中国河北地区汉族人群 HLA －E基因多态性分析

目的：通过调查中国河北地区汉族人群人类白细胞抗原－E（ HLA－E）等位基因多态性分布情况,为探讨HLA－E基因多态性与疾病的关联奠定基础。方法 HLA－E等位基因多态性分析采用聚合酶链反应－序列特异性引物（ PCR－SSP）方法,调查285例中国河北地区汉族正常人群。结果 HLA－E的2个等位基因在这一人群中检测到,分别是HLA－E倡0101和HLA－E倡0103,分布频率分别是41.05％和58.95％。而HLA－E倡0104等位基因未检测到。结论中国河北地区汉族人群中共有2个HLA－E等位基因分布,分别为HLA－E倡0101和HLA－E倡0103,其分布频率相近,分别是41.05％和58.95％。     

云南彝族和汉族人群HLA—DQA1等位基因多态性研究

目的分析云南彝族和汉族人群中HLA—DQA1位点等位基因多态性。方法采用聚合酶链反应一序列特异性引物（PCR—SSP）技术,对云南楚雄地区82例彝族和昆明地区68例汉族健康个体进行HLA—DQA1基因分型,并将所得结果同国内其他民族资料进行对比分析。结果云南彝族、汉族HLA—DQA1等位基因分布具有共同点也有其各自的独特性,统计学分析显示HLA—DQA1＊0601、＊0401等位基因分布频率差异有统计学意义。湖南汉族、青海土族等其他人群HLA—DQA1等位基因分布,与云南汉族、彝族间存在差异。结论HLA—DQA1位点基因分布有民族和地域差异性,本研究可为人类学及疾病相关性研究提供了基础数据。     

HLA—Ⅱ血清学分型与微量SSP法基因分型的比较分析

目的 验证微量序列特异性引物（SSP）技术进行HLA－Ⅱ类移植配型的准确性并探讨血清学分型错误发生的原因。方法 采用聚合酶链反应结合微量SSP技术（简称微量PCR－SSP法）以及单克隆抗体血清学分型技术对血清样品进行HLA分型并比较其结果。结果 （1）微量PCR－SSP法检测的110例样本中，99例检出HLA－DR的396个等位基因、11例检出HLA－DQ的22个等位基因，检出10％的单倍型个体；（2）两种方法对比研究发现单克隆抗体血清学分型检出错误和漏检率较高，其误差在DR和DQ分别为38．81％和50．75％；（3）错误发生和易混淆的抗原为：DR15／16、11／12、13／14、8、12和DQ5／6、8／9。结论 微量SSP法可以准确检定血清学易漏检和发生错误的抗原等位基因。     

PCR—SSP检测HLA—B27基因的方法及临床意义

目的：建立快捷、特异的PCR－SSP检测HLA－B27基因的方法。方法：以钾缓冲液提取50－200μl外周血中的DNA，设计序列特异性的HLA－B27引物进行PCR扩增检测HLA－B27基因，结果与淋巴细胞毒方法（MLCT）相对比。结果：所设计引物可扩增出目的基因片段，钾缓冲液提取DNA可满足PCR要求，全部检测过程可在6h内完成。在225例门诊和住院患者中，HLA－B27阳性率在PCR方法和MLCT方法分别为77．3％和68．0％，两者的一致率为83．6％，在88例肯定的脊柱关节病（SpAs)住院患者中，HLA－B27阳性率在PCR方法为92．1％，在MLCT方法为81．8％，两者的一致率为89．8％。结论：PCR方法检测HLA－B27较MLCT方法敏感，特异和快捷，标本用量少、采集和保存方便，便于大量样本的临床和流行病学研究。     

脐血HLA—I类抗原PCR—SSP分型的研究

目的 探讨PCR－SSP（聚合酶链反应－序列特异性引物）分型方法在脐血HLA－I类抗原分型中的应用价值。方法 53例脐血用免疫磁珠分离T淋巴细胞，单克隆抗体配型板作血清学分型，其中38例脐血用DNA快速抽提技术提取DNA后进行PCR－SSP基因分型，对两种方法分型结果进行对比研究。结果 38例脐血中，HLA－A位点PCR－SSP方法与血清学分型方法结果符合率100％，HLA－B位点血清学方法分型误差率为13．2％，其中1个抗原错误（占1．3％），9个抗原漏检（占11．8％）。脐血采集后24小时内作血清学分型较理想，超过24小时则半数以上不能进行血清学分型。抽提脐血DNA一次成功率100％，不受时间限制。结论 在脐血HLA－I类抗原分型中，PCR－SSP方法准确、省血、标本限制少，明显优于血清学方法，适用于脐血库。     

