菟丝子rDNA ITS序列的测定及分析

目的研究菟丝子rDNA-ITS序列特征。方法分别采用PCR产物直接测序法和克隆测序法,对菟丝子属7个种rDNA的ITS区(包括ITS-1,5.8S rDNA和ITS-2)进行序列测定。结果菟丝子属植物ITS序列总长度约为612 bp,GC含量分别为:ITS-1区53%~63%,5.8S rDNA 48%~55%,ITS-2区46%~56%;苜蓿菟丝子种内的3个地理种发现了3个变异位点。用NJ法构建系统发育树显示:含日本菟丝子Cuscuta.japonica的分支处于系统树靠近基部位置,与之亲缘关系较近的依次为中国菟丝子C.chinensis和杯花菟丝子C.cupulata;余下5个种的分支中田野菟丝子C.campestris和五角菟丝子C.pentagona合为一支,南方菟丝子C.australis和苜蓿菟丝子C.approximata合为一支。结论NJ法建立的发育树与形态学分类基本相符,为菟丝子属植物分类鉴定提供了重要的分子依据。     

太子参脱病毒苗的核糖体ITS序列研究

目的研究太子参脱病毒苗与外界苗rDNAITS区碱基序列的异同。方法运用PCR直接测序法对9种太子参脱病毒苗和4种外界苗的rDNAITS区（包括ITS1、5．8S、ITS2）碱基序列进行了序列测定。结果太子参脱病毒苗与外界苗的5．8S碱基序列完全一致，变异位点基本上位于ITS1的起始端与ITS2的终止端，其中江苏溧阳和安徽宣城的脱病毒苗变异位点较多。使用UPGMA法构建了系统发生树，从分子生物学角度说明了它们之间的内在联系。结论rDNAITS碱基序列的比较分析从分子水平上进一步阐明了脱病毒苗的遗传稳定性。     

石豆兰属植物rDNA ITS序列的克隆与分析

目的 通过测定11种石豆兰属植物的ITS序列,为石豆兰属植物分子鉴定和遗传多样性研究提供依据。方法 利用PCR法从叶片基因组DNA中克隆ITS序列,并借助生物信息学软件对其进行分析。结果 11种石豆兰属植物的ITS全长为633～645 bp,5.8 S序列长度162 bp,ITS1和ITS2序列变异位点丰富,共168个,其中信息位点95个,序列存在大量的转换、颠换和缺失;5.8 S序列较为保守,仅含6个变异位点和2个信息位点;11种石豆兰属植物的遗传距离为0.002 2～0.212 0,其中齿瓣石豆兰与斑唇石豆兰之间的遗传距离最小,亲缘关系最为接近。序列已上传至NCBI,登录号为JN619409～JN619419。结论 获得了11种石豆兰属植物的rDNA ITS序列,为石豆兰属植物分子鉴定和遗传多样性研究奠定了基础。     

苏皖产大戟属药用植物rDNA的ITS序列分析

目的研究苏皖产大戟属内6种药用植物的ITS长度的变异,为探讨大戟属植物的系统演化关系和大戟属植物鉴定提供DNA分子证据。方法利用PCR技术对大戟属植物的rDNAITS区碱基序列进行测定。结果这6种大戟属植物的ITS1的长度范围为255~262bp,ITS2的长度范围为214~236bp。运用Mega2软件进行的系统分析得到大戟属内6种植物的系统进化树。这一分析结果与来自形态学的研究结果相吻合。结论此法可用于大戟属植物种间及真伪品鉴别。     

丹参及鼠尾草属植物的rDNA ITS序列分析

目的研究丹参ITS片段遗传多样性,分析该片段在丹参药材DNA分子鉴别和鼠尾草属植物系统学研究中的意义。方法用一对引物进行PCR扩增,扩增产物纯化后用双脱氧终止法测序。结果获得核糖体DNA中ITS和5.8SrDNA完整序列,13个鼠尾草属植物ITS1与ITS2序列的长度分别为222～224bp、220～223bp。鼠尾草属植物种间ITS1序列差异百分率为0～12.16%,ITS2序列的差异百分率为0.5%～13.51%;丹参种内ITS1序列的差异百分率为0～0.9%,ITS2序列的差异百分率为0～0.5%;鼠尾草属各类群与外类群的差异百分率ITS1序列为16.07%～20.27%,ITS2序列为15.91%～20.27%。用邻接法(NJ)根据ITS1与ITS2序列数据建立系统发生树。结论两段序列在丹参种内保守,在属间有较大的差异,与外类群的差异最大,可作为中药丹参分子鉴定的标记,而鼠尾草属植物的系统发生关系尚须进一步研究。     

