缺氧诱导因子-1α和血管内皮生长因子在肾细胞癌组织中的表达及意义

目的检测缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）和血管内皮生长因子（VEGF）在肾细胞癌中的表达及其相互关系。方法用免疫组织化学SABC法检测42例肾细胞癌组织中HIF-1α及VEGF蛋白的表达。结果肾细胞癌组织中HIF-1α阳性表达率为57．1％，癌旁及正常组织不表达；肾细胞癌VEGF阳性表达率为61．9％，与癌旁及正常组织（阳性表达率为20％）相比有显著性差异（P〈0．05）；癌转移患者与无癌转移者HIF-1α、VEGF比较均有显著性差异（P〈0．01）；HIF-1α与VEGF表达呈正相关（Kappa=0．41,P〈0．01）。结论HIF-1α在肾细胞癌组织中呈高表达，其与VEGF有相关性，有望成为判断肾细胞癌转移和预后等生物学行为的重要参考指标，HIF-1α是VEGF表达的调控因子之一。     

肾透明细胞癌中碳酸酐酶IX与Pten蛋白的表达与意义

目的：分析研究碳酸酐酶IX与Pten蛋白在肾透明细胞癌中的表达情况及其临床意义。方法采用免疫组织化学SP法检测98例肾透明细胞癌组织和15例正常肾组织中碳酸酐酶IX与Pten蛋白的表达情况。分析该两种蛋白的表达与肾癌临床病理特征的相关性。结果碳酸酐酶 IX在肾透明细胞癌中的阳性表达率为72．45％,明显高于正常肾组织中的0（ P＜0．01）,Pten蛋白在肾透明细胞癌中阳性表达率为42．86％,明显低于正常肾组织中的100％（P＜0．01）。碳酸酐酶IX的表达与患者年龄分布、肿瘤直径大小、TNM分期、Fuhrman分级、有无淋巴结转移等因素无关。在98例肾透明细胞癌组织中的不同大小肿瘤、不同年龄方面的Pten蛋白的阳性表达率差异无统计学意义（均 P＞0．05）。有无淋巴结转移、Fuhrman病理分级及临床分期方面的Pten蛋白的阳性表达率差异有统计学意义（均 P＜0．05）。结论碳酸酐酶IX与Pten蛋白有助于肾透明细胞癌的诊断,Pten蛋白的表达与肾癌的临床病理特征具有相关性,联合检测有助于肾透明细胞癌的病情判断及预后评估。     

食管鳞状细胞癌组织中血管内皮生长因子-C与血小板生成因子-4蛋白的表达

目的：检测食管鳞状细胞癌（ESCC）组织中血管内皮生长因子-C（VEGF—C）及血小板生成因子4（FLT-4）蛋白的表达。方法：应用免疫组织化学SP法检测50例ESCC组织及其相应的癌旁不典型增生组织（19例）及正常食管黏膜组织（50例）中VEGF—C与FLT-4蛋白的表达，并分析ESCC组织中2者的表达与患者临床病理因素的关系。结果：ESCC组织、癌旁不典型增生组织及正常食管黏膜组织中VEGF—C蛋白的阳性表达率依次降低，分别为82．0％（41／50）、47．4％（9／19）、26．0％（13／50），3组间比较，差异有统计学意义（P〈0．05）；FLT-4蛋白的阳性表达率依次降低，分别为72．0％（36／50）、36．8％（7／19）、18．0％（9／50），3组间比较，差异有统计学意义（P〈0．05）；VEGF—C蛋白的表达与肿瘤的浸润深度、淋巴结转移有关（P〈0．05），FLT-4蛋白的表达与肿瘤的淋巴结转移有关（P〈0．05）。ESCC组织中2者的阳性表达呈正相关（r=0．536，P=0．000）。结论：VEGF—C和FLT-4与ES—CC的发生、浸润及转移有关，联合检测2者可望成为ESCC早期诊断和判断预后的分子指标之一。     

