多发性硬化症脑脊液中活化T细胞抗原受体V_β基因的表达

应用定量逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）对４例多发性硬化症（ＭＳ）脑脊髓液（ＣＳＦ）细胞及末梢血单个核细胞（ＰＢＭＣ）中Ｔ细胞抗原受体（ＴＣＲ）Ｖ_β基因（Ｖ_β１～Ｖ_β２０）表达进行了探讨。结果表明：未经刺激的ＣＳＦ细胞和ＰＢＭＣ表达广谱Ｖ_β基因，经ＴＣＧＦ／ＩＬ－２／ＩＬ－４短期培养的ＣＳＦ细胞则表达限制性Ｖ_β基因，而经同样培养的ＰＢＭＣ各Ｖ_β基因表达的百分率同培养前ＰＢＭＣ相同。说明在ＭＳ疾病的中枢神经系统中存在着对某种抗原的特异性Ｔ细胞应答，为ＭＳ的免疫治疗提供了新的启示。     

胸腺基质细胞的抗原提呈作用

目的 研究胸腺基质细胞的抗原提呈能力。方法 应用ＯＶＡ－特异的、受Ｉ－Ａ＾ｄ分子识别限制的辅助Ｔ细胞杂交瘤（３ＤＯ．１８．３）识别提呈的ＯＶＡ的ＣＮＢｒ水解片段而被活化后产生ＩＬ－２,测定ＩＬ－２活性来分析胸腺基质细胞的抗原提呈作用。结果ＩＦＮ－γ能促进ＭＴＥＣＩ和ＭＴＳＣ４表达Ｉ－Ａ＾ｄ分子,并促进ＭＴＳＣ４表达Ｂ７－１分子。经ＩＦＮ－γ作用后,ＭＴＥＣ１和ＭＴＳＣ４均有抗原提呈能力,ＭＴＳＣ     

T细胞受体Vβ基因在识别HSV—2过程中的表达水平和特点

本课题主要研究Ｔ细胞受体（ＴＣＲ）识别抗原后Ｖβ基因发生重排，ｍＲＮＡ表达水平改变。用紫外线处理的单纯疱疹病毒－２型（ＨＳＶ－２）、ＨＳＶ－２及ＰＨＡ分别感染或刺激正常人的ＰＢＬｓ，培养４～６天后，提取ｍＲＮＡ，并采用ＲＴ－ＰＣＲ、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交发现识别ＨＳＶ－２的ＴＣＲＶβ２、６、７、８基因在体外选择性扩增。在采用ＨＳＶ－２攻击皮肤病患者发作期、缓解期以及再发作期的ＰＢＬｓ时，发现ＴＣＲＶβ基因表达随着病程变化而改变，尤其Ｖβ７亚家族表达水平显著高于其它亚家族基因，这显示了ＴＣＲＶβ基因的变化是恒定特异性的。     

亚急性重型肝炎患者TNF-α和IL-1表达及IL-4对其的调控

目的：分析ＩＬ－４对亚急性重型肝炎（亚重肝）患者外周血单个核细胞（ＰＢＭＣＳ）ＴＮＦ－α和ＩＬ－１的调控作用,评价ＩＬ－４在亚重肝治疗中的潜在价值。方法：应用细胞生物学、免疫组化和ＲＴ－ＰＣＲ等方面测定ＰＢＭＣＳ ＴＮＦ－α、ＩＬ－１的表达。结果：亚重肝患者ＰＢＭＣＳ ＴＮＦ－α、ＩＬ－１表达水平均较正常人显著增高血糖素含量和虽然ＩＬ－４ ＭＲＮＡ及蛋白质的表达与正常人比较一差异无但ＩＬ－４ ＭＲ     

Epstein—Barr病毒潜伏膜蛋白2A重组痘苗病毒转染DC及特异性CTL的体外诱导

通过ＥＢ病毒ＬＭＰ２Ａ重组痘苗病毒转染的ＤＣＳ体外诱导ＬＭＰ２Ａ特异性ＣＴＬ,并通过ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－４和ＴＮＦ－ａ培养体系,我们诱导出了人外周血单核细胞来源的ＤＣ。同时选用在鼻咽癌患者中表达的ＥＢ病毒潜伏蛋白之一ＬＭＰ２Ａ作为靶基因,利用重组痘苗病毒转染诱导的ＤＣＳ。ＤＣＳ与自体ＰＢＭＣＳ混合培养,在ＩＬ－２的刺激作用下获得特异性ＣＴＬ。结果如下：１．人外周血单核细胞经ＧＭ－ＣＳＦ、ＩＬ－４、ＴＮＦ－ａ的混合培养,１０天可获得成熟的功能性ＤＣＳ。ＦＡＣＳ检测显示ＤＣ表面相对特异性标志ＣＤ８３…     