蛲虫核糖体DNA ITS1的PCR扩增及序列分析

目的 扩增人蛲虫（Enterobius vermicularis）核糖体DNA的第一内转录间隔区（ITS1）。方法提取人蛲虫的基因组DNA，PCR扩增rDNA的ITS1及部分5．8S片段，对该片段进行PCR—SSCP分析并测序。结果扩增的片段大小为334bp，包含Enterobius vermicularis全部的ITS-1（303bp）及部分5．8S（31bp）序列，ITS1种内序列一致。结论首次报道人蛲虫的ITS1序列，将为以ITS1作为遗传标记用于蛲虫鉴别诊断、系统发育等研究奠定基础。     

阳春砂的ITS序列分析

目的：用ITS全序列鉴别各地产阳春砂及常见伪品。方法：从各地产阳春砂及常见伪品绿壳砂和海南砂中提取总DNA，以核基因组通用引物ITS为引物进行扩增，扩增产物经纯化后，用PCR产物直接法进行测序。结果：各样品的ITS序列总长度均为626bp，其中ITS－1序列长度为248bp,5.8S序列长度为155bp，ITS－2序列长度为223bp；6个阳春砂和绿壳砂的ITS－2序列完全一致，各样品的5．8S序列完全一致，在ITS-1可各样品却有不同的碱基位点。结论：ITS－1序列可对阳春砂的道地性作出鉴别，明显区分其伪品。     

绵枣儿核核糖体DNA ITS序列扩增的研究

采用通用引物扩增绵枣儿核核糖体DNA ITS序列,未得到目的条带.根据引物设计原则自行设计12个引物,其中只有使用引物对PA3、D(ITS3),PA4、D(ITS3),PA4、DO2扩增得到绵枣儿核核糖体DNA ITS序列.     

不同种质来源孩儿参的rDNA ITS区序列分析及鉴别

目的 通过分析不同种质来源孩儿参ITS序列,为孩儿参种内鉴别提供DNA分子标记。方法 利用特异性引物进行PCR扩增、克隆和测序,对孩儿参的rDNA ITS区间碱基序列进行测定,比较其差异。结果 参试的9个不同种质来源孩儿参的整个ITS长度变异为623～624 bp;其中ITS1为224 bp,G＋C量为52.91%～54.26%;5.8 SrDNA为155 bp,G＋C量为54.49%～55.13%;ITS2为244～245 bp,G＋C量为55.55%～56.41%。整个ITS区共有17个变异位点（2.72%）,ITS1、ITS2和5.8S的变异位点分别为7、7和3个,不同种质来源孩儿参均有若干个特异性的单核苷酸变异位点;各样品的序列同源性均在99.9%以上;序列间的遗传距离为0.003～0.013。显示了不同产地、不同种质孩儿参的变异是不超过1个种的范围内的变异。结论 可利用ITS区序列差异,鉴别不同种质来源的孩儿参。     

绒山羊和绵羊源东毕吸虫ITS rDNA的PCR扩增及序列分析

目的扩增绒山羊和绵羊源东毕吸虫的ITS rDNA序列并进行分析比较。方法运用PCR方法,以保守引物BD1和BD2扩增从黑龙江绒山羊和绵羊体内分离的东毕吸虫（Oriemobilharzia spp．）rDNA的内转录间隔区（ITS-1及ITS-2）。PCR产物经测序后进行序列分析。结果黑龙江绒山羊和绵羊东毕吸虫的ITS序列总长均为875bp,其中ITS-1序列长为384Up,5．8S序列长为159Up,ITS-2序列长为332Up。黑龙江绒山羊和绵羊东毕吸虫的ITS序列相似性为99．9％,只有一个碱基差异,存在于ITS-2序列中。结论本研究在国际上首次报道了绒山羊和绵羊东毕吸虫的ITS序列,证实绒山羊和绵羊源东毕吸虫代表同一个种。这些结果为东毕吸虫分子生物学的进一步研究奠定了基础,并为寄生虫分子系统学研究提供了新资料。     

玫瑰花与月季花的比较鉴别

[目的]考察目前市场上玫瑰花和月季花的品种来源,了解质量优劣,为中医临床处方用药提供依据。[方法]通过收集,对目前临床使用的玫瑰花和月季花进行性状、显微及理化鉴别。[结果]两者在药材性状、显微特征上有显著差异。[结论]通过上述方法可以简便的将玫瑰花和月季花区分开来。     

玫瑰花与月季花的性状鉴别及GC-MS分析

目的 比较玫瑰花与月季花的性状及主要化学成分.方法 采用性状鉴别法区分玫瑰花与月季花及GC-MS方法对两者挥发油成分进行分析,并通过峰面积归一法计算各成分的相对百分含量.结果 两者在药材性状、挥发性成分方面有显著差异.其中玫瑰花鉴定出46种化合物,异戊酸香茅酯含量高达31.08％.月季花鉴定出26种化合物,二十九碳烷和8-己基-十五烷含量较高,分别为26.83％和26.51％.结论 性状鉴别及GC-MS方法可以准确地区分鉴别玫瑰花与月季花.     

