羟基红花黄色素A缓解大鼠心肌细胞凋亡作用的研究

目的 以整体和离体实验观察羟基红花黄色素A(HSYA)缓解心肌细胞凋亡的作用.方法 以异丙肾上腺素(ISO)造成人鼠急性心肌缺血,以TUNEL法检测心肌组织细胞凋亡,免疫组化法和RT-PCR法观察心肌组织中bax、bcl-2基因表达的变化;用缺精缺氧/再复氧模型诱导原代培养心肌细胞凋亡,以PI 流式细胞法观察凋亡情况,以Rhodamine 123荧光法考察线粒体膜电位的变化.结果 60、120、240 mg/kg HSYA ip给药可以减轻心肌缺血大鼠的线粒体肿胀、核凝集及固缩,降低心肌细胞凋亡率(P＜0.01),下调心肌组织Bax蛋白(P＜0.05)及bax mRNA的表达(P＜0.01).0.64、1.3、2.5 mmol/L HSYA可减少缺氧/再复氧造成的细胞凋亡(P＜0.05),且可缓解该损伤造成的心肌线粒体膜电位下降(P＜0.05).结论 抑制心肌细胞凋亡是HSYA缓解心肌缺血的重要机制.     

黄芪甲苷联合羟基红花黄色素A对小鼠心肌梗死的保护作用

目的:观察黄芪甲苷联合羟基红花黄色素A预处理对心肌梗死小鼠心梗面积、心肌细胞凋亡及炎症因子表达的影响。方法:50只(SPF级)C57小鼠雌雄各半,随机分为假手术组(Sham),心肌梗死模型组(MI),黄芪甲苷预处理组(MI+AsⅣ,3.5 mg·kg-1),羟基红花黄色素A预处理组(MI+HSYA,10 mg·kg-1),黄芪甲苷+羟基红花黄色素A联合预处理组(MI+AsⅣ+HSYA,3.5 mg·kg-1+10 mg·kg-1)。造模前连续腹腔注射7 d,每天1次;结扎左冠状动脉前降支建立小鼠心肌梗死模型,用伊文思蓝-TTC双染色方法区分心肌梗死后心肌的梗死区、缺血危险区(AAR)和左心室总面积(LV);Image J软件计算心肌梗死面积,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测心肌细胞中B细胞淋巴癌/白血病-2基因(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),活化的天冬氨酸蛋白水解酶-3(cleaved-Caspase-3)的表达水平,酶联免疫吸附法(ELASA)检测血清白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6),肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的含量。结果:与模型组相比,黄芪甲苷预处理组、羟基红花黄色素A预处理组及联合预处理组均可显著减小小鼠心肌梗死面积,且联合预处理组效果优于单药预处理组(P0.05,P0.01);与假手术组相比,模型组的缺血面积和梗死面积增大,单独给药组与联合给药组的缺血面积及梗死面积均减小(P0.05,P0.01);与模型组与假手术相比,黄芪甲苷联合羟基红花黄色素A可上调心肌细胞中抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,下调促凋亡蛋白cleaved-Caspase-3和Bax的表达;黄芪甲苷与羟基红花黄色素A联合可降低心肌梗死小鼠血清中IL-6,TNF-α的含量(P0.05,P0.01)。结论:黄芪甲苷联合羟基红花黄色素A可减小小鼠心肌梗死面积,抑制心肌梗死后的心肌细胞凋亡及炎症反应,发挥保护心肌损伤的作用。     

大鼠口服红花水提物和红花黄色素后羟基红花黄色素A的排泄研究

建立简便的高效液相色谱法(HPLC)测定大鼠口服红花水提物和红花黄色素后尿、粪和胆汁中主要活性成分羟基红花黄色素A(HSYA)的含量。色谱柱为Hypersil BDS-C18(250×4．6mm,5μm),流动相为乙腈-0．3%冰醋酸水溶液梯度洗脱,检测波长320nm,葛根素或对羟基苯甲醛为内标。尿、粪和胆汁中的HSYA的日内精密度小于3．1%,日间精密度小于5．8%。提取回收率为79．2%～102．1%。该方法首次研究了大鼠口服红花水提物和红花黄色素后羟基红花黄色素A的排泄情况。     

