竹荪醇提物对脂多糖诱导的RAW264.7细胞炎症反应的影响

目的探讨竹荪醇提物对LPS诱导的RAW264.7细胞肿瘤坏死因子(TNF-α)、一氧化氮(NO)的分泌,TNF-α、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素10(IL-10)的m RNA水平以及核转录因子(NF-κB)p65蛋白表达的影响及可能的抗炎机制。方法以不同浓度(100、200、400μg/ml)的竹荪醇提物作用于LPS(1μg/ml)诱导的RAW264.7小鼠巨噬细胞,采用ELISA法和Griess法检测炎性介质TNF-α和NO的分泌量;RT-PCR法测定促炎介质TNF-α、iNOS、IL-6和抗炎介质IL-10的m RNA水平;Western blot检测NF-κB p65蛋白的表达水平。结果与LPS组相比,200、400μg/ml的竹荪醇提物能显著抑制LPS诱导的RAW264.7细胞TNF-α和NO的释放(P0.01);且不同程度抑制RAW264.7细胞中促炎介质iNOS、TNF-α和IL-6的m RNA表达水平(P0.01),剂量依赖性的促进抗炎介质IL-10的m RNA表达水平(P0.01);不同浓度的竹荪醇提物均可显著抑制LPS诱导RAW264.7细胞中NF-κB p65蛋白的表达,差异有统计学意义(P0.01)。结论竹荪醇提物可抑制LPS诱导的RAW264.7细胞TNF-α和NO的释放,其抗炎作用的发挥可能与抑制NF-κB p65蛋白的表达,从而调节炎性介质的基因水平有关。     

苜草素对巨噬细胞吞噬活性和NO、IL-6、TNF-α分泌的影响

目的研究苜草素对小鼠巨噬细胞RAW264.7吞噬活性和NO、IL-6、TNF-α的影响,探讨苜草素对巨噬细胞免疫功能的影响机制。方法以不同浓度的苜草素和10 g/ml的脂多糖(LPS)分别处理巨噬细胞RAW264.7,采用中性红法测定巨噬细胞的吞噬活性,ELISA检测TNF-α分泌量。以不同浓度的苜草素处理LPS诱导的巨噬细胞RAW264.7,采用Griess分析法测定NO含量,ELISA检测IL-6分泌量,半定量RT-PCR方法测定巨噬细胞中iNOS、IL-6、TNF-αmRNA水平。结果苜草素在0.4、0.6、0.8和1.0 mg/ml时能显著提高巨噬细胞RAW264.7的吞噬活性(P<0.05);在0.6、0.8和1.0 mg/ml时显著增加TNF-α的分泌量(P<0.01),显著降低LPS诱导的巨噬细胞NO产生量(P<0.05);在0.2、0.4、0.6、0.8和1.0 mg/ml时显著降低LPS诱导的巨噬细胞IL-6的产生量(P<0.01)。苜草素可抑制LPS诱导的iNOS mRNA和IL-6 mRNA的表达,增加TNF-αmRNA的表达。结论苜草素可以提高巨噬细胞RAW264.7的吞噬活性,在转录水平上影响小鼠巨噬细胞iNOS、IL-6、TNF-α的基因表达,对巨噬细胞免疫功能起调节作用。     

番茄红素对脂多糖诱导巨噬细胞炎症反应影响

目的 探讨番茄红素对脂多糖(LPS)所诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症反应的影响.方法 采用Griess法和酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测一氧化氮(NO)和白介素-6(IL-6)的生成水平,半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹(Western-blot)法检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和IL-6的基因表达量及iNOS的蛋白表达量.结果 番茄红素中、高剂量组NO分别生成(40.6±1.5)、(26.6±1.3) μmol/L,均明显低于阳性对照组的(56.3±2.5) μmol/L(F=18.3,P＜0.01);番茄红素低、中、高剂量组IL-6分泌量分别为(508.3±39.5)、(469.2±66.9)、(335.5±72.9)pg/mL,均明显低于阳性对照组的(603.4±16.8) pg/mL(F=92.6,P＜0.05或P＜0.01),且其iNOS和IL-6基因及蛋白表达水平也均明显低于阳性对照组.结论 番茄红素能够降低LPS所诱导的RAW264.7巨噬细胞中iNOS、IL-6及其产物NO、IL-6的表达水平,提示其可能对于治疗各种炎症相关性疾病如动脉粥样硬化等有着重要意义.     