腺病毒、合胞病毒对外周血单个核细胞的IL-2受体表达及TNFα产生的影响

近年来国内外均注意到细胞因子及受体与病毒感染的关系。作者用１００ＴＣＩＤ５０的７型腺病毒（ＡＤＶ）及呼吸道合胞病毒（ＲＳＶ）Ｌｏｎｇ株刺激正常人体外培养的外周血淋巴细胞（ＰＢＭＣ），ＡＰＡＡＰ法检测淋巴细胞ＩＬ－２受体阳性率，酶联免疫法检测淋巴细胞上清液的ＴＮＦａ。初步观察了ＡＤＶ、ＲＳＶ对人ＰＢＭＣ的ＩＬ－２受体表达、ＴＮＦα产生的影响。经２００Ｕｇ／ｍｌ的ＰＨＡ活化的ＰＢＭＣ加入ＡＤＶ、ＲＳＶ后对照组ＩＬ－２＋细胞百分率为３４．３％，ＡＤＶ组为１７．３％，ＲＳＶ组为１７％，较对照组均显著降低…     

逆转录病毒载体介导的IL—4基因修饰对HL—60细胞？…

目的 观察ＩＬ－４基因转染对ＨＬ－６０增殖及Ｔ细胞功能的影响及其可能机制。方法 采用逆转病毒载体介民基因转染法将人ＩＬ－４基因导入髓系白血病细胞ＨＬ－６０,观察高表达外源性ＩＬ－４基因ＨＬ－６０株的增殖反应及其诱导的正常人ＰＢＭＣ增殖,ＩＬ－２、ＩＬ－６、ＩＦＮ－γ基因表达及肿瘤特异性ＣＴＬ杀伤活性。结果 ｒＩＬ－４或瘤细胞产生的ＩＬ－４早期促进ＨＬ－６０细胞增殖,培养５天后则明显和抑制其增殖;与     

成年大鼠星形细胞经LPS、前炎症因子和免疫调节因子刺激后β-趋化因子的分泌

目的研究在中枢神经系统（ＣＮＳ）的炎症性疾病中,作为构成血脑屏障结构的组成部分之一,可引起白细胞浸润的星形细胞分泌趋化因子的影响因素。方法通过星形细胞体外培养,经不同细胞因子刺激,用原位杂交检测成年大鼠星形细胞β－家系趋化因子的ｍＲＮＡ表达。结果ＩＦＮ－γ可引起ＭＣＰ－１,ＲＡＮＴＥＳ,ＭＩＰ－１α和ＭＩＰ－１β的ｍＲＮＡ表达;ＴＮＦ－α可引起ＲＡＮＴＥＳ和ＭＩＰ－１β的ｍＲＮＡ表达;ＬＰＳ可引起ＭＩＰ－１α和ＭＩＰ－１β的ｍＲＮＡ表达。ＴＧＦ－β和ＩＬ－１０下调由ＬＰＳ引起的ＭＣＰ－１和ＭＩＰ－１α和ＭＩＰ－１βｍＲＮＡ表达。ＴＧＦ－β和ＩＬ－１０可抑制由ＴＮＦ－α引起的ＭＣＰ－１和ＲＡＮＴＥＳ的ｍＲＮＡ表达。ＩＬ－１０还可下调由ＴＮＦ－α引起的ＭＩＰ－１βｍＲＮＡ表达。结论成年大鼠体外试验中的星形细胞可由ＬＰＳ和前炎症因子刺激,产生β－家系趋化因子ｍＲＮＡ的表达。而调节因子如ＴＧＦ－β和ＩＬ－１０可抑制由ＩＦＮ－γ、ＴＮＦ－α和ＬＰＳ引起的β－家系趋化因子的ｍＲＮＡ表达。     

