银杏内酯对体外培养的大鼠胚基底前脑神经元凋亡的影响

目的 :探讨银杏内酯对体外培养的鼠胚基底前脑神经元凋亡的影响。方法 :实验分成银杏组、NGF组和单纯对照组。取 E17d SD大鼠胚基底前脑原基制成细胞悬液接种于 2块 2 4孔培养板中 ,分别加入含银杏内酯、NGF及不含上述成份的 DMEM培养液 ,于体外分别培养 18d和 3 0 d后 ,用 TUNEL 法检测细胞凋亡情况 ,显微镜下计数各组的凋亡细胞。数据用方差分析和 SNK检验进行统计学处理。结果 :培养 18d和 3 0 d两个时期的银杏组凋亡细胞数均明显少于单纯对照组 ( P<0 .0 1) ,而略多于 NGF组 ,但其差异无显著性 ( P>0 .0 5 )。结论 :银杏内酯具有类似NGF的作用 ,可有效抑制体外培养的胚基底前脑神经元凋亡     

17β雌二醇对丙泊酚诱导皮层神经元凋亡的影响

目的 探讨17β雌二醇对丙泊酚诱导原代培养皮层神经元凋亡的影响及机制。方法 原代培养7 d的大鼠皮层神经元,随机分为三组:溶剂对照组(给予等溶剂20%脂肪乳),丙泊酚组(丙泊酚终浓度为500μmol/L),17β雌二醇+丙泊酚组(17β雌二醇终浓度为0.1μmol/L,丙泊酚终浓度为500μmol/L)。上述药物处理皮层神经元12 h后,用Hoechst 33258核染色法和TUNEL法检测皮层神经元调亡,Western-blot法测定神经元Bcl-2,Bax和cleaved caspase-3蛋白的水平。结果 与溶剂对照组比较,丙泊酚组神经元凋亡率显著性增加(P<0.01),Bcl-2蛋白水平显著性下降(P<0.01),Bax蛋白水平显著性增加(P<0.01),Bcl-2/Bax显著性降低(P<0.01),cleaved caspase-3蛋白水平显著性增加(P<0.01)。与丙泊酚组比较,17β雌二醇+丙泊酚组神经元凋亡率显著性下降(P<0.01),Bcl-2蛋白水平显著性增加(P<0.01), Bax蛋白水平显著性下降(P<0.01),Bcl-2/Bax显著性增加(P<0.01),cleaved caspase-3蛋白水平显著性下降(P<0.01)。结论 17β雌二醇可通过影响Bc1-2和Bax蛋白水平抑制皮层神经元凋亡,产生保护作用。     

蒺藜皂苷对缺氧-复氧诱导大鼠皮层神经元凋亡的影响

目的：观察蒺藜皂苷（Tribulus terrestrisL．saponion，TTLS）对大鼠皮层神经元经缺氧一复氧后细胞凋亡的影响，并探讨其可能的作用机制。方法：离体培养大鼠皮层神经元，先用95％N：与5％CO2混合气体造成细胞缺氧3h，再给予95％O2。与59／6CO2混和气复氧12h，建立缺氧复氧损伤的皮层神经元凋亡模型。中药组于缺氧-复氧时均加入TTLS进行干预。AnnexinV—FITC／碘化丙啶（propidiumiodide，PI）双染，流式细胞仪定量分析细胞凋亡百分率；JC-1荧光染色，激光扫描共聚焦显微镜观察细胞线粒体膜电位的变化，荧光酶标仪测定神经元胞浆内caspase-3／7的活性，并采用免疫细胞化学法观察细胞Bax蛋白表达情况。结果：细胞缺氧3h复氧12h后，凋亡率明显增加，线粒体膜电位显著降低，胞浆内caspase-3／7活性增多，Bax蛋白大量表达（P〈0．01）。TTLS能抑制缺氧-复氧损伤的皮层神经元线粒体膜电位的降低，减少caspase-3／7活性，并可降低Bax蛋白的表达，从而抑制细胞凋亡的发生。结论：缺氧一复氧可以诱导皮层神经元的凋亡。TTLS可降低缺氧-复氧诱导细胞凋亡的发生，其机制与维持线粒体膜电位的稳定，抑制caspase酶活性，降低Bax蛋白表达有关。     