羟基红花黄色素A对缺血性脑卒中神经保护作用及机制的研究进展

缺血性脑卒中是因血管栓塞导致局部脑血流急剧减少或中断引起的脑组织缺血缺氧损伤,常伴有严重的神经功能障碍。羟基红花黄色素A是活血化瘀药红花的主要成分之一。现代药理学研究发现,它在缺血性心脑血管疾病中发挥神经保护作用可缓解缺血再灌注造成的各种损伤,但其发挥作用的具体机制仍不清楚。通过检索红花在脑卒中应用的相关文献,笔者就羟基红花黄色素A在缺血性脑卒中发挥保护作用的机制包括抗氧化应激、抑制神经炎症反应、抗细胞凋亡、保护血脑屏障及促进突触可塑性等方面进行综述。以期为羟基红花黄色素A作为神经保护药物在脑卒中的临床应用中提供理论支持。     

羟基红花黄色素A抗氧化作用的研究

红花Carthamus tinctorius L.为活血化瘀药，可活血通经、化瘀止痛，临床上主要以水煎液人药。组织缺血一再灌注等过程中，自由基引发的氧化反应为许多血液循环障碍疾病的重要损伤机制。红花水提液可清除羟自由基，抑制小鼠肝匀浆脂质过氧化。羟基红花黄色素A(hydroxysafflor yellow A，HSYA)为红花主要水溶性活血化瘀有效成分，     

羟基红花黄色素A对LPS所致内皮细胞损伤的保护作用

目的:观察羟基红花黄色素A(HSYA)对脂多糖(LPS)诱导内皮细胞损伤的保护作用.方法:建立内皮细胞损伤模型,光镜观察内皮细胞形态的改变,RT-PCR法检测ICAM-1,VCAM-1,TNF-α,IL-6 mRNA的表达水平,免疫荧光染色法观察NF-kB的活化.结果:HSYA可显著抑制LPS诱导的内皮细胞内ICAM-1,VCAM-1,TNF-α,IL-6 mRNA的表达,抑制NF-kB的激活和核转运.结论:HSYA可缓解LPS所致的血管内皮细胞的炎症损伤.     

羟基红花黄色素A对大鼠心肌细胞缺血再灌注损伤的保护作用

目的:探讨羟基红花黄色素A对心肌缺血再灌注损伤(I/R)的影响。方法:采用大鼠冠状动脉左前降支结扎40min,再灌注160min建立实验性心肌I/R损伤模型,于结扎冠状动脉10min后股静脉分别给于4、8、16mg/kg羟基红花黄色素A,测定心肌梗死面积、血清中乳酸脱氢酶(LDH)、血清肌钙蛋白(c Tn T)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)活性的变化,血浆中血浆血栓素(TXB2)、6-酮-前列腺1a(6-keto-PGF1a)含量,心肌组织中IL-6、IL-1β、TNF-α水平和MPO活性。结果:羟基红花黄色素A 4、8、16mg/kg各剂量均可不同程度降低大鼠急性心肌梗死面积,减少心肌酶的漏出,升高6-keto-PGF1a含量,并可显著降低TXB2含量;羟基红花黄色素A 4、8、16mg/kg各剂量组可不同程度降低心肌组织炎性因子IL-6、IL-1β、TNF-α水平和MPO活性,其中对TNF-α水平和MPO活性的影响尤为显著。结论:羟基红花黄色素A对心肌I/R损伤具有较好的保护作用,可能与其抑制血小板聚集、抑制炎症反应有关。     

羟基红花黄色素A注射液调节血脂作用初探

目的 观察羟基红花黄色素A调节血脂的作用,并探讨其初步机理.方法 将50只小鼠按体重随机分成正常动物组(A组)、高脂血症模型组(B组)、羟基红花黄色素A注射液低、中、高三种剂量组(C、D、E组).C、D、E组每天分别注射10、40、70 mg/kg羟基红花黄色素;A、B组每天分别注射生理盐水0.4 ml.连续注射3d后...     