受体结合肿瘤抗原、血管内皮生长因子和基质金属蛋白酶-9在宫颈癌组织中的表达及其与肿瘤侵袭、转移的关系

目的探讨受体结合肿瘤抗原（RCAS1）、血管内皮生长因子（VEGF）和基质金属蛋白酶-9（MMP-9）在早期宫颈浸润癌组织中的表达及其与宫颈癌组织侵袭、转移的关系。方法采用免疫组织化学S-P法,分别检测RCAS1、VEGF及MMP-9蛋白在95例早期宫颈浸润癌（ICC）,82例宫颈上皮内瘤样病变（CIN）和24例正常宫颈上皮（NCE）中的表达,并分析其与宫颈癌临床病理学参数间的关系及3者间的相关性。结果免疫组织化学方法显示,从NCE到CIN再到ICC,RCAS1蛋白阳性表达率分别为0、39．0％和72．6％;VEGF蛋白阳性表达率分别为16．7％、41．5％和67．4％;MMP-9蛋白阳性表达率分别为18．2％、53．7％和78．9％,差异有统计学意义（P〈0．01）。RCAS1在ICC中的表达与盆腔淋巴结转移、脉管浸润、间质浸润和组织学分级有关（P〈0．01）;而与年龄和组织学类型、临床分期无关（P〉0．05）;MMP-9和VEGF在ICC中的阳性表达与盆腔淋巴结转移、脉管浸润、间质浸润和临床分期有关（P〈0．05）,与年龄、组织学分级和组织学类型无关（均P〉0．05）。在宫颈癌组织中,RCAS1、VEGF和MMP-9蛋白表达均呈显著正相关（均P〈0．01）。结论RCAS1、VEGF和MMP-9蛋白异常表达在宫颈癌的恶化、侵袭、转移中起重要作用,联合检测这些指标并分析其表达的相互关系有助于判断宫颈癌的转移潜能及指导术后,干预治疗。     

TGIF,MMP9和VEGF蛋白在胃癌中的表达及临床病理联系

目的：探讨TGIF，MMP9和VEGF蛋白在胃癌中的表达及其临床病理联系。方法：运用连续切片HE染色法观察SGC-7901细胞、PcDNA3．1转染细胞和TGIF转染细胞荷瘤裸鼠瘤组织有无血管浸润和远处转移，同时以免疫组织化学法分析转移相关分子MMP2，MMP9和VEGF在裸鼠瘤组织中的表达变化，并分析TGIF，MMP9和VEGF蛋白在76例胃癌组织中的表达水平及其临床病理联系。结果：3种细胞的荷瘤裸鼠均无远处转移，SGC-7901细胞和PcDNA3．1转染细胞接种组裸鼠瘤组织有癌栓形成，但TGIF组无癌栓形成；对照组MMP9和VEGF均呈强阳性表达，表达水平明显高于TGIF组，但MMP2在3组间的表达无明显差别。胃癌组织中TGIF蛋白表达阳性，阳性率为46．1％（35／76），明显低于断端胃黏膜（78．1％）（P〈0．05），且它的低表达与淋巴结转移有关（P〈0．05）。MMP9表达阳性率为59．2％，明显高于断端胃黏膜（31.3％）（P〈0．05），且其高表达与淋巴结转移有关（P〈0．05）。VEGF蛋白的阳性表达率为56．6％，明显高于断端胃黏膜（31．3％）（P〈0．05），且其表达与淋巴结转移和胃癌的浸润深度密切相关（P〈0．05）。TGIF与VEGF和MMP9蛋白的表达呈负相关（P〈0．05）。结论：TGIF可能通过下调VEGF和MMP9蛋白的表达抑制胃癌的转移。     