银杏内酯对培养小鼠皮层神经细胞缺氧损伤的保护作用

目的：研究银叶内酯对缺氧神经细胞的保护作用,方法：采用原代培养的小鼠大脑皮层神经细胞,利用MTT比色法观察了不同浓度（终浓度为0．59－37．5μg/ml)的银杏内酯对缺氧神经细胞的作用。检测外液LDH释放量以观察37．5μg/ml浓度的银杏内酯对缺氧神经细胞存活的影响,并进行了形态学的观察。结果：银杏内酯在所研究的浓度范围之中对神经细胞的保护作用呈现出浓度依赖性;并用37．5μg/ml浓度的银杏酯能明显提高缺氧神经的活性和生存能力,减轻细胞的形态学损伤。结论：银杏内酯对小鼠神经细胞缺氧损伤有明显的保护作用。     

银杏内酯对培养的皮层神经元的影响及机制

目的:探讨银杏内酯(Gin)对体外培养的皮层神经元的影响及机制。方法:用Gin处理皮层神经元,以细胞活性、丙二醛(MDA)含量、促红细胞生成素(EPO)的表达为指标。结果:经Gin处理的神经元,胞体饱满,突起变粗变长,细胞活性明显升高,MDA含量降低,EPO表达显著上升。结论:Gin对神经元生长有营养保护作用,其机制可能与提高神经元EPO表达水平,增强神经元抗氧化能力有关。     

银杏内酯B对谷氨酸诱导视网膜神经细胞凋亡的影响

 ［目的］探讨银杏内酯B拮抗谷氨酸诱导的体外培养新生大鼠视网膜神经细胞凋亡作用及其可能的机制。 ［方法］MTT法检测不同浓度谷氨酸对原代培养SD大鼠视网膜神经细胞的兴奋性毒性作用。细胞分为正常组、谷氨酸组和不同浓度（10、50、100μmol/L）GB治疗组(n=6)。MTT法检测不同浓度的银杏内酯B对谷氨酸诱导凋亡的视网膜神经细胞存活率的影响。流式细胞仪结合Annexin V/ PI检测细胞凋亡率，JC-1染色检测线粒体膜电位。［结果］100μmol/L谷氨酸作用下，视网膜神经细胞的吸光度值降低至0.50±0.07，凋亡率为52.4％，JC-1的红/绿比值为1.77。10~100μmol/L银杏内酯B作用下神经细胞的吸光度值分别为0.52±0.09、0.64±0.15和0.74±0.11，细胞的凋亡率分别下降至36.7%，12.4%和2.1%，JC-1的红/绿比值则分别上升为1.898、2.089、2.276（P＜0.05）。［结论］银杏内酯B可以拮抗谷氨酸诱导的视网膜神经细胞凋亡，其作用机制可能与提高线粒体膜机能有关。     

银杏内酯B对谷氨酸诱导视网膜神经细胞凋亡的影响

【目的】探讨银杏内酯B拮抗谷氨酸诱导的体外培养新生大鼠视网膜神经细胞凋亡作用及其可能的机制。【方法】MTT法检测不同浓度谷氨酸对原代培养sD大鼠视网膜神经细胞的兴奋性毒性作用。细胞分为正常组、谷氨酸组和不同浓度（10、50、100μmol／L）银杏内酯B治疗组（n=6）。MTT法检测不同浓度的银杏内酯B对谷氨酸诱导凋亡的视网膜神经细胞存活率的影响。流式细胞仪结合AnnexinV／PI检测细胞凋亡率，JC-1染色检测线粒体膜电位。【结果】100μmol／L谷氨酸作用下，视网膜神经细胞的吸光度值降低至0．50&#177;0．07，凋亡率为52．4％，JC-1的红／绿比值为1．77。10～100μmol／L银杏内酯B作用下神经细胞的吸光度值分别为0．52&#177;0．09、0．64&#177;0．15和0．74&#177;0．11，细胞的凋亡率分别下降至36．7％，12．4％和2．1％，JC-1的红／绿比值则分别上升为1．898、2．089、2．276（P〈0．05）。【结论】银杏内酯B可以拮抗谷氨酸诱导的视网膜神经细胞凋亡。其作用机制可能与提高线粒体膜机能有关。     