青蒿琥酯对脂多糖诱导RAW264.7细胞保护作用

目的 探讨中药青蒿琥酯(artesunate,AR)对脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7细胞损伤状态下的保护作用及其机制.方法 采用体外培养的巨噬细胞系RAW264.7细胞,待细胞生长至融合状态后分别加入LPS和不同浓度的AR(2.5,5,10,20μg/ml),于37℃、5%CO2条件下共同孵育24h,设立空白对照组.采用反转录PCR(RT-PCR)技术检测细胞核因子κB(NF-κB)mRNA表达的变化,硝酸还原酶法检测细胞上清液中炎性介质一氧化氮(NO)的含量.结果 1μg/ml的LPS刺激后,巨噬细胞信号转导通路上NF-κB的表达及炎症介质NO的含量均较对照组明显增加(P<0.05),加入AR后,随AR浓度的增加逐渐下调LPS升高的(NF-κB)mRNA表达及N0含量,且与LPS组比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 青蒿琥酯可明显降低内毒素诱导的巨噬细胞NF-κB的表达,减少NO的分泌可能是其抗损伤的保护作用机制之一.     

牛磺酸对糖尿病大鼠视网膜NO及其合酶影响

目的 探讨牛磺酸对糖尿病大鼠视网膜一氧化氮(NO)及其合酶(NOS)表达的影响.方法 链脲佐菌素制备大鼠糖尿病模型,24只成年雄性SD大鼠随机分成对照组、糖尿病组、牛磺酸干预组,每组8只.牛磺酸干预组饲料添加1.2%牛磺酸.12周处死,取视网膜标本进行实验.硝酸还原酶测定NO含量,免疫组化法测定神经型一氧化氮合酶(nNOS)及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达.结果 糖尿病组与牛磺酸干预组NO含量表达为(2.138±0.260)和(1.053±0.159)μmol/L,差异有统计学意义(P＜0.01);糖尿病组与牛磺酸干预组iNOS吸光度分别为(0.390±0.022)和(1.101±0.006),后者明显低于前者(P＜0.01);牛磺酸干预组nNOS吸光度为(0.429±0.035),明显高于糖尿病组的(0.125±0.024)(P＜0.01).结论 牛磺酸通过减少视网膜NO含量和影响iNOS、nNOS表达,改变糖尿病性视网膜病变(DR).     

毛蕊异黄酮对TGFβ1诱导的内皮细胞转分化相关细胞因子的影响

目的 探讨毛蕊异黄酮对转化生长因子β1(TGFβ1)诱导的人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)转分化相关细胞因子的影响.方法 TGFβ1(10μg/L)刺激生长良好的HUVECs,用毛蕊异黄酮(25、50、100μmol/L)进行干预;MTT法检测毛蕊异黄酮对HUVEC的细胞毒性作用;实时定量PCR法检测细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Gremlin、CD31、骨形态发生蛋白7(BMP7)mRNA的表达水平.结果 ①TGFβ1(10μg/L)、25、50、100μmol/L浓度的毛蕊异黄酮对HUVECs无细胞毒性作用(P>0.05).②用TGFβ1刺激HUVECs后,细胞中 α-SMA、Gremlin mRNA的表达水平显著升高,CD31、BMP7 mRNA的表达水平显著降低(P<0.05);毛蕊异黄酮(25、50、100μmol/L)进行干预后,α-SMA、Gremlin mRNA的表达水平显著降低,CD31、BMP7 mRNA的表达水平显著升高,并且表现出一定的浓度依赖性(P<0.05).结论 毛蕊异黄酮能抑制TGFβ1诱导的内皮细胞转分化,具有内皮细胞保护作用.     