VEGF、核内EGFR及CD 105在早期非小细胞肺癌的表达及临床意义研究

目的：探讨 VEGF、核内 EGFR及CD105在早期非小细胞肺癌的表达情况及其与早期非小细胞肺癌临床病理特征的关系。方法选择30例手术切除的早期非小细胞肺癌组织及癌旁正常组织,应用免疫组化方法检测 VEGF、核内 EGFR及CD105的表达情况,分析3者之间的相互关系及临床意义。计量资料采用t检验,计数资料用卡方检验或四格表确切概率检验,两者相关性采用非参数Spearman等级相关性分析。结果 VEGF在30例早期非小细胞肺癌组织和癌旁正常组织中的阳性表达率分别为53．5％和26．7％,差异具有统计学意义（P ＜0．05）。核内 EGFR在癌组织和癌旁正常组织中的阳性表达率分别为16．7％和0％,差异无统计学意义（P ＞0．05）,CD105标记的微血管密度值（MVD）在癌组织与癌旁正常组织中分别为（17．3±5．6）和（8．9±4．2）,差异具有统计学意义（P ＜0．05）。VEGF与核内 EGFR的表达与肿瘤复发转移有关,差异具有统计学意义（P ＜0．05）, VEGF、核内 EGFR的表达及CD105标记的 MVD值与与患者年龄、性别、吸烟、肿块大小、病理类型、临床分期、分化程度、解剖学类型差异无统计学意义（P ＞0．05）。VEGF在癌组织中的表达与 MVD呈正相关性（r ＝0．516,P＝0．004）,VEGF的阳性表达与核内 EGFR 的阳性表达、核内 EGFR 的阳性表达与 MVD 之间无相关性（P ＞0．05）。结论 VEGF、核内 EGFR及CD105在早期 NSCLC均有表达,VEGF、核内 EGFR的表达与早期非小细胞肺癌的复发转移有关。     

宫颈癌组织中VEGF和nm23-H1表达及临床意义

目的探讨宫颈癌组织中VEGF和nm23-H1蛋白表达作为判断宫颈癌患者预后因素的意义。方法应用免疫组织化学S-P法对105例宫颈癌及10例慢性宫颈炎和20例癌旁组织进行VEGF和nm23-H1蛋白产物检测，并对宫颈癌惠者化疗后进行5a以上随访，分析它们与宫颈癌患者复发、转移及预后的关系。结果慢性宫颈炎组织中VEGF表达均为阴性，nm23-H1表达阳性率为90．0％；癌旁组织VEGF阳性表达率为45．0％，nm23-H1阳性表达率为75．0％；宫颈癌组织中VEGF阳性表达率为72．4％，nm23-H1阳性表达率为47．6％。VEGF阳性表达和nm23-H1阴性表达与宫颈癌患者局部复发（分别为P〈0．05，P〈0．01），转移（分别为P〈0．01，P〈0．05）和较短的生存期（分别为P〈0．01，P〈0．01）密切相关。VEGF蛋白表达与nm23-H1蛋白表达呈负相关（P〈0．05）。结论宫颈癌活体组织检测标本中VEGF和nm23-H1的表达与肿瘤的浸润、转移及预后密切相关，可作为预测宫颈癌患者的预后因素。     

肿瘤转移抑制基因KISS-1在前列腺癌组织中表达和预后的研究

目的检测KISS-1蛋白、基质金属蛋白酶（MMP）-9及Ki67在前列腺癌中的表达,探讨三者在前列腺癌发生发展过程中的作用。方法采用免疫组织化学法检测15名正常前列腺组织、20例前列腺上皮内瘤（PIN）、48例前列腺癌组织KISS-1蛋白、MMP-9及Ki67的表达,分析三者在不同临床病理特征中表达的意义及它们之间的相关性。结果前列腺癌组KISS-1蛋白阳性表达率（42％）明显低于正常前列腺组织和前列腺PIN组（分别为93％、75％;P〈0．01）,并且KISS-1蛋白低表达与前列腺癌的临床分期和淋巴结转移有关（P〈0．05）,与前列腺癌患者的年龄、组织学分级无关（Jp〉0．05）。前列腺癌组和前列腺PIN组MMP一9阳性表达率（分别为79％,55％）明显高于前列腺组（13％;P〈0．01）,并且MMP-9高表达与前列腺的临床分期和淋巴结转移有关（P〈O．05）,与前列腺癌患者的年龄、组织学分级无关（P〉0．05）。前列腺癌组和PIN组的Ki67阳性表达率（分别为85％,60％）明显高于正常前列腺组（13％;P〈O．01）,并且Ki67高表达与前列腺癌的临床分期有关（P〈0．05）,与前列腺癌患者的年龄、组织学分级和淋巴结转移无关（P〉0．05）。在前列腺癌中KISS-1蛋白与MMP-9表达呈负相关（r=-0．399,P〈0．01）。结论KISS-1蛋白、MMP-9及Ki67与前列腺癌的发生发展有关,联合检测三者的表达可能作为评估前列腺癌预后和指导临床靶向治疗的重要指标。     

