RASSF1A转录本在肺癌组织中表达及其临床意义

目的　探讨RASSF1A(RAS相关区域家族 1A)基因转录表达与肺癌发生、发展的关系。方法　采用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)的方法检测 4 7例肺癌患者癌组织及相应癌周正常组织中RASSF1AmRNA的表达水平。结果　 (1)RASSF1AmRNA在所有正常组织中表达 ,而在肺癌癌组织中存在较高的表达缺失率 (5 3 2 % )。 (2 )淋巴结转移阳性者癌组织中RASSF1AmRNA表达缺失率 (70 4 % )明显高于淋巴结转移阴性者 (30 0 % ) (P <0 0 1) ;(3)RASSF1AmRNA表达缺失率与肺癌分期有关 ,越晚病例RASSF1A表达缺失率越高 (P <0 0 5 ) ;(4 )RASSF1AmRNA表达缺失与肿瘤组织学类型、肿瘤分化程度及吸烟指数未见显著相关 (P >0 0 5 )。结论　RASSF1A转录表达缺失 ,它可能参与调控肺癌的发生、发展过程 ,并进而影响其生物学特点及预后。     

非小细胞肺癌组织中RASSF1 A蛋白的表达

目的:检测非小细胞肺癌(NSCLC)组织中RASSF1A蛋白的表达.方法:采用Western Blot检测96例NSCLC患者癌组织及相应的癌旁正常肺组织中RASSF1A蛋白的表达.结果:①在NSCLC组织中,RASSF1A失表达或低表达率达60.4%(58/96),而相应的癌旁正常肺组织均正常表达,2者比较,差异有统计学意义(P<0.05).②RASSF1A表达下调或缺失与肿瘤的病理分期和淋巴结转移有关(P<0.05),但与患者的性别、年龄、是否吸烟,肿瘤的组织学类型及分化程度无关(P>0.05).结论:RASSF1A在中国人NSCLC组织中有较高比例的表达下调或缺失,该蛋白低表达或阴性表达可能促进NSCLC的发生、发展及淋巴结转移.     

喉鳞状细胞癌中RASSF1A基因启动子区甲基化及蛋白表达

目的：探讨RASSF1A基因启动子区甲基化与喉癌的关系。方法：运用甲基化特异性PCR,检测RASSF1A基因在48例喉癌组织、相对应癌旁组织及48例正常人外周血中的启动子区甲基化情况。用Western blotting方法检测喉癌组织、癌旁组织及正常人外周血中RASSF1A表达情况。结果：在48例喉癌组织、相对应的癌旁组织和48份正常人外周血中,RASSF1A基因启动子区分别有34例（70.83%）、11例（22.92%）和6例（12.50%）发生了甲基化, 喉癌组织甲基化程度明显高于癌旁组织和正常人外周血（P<0.05）。在48例喉癌组织中27例（56.25%）不能正常表达RASSF1A蛋白,而相对应癌旁组织中仅有8例（16.67%）,喉癌组织中RASSF1A蛋白的表达程度明显低于癌旁组织(P<0.01)。启动子区发生甲基化的34例喉癌组织中共有25例（73.53%）呈弱阳性,而7例未发生甲基化的喉癌组织中为1例（14.29%）,两组间比较差异具有显著性(P<0.05)。结论：RASSF1A基因启动子区甲基化与喉癌的发生有关,有望成为喉癌诊断的分子标志。     

肾细胞癌RASSF1A基因启动子区甲基化状况与表达水平研究

目的 检测19例肾细胞癌患者癌组织及癌旁组织Ras相关区域家族蛋白1A(RASSF1A)基因启动子区甲基化情况并检测其mRNA表达水平,探索两者之间的联系.方法 收集肾细胞癌患者癌组织及相应癌旁组织19份,分别提取其基因组DNA,以甲基化特异性PCR(Methylation special PCR, MSP)法检测RASSF1A基因启动子区甲基化情况,并以QPCR法检测了RASSF1A基因的mRNA表达水平.结果 19例中有10例肾细胞癌患者癌组织存在高甲基化, mRNA表达水平表达降低,二者之间存在显著负相关性(r=-0.8734, P<0.01).结论 肾细胞癌中RASSF1A基因启动子区存在高甲基化,并抑制该基因的表达.     