106例广东汉族群体HLA基因频率的分析及其意义

目的 探讨广东汉族群体HLA抗原多态性分布的情况。方法 随机选择了106例广东籍汉族人进行HLA分型。分别采用微量淋巴细胞毒试验及PCR－SSP方法检测了HLAⅠ类,A,B位点及HLAⅡ类DR位点。结果 共检出了HLA－A位点抗原10种,HLA－B位点抗原21种,HLA－DR位点抗原13种,并与北方人群抗原分布进行对比。结论 A11,B46和B60抗原频率比北方人群有显著增高,而A1,A3、B7等抗原则相对减少,显示广东地区汉族人群与北方人群间在HLA多态性分布上有较显著的差异。     

HLA-DRB1基因多态性与儿童急性淋巴细胞白血病易感性的关联

目的 探讨儿童急性淋巴细胞白血病（儿童－ALL）易感笥与HLA－DRB1基因多态性的关联性，找出儿童急性淋巴细胞白血病的易感基因。方法 采用序列特异性引物聚合酶链反应（PCR－SSP）DNA分型技术对30例儿童－ALL患者及53便健康对照进行了HLA－DRB1基因分型。结果 儿童－ALL患者与HLA－DRB1＊15基因关联，基因频率为25．0％，RR＝3．08，x^2＝5．56，P＜0．025。其他等位基因频率与对照组之间无显著性差异。结论 提示在华北汉族人群中，HLA－DRB1＊15与儿童急性淋巴细胞白血病有关联。     

PCR—RSSO基础上HLA—I、Ⅱ基因分型的研究

目的：通过对PCR－DNA技术的分析，探讨人类白细胞抗原（HLA）基因分型方法。方法：采用PCR反向序列特异性寡核苷酸（polymerase chain reaction-reverse sequence specific oligonucleotide,PCR-RSSO)杂交技术，建立改良半量扩增体系全自动HLA－I、Ⅱ等位基因分型方法，进行了635份血液标本HLA－A、B、C、DR、DQ等位基因分型，其中166份DNA同时采用序列特异性引物技术（PCR－SSP）和手工全量扩增体系PCR－RSSO技术。对全自动半量PCR－RSSO、PCR－SSP、手工PCR－RSSO 3种方法做两两比较。结果；全自动半量PCR－RSSO的分型成功率为98．4％（3124／3175），PCR－SSP为98．8％（656／664），手工PCR－RSSO为88．3％（733／830）。经χ^2检验，全自动半量PCR－RSSO与PCR－SSP的分型成功率无统计学差异，与手工PCR－RSSO有显著差异（P＜0．05）。结论：PCR－RSSO可识别HLA－I、Ⅱ共706个等位基因，覆盖WHO命名委员会2000年公布的36个等位基因的75．43％；对706个HLA等位基因的分型均为中－高分辨率，有分辨纯合子等位基因的能力；易长期保存书面的实验原始资料，即杂交条；具有成本低、劳动强度低、省时和DNA消耗量少等优点。PCR－RSSO适合于造血干细胞移植和建立造血干细胞及脐带血干细胞库的组织配型。     

山西汉族类风湿关节炎与HLA-DPB1基因相关性研究初探

目的：探讨山西汉族类风湿关节炎（RA）与HLA—DPB1基因相关性。方法：用聚合酶链反应-序列特异性引物（PCR—SSP）方法检测36例RA患者和36例健康人的HLA—DPB1基因型。结果：RA患者HIA—DPB1＊2201等位基因的频率显著高于正常对照组。结论：HLA—DPB1＊2201可能是山西汉族类风湿关节炎的易感基因。     

HLA-II 类抗原基因分型PCR-SSP方法在ALLo-HSCT中的应用

准确的HLA配型是异基因造血干细胞移植（Allo－HSCT）成功的关键之一，经典的血清学方法用于HLA－Ⅱ类抗原的配型因存在诸多不足导致漏配或错配，为了克服血清学方法的种种不足，我们建立了HLA－Ⅱ类聚合酶链反应－序列特异性引物（PCR－SSP）基因配型方法，此方法可避开血清学方法的种种干扰，直接从基因水平检测HLA的个体遗传学差异，结果表明：PCR－SSP方法具有重复性好、特异性强、灵敏度高、实验结果易于判断等特点，对于Allo－HSCT选择理想供者，减少或减轻Allo-HSCT时GVHD的发生，有着至关重要的意义。可满足Allo-HSCT对HLA配型准确性高的要求，为在同胞兄弟姐妹间和无血缘关系供－受者之间选择理想供者提供了重要保证。     