环氧化酶-2与血管内皮生长因子在喉癌的表达及意义

目的探讨环氧化酶-2（COX-2）与血管内皮生长因子（VEGF）蛋白在喉鳞状细胞癌组织中表达的相关性。方法采用免疫组织化学SP法对76例喉癌组织与15例喉息肉进行COX-2与VEGF蛋白表达的染色，结合相关临床病理特征进行分析。结果COX-2与VEGF蛋白在喉癌组织的阳性表达率分别为51．32％和63．16％，均高于喉息肉（P〈0．01），二者均与喉癌浸润深度、组织分化程度密切相关，浸润越深、分化程度越差，表达越强（P〈0．05）；COX-2与淋巴结转移无明显相关（P〉0．05），VEGF则与淋巴结转移相关（P〈0．01），二者在喉癌组织的表达呈明显正相关（P〈0．05）。结论COX-2与VEGF在喉癌的发展中起重要作用，可能为喉癌的治疗提供新的靶点。     

胃癌组织中VEGF—C、VGFR-3表达和微淋巴管密度的研究

目的探讨血管内皮生长因子C（VEGF—C）及其受体-3（VEGFR-3）在胃癌组织中的表达,分析其表达与微淋巴管密度（LVD）和胃癌生物学行为之间的关系。方法采用组织微阵列技术,通过免疫组化sP法检测胃癌组织标本125例、癌旁正常组织96例中VEGF—C、VEGFR-3的表达,以Podoplanin标记微淋巴管密度（LVD）进行计数。结果VEGF—C和VEGFR-3在胃癌组织和癌旁正常组织中的阳性表达率分别为62．4％、56．0％和10．41％、12．5％,差异有统计学意义（均P〈0．05）,VEGF—C和VEGFR一3表达与LDV、胃癌淋巴结转移、临床分期、远处转移及CEA均呈正相关（P〈0．05）,VEGFR一3表达与Ca19—9呈正相关（P〈0．05）而VEGF—C的表达则与CA19—9无相关（P〉0．05）;胃癌组织中LVD计数为（2．98±0．81）个高于癌旁正常组织中计数（1．82±0．63）个,差异有统计学意义（P〈0．05）,且癌周LVD计数高于癌内LVD计数（P〈0．05）。结论胃癌组织中VEGF—C和VEGFR-3均呈高表达,与淋巴管生成有关并参与了胃癌的发生、浸润和转移。     

人成纤维细胞产生的抑制因子对肿瘤和转化细胞增殖与分化的影响

对人成纤维细胞产生的抑制因子(HFDI)的细胞生长抑制效应进行研究,发现HFDI对肿瘤细胞~3H—TdR掺入抑制是由于使细胞变性坏死或促使细胞有限分化所致;并证明HFDI对PHA刺激的淋巴细胞转化的抑制,也是由于使转化细胞变性坏死或促使细胞向成熟方向发展所致。     

Culture and Identification of Human Amniotic Mesenchymal Stem Cells

Objective To establish the method of isolation, purification, and identification of human amniotic mesenchymal stem cells （hAMSCs）. Methods hAMSCs were isolated from human amniotic membrane by trypsin-collagenase digestion, and cultured in Dulbecco＇s modified Eagle＇s medinm/F12 medium supplemented with 10% fetal bovine serum. Phenotypic characteristics of these cells were analyzed by means of immunocytochemistry and flow cytometry. Results The cells successfully isolated from human amniotic membrane expressed representative mesenchymal cell surface markers CD44, CD90, and vimentin, but not CD45. Conclusions This study establishes a potential method for isolation of hAMSCs from human amnion, in vitro culture, and identification. The isolated cells show phenotypic characteristics of mesenchymal stem cells.     