大鼠口服红花水提物和红花黄色素后羟基红花黄色素A的排泄研究

建立简便的高效液相色谱法（HPLC）测定大鼠口服红花水提物和红花黄色素后尿、粪和胆汁中主要活性成分羟基红花黄色素A（HSYA）的含量。色谱柱为Hypersil BDS-C18（250×4．6mm,5μm）,流动相为乙腈-0．3%冰醋酸水溶液梯度洗脱,检测波长320nm,葛根素或对羟基苯甲醛为内标。尿、粪和胆汁中的HSYA的日内精密度小于3．1%,日间精密度小于5．8%。提取回收率为79．2%～102．1%。该方法首次研究了大鼠口服红花水提物和红花黄色素后羟基红花黄色素A的排泄情况。     

注射用红花黄色素与羟基红花黄色素A对大鼠急性心肌缺血的保护作用比较

目的 比较注射用红花黄色素(SY)和羟基红花黄色素A(HSYA)对急性心肌缺血(acute myocardial ischemia,AMI)损伤大鼠的保护作用.方法 采用随机数字表法将60只雄性大鼠随机分为5组各12只:假手术组和模型组(生理盐水)、注射用SY组(90 mg/kg)、HSYA小、大剂量组(20mg/kg,40mg/kg).采用冠状动脉结扎法复制急性心肌缺血损伤大鼠模型,经腹腔注射给予不同剂量的注射用SY和HSYA.NBT染色法检测心肌梗死面积,记录并分析心电图ST段的改变、检测血清CK-MB、cTnT、SOD、MDA的变化.结果 注射用SY和HSYA大剂量组可明显降低大鼠心电图ST段抬高程度[分别为(0.087±0.022)mv、(0.091±0.014)mv],减小心肌梗死面积[分别为(20.13±9.17)%、(18.36±9.38)%],降低血清CK-MB[分别为(1460.70±219.73)U/L、(1472.72±185.61)U/L],cTnT[分别为(2.345±0.883)ng/ml、(2.358±0.843)ng/ml],MDA[分别为(5.71±0.67)mmol/ml、(5.76±0.84)mmol/ml]的含量,升高血清SOD[分别为(58.27±7.99)U/ml、(56.49±5.19)U/ml]活性.结论 注射用SY和HSYA对急性心肌缺血损伤大鼠均具有保护作用.

Abstract：

Objective The comparison research of protective effect between intravenous infusion injection of safflor yellow and hydroxyl safflor yellow A on acute myocardial ischemia injury in rats. Methods Qualified 60 male Wistar rats were divided into 5 groups at random (12 in each group):Blank control group, AMI model (treated with normal saline) group, intravenous infusion injection of safflor yellow (90 mg/kg) group, HSYA low dosage (20 mg/kg) group and high dosage (40 mg/kg) group. The acute myocardial ischemia injury in rats was induced by ligating the anterior descending coronary artery in Wistar rats and administered different dosage of safflor yellow and hydroxyl safflor yellow A with intraperitoneal injection. Myocardial infarction degree (MID) was calculated by detecting myocardial infarction area with nitroblue tetrazolium(NBT) assay. The changes of ST-elevation, CK-MB, cTnT, SOD activities and MDA contents were detected and analyzed. Results The intravenous injection of safflor yellow and HSYA low dosage group can significantly decreased ST-elevation [difference is (0.087?.022)mv,(0.091?.014)mv],MID[difference is (20.13?.17)%,(18.36+9.38)%], CK-MB [difference is (1460.70+219.73)U/L, (1472.72?85.61)U/L], cTnT[difference is (2.345?.883)ng/ml, (2.358?.843)ng/ml], and MDA [difference is(5.71 ?.67) mmol/ml, (5.76?.84)mmol/ml] contents in serum, increased SOD[difference is(58.27?.99)U/ml,(56.49+5.19)U/ml]activities in serum.Conclusion It showed that intra venous injection of safflor yellow and hydroxyl safflor yellow A had the same protective effect on acute myocardial ischemia injury in rats. Hydroxyl safflor yellow A is an important portion of safflor yellow.     