食管癌组织RASSF1A的表达及其与基因启动子甲基化的关系

目的探讨RASSF1A表达及其基因启动子甲基化在食管癌发生中的作用。方法取40例食管癌患者肿瘤组织及癌旁组织,用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测RASSF1A的mRNA表达,用甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）检测RASSF1A基因启动子的甲基化。结果 RASSF1A mRNA在食管癌组织、癌旁组织表达缺失率分别为77.5%（31/40）、2.5%（1/40）,差异有统计学意义（P〈0.05）。癌旁组织均未发现甲基化,而癌组织中甲基化率为67.5%（27/40）。所有甲基化的食管癌组织RASSF1A mRNA表达缺失。结论食管癌的发生与RASSF1A基因表达缺失有关联,而RASSF1A基因启动子区甲基化是RASSF1A基因表达缺失的原因。     

肾癌组织中RASSF1A和BLU基因的异常甲基化

目的:观察肾癌组织中RASSF1A和BLU基因启动子甲基化状态,探讨二者在肾癌发生中的可能作用.方法:采用甲基化特异性PCR(MSP)技术检测26例肾癌组织和相应癌旁组织中RASSF1A和BLU基因启动子甲基化状态,分析二者检测结果.结果:肾癌组织中17例(65.4%)RASSF1A基因异常甲基化表达,相应癌旁组织中无RASSF1A基因异常甲基化表达;11例(42.3%)肾癌组织中BLU基因高甲基化,相应癌周组织中未发现BLU基因高甲基化.结论:肾癌组织中RASSF1A和BLU基因启动子高度甲基化,表明RASSF1A和BLU基因甲基化可能与肾癌的发生相关.     

RASSF2基因甲基化与卵巢透明细胞癌的相关性

目的探讨RASSF2基因异常甲基化与卵巢透明细胞癌的相关性。方法分别通过甲基化特异性PCR技术及免疫组化技术检测48例卵巢透明细胞癌组织中RASSF2基因的甲基化及蛋白表达情况。结果透明细胞癌组织中RASSF2基因的甲基化发生率(45.83%,22/48)及蛋白表达缺失发生率(47.92%,23/48)均显著高于正常卵巢组织及癌旁异位内膜组织,差异有统计学意义(P<0.05)。RASSF2基因甲基化与其蛋白表达缺失具有相关性。结论 RASSF2基因异常甲基化所导致的蛋白表达缺失可能在卵巢透明细胞癌的发病机制中具有重要作用。     

乳头状甲状腺癌组织中RASSF1A基因甲基化及其临床意义

目的:探讨乳头状甲状腺癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)组织中RASSF1A基因甲基化表达及其临床意义。方法:采用甲基化特异性PCR(methylation-specific polymerase chain reaction,MSP)检测28例PTC组织及癌旁组织RASSF1A基因甲基化状态,结合临床资料,分析RASSF1A基因甲基化与年龄、性别、病理分期、淋巴结转移间的相关性。结果:28例PTC组织中有15例(53.6%)RASSF1A基因存在甲基化,相应癌旁甲状腺组织仅7例(25.0%)存在甲基化。RASSF1A基因异常甲基化在PTC肿瘤组织中显著高于癌旁组织(P=0.029)。在临床分期Ⅱ~Ⅲ期组(87.5%,7/8)显著高于Ⅰ期组(35.0%,7/20)(P<0.05);而在年龄(P=0.385)、性别(P=0.165)、淋巴结转移(P=0.420)方面差异无统计学意义。结论:RASSF1A基因甲基化在PTC的发生、发展中起重要作用。     

RASSFIA基因启动子甲基化与乳腺癌相关性研究

目的:研究抑癌基因RASSF1A在乳癌组织中的表达情况及与RASSF1A基因启动子甲基化的关系。方法:运用RT-PCR方法检测40例乳癌组织和6例乳腺良性肿瘤和5例正常乳腺组织中RASSF1A的表达,运用甲基化特异PCR方法检测这些组织中RASSF1A基因启动子的甲基化情况。结果:RASSF1A基因在40例乳腺癌组织中8例(20%)存在表达缺失,差异无统计学意义(P>0.05)。但其表达量明显低于正常乳腺组织(P<0.05)。乳腺癌组织的RASSF1A基因启动子甲基化频率(65%)明显高于正常乳腺组织(20%)和乳腺良性肿瘤(17%)(P<0.05)。结论:乳腺癌组织中RASSF1A基因启动子的高甲基化是引起RASSF1A基因表达下调的重要原因,在肿瘤的发生和发展中起重要的调控作用。     