人子宫内膜基质细胞及腺上皮细胞的分离纯化和体外培养

目的：建立人子宫正常内膜、内膜异位症在位及异位子宫内膜的基质及腺上皮细胞分离、培养的方法，为进一步研究子宫内膜异位症发生、发展的分子生物学机制提供一个理想的实验模型。方法：15例正常子宫内膜、15例在位子宫内膜及10例异位内膜经胶原酶消化、筛网过滤、差时贴壁等技术进行分离、纯化和体外培养，光镜观察，应用鼠抗人波形蛋白抗体、鼠抗人细胞角蛋白单克隆抗体免疫组化染色对间质及上皮细胞进行鉴定。结果：正常子宫内膜和子宫内膜异位症在位子宫内膜标本分离、培养均成功；5例异位内膜标本获得成功．基质细胞和腺上皮细胞纯度均可达95％以上，并均可传代。结论：采用酶解、筛网分离及贴壁能获得纯度较高的基质与腺上皮细胞。人子宫内膜细胞分离体外培养的成功，有助于研究子宫内膜异位症的发病机制．为临床实验提供重要的理论依据．     

一种新的子宫内膜腺上皮细胞和基质细胞的分离纯化及培养方法的探讨

目的:建立一种简捷的分离纯化培养子宫内膜腺上皮细胞和基质细胞的方法。方法:选择子宫全切育龄妇女的新鲜子宫内膜组织,经单酶消化、二次筛网过滤及贴壁纯化技术分离纯化培养人子宫内膜腺上皮细胞和基质细胞,光镜及免疫细胞化学染色鉴定细胞纯度。结果:腺上皮细胞漩涡状生长,细胞呈蝌蚪形或类圆型,细胞角蛋白19免疫组化染色阳性,纯度可达92%。基质细胞呈平行状生长,细胞呈梭形或多角形。波形蛋白免疫组化染色阳性,纯度达95%以上。每例子宫肌瘤切除标本可获得(10～25)×106原代基质细胞和(4～6)×106原代腺上皮细胞。结论:该培养方法可获得高产量的纯化的子宫内膜腺上皮细胞和基质细胞。     

成人血源性间充质干细胞的分离和鉴定

目的建立一种分离、培养扩增成人血源性间充质干细胞(MSCs)的方法进行鉴定,并与骨髓源性MSCs比较生物学特性。方法30名成年志愿者随机平分为二组,一组直接抽静脉血,并细分为全血细胞法组和外周血密度梯度离心法组,同时抽骨髓为骨髓密度梯度离心法组;另一组为血细胞分离机法组。各组进行细胞存活率、集落形成率、形态学、流式表型分析、胶原染色等研究。结果外周血密度梯度离心法分离成人静脉血后培养,贴壁细胞呈梭形,集落形成率为(0.12±0.08)/106单个核细胞,传代扩增到第5代时每份平均细胞数达51.4674×106,表达CD44、CD54、CD105和CD166,不表达CD14、CD34、CD45和CD31,细胞分泌Ⅰ、Ⅲ型胶原。全血细胞法和血细胞分离机法获得的细胞不能连续多次传代。结论外周血密度梯度离心法比全血细胞法和血细胞分离机法简单,贴壁细胞培养扩增容易,获得的血源性MSCs与骨髓源性MSCs的生物学特性相似。     

