小鼠分为给药组、模型组和正常组 ,采用Rene法 ,选取7个时间点 ,用流式细胞仪分别对提取纯化后的小鼠腹腔巨噬细胞进行检测。结果 :CD16/32阳性、CD80阳性和CD16/32阴性、CD80阴性亚群给药后48h内有显著变化。结论 :跌打膏外敷给药对上述物质的表达可起到调节至正常水平的作用     

Modulation of costimulatory molecules CD80/CD86 on B cells and macrophages by stress proteins GroEL, GroES and DnaK

The aim of this study was to evaluate the effect of the Heat Shock Proteins GroES, GroEL and DnaK on the expression of the costimulatory molecules CD80/CD86 in B cells and macrophages. The interactions among these molecules are able to highly influence the immune response through the regulation of cytokine liberation which, on their own, are able to regulate the immunological response by a feedback mechanism. Our results showed that, on B cells, GroES and GroEL stimulated the expression of CD86 but did not induce the increase of the CD80 expression. CD86 peak expression showed a peak after 24-48 h of culture and decreased 60h after the stimulation. GroES and GroEL also stimulated the expression of CD80 and CD86 on macrophages. The same HSPs did not modify the expression of CD80 and CD86 on cells having characteristics of activated macrophages, the A-THP-1 cell line. DnaK did not induce any increase in the expression of CD80 and CD86 on lymphocytes or macrophages.     

西罗莫司对小鼠树突状细胞CD（86）、I-Ab和Toll样受体4表达的影响

目的：研究西罗莫司（SRL）对小鼠骨髓源树突状细胞（DC）发育成熟和Toll样受体4（TLR4）mRNA表达的影响。方法：（1）用细胞因子定向诱导C57BL/6小鼠骨髓细胞分化为DC,在相差显微镜和扫描电镜下动态观察DC在分化发育不同阶段的典型形态。（2）用SRL处理DC,通过流式细胞仪测定CD11c、CD86、MHC-Ⅱ类分子（I-Ab）的表达及在脂多糖（LPS）刺激后各分子表达的变化。（3）实时定量PCR法检测SRL处理DCTLR4mRNA表达水平。结果：（1）在相差显微镜和扫描电镜下可以看到DC在分化发育不同阶段的典型形态。（2）SRL抑制LPS刺激后DC表面CD86和I-Ab表达的上调。（3）与常规培养的DC相比,SRL组DCTLR4mRNA表达水平明显增高。结论：SRL处理的DC可抵抗LPS的促成熟作用。SRL促进DCTLR4mRNA表达。