抑癌基因RASSF1A在肝癌中表达的研究

目的研究抑癌基因RASSF1A在肝癌组织以及肝癌细胞株中的表达情况及其与临床相关因素间的关系。方法收集24例手术切除的肝癌及其癌旁组织以及4株肝癌细咆株（SMMC7721、HepG2、BEL7402和BEL7703（由国家人类基因组南方中心提供）。用RT-PCR和Northern Blot的方法来分析基因RASSF1A在肝癌组织和肝癌细胞株中的表达情况。结果67％的原发性肝癌组织中未检测到RASSF1A的mRNA，而相应的癌旁组织中仅33％的样本未表达RASSF1A；75％（3／4）肝癌细胞株也未表达RASSF1A。结论RASSF1A在肝癌中是一潜在的抑癌基因．RASSF1A基因的失表达在原发性肝癌的发生发展中起重要作用，检测RASSF1A的表达情况可用于对肝癌的早期发现和早期诊断，结合临床相关因素对肝癌预后评估也有帮助。     

肝癌患者血浆RASSF1A异常甲基化检测的意义

目的:采用甲基化特异性PCR法(MSP)检测41例原发性肝癌(HCC)患者血浆中游离Ras相关结构域家族蛋白1A(RASSF1A)异常高甲基化情况,探讨血浆RASSF1A检测在肝癌诊断中的意义. 方法:收集患者血浆,提取游离DNA,亚硫酸氢钠修饰并纯化,以甲基化特异性引物及非甲基化引物进行PCR. 结果: 41例患者血浆中有17例RASSF1A呈现异常高甲基化(41.5%),对照血浆均为阴性. 患者一般情况、临床病理资料等与血浆中RASSF1A异常高甲基化检测结果无关(P＞0.05);在10例AFP阴性的HCC患者中,有7例结果为阳性. 结论:血浆RASSF1A甲基化检测对肝癌的早期诊断及筛选有重要意义,并有助于判断预后.     

KLF6mRNA Expression in Primary Hepatocellular Carcinoma

Hepatocellularcarcinoma(HCC)isoneofthethreeleadingcausesofcancerdeathsworldwide.Itsprogressionisbelievedtoresultfromtheaccumulationofgeneticalterationsatnumerouslocicontrollinggrowthandproliferation.Asamodelforbothmultistepandmultipathwaycarcinogenesis,he…     

RASSF1A基因表达对肝癌细胞化疗药物敏感性的影响

目的:研究RASSF1A提高肝癌细胞化疗药物敏感性的作用。方法:通过脂质体介导的基因转染法将RASSF1A基因的真核表达载体及空载体转染肝癌细胞株QGY-7703,G418筛选稳定表达株,并以RT-PCR和Western Blot进行鉴定目的基因的表达。化疗药物阿霉素(ADM)、丝裂霉素(MMC)、鬼臼乙叉甙(VP-16)、5-氟尿嘧啶(5-FU)、顺铂(DDP)分别作用各细胞株后,检测各细胞株的生长抑制率。结果:经800μg/ml的G418最佳筛选浓度筛选QGY-7703细胞株,成功建立稳定表达RASSF1A基因的肝癌细胞株。以QGY-7703细胞为对照,MMC对表达RASSF1A基因的肝癌细胞的生长抑制率最大为21%。结论:RASSF1A基因的表达可明显提高肝癌细胞对MMC的敏感性。RASSF1A的表达不影响肝癌细胞QGY-7703对ADM、VP-16、5-FU和DDP敏感性。     

原发性肝癌中HIF-1α、P-gp的表达及相关性的研究

目的：观察HIF-1α和P-gp在原发性肝癌（HCC）中的表达,探讨两者相互作用的关系。方法：采用免疫组织化学法检测36例HCC及20例非肿瘤肝组织中P-gp和HIF-1α的表达,对两者均表达阳性的病例,进行免疫组织化学双标记染色。结果：36例HCC中HIF-1α和P-gp高表达,阳性率分别为58.33%和77.78%,明显高于非肿瘤肝组织（P＜0.001）。两者表达呈正相关（r=0.388,P＜0.05）。18例两者均表达阳性的病例中,免疫双标共表达率为61.1%。结论：HCC中HIF-1α和P-gp的表达密切相关,HIF-1α可通过上调P-gp的表达实现对化疗药物的耐受,HIF-1α有望成为评价及逆转肿瘤多药耐药的新指标。     