银杏内酯B对谷氨酸诱导大鼠大脑皮质神经元氧化损伤的影响

【目的】探讨银杏内酯B(ginkgolide B)对谷氨酸(glutamate)引起原代培养的脑皮质神经元氧化损伤的保护作用。【方法】采用改良的方法原代培养胎鼠脑皮质神经元，用噻唑蓝(MTT)及乳酸脱氢酶法分别检测神经元的存活率和损伤情况；用硫代巴比妥酸法测定细胞脂质过氧化的程度；并同时检测了细胞内抗氧化酶的活性。【结果】银杏内酯B(10～100μmol／L)能剂量依赖性地抑制谷氨酸(O．8mmol／L)引起的细胞存活率下降和细胞损伤，同时提高细胞内抗氧化酶活性和减轻细胞脂质过氧化。【结论】银杏内酯B可拮抗谷氨酸所致的神经细胞毒性作用，这可能与其能提高神经细胞内抗氧化酶活性和清除氧自由基有关。     

高碘对原代培养的大鼠皮层神经元细胞凋亡影响的实验研究

目的研究高碘对原代培养的大鼠皮层神经元细胞凋亡的影响,并对其机制作初步探讨。方法采用体外新生大鼠皮层神经细胞培养法观察不同浓度的碘化钾对神经细胞凋亡及其一氧化氮（NO）含量及一氧化氮合酶（NOS）活性的影响。结果高碘可以诱发原代培养的大鼠皮层神经元细胞发生凋亡,细胞凋亡率随碘化物浓度的升高而升高,实验组细胞的NO含量及NOS活性较正常对照组增高。结论高碘可以诱导原代培养的大鼠皮层神经元细胞发生凋亡,并呈剂量依赖关系,其机制可能与NOS活性及NO含量增高有关。     

还原型辅酶I对缺氧复氧诱发大鼠脑皮层神经元凋亡的保护作用

目的通过建立大鼠脑皮层神经元缺氧复氧模型,探讨还原型辅酶Ⅰ(reduced nicotinamide adenine dinu-cleotide,NADH)对缺氧复氧诱发神经元凋亡的保护作用。方法原代培养新生大鼠脑皮层神经元,随机分成正常对照组,缺氧复氧组和NADH组。用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL法)检测细胞凋亡,计算凋亡率,检验各试验组细胞凋亡率的差异。用透射电镜观察凋亡细胞超微结构。结果正常对照组各阶段细胞凋亡率间差别无统计学意义(P0.05)。缺氧复氧组和NADH组凋亡率均较正常对照组调亡率大,差异有统计学意义(P0.01),缺氧复氧组较NADH组凋亡率大,差异有统计学意义(P0.01)。在复氧12 h内给予NADH,对于神经元凋亡抑制作用优于其余复氧时间点。结论缺氧复氧可诱发体外培养神经元发生凋亡,NADH对此有明显抑制作用。在复氧12 h内给予NADH对凋亡的抑制作用较明显。     

脑源性神经营养因子对体外培养大鼠胚脑皮质神经元缺氧的保护作用

目的探讨脑源性神经营养因子（BDNF）对体外培养大鼠胚脑皮质神经元在低氧适应过程的保护作用。方法对胚鼠皮质神经元进行体外培养,观察透射电镜下缺氧诱导大鼠胚脑皮质神经元损伤的超微结构变化;采用MTT比色法检测正常对照组（A组）、不同缺氧时间点皮质神经元缺氧对照组（B组）及缺氧培养前24h和缺氧即刻加入不同剂量外源性BDNF实验组（C组）神经细胞存活率差别;4’、6-二脒基-2-苯基吲哚盐酸染色法结合凋亡细胞的原位末端标记法（TUNEL）检测细胞凋亡。结果遭受缺氧损伤的大鼠胚脑皮质神经元超微结构显示缺氧可以诱导神经细胞坏死、凋亡和混合型细胞死亡;以神经元缺氧最为敏感的0～10h为研究时间,C组在缺氧0～6h时细胞活性显著高于缺氧对照组B组（P〈0．05）。凋亡神经细胞百分率低于缺氧对照组B组（P〈0．05）。结论缺氧可诱导体外培养大鼠胚脑皮质神经元死亡,早期加入外源性BDNF可以使神经元对低氧的耐受性增强而发挥其对神经元的保护作用。     