再生障碍性贫血患者细胞因子水平观察

为进一步探讨细胞免疫对ＡＡ发病的影响，阐明细胞因子在ＡＡ患者中变化的基础与临床意义，采用酶联免疫试剂盒ＥＬＩＳＡ法对３８例ＡＡ患者及２０例正常人外周血单个核细胞（ＰＢＭＮＣ）培养上清诱生Ｇ－ＣＳＦ，ＩＬ－６，ＴＮＦα，ＩＦＮα及ＩＬ－８水平进行测定，同时采用改良ＡＰＡＡＰ法观察外周血Ｔ细胞亚群及ＨＬＡ－ＤＲ抗原表达，结果ＡＡ患者ＰＢＭＮＣ培养上清中Ｇ－ＣＳＦ阳性率减低，ＩＬ－６，ＴＮＦαＩＦＮα及     

逆转录病毒载体介导入GM—CSF基因转染肿瘤细胞

应用逆转录病毒载体ｐＺＩＰＮｅｏＳＶ介导入ＧＭ－ＣＳＦ基因转染肿瘤细胞获得表达。经Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ将含有人ＧＭ－ＣＳＦ基因的重组逆转录病毒功茶ｐＺＩＰ－ＧＭ转染兼性病毒包装细胞系ＰＡ３１７，继之用病毒睡获感染人肝癌细胞ＳＭＭＣ７７２１和人胃癌ＢＧＣ－８２３，经ＧＭ－ＣＳＦＪ依赖细胞株ＴＦ１活活和双抗体夹心法ＥＬＩＳＡ法测定表明：人ＧＭ－ＣＳＦ基因在人肿瘤中获得稳定高效表达。     

逆转录病毒载体介导的IL-4基因修饰对HL-60细胞增殖及T细胞功能的影响

目的观察ＩＬ－４基因转染对ＨＬ－６０增殖及Ｔ细胞功能的影响及其可能机制。方法采用逆转录病毒载体介导基因转染法将人ＩＬ－４基因导入髓系白血病细胞ＨＬ－６０,观察高表达外源性ＩＬ－４基因ＨＬ－６０株的增殖反应及其诱导的正常人ＰＢＭＣ增殖,ＩＬ－２、ＩＬ－６、ＩＦＮ－γ基因表达及肿瘤特异性ＣＴＬ杀伤活性。结果ｒＩＬ－４或瘤细胞产生的ＩＬ－４早期促进ＨＬ－６０细胞增殖,培养５天后则明显抑制其增殖;与ｒＩＬ－４处理的ＨＬ－６０细胞比较,ＩＬ－４基因修饰的ＨＬ－６０细胞明显促进正常人ＰＢＭＣ增殖并合成ＩＬ－２、ＩＬ－６及ＩＦＮ－γｍＲＮＡ,其诱导的特异性ＣＴＬ杀伤活性明显高于野生型ＨＬ－６０、仅导入载体的ＨＬ－６０和加入ｒＩＬ－４共育的ＨＬ－６０细胞诱导者。结论ＩＬ－４基因转染在影响ＨＬ－６０细胞增殖和分化过程的同时,可能促进某些抗原（如ＭＨＣⅠ类抗原）的抗原性,从而有利于机体建立有效的抗肿瘤免疫反应。     

人参总皂甙对造血生长因子活性及其mRNA表达的影响

目的　探讨人参“补气生血”的现代生物学机理。　方法　采用核酸分子原位杂交和造血生长因子生物活性检测等技术,研究人参总皂甙（ＴＳＰＧ）对造血生长因子活性及其ｍ ＲＮＡ表达的影响。　结果　ＴＳＰＧ能显著促进小鼠骨髓基质细胞（ＢＭＳＣ）、腹腔巨噬细胞（ＰＭ）和脾细胞（ＳＰＣ）的粒－巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）及白细胞介素－６（ＩＬ－６）ｍ ＲＮＡ的表达,经ＴＳＰＧ诱导制备的ＢＭＳＣ、ＰＭ和ＳＰＣ条件培养上清液含有较高的爆式红系集落刺激活性（ＢＰＡ）、粒－巨噬细胞集落刺激活性（ＧＭ－ＣＳＡ）和巨核细胞集落刺激活性（ＭＫ－ＣＳＡ）。　结论　ＴＳＰＧ促进血细胞生成的机理与其诱导造血生长因子的基因表达有密切关系。     