胃癌RASSF1A的表达与幽门螺杆菌感染关系的研究

目的：探讨RAS相关区域家族基因1A（RASSF1A）在胃腺癌中的表达及与幽门螺杆菌（Hp）感染的关系。方法：用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测48例胃癌组织及15例癌旁正常组织中RASSF1A mRNA的表达,用PCR法检测上述胃癌组织中的Hp感染情况。结果：RASSF1A在胃癌组织中转录表达缺失率为50.0%,其表达缺失率与胃癌分化程度、淋巴结转移及TNM分期有一定关系（P〈0.05）,与其组织学类型无明显关系（P〉0.05）。胃癌组织中Hp感染率为62.5%（30/48）,RASSF1A的表达缺失与Hp感染组之间无相关性（P〉0.05）。结论：RASSF1A是胃癌的相关抑癌基因,RASSF1A的表达缺失与胃癌的临床分期和病理分级具有一定关系,RASSF1A的表达缺失与Hp感染之间无明显关系,它们可能是两个独立的致病因素。     

RASSF2A Promoter Methylation in Hepatitis B Virus-related Hepatocellular Carcinogenesis and Its Correlation with Elevated Serum α-Fetoprotein Level

Loss of the RASSF2A expression induced by methylation-mediated silencing has been reported in several human cancers, but the methylation status of RASSF2A in hepatocellular carcinoma （HCC） is rarely studied so far. In this study, we investigated the RASSF2A expression and its methylation status in a cohort of 45 hepatitis B virus-associated HCC tissues and their adjacent non-carcinoma tissues by using RT-PCR and MS-PCR. Promoter methylation of RASSF2A was found in 31 （68.9%） out of 45 HCC tissues and 12 （40%） out of 30 adjacent normal tissues, respectively （P〈0.05）. The methylation status of PASSF2A was closely associated with the loss of RASSF2A expression and elevated serum α-fetoprotein level, but not significantly with clinical stage, hepatic fibrosis and K-ras mutation. It was concluded that aberrant methylation of the RASSF2A gene with the subsequent loss of RASSF2A expression plays an important role in the pathogenesis of HCC.     

Identification of biomarkers for hepatocellular carcinoma using network-based bioinformatics methods

Background

Hepatocellular carcinoma (HCC) is one of the most common types of cancer worldwide. Despite several efforts to elucidate molecular mechanisms involved in this cancer, they are still not fully understood.

Methods

To acquire further insights into the molecular mechanisms of HCC, and to identify biomarkers for early diagnosis of HCC, we downloaded the gene expression profile on HCC with non-cancerous liver controls from the Gene Expression Omnibus (GEO) and analyzed these data using a combined bioinformatics approach.

Results

The dysregulated pathways and protein-protein interaction (PPI) network, including hub nodes that distinguished HCCs from non-cancerous liver controls, were identified. In total, 29 phenotype-related differentially expressed genes were included in the PPI network. Hierarchical clustering showed that the gene expression profile of these 29 genes was able to differentiate HCC samples from non-cancerous liver samples. Among these genes, CDC2 (Cell division control protein 2 homolog), MMP2 (matrix metalloproteinase-2) and DCN (Decorin were the hub nodes in the PPI network.

Conclusions

This study provides a portfolio of targets useful for future investigation. However, experimental studies should be conducted to verify our findings.     

HCC患者GSTP1基因启动子区CpG岛甲基化状态研究

目的 检测人原发性肝癌（HCC）中抑癌基因GSTP1的启动子区CpG岛甲基化的状况，并探讨其在肝癌发生中的作用。方法 以已知的GSTP1基因启动子区CpG岛甲基化阳性的乳腺癌细胞株MCF-7为阳性对照，以11例正常人外周血单核细胞（PBMC）DNA为阴性对照，用甲基化特异性PCR（MSP）的方法对26例肝细胞癌患者的癌、远癌组织中GSTP1基因启动子区CpG岛甲基化的状态进行检测。结果 在26例原发性肝癌中GSTP1基因启动子区CpG岛甲基化在癌组织为88％（23／26），在远癌组织中为69％（18／26）；而在11例正常人外周血单核细胞均为甲基化阴性。结论 抑癌基因GSTP1基因启动子区CpG岛高甲基化可能是肝癌发生早期的分子事件，在人原发性肝癌的发生发展中具有重要的作用。