PCR-SSP技术检测HLA-DR抗原基因型及其临床应用

目的：用PC－SSP技术检测HLA－DR抗原基因型，并探讨其在临床上的应用价值。方法：根据已公布HLA－DR位点的核苷酸序列，参照Olerup的引物序列合成SSP引物。对临床血液病患者及其亲属共27人，其中包括4个两代家系进行配型分析。结果：所有样本都能成功分型，重复率100％，没有假阳性和假阴性,4两代家系分析符合孟德遗传规律，DNA的提取，PCR扩增及扩增后的处理过程，包括凝胶制备，电泳，结果分析在4h内完成，同时应用降落（TD）PCR的方法对本实验进行优化。结论：PCR－SSP方法具有准确性，重复性好，结果易于判定，耗时少等优点。     

山东地区MG易感性与HLA—DQB1基因多态性的相关性研究

目的 探讨中国北方汉人HLA－DQB1基因和重症肌无力的遗传易性感笥的相关性。方法 运用PCR－SSP基因分型方法,对53例MG患者及50例健康对照组HLA－DQB1基因进行分型,并对患者组和健康对照组的DQB1各等位基因频率进行比较。结果 DQB1＊0303的频率在患者组中明显升高,差异具有显著性意义。结论 DQB1＊0303参与北方汉人MG的易感性。     

汉族人群肺结核患者白介素-4基因多态性的研究

目的探讨白介素-4（IL-4）基因启动子区-590C/T位点单核苷酸多态性（SNP）与肺结核病的关系。方法采用序列特异性引物PCR（PCR—SSP）22．测序技术检测深圳地区汉族人群肺结核患者194例及健康对照者195例IL-4启动子-590C/T位点基因多态性。采用直接计数法计算各组基因型频率及等位基因频率,并进行）（2检验。以P〈0．05为具有统计学意义。结果两组人群IL-4启动子区-590C/T位点基因型及等位基因分布频率无明显差异（P〉0．05）。结论IL-4基因启动子区-590C／T位点基因多态性与中国汉族人群肺结核病易感性无关。     

HLA—DQ等位基因对国人Graes‘病易感性的影响

目的：探讨等位基因HLA－DQA1及DQB1在国人Graves‘病（gravs‘ disease,GD）发病中的作用。方法：选择汉族GD患者103例及正常人100例。采用PCR－SSP方法,检验HLA－DQA1＊051,DQB1＊0201及DQB1＊0303的出现频率。结果：HLA－DQA1＊0501及DQB1 0201GD组均低于对照组（分别P－0．002,RR＝0．38及P＝0．001,RR＝0．27）,DQB1＊0303GD组与对照组之间无差异（P＝0．189RR＝0．64）,研究提示DQA1＊0501,DQB1＊020为中国汉族人群GD的保护因素,以上3种基因在不同性别GD患者之间未见差异,结论：HLA－DQ与国人GD的发病有关。GD患者DQA1＊0501及DQB1＊0201出现频率减少。     

序列特异性PCR在HLA-DRB1基因分型中的应用

参照HLAⅡ型基因序列设计8条序列特异性引物，应用分别代表HLA－DR1－18血清学特异性的11株DNA标准品建立序列特异性PCR（PCR-SSP）和套式PCR方法，并对64例IDDM病人和72例健康对照者进行HLA－DRB1基因分型。结果：（1）方法学鉴定示各序列特异性引物均能从11株DNA标准品中扩增出相应的等位基因，并能检出来合子。除HLA－DR3组特异引物对DR1发生交叉外，其余序列特异性引物扩增中均未出现交叉现象，且重复性好；（2）样本测定显示IDDM组与对照组HLA－DR1、DR2、DR4、DR7、DR8和DR10各等位基因频率无显著差异。结果表明，PCR-SSP不仅具有较好的敏感性、特异性和重复性，而且显得简便、快速经济，有较好的应用前景。     