白藜芦醇对缺氧诱导大鼠乳鼠心肌细胞凋亡的作用

目的 观察白藜芦醇(Res)对缺氧诱导大鼠乳鼠心肌细胞凋亡的保护作用. 方法 建立体外培养大鼠乳鼠心肌细胞缺氧模型, MTT法检测心肌细胞活力,Hoechst33258染色检测心肌细胞凋亡,测定心肌细胞内总抗氧化能力(T-AOC)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性. 结果 经8h、12h、16h、24h缺氧培养后,心肌细胞抑制率分别为(22.13±3.22)%、(29.75±0.34)%、(37.43±6.42)% 和(45.47±7.32)%;心肌细胞缺氧培养24h后,呈现典型的凋亡形态学变化;心肌细胞内GSH-Px活性从(46.96±8.36)U/ml下降到(27.13±4.76) U/ml(P<0.01);心肌细胞内T-AOC为(2.68±0.31)U/ml,缺氧24h后下降到(1.28±0.27)U/ml(P<0.05).Res(25、50、75μmol/L)可剂量依赖性降低8h、12h、16h、24h缺氧培养所引起的心肌细胞抑制率升高(P<0.05,P<0.01或P<0.001);心肌细胞凋亡形态学改变逐渐改善, 50μmol/L和75μmol/L Res作用更明显;剂量依赖性升高心肌细胞内GSH-Px活性和T-AOC水平(P<0.05 或P<0.01). 结论Res可减轻缺氧诱导大鼠乳鼠心肌细胞凋亡程度.     

烟碱拮抗秋水仙碱诱导大鼠大脑皮质神经元凋亡的作用

[目的]研究烟碱对皮质神经元的保护作用.[方法]在培养至第6天的皮质神经元中以不同浓度(1μmol/L,10 μmol/L,100 μmol/L)烟碱预孵2 h,再加入0.1 μmol/L秋水仙碱作用24 h.通过相差显微镜形态学观察,Hoechst33258核荧光染色进行凋亡率计数和测定乳酸脱氢酶相对释放量(LDH)的实验,再测试10 μmol/L预孵不同时间(0.5,2,8)h的烟碱对秋水仙碱诱导大鼠大脑皮质神经元凋亡的作用.[结果]秋水仙碱可诱导皮质神经元调亡,烟碱可拮抗秋水仙碱的此种作用.其中10 μmol/L烟碱预孵2 h保护作用最强.[结论]烟碱可拮抗秋水仙碱诱导大鼠大脑皮质神经元凋亡的作用.     

低氧对裸鼹鼠皮肤成纤维细胞自噬水平及凋亡的影响

目的 比较裸鼹鼠成纤维细胞常氧与低氧条件下自噬与凋亡水平.方法 分别采用低氧（3％O2）与常氧（20％ O2）培养裸鼹鼠皮肤成纤维细胞,采用Western blotting、RT-PCR等方法检测自噬相关基因Beclin1、LC3的表达,并用流式细胞术检测低氧与常氧条件下裸鼹鼠成纤维细胞凋亡水平.结果 裸鼹鼠皮肤成纤维细胞在低氧与常氧处理24 h时,LC3 Ⅱ蛋白的表达量并无明显差异,而低氧处理48 h后LC3 Ⅱ蛋白的表达量显著高于常氧组,并且裸鼹鼠成纤维细胞随着低氧培养时间的延长,LC3 Ⅱ蛋白表达升高.流式细胞术结果显现低氧处理组裸鼹鼠皮肤成纤维细胞凋亡率显著低于常氧组.结论 裸鼹鼠皮肤成纤维细胞可以通过提高自噬水平适应低氧环境,这为今后深入研究裸鼹鼠耐低氧机制提供了参考.     

阿魏酸对NMDA诱导的体外培养神经细胞损伤的保护作用

目的应用培养的胎鼠皮层神经细胞观察阿魏酸对N-甲基-D-天门冬氨酸(30μmol／L)诱导的皮层神经元损伤的保护作用；方法取17-18d胎龄大鼠皮层神经元进行分离培养。通过光镜观察细胞形态变化并测定乳酸脱氢酶(LDH)的漏出量来观察阿魏酸的保护作用；结果阿魏酸可以使细胞损伤减轻，使LDH在培养液中漏出量显著降低，并呈剂量依赖性；结论阿魏酸对NMDA损伤的神经元有保护作用。     