活化T细胞核因子在双酚A调控巨噬细胞分泌IL-10中的作用

研究活化T细胞核因子(NFAT)在环境内分泌干扰物双酚A(BPA)调控小鼠单核巨噬细胞白血病细胞(RAW264.7)分泌白细胞介素-10(IL-10)蛋白中的作用,为进一步研究BPA的免疫毒作用机制提供理论依据。将不同剂量的BPA(0.1、1、10、100及1000μmol/L)作用于RAW264.7细胞24 h、48 h,用CCK8试剂盒检测细胞活性。以1μg/ml脂多糖(LPS)为激活剂,以1、10、50、100μmol/L BPA作用细胞24 h,ELISA试剂盒检测细胞上清液中IL-10蛋白含量。10、100μmol/L BPA作用细胞4 h、12 h,用实时定量PCR方法测定IL-10、NFATc、NFATp基因表达。与对照组比较,1000μmol/L BPA无论作用24 h还是48 h均能明显抑制细胞活性(P0.01);LPS显著促进巨噬细胞分泌IL-10蛋白,50和100μmol/L BPA作用细胞24 h,与LPS组比较,显著抑制IL-10蛋白的分泌(P0.01);10μmol/L、100μmol/L BPA染毒4 h能明显促进NFATp mRNA表达(P0.01);染毒12 h时,IL-10 mRNA水平降低,差异有统计学意义(P0.05)。提示本实验条件下,NFATp在BPA调控巨噬细胞分泌IL-10蛋白中具有一定的作用。     

较低剂量甲醛诱导人脐静脉内皮细胞损伤的时相特征及机制

目的观察较低剂量甲醛(formaldehyde,FA,浓度为40μmol/L)诱导人脐静脉内皮细胞损伤时相特征及一氧化氮(NO)含量变化的时相规律,分析甲醛在诱导内皮细胞损伤中的作用机制。方法将人脐静脉内皮细胞(HU-VEC-12株)与甲醛浓度为40μmol/L的DMEM培养基孵育。分别处理一定时间后(0,4,12,24,48,72h)H-E染色-光学显微镜观察细胞形态变化;MTT法测定细胞的活性;丙酮酸二硝基苯腙比色-分光光度法检测细胞上清液乳酸脱氢酶(LDH)漏出量;硫代巴比妥法检测细胞上清液中丙二醛(MDA)浓度;硝酸还原酶法测定培养液中NO浓度;生化分析法测定内皮细胞一氧化氮合酶活性;免疫细胞化学法测定内皮型一氧化氮合酶(eNOS)和诱生型一氧化氮合酶(i NOS)的蛋白表达;RT-PCR法测定eNOS和i NOS的mRNA表达。结果较低浓度甲醛呈时间依赖性地促进细胞LDH漏出,以及内皮细胞上清液MDA和NO的产生;降低eNOS的活性,抑制eNOS在蛋白和基因水平的表达;增加i NOS活性,促进i N-OS在蛋白和基因水平的表达。结论甲醛诱导HUVEC-12细胞损伤,机制可能与其抑制eNOS的活性及表达,诱导i NOS的活性及表达,增加病理性NO产生,从而导致内皮细胞损伤。     

维生素C对染镍肺泡巨噬细胞iNOS的影响

目的 探讨镍在大鼠肺泡巨噬细胞诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)基因诱导表达中的作用，以及维生素C对巨噬细胞iNOS诱导表达的影响及其机制。方法 采用体外细胞培养法测定在维生素C(25，50，100μmol／L)作用下，体外染镍肺泡巨噬细胞的存活率及活力。同时观察细胞内一氧化氮(nitric oxide，NO)和活性氧的产生，以及一氧化氮合酶(nitric oxide synthase，NOS)活力的变化。以逆转录-聚合酶链反应(RT—PCR)法测定iNOS mRNA的表达。结果 在体外染镍肺泡巨噬细胞中加入不同浓度的维生素C后可提高该细胞的存活率和活力，可减少NO和活性氧的产生，降低NOS和活性，还可抑制镍诱导的iNOS mRNA的表达水平。结论 镍可通过诱导大鼠肺泡巨噬细胞．NOS基因表达，产生大量NO，导致细胞脂质过氧化，而维生素C可通过抑制iNOS mRNA的表达，拮抗镍对肺泡巨噬细胞的细胞毒作用。     