宫颈癌细胞产生的免疫抑制因子对IL－2作用的影响

人宫颈癌细胞产生的免疫抑制因子（ＴＤＳＦ）作用于人外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）６ｈ，即可抑制白细胞介素２（ＩＬ－２）产生，与对照组相比，Ｐ＜０．０１。当ＴＤＳＦ存在时，经ＰＨＡ－Ｐ驯化的ＰＢＭＣ效应细胞对外源性ＩＬ－２反应显著减弱，表明ＴＤＳＦ能抑制ＩＬ－２的作用。ＰＨＡ－Ｐ刺激ＰＢＭＣ增殖，但ＴＤＳＦ使其增殖抑制。表明ＴＤＳＦ能抑制ＩＬ－２产生及其作用；抗癌药对ＴＤＳＦ的分泌有部分阻抑作用。     

OKT3＋rhIL－2激活胎儿脾细胞的研究

观察了１８～２８周龄胎儿脾单个核细胞（ＦＳＭＣ）在体外对ＯＫＴ３＋ｒｈＩＬ－２联合刺激的反应性，结果发现：ＯＫＴ３单独能活化ＦＳＭＣ，最适浓度ＯＫＴ３与ｒｈＩＬ－２联合对ＦＳＭＣ有强协同刺激作用。ＯＫＴ３刺激ＦＳＭＣ后明显促进ＩＬ－２Ｒ表达，表明ＯＫＴ３对ＦＳＭＣ的括化作用与ＩＬ－２／ＩＬ－２Ｒ途径相关。ＯＫＴ３＋ｒｈＩＬ－２协同诱导的ＦＳＭｃ能产生ＮＫ和ＬＡＫ活性，且ＬＭ活住较单用ｒｈＩＬ－２诱导者强，间接免疫荧光染色ＦＡＣＳ分析显示，ＯＫＴ３＋ｒｈｌＬ－２协同激活的ＦＳＭＣ主要是ＣＤ８￣＋Ｔ细胞。结果表明ＦＳＭＣ与成人ＰＢＭＣ－样能被ＯＫＴ３活化。     

宫颈癌细胞产生的免疫抑制因子对IL－2作用的影响

人宫颈癌细胞产生的免疫抑制因子（ＴＤＳＦ）作用于人外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）６ｈ，即可抑制白细胞介素２（ＩＬ－２）产生，与对照组相比，Ｐ＜０．０１。当ＴＤＳＦ存在时，经ＰＨＡ－Ｐ驯化的ＰＢＭＣ效应细胞对外源性ＩＬ－２反应显著减弱，表明ＴＤＳＦ能抑制ＩＬ－２的作用。ＰＨＡ－Ｐ刺激ＰＢＭＣ增殖，但ＴＤＳＦ使其增殖抑制。表明ＴＤＳＦ能抑制ＩＬ－２产生及其作用；抗癌药对ＴＤＳＦ的分泌有部分阻抑作用。     

造血生长因子促进RV介导LacZ-NeoR基因在人骨髓造血细胞中转染的机制

目的：本文探索了不同组合的造血生长因子ＳＣＦ、ＩＬ３及ＩＬ６对逆转录病毒（ＲＶ）介导的ＬａｃＺ－ＮｅｏＲ双标志基因转染人骨髓造血细胞转染效率、表达水平的影响及其相关机理。方法：采用ＲＶ转染人骨髓非粘附造血细胞（ＮＡＢＭＣ）及经ＳＣＦ、ＩＬ３及ＩＬ６不同组合预激４８ｈ后的ＮＡＢＭＣ。经荧光素二－β－Ｄ－半乳糖呋喃苷脂（ＦＤＧ）标记的半乳糖苷酶、Ｇ４１８ＲＣＦＵ－ＧＭ及ＰＣＲ／Ｓｏｕｒｔｈｅｒｎ－ｂｌｏｔ检测ＮｅｏＲ和ＬａｃＺ基因的表达。结果：早期造血生长因子（ＨＧＦｓ）的预激明显改善了ＲＶ介导的ＬａｃＺ－ＮｅｏＲ基因在人骨髓造血细胞中的转染效率与表达水平,ＳＣＦ＋ＩＬ３＋ＩＬ６＞ＳＣＦ＋ＩＬ３＞ＩＬ３＋ＩＬ６＞ＳＣＦ＋ＩＬ６。氚标记脱氧胸苷（３Ｈ－ＴｄＲ）自杀及５－溴脱氧尿苷－碘化丙啶（ＢｒｄＵ－ＰＩ）双标流式细胞仪（ＦＣＭ）检测显示,ＨＧＦｓ预激后人骨髓造血细胞及ＣＦＵ－ＧＭ的Ｓ期比例显著提高。结论：ＳＣＦ＋ＩＬ３＋ＩＬ６的联合预激可显著改善ＲＶ介导的外源基因在人骨髓造血细胞中的转染效率与表达水平,这可能与ＨＧＦｓ预激后明显提高人骨髓造血细胞及ＣＦＵ－ＧＭ的Ｓ期比例密切相关     