尼莫地平对大鼠缺氧缺血性脑神经细胞损伤的保护作用研究

为探讨尼莫地平对脑神经细胞的保护作用 ,将 2 4只雌性 SD大鼠的大脑皮层神经细胞经试管内培养后 ,分为正常对照组、缺氧缺血组和尼莫地平处理组 ,每组各 8只 ,观察并比较 3组动物神经细胞胞浆总钙(TCa2 )和游离钙 (Ca2 i)的变化。结果 :缺氧缺血组神经细胞 TCa2 和 Ca2 i分别为 6 .70± 1.15 μg/ m l cell和 1.0 8± 0 .14F331.2 / F382 .4,均明显高于正常组 (TCa2 3 .10± 1.15 μg/ ml cell和 Ca2 i0 .83± 0 .13F331.2 / F382 .4)(P<0 .0 5 ) ;尼莫地平处理组 TCa2 和 Ca2 i分别为 3.5 3μg/ ml cell± 1.74和 0 .89± 0 .0 5 F331.2 / 382 .4,均明显低于缺氧缺血组 (P<0 .0 5 ) ,但与正常组比较则无显著性差异 (P>0 .0 5 )。由此提示 ,尼莫地平可阻滞脑神经细胞缺氧缺血性损伤时的钙超载 ,能有效地保护脑神经细胞。     

苯丙氨酸对胚鼠大脑皮层神经元Rho GTPases基因表达的影响

目的研究苯丙氨酸对大脑皮层神经元RhoGTPases(Racl、Cdc42、RhoA)mRNA体外表达的影响。方法在体外培养3d的原代培养胚鼠大脑皮层神经元中,加入高浓度苯丙氨酸诱导18h,用实时荧光定量PCR方法,检测苯丙氨酸对胚鼠大脑皮层神经元Rac1、Cdc42、RhoA基因表达的影响。结果胚鼠大脑皮层神经元经苯丙氨酸诱导后,Rac1、Cdcd2、RhoAmRNA表达分别是对照组的37.0%、29.8%、30.0%(P<0.01)。结论高浓度苯丙氨酸通过影响RhoGTPases基因表达,进而干扰神经元突起的生长和突触的连接,可能是苯丙酮尿症导致患者智力落后机制之一。     

一氧化氮在缺氧复氧所致神经细胞凋亡中的作用及银杏叶提取物的保护效应

为探讨银杏叶提取物对缺氧复氧神经细胞凋亡中一氧化氮 (NO)动态表达的作用 ,对大鼠大脑皮质神经细胞原代分离培养 ,用原位末端标记法 (TUNEL)及流式细胞术检测细胞凋亡 ,用荧光分光光度法检测细胞培养上清液中亚硝酸根含量的变化。结果 :缺氧复氧致胎鼠大脑皮质神经细胞凋亡中NO含量呈双时相增高 (单纯缺氧 2h及缺氧 18h复氧 18h) ,银杏叶提取物 (EGB)对此双时相的NO升高有抑制作用 ,氨基胍 (AG)可抑制缺氧 8h复氧 18h组的NO升高 ,对缺氧 2h组的NO升高无抑制作用。提示 :NO参与了缺氧复氧过程中神经细胞凋亡 ,银杏叶提取物对缺氧复氧神经细胞凋亡有保护作用 ,其作用可能是通过抑制NO而实现的。     

氯化钴诱导低氧对裸鼹鼠肝星形细胞增殖及凋亡的影响

目的 比较研究氯化钴(CoCl2)对裸鼹鼠及C57BL/6J小鼠肝星形细胞增殖和凋亡的影响.方法 采用活细胞计数试剂盒(CCK8)法和流式细胞术分别检测不同浓度CoCl2对裸鼹鼠和小鼠肝星形细胞增殖活力以及和凋亡水平的影响.采用蛋白印迹测定CoCl2处理后裸鼹鼠肝星形细胞低氧诱导因子1α(HIF-1α)和凋亡相关蛋白(BCL2、BAX)的表达水平.结果 低浓度(50 μtmol/L)CoCl2对C57BL/6j、鼠肝星形细胞增殖活性具有明显的抑制作用,并能显著提高其凋亡率,然而同样剂量的CoCl2能够显著提高裸鼹鼠肝星形细胞的增值活性,对细胞凋亡率亦无明显影响.高剂量CoCl2(＞200 μtmol/L)虽能导致裸鼹鼠肝星形细胞增殖活力的降低,及凋亡率的升高,但裸鼹鼠肝星形细胞的变化幅度明显小于小鼠.同时CoCl2处理后,裸鼹鼠肝星形细胞HIF-1α的表达或累积显著升高(P＜0.05),BCL2/BAX比率显著上调(P＜0.05).结论 与C57BL/6J小鼠相比,裸鼹鼠肝星形细胞具有更强的抵抗CoCl2引起的化学性低氧损伤的能力.同时HIF-1α可能参与调控裸鼹鼠抵抗化学性低氧环境造成的损伤.