氨基胍对内毒素活化小鼠巨噬细胞L-arginine转运及CAT-2表达影响的实验研究

目的:通过氨基胍(AG)干预内毒素活化小鼠巨噬细胞RAW264.7模型,观察NO的产生、左旋精氨酸(L-Arg)转运以及碱性氨基酸转运体-2(CAT-2)mRNA的表达,旨在研究氨基胍对L-Arg跨膜转运及CAT-2表达的影响.方法:实验分为四组,即对照组,LPS对照组,AG组,AG+LPS组.接种RAW264.7细胞...     

Effects of Selemum on Expression of iNOS and eNOS Induced by Arsenic in HUECV-304

目的 研究适量硒对砷诱导的人脐静脉血管内皮细胞株(HUVEC-304细胞)诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和内皮型一氧化氮合酶( eNOS)表达的影响.方法 调整HUVEC-304细胞密度为1.0× l05/ml,分别加入终浓度为0.05、0.1、0.5、1.5、3.0、6.0、12.0 μmol/L三氧化二砷以及0.1 μmol/L亚硒酸钠+0.05、0.1、0.5、1.5、3.0、6.0、12.0 μmol/L三氧化二砷染毒48 h,并设立对照(正常培养液)组.检测培养液中iNOS和eNOS的活力,采用逆转录聚合酶连反应(RT-PCR)测定iNOS mRNA和eNOS mRNA的表达.结果 随着三氧化二砷染毒浓度的升高,HUVEC-304细胞培养物中eNOS的活力呈逐渐下降的趋势,而iNOS的活力呈逐渐上升的趋势.与对照组比较,1.5～12.0 μmol/L三氧化二砷染毒组HUVEC-304细胞培养物中iNOS mRNA的表达均较高,eNOS mRNA的表达均较低,差异均有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).与相应浓度三氧化二砷单独染毒组比较,0.05、0.1、1.5 μmol/L三氧化二砷+0.1 μmol/L亚硒酸钠联合染毒组HUVEC-304细胞培养物中的iNOS的活力及其mRNA的表达均较低,0.05、0.5、1.5 μmol/L三氧化二砷+0.1 μmol/L亚硒酸钠联合染毒组eNOS的活力及其mRNA的表达均较高,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 硒对砷诱导HUVEC-304细胞iNOS和eNOS的异常表达具有一定的抑制作用.     

L-精氨酸对脂多糖诱导免疫应激大鼠血清生化指标和肝脏的影响

目的探讨外源性精氨酸对动物机体在免疫应激状态下的保护作用。方法以腹腔注射大肠杆菌内毒素(LPS)的方式复制免疫应激动物模型。将SD大鼠32只随机分成4组:正常对照组;生理盐水配对组;免疫应激组(LPS组);L-精氨酸+LPS组(L-Arg+LPS组)。结果腹腔注射LPS 4mg/kg.bw,可以使大鼠产生免疫应激。L-Arg+LPS组大鼠血清中Arg浓度非常显著高于其余各组(P<0.01),与对照组相比,L-Arg+LPS组和LPS组血液中谷丙转氨酶(ALT)活性非常显著(P<0.01),L-Arg+LPS组和LPS组血清中总的一氧化氮合酶(T-NOS)活性显著增高(P<0.05),NO浓度和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)活性达到非常显著(P<0.01)。免疫组化显示:L-Arg+LPS组的大鼠肝组织内皮型一氧化氮合酶(eNOS)表达呈强阳性,其他组未见eNOS表达;而LPS组肝组织iNOS表达呈中度阳性,L-Arg+LPS组iNOS表达呈痕迹反应,对照组和配对组均无iNOS表达。L-Arg+LPS组和LPS组分别与对照组相比,肝细胞凋亡极显著增多(P<0.01),但L-Arg+LPS组细胞凋亡数显著低于LPS组(P<0.05),对照组和配对组之间差异不显著。结论对免疫应激大鼠添加精氨酸后,可抑制由iNOS催化生成NO而导致的肝脏组织炎症及肝细胞凋亡,缓减免疫应激对大鼠机体的损害作用。     