玫瑰花和月季花中槲皮苷含量的HPLC法测定

[目的]测定中药玫瑰花和月季花中槲皮苷的含量。[方法]采用反相高效液相色谱法，以Hypersil GOLD（5μm250×4．60mm）分析柱，乙晴：水（加磷酸调pH至2．6）（玫瑰花为20：80，月季花为16：84）为流动相，流速：0·8ml·min^-1；检测波长为254nm，柱温30℃。[结果]槲皮苷浓度在（0．005-0．200）μg范围内与色谱峰面积呈良好的线性关系，r=0.9998。[结论]该方法简易准确，重现性好，在本色谱条件及样品处理方法下，可以准确测出玫瑰花和月季花中槲皮苷的含量。     

湛江南药场引种檀香rDNAITS序列系统发育分析

目的研究广东湛江南药场引种檀香与檀香科内植物rDNA ITS序列系统发育的关系。方法采用改良CTAB法提取檀香总DNA,分别对样品rDNA ITS区进行PCR扩增和测序,通过rDNA ITS序列进行分类鉴定及系统发育分析。结果 11个样品rDNA ITS序列间的遗传距离为0.000%-0.144%,邻接法和最大简约法构建的系统发育树显示国内引种自印度和印度尼西亚的檀香与印度檀香聚为一亚支（支持率为84%和95%）。结论基于rDNA ITS序列的测序分析和构建系统发育树的分子生物学方法,可为檀香药材的种类鉴定提供科学依据。     

原子吸收光谱法测定中药玫瑰花中的微量元素

目的:建立测定中药玫瑰花中的Ca、Fe、Zn 3种微量元素含量的方法。方法:利用干灰化法处理样品,采用火焰原子吸收光谱法测定玫瑰花中Ca、Fe、Zn 3种元素的含量。结果:玫瑰花中Ca含量为3 096μg/g,Fe为67.06μg/g,Zn为87.82μg/g;各元素回收率在98.32%～101.20%之间,RSD≤3.1%。结论:该方法简便、准确、重复性好,可用于玫瑰花中微量元素的测定。     

深圳市白纹伊蚊rDNA ITS2区克隆及SNP分析

目的 克隆和序列分析深圳市白纹伊蚊核糖体DNA（rDNA）第2内转录间隔区（ITS2），并探明其rDNA ITS2核酸的特异性及不同个体在rDNA ITS2区的单核甘酸的多态性（sinde Nuclear Polymorphism。SNP），以便利用ITS2基因的高度保守I匿及其蚊媒不种群在ITS2片段的多态性束分子鉴别白纹伊蚊。方法 PCR特异扩增白纹伊蚊rDNA ITS2，利用QIAquick技术从琼脂糖胶上回收纯化扩增的目的ITS2DNA片段，纯化后的目的ITS2DNA片段被连接到TA载体上，在含有青霉素的琼脂糖胶平面上筛选舍目的ITS2DNA片段的阳性克隆，阳性克隆经含有青霉素的LB液体培养基培养，用Ultrapure^TM质粒提取试剂盘提取克隆质粒，用双酶切鉴定插入的片段大小，DNA序列分析仪分析每个蚊rDNArrs2的序列，用生物信息系统进行白纹伊蚊rDNAITS2SNP的差异分析。结果 518bp全长的深圳市白纹伊蚊rDNAITS2被克隆和序列分析．深圳市四个不同地理的白蚊伊蚊rDNAITS2的同一性为97％，而两个地方之间的比较有99％的同一性，其rDNAITS2基因单核苷酸存在转换、颠换和缺失，在518bp的范围内有6个C→T，2个A→G的转换，3A→Ts一个A→C的颠换。3个CG和一个AC缺失。结论 白蚊伊蚊rDN AITS2有高度的保守性，不同个体也表现了单核苷酸的多态性。     

药用植物种质资源ITS序列研究进展

ITS(internal transcribed spacer)序列分析已成为近年来国际上植物多样性研究的热点，并在药用植物种质资源研究中得到广泛的应用。但由于相关研究成果众多，一定程度上也阻碍了该方面的科研工作。针对这种情况，对ITS序列分析的优缺点、技术流程、数据分析方法及其在药用植物品种鉴定、分类、亲缘关系确定、遗传多样性分析等方面的应用情况进行详细的综述，同时对其未来的发展前景进行了展望，以期能使国内药用植物学工作者对此有更多的了解和认识。     

眼蚤属（Ophthalmopsylla）两蚤种的rDNA ITS2序列研究

目的：研究伏河眼蚤异常亚种Ophthalmopsylla volgensis extrema（Ioffet Scalon,1953）和长突眼蚤Oph-thalmopsylla kiritschenkoi（Wagner,1930）rDNA ITS2序列,为蚤类分子系统发育的研究提供基础资料。方法：PCR扩增两蚤种rDNA ITS2片段并测序,比较两者差异。结果：伏河眼蚤异常亚种rDNA ITS2序列长372 bp,长突眼蚤长380 bp;两蚤种间共有30处碱基不同,包括16处缺失/插入、4处转换、10处颠换,种内无差异。结论：rDNA ITS2序列可用作两蚤种鉴别的分子标记。