小鼠DC、NK细胞体外诱导、增殖及示踪方法

目的研究小鼠自然杀伤(NK)细胞、树突状细胞(DC)体外诱导增殖及其过继免疫后示踪的方法.方法建立C57BL/6小鼠皮下黑素瘤模型,体外诱导、增殖小鼠脾源性NK细胞及骨髓源性DC,进行电镜观察,并在体外以Brdu、DAPI标记,混合两种细胞回输荷瘤小鼠体内,观察肿瘤组织中两种细胞的示踪情况.结果DC、NK细胞在细胞因子诱导下体外成倍扩增,电镜下可见典型的DC、NK细胞.Brdu对细胞的标记率约65%,DAPI对细胞的标记率可达100%.在荧光显微镜下可见肿瘤组织切片中外源性DC、NK细胞的分布.结论Brdu、DAPI均可作为外源性细胞体内示踪的标记方法.     

大鼠胃壁细胞的分离及培养

目的　完成胃壁细胞分离及纯化 ,建立原代培养胃壁细胞的方法 .方法　制备大鼠翻转的胃囊用含链霉蛋白酶E的消化液注入胃囊内孵育 ,并用磁力搅拌器轻轻搅拌而制备单个的胃底腺细胞 ,Percoll梯度离心富集胃壁细胞 ,用含10 0 m L· L- 1 血清的 PBS或培养液 ,时差贴壁去除成纤维细胞 ,然后 ,将壁细胞接种于培养板中 ,培养液用无血清的 1∶ 1Harm's F- 12 / DMEM培养 ,内含胰岛素 5 mg· L- 1 ,氢化可地松 4μg· L- 1 ,转铁蛋白 5 mg· L- 1 ,硒酸钠 5μg· L- 1 ,牛血清白蛋白 2 g· L- 1 ,表皮生长因子 2 5 μg· L- 1 ,葡萄糖 1.98g· L- 1持续培养可达 1wk以上 .结果　获得的壁细胞经吖啶橙 (acridine orange,AO)鉴定纯度达 80 %以上 ,原代培养经HE染色可见壁细胞呈分散小组式生长 ,且生长状态良好 .结论　此方法适宜于大鼠胃壁细胞的分离及体外培养 ,为体外进一步研究壁细胞的功能打下基础 .     

大鼠胚胎神经干细胞的分离培养及鉴定

利用无血清培养和细胞克隆技术从孕鼠(14d)胚胎中分离出神经干细胞，并进行传代培养，采用免疫细胞化学技术检测神经巢蛋白和成熟脑细胞特异性抗原神经元特异性烯醇化酶(neuron specific enolase，NSE)、胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein，GFAP)的表达，同时采用H-E染色法鉴定神经细胞类型。证实从大鼠胚胎大脑皮质分离出的细胞具有连续的克隆能力，并表达神经巢蛋白，分化的细胞表达神经元和神经胶质细胞的特异性抗原，为中枢神经系统的干细胞。     

造血干细胞移植后免疫重建及其意义的研究进展

本文对造血干细胞移植后的免疫重建及其意义的研究进展作一综述,着重介绍移植后宿主体内T细胞、自然杀伤(NK)细胞及树突细胞(DC)数量和功能的变化。     

结核菌素对肝癌和肺癌肿瘤细胞生长和凋亡的调控作用

目的探讨结核菌素对肝癌和肺癌肿瘤细胞生长和凋亡的调控作用。方法制备不同浓度的结核菌上清液(TB-SN),分别与肿瘤细胞株HePG2(肝癌)和A549(肺癌)进行反应。应用特异性荧光探针LIVE/DEAD Viability/Cytotoxicity试剂盒检测肿瘤细胞的生长情况,应用Vybrant凋亡试剂盒检测肿瘤细胞的凋亡情况。结果与5%TB-SN反应5 d后,HePG2和A549细胞凋亡显著增加;与TB-SN反应后,HePG2和A549细胞生长受到抑制。结论结核菌素可以介导肝癌和肺癌肿瘤细胞的凋亡,并抑制肿瘤细胞的生长。