染料木黄酮对脂多糖诱导的RAW264.7细胞炎症因子、腺苷酸激活蛋白激酶磷酸化的影响

目的研究染料木黄酮(genistein,Gen)对脂多糖(LPS)诱导的巨噬细胞炎症因子产生和腺苷酸激活蛋白激酶(AMPK)磷酸化的影响。方法体外培养RAW 264.7小鼠单核巨噬细胞,加入1、5、10、50、100 mol/L的Gen共同培养,MTT法检测其对细胞活性的影响。将RAW264.7细胞随机分为4组:空白对照组不加任何药物,模型组加入终浓度为1 g/ml的LPS进行刺激,Gen高、低剂量组分别加入终浓度为10、5 mol/L的Gen预处理1h后,再加入终浓度为1 g/ml的LPS刺激,24h后收取细胞上清用酶联免疫(ELISA)方法检测TNF-α、IL-6含量,Westernblot检测AMPKα蛋白及其磷酸化的表达水平。结果 100 mol/L的Gen对体外培养RAW264.7细胞的增殖有影响,而其他浓度则无。LPS处理的RAW 264.7细胞与对照组比较,TNF-α、IL-6生成显著增多(P<0.01)、AMPKα磷酸化水平显著降低(P<0.01),而AMPKα总蛋白表达水平无差异(P>0.05)。Gen干预可减少LPS诱导的TNF-α、IL-6生成,上调AMPKα磷酸化水平的表达,与LPS组相比,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论 Gen能抑制LPS诱导巨噬细胞的炎症反应,减少TNF-α、IL-6生成,这可能与Gen促进AMPKα磷酸化,从而激活AMPKα有关。     

白藜芦醇对LPS刺激RAW264.7细胞炎症因子影响研究

[目的]观察白藜芦醇对脂多糖刺激小鼠RAW264.7细胞炎症因子的影响.[方法]体外培养小鼠RAW264.7细胞,脂多糖刺激小鼠RAW264.7细胞分泌细胞因子,用不同浓度白藜芦醇进行干预,ELISA法检测培养上清液中IL-10和PGE2含量.[结果]白藜芦醇可抑制脂多糖刺激小鼠RAW264.7细胞释放PGE2,促进抗炎因子IL-10表达,并呈一定量效关系,其影响细胞因子释放作用与细胞毒作用无关.[结论]自藜芦醇呈浓度依赖性地抑制脂多糖刺激小鼠RAW264.7细胞释放PGE2,促进IL-10表达.     

高温及内毒素复合因素对IL-1 βmRNA表达影响

目的 探讨高温和内毒素(LPS)复合因素对RAW 264.7细胞IL-1β mRNA表达的影响.方法 采用体外培养的巨噬细胞系RAW 264.7细胞,分为37,40℃对照组,37,40℃LPS组.用RT-PCR方法检测RAW 264.7细胞IL-1 βmRNA表达.结果 RAW264.7细胞在37和40℃加或不加LPS条件下随着时间的变化IL-1 βmRNA表达各不相同,在37℃条件下,LPS组随着时间的不断延长,IL-1 βmRNA表达不断增强;40 ℃条件下对照组IL-1βmRNA表达亦表现出不断增强,而LPS组IL-1 βmRNA表达表现为先增强后减弱.结论 高温和内毒素复合因素能够下调RAW 264.7细胞IL-1 βmRNA表达,考虑其原因与高温和内毒素复合因素诱导产生的热休克蛋白及该条件下RAW 264.7细胞的大量凋亡有关.     