以pMSEx—1作为共转染质粒观察人NF—IL6过量表达对NIH3T …

我们曾以ｐＳＶ２－ｎｅｏ作为共转染质粒观察到ＮＦ－ＩＬ６具有转化基因活性。本文以ｐＭＥＳｘ－１（含ｎｅｏ抗性基因）质粒作为共转染质粒，发现能表达有义ＮＦ－ＩＬ６的ＮＩＨ３Ｔ３转染子，可同时出现转化形态的克隆和扁平形态的克隆，二者比例６：４，且ＮＦ－ＩＬ６的表达状态相似。我们提出，ＮＦ－ＩＬ６在ＮＩＨ３Ｔ３细胞表现为转化基因活性时，作用方式具有随机性。本文还提出，ｐＳＶ－ｎｅｏ可能是ＮＩＨ３Ｔ３细胞     

造血生长因子促进RV介导LacZ—Neo^R基因在人骨髓造血细胞中 …

目的：本文探索了不同组合的造血生长因子ＳＣＦ、ＩＬ３及ＩＬ６对逆转录病毒（ＲＶ）介导的ＬａｃＺ－Ｎｅｏ＾Ｒ双标志基因转染人骨髓造血细胞转染效率、表达水平的影响及其相关机理。方法：采用ＲＶ转染人骨髓非粘附造血细胞（ＮＡＢＭＣ）及经ＳＣＦ、ＩＬ３及ＩＬ６不同组合预激４８ｈ后的ＮＡＢＭＣ。经荧光素二－β－Ｄ－半乳糖呋喃苷脂（ＦＤＧ）标记的半乳糖苷酶、Ｇ４１８＾ＲＣＦＵ－ＧＭ及ＰＣＲ／Ｓｏｕｒｔｈｅｒｎ－     

逆转录病毒载体介导人GM－CSF基因转染肿瘤细胞

应用逆转录病毒载体ｐＺＩＰＮｅｏＳＶ（Ｘ）介导人ＧＭ－ＣＳＦ基因转染肿瘤细胞获得表达。经Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ将含有人ＧＭ－ＣＳＦ基因的重组逆转录病毒载体ｐＺＩＰ－ＧＭ转染兼性病毒包装细胞系ＰＡ３１７，继之用病毒收获液感染人肝癌细胞ＳＭＭＣ７７２１和人胃癌ＢＧＣ－８２３，经ＧＭ－ＣＳＦ依赖细胞株ＴＦ１测活和双抗体夹心法ＥＬＩＳＡ测定表明：人ＧＭ－ＣＳＦ基因在人肿瘤细胞中获得稳定高效表达。为进─步建立ＧＭ－ＣＳＦ的转基因治疗模型提供了基础。     

急性丙型肝炎患者免疫状况的研究

用间接免疫荧光法、酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）及ＬＤＨ释法，对１６例急性输血后丙型肝炎（抗－ＨＣＶ、ＨＣＶ－ＲＮＡ均阳性）患者，分别进行外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）的Ｔ细胞亚群计数、Ｔ４／Ｔ８比值、Ｔａｃ受体的检测及血清可溶性白细胞介素２受体（ｓＩＬ－２Ｒ）ＮＫ细胞活性的测定。并与正常人组比较，经ｔ检验发现，急性丙型肝炎患者的Ｔ４亚群所占百分比、Ｔ４／Ｔ８比值及ＰＢＭＣＴａｃ受体表达均明显低于正常人组（Ｐ＜０．０５），而ＮＫ细胞活性、血清ｓＩＬ－２Ｒ明显高于正常人组（Ｐ＜０．０５）。患者的这些免疫状态改变，可能对其发病机理的研究有一定意义。