湖南汉族群体HLA-DQA1位点等位基因多态性分析

目的 :分析湖南汉族群体HLA DQA1位点等位基因多态性。方法 :应用PCR/SSP和银染PCR/SSCP技术对 60名无血缘关系湖南汉族健康个体作HLA DQA1基因分型。结果 :检出 1 0种HLA DQA1等位基因 ,基因频率范围为 0 .0 1 67～ 0 .2 2 54 ;HLA DQA1 0 30 2 , 0 50 1 , 0 1 0 2为常见等位基因 ,HLA DQA1 0 1 0 1 , 0 2 0 1 , 0 4 0 1为少见等位基因。检出 2 6种基因型 ,基因型观察值和理论值分布符合Hardy Weinberg平衡 (P >0 .0 5)。 5例样本的PCR/SSP分型只能确定一个等位基因 ,另一等位基因经PCR/SSCP确认。结论 :提供了湖南汉族群体HLA DQA1位点等位基因频率正常值     

醛糖还原酶基因5‘端微卫生多态性在中国汉族人群中的分布特点

目的：了解醛糖还原酶（ＡＲ）基因５’端微卫星多态性在中国北方汉族人群中的分布特点及其在不同种族分布的差异。方法：通过同位素放射自显影方法对１１７例正常中国北方汉族ＡＲ基因５’端微卫星多态性进行检测，并结合文献对不同种族间该基因位点多态性进行比较分析。结果：中国北方汉族人群中存在９个等位基因，２３种基因型，各等位基础出现频率与香港中国人群无差异，但Ｚ等位基因频率与英国白人间存在明显差异，Ｚ／Ｚ纯合子     

中国汉族人及维吾尔族人Rh血型基因结构多态性研究与分析

目的：研究中国汉族及维吾尔族家系的RHD基因结构，方法：采用聚合酶链反应－序列特异性引物扩增（PCR－SSP）方法，对汉族和维族Rh阴性家系的D基因结构多态性进行研究。结果：中国人RHD基因结构具有多态性，性别是带有C的个体；82例RHD血清学阴性个体中，完整携带十个外显子的有14个样本，部分携带的有6个样本，8个样本为完全缺失。结论：中国汉族人群与高加索人种有着显著的不同，且插入片段和RH Box在中国人D基因的表达上并不具有确定的意义。     

MicroSSP法用于器官移植病人HLA—DR／DQB1等位基因分型的研究

目的：通过快速、准确的微量序列特异性引物聚合酶链法对器官移植病人HLA－DR／DQB1等位基因分型。方法：MicroSSP法^[1]是在PCR－SSP法的基础上建立起来的。可用于低或高分辨的HLA分型；此法有理想的引物和布局；引物和对照物事先包被在干板上；应用微量SSP凝胶系统电泳仅用2－4分钟；配有视窗系统分析软件，确保了分析结果的准确性。结果：选择了76例肝、肾移植病人进行HLA－DR／DQB1分型，共检出14种DRB1、7种DQB1等位基因。频率最高的为DRB1＊1501－1502、DRB1＊1401、1404、1405、DRB1＊0701－0702、DRB1＊1201、1202。DQB1＊05、DQB1＊06、DQB1＊07。符合东方人基因频率的分布。分型全部成功。结论：MicroSSP法具有快速（整个实验仅用2小时）、需血量少、分辨率高、方法稳定、结果判断准确等优点。特别适用于尸体器官的供体配型。     

广东汉族人群HLA-Cw基因座的等位基因多态性分析

目的调查广东汉族人群人类白细胞抗原（HLA）-Cw基因座的等位基因分布,并比较分析中国人群HLA-Cw基因的分布特征。方法采用结合聚合酶链式反应（PCR）-测序分型（sequence based typing,SBT）方法对160例广东汉族骨髓供者的HLA-Cw基因的第2,3外显子进行序列分析。结果广东汉族群体中共检出20种HLA-Cw等位基因,频率分布为0．0031～0．2094,其中Cw＊070201（0．2063）、Cw＊0102（0．1937）、Cw＊0304（0．1563）、Cw＊0302（0．0906）和Cw＊080101（0．0781）比较常见。70检验表明其基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡定律。结论建立广东汉族人群HLA-Cw基因座的等位基因频率数据库,为法医学、人类学、医学研究和应用提供重要的群体遗传学资料;同时发现HLA-Cw等位基因在中国人群中呈现规律性分布。