硒对氟诱导人脐静脉血管内皮细胞iNOS和eNOS表达的影响

目的研究一定浓度的硒对氟诱导人脐静脉血管内皮细胞(ECV-304)内皮型一氧化氮合酶(eNOS)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的影响。方法体外培养人脐静脉血管内皮细胞株,加氟组培养液中分别加入400、1 000、2 000μmol/L的氟化钠;加氟加硒组培养液中分别加入400、1 000、2 000μmol/L的氟化钠,同时加入100 nmol/L的亚硒酸钠;对照组细胞在无血清培养液中培养;连续培养24 h,检测培养液中的iNOS、eNOS的活力;采用逆转录聚合酶连反应(RT-PCR)测定iNOS mRNA和eNOS mRNA的表达。结果与对照组比较,400、1 000、2 000μmol/L加氟组iNOS活力和iNOS mRNA的表达增强(P<0.01);而400、1 000、2 000μmol/L加氟组eNOS的活力和1 000、2 000μmol/L加氟组eNOSmRNA的表达降低(P<0.05,P<0.01);与相应剂量的加氟组(400、1 000μmol/L)比较,加硒加氟组iNOS活力和iNOS mRNA的表达降低(P<0.05),而eNOS的活力和eNOS mRNA的表达升高(P<0.05);而加硒加氟组(氟剂量:2 000μmol/L、硒剂量:100 nmol/L)的iNOS与eNOS的表达与相应剂量的加氟组(2 000μmol/L)比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论硒对氟诱导人脐静脉血管内皮细胞iNOS和eNOS表达产生影响,但是对高剂量氟组作用不强。     

叶黄素对D-半乳糖致氧化损伤小鼠HO-1、TLR4表达的影响

目的研究叶黄素缓解D-半乳糖诱导小鼠氧化应激损伤的作用机制。方法 48只昆明种小鼠随机分为D-半乳糖模型对照组、叶黄素低剂量组(10mg/kg·d)、叶黄素高剂量组(40mg/kg·d)和正常对照组。6周后观察小鼠肝组织活性氧(ROS)、一氧化氮(NO)含量,总一氧化氮合酶(TNOS)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和线粒体ATP酶(ATPase)活性,RT-PCR法检测血红素氧合酶(HO-1)和toll样受体4(TLR4)mRNA表达水平。结果叶黄素低、高剂量组小鼠肝组织ROS含量低于模型对照组(P0.01);低、高剂量组线粒体Na+-K+-ATP酶及高剂量组线粒体Ca2+-ATP酶活性高于模型对照组(P0.05);高剂量组TNOS、iNOS活性及NO含量低于模型对照组(P0.05);高剂量组小鼠肝HO-1mRNA表达高于模型对照组(P0.05),叶黄素低、高剂量组TLR4mRNA表达均低于模型对照组(P0.01)。结论叶黄素降低D-半乳糖小鼠氧化应激效应可能与其提高HO-1表达和下调TLR4mRNA表达有关。     

硒对砷诱导人脐静脉血管内皮细胞诱导型一氧化氮合酶和内皮型一氧化氮合酶表达的影响

目的研究适量硒对砷诱导的人脐静脉血管内皮细胞株(HUVEC-304细胞)诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和内皮型一氧化氮合酶(eNOS)表达的影响。方法调整HUVEC-304细胞密度为1.0×105/ml,分别加入终浓度为0.05、0.1、0.5、1.5、3.0、6.0、12.0μmol/L三氧化二砷以及0.1μmol/L亚硒酸钠+0.05、0.1、0.5、1.5、3.0、6.0、12.0μmol/L三氧化二砷染毒48 h,并设立对照(正常培养液)组。检测培养液中iNOS和eNOS的活力,采用逆转录聚合酶连反应(RT-PCR)测定iNOS mRNA和eNOS mRNA的表达。结果随着三氧化二砷染毒浓度的升高,HUVEC-304细胞培养物中eNOS的活力呈逐渐下降的趋势,而iNOS的活力呈逐渐上升的趋势。与对照组比较,1.5～12.0μmol/L三氧化二砷染毒组HUVEC-304细胞培养物中iNOS mRNA的表达均较高,eNOS mRNA的表达均较低,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。与相应浓度三氧化二砷单独染毒组比较,0.05、0.1、1.5μmol/L三氧化二砷+0.1μmol/L亚硒酸钠联合染毒组HUVEC-304细胞培养物中的iNOS的活力及其mRNA的表达均较低,0.05、0.5、1.5μmol/L三氧化二砷+0.1μmol/L亚硒酸钠联合染毒组eNOS的活力及其mRNA的表达均较高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论硒对砷诱导HUVEC-304细胞iNOS和eNOS的异常表达具有一定的抑制作用。     

介孔二氧化硅对人脐静脉血管内皮细胞血管保护因子和细胞黏附因子表达的影响

目的研究介孔二氧化硅(SBA-15)对人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)的一氧化氮(NO)、细胞黏附因子-1(ICAM-1)和血管细胞黏附因子-1(VCAM-1)表达的影响。方法分别将HUVEC细胞暴露于含有终浓度为0(溶剂对照)、25、50、100、200μg/ml的SBA-15培养基中培养24 h。采用硝酸盐还原酶法测定细胞上清液中NO含量,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术和蛋白印迹(Western Blot)技术分别测定ICAM-1、VCAM-1mRNA和蛋白表达水平。结果与溶剂对照组相比,SBA-15染毒HUVEC的上清液中NO含量和细胞内ICAM-1、VCAM-1mRNA及蛋白的表达水平均较高,差异有统计学意义(P0.05);且随着SBA-15染毒浓度的升高,HUVEC的上清液中NO含量和细胞内ICAM-1、VCAM-1 mRNA及蛋白的表达水平均呈上升趋势。结论 SBA-15可能通过诱导HUVEC的NO、ICAM-1、VCAM-1高表达而对心血管系统产生影响。     

三氯乙烯对人角质形成细胞一氧化氮和一氧化氮合酶的影响

目的研究三氯乙烯(TCE)对体外培养的人角质形成细胞(KC)一氧化氮(NO)合成和一氧化氮合酶(NOS)表达及活力的影响,探讨TCE的皮肤细胞毒性机制。方法无血清培养的正常人KC与0.125、0.25、0.5、1.0、2.0mmol/L的TCE共培养4h,分别于染毒后12、24、48、72h测定培养液中NO含量和NOS活力,分析其时间—剂量—效应关系,并用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测诱导型NOS(iNOS)mRNA的表达情况。结果低剂量组(0.125和0.25mmol/L)NO含量与iNOS活力在染毒后各时点与对照组相比均无差异;0.5mmol/L组NO含量与iNOS活力均在染毒后48h开始升高,分别为(32.19±4.75)μmol/L[对照组:(23.70±3.11)μmol/L,P<0.05]和(1.15±0.02)×103U/L[对照组:(0.77±0.06)×103U/L,P<0.05],随着染毒浓度的升高,0.5～2.0mmol/L组NO量与iNOS活力呈上升趋势,而且上升出现的时间提前,1.0和2.0mmol/L组分别于染毒后24和12h出现升高;NO释放的增加总是与iNOS活力升高一致,而结构型NOS(cNOS)活力在各剂量组的各时点均无变化;RT-PCR结果显示TCE可以诱导iNOSmRNA转录水平增高。结论TCE可以诱导人角质形成细胞NO合成增加,大量产生的NO与iNOS基因的上调有关,这一机制可能参与了TCE的皮肤细胞毒性。