谷红注射液中羟基红花黄色素A在大鼠体内的药动学研究

目的研究谷红注射液中羟基红花黄色素A在大鼠体内的药代动力学特征,比较单体状态与注射液中羟基红花黄色素A药代动力学差异。方法 HPLC法测定经尾静脉注射给药后大鼠血浆中羟基红花黄色素A的浓度,运用PKSolver 2.0软件拟合药时曲线,对药代动力学参数进行分析。结果羟基红花黄色素A单体与谷红注射液中羟基红花黄色素A的主要药代动力学参数α、β、t1/2α、t1/2β、C0、V、CL、AUC0-150、AUC0-inf分别为(0.306 9±0.136 4)和(0.091 8±0.079 3)/min,(0.016 4±0.003 1)和(0.010 5±0.003 0)/min,(2.738 6±1.163 4)和(22.020 0±19.970 3)min,(43.819 9±8.607 7)和(74.941 1±32.794 3)min,(21.309 8±2.957 3)和(26.579 9±3.763 5)μg/m L,(0.098 1±0.013 5)和(0.078 6±0.010 7)L/kg,(0.003 4±0.000 5)和(0.001 2±0.000 2)(L/kg)/min,(567.774 4±66.149 7)和(1 391.658 0±159.754 7)(min·μg)/m L,(625.723 0±96.292 6)和(1 734.929 2±222.467)(min·μg)/m L。结论与羟基红花黄色素A单体比较,谷红注射液中羟基红花黄色素A在大鼠体内的AUC明显增大。     

Effects of hydroxysafflor yellow A on the activity and mRNA expression of four CYP isozymes in rats

Ethnopharmacological relevance

In traditional therapy with Chinese medicine, hydroxysafflor yellow A (HSYA), a main active component isolated from the dried flower of Carthamus tinctorius L., is the principal efficiency ingredient of Safflor Yellow Injection. Now HSYA has been demonstrated to have good pharmacological activities of antioxidation, myocardial and cerebral protective and neuroprotective effects. The purpose of this study was to find out whether HSYA influences the effect on rat cytochrome P450 (CYP) enzymes (CYP1A2, CYP2C11, CYP2D4 and CYP3A1) by using cocktail probe drugs in vivo; the influence on the levels of CYP mRNA was also studied.

Materials and methods

A cocktail solution at a dose of 5 mL/kg, which contained phenacetin (20 mg/kg), tolbutamide (5 mg/kg), dextromethorphan (20 mg/kg) and midazolam (10 mg/kg), was given as oral administration to rats treated with short or long period of intravenous HSYA via the caudal vein. Blood samples were collected at a series of time-points and the concentrations of probe drugs in plasma were determined by HPLC–MS/MS. The corresponding pharmacokinetic parameters were calculated by the software of DAS 2.0. In addition, real-time RT-PCR was performed to determine the effect of HSYA on the mRNA expression of CYP1A2, CYP2C11, CYP2D4 and CYP3A1 in rat liver.

Results

HSYA had significant inhibition effects on CYP1A2 and CYP2C11 in rats as oriented from the pharmacokinetic profiles of the probe drugs. Furthermore, HSYA had no effects on rat CYP2D4. However, CYP3A1 enzyme activity was induced by HSYA. The mRNA expression results were in accordance with the pharmacokinetic results.

Conclusions

HSYA can either inhibit or induce activities of CYP1A2, CYP2C11 and CYP3A1. Therefore, co-administration of some CYP substrates with HSYA may need dose adjustment to avoid an undesirable herb–drug interaction.     

羟基红花黄色素A人工抗原的制备

目的研究羟基红花黄色素A(HSYA)与牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)的偶联方法,获得具有免疫原性的羟基红花黄色素A人工抗原。方法通过偶联物透析液的颜色变化、紫外图谱、红外扫描图谱及动物免疫试验来鉴定制备的人工抗原。结果HSYA-BSA人工抗原在紫外扫描中表现出HSYA和BSA的特征吸收峰;在红外扫描中HSYA-BSA具有HSYA特征官能团的吸收峰和氨基酸的特征吸收峰;间接ELISA检测结果显示产生抗HSYA的特异性抗体,血清效价可达1∶3 200;标准曲线方程计算得BSA和HSYA的结合率是1∶50。结论通过直接偶联法成功制备出具有免疫原性的羟基红花黄色素A人工抗原。     

苏木对红花中羟基红花黄色素A的药代动力学影响

目的:研究苏木对红花中羟基红花黄色素A(HSYA)的药代动力学的影响.方法:RP-HPLC测定红花单煎液和红花-苏木配伍液灌胃后正常大鼠血浆中HSYA的血药浓度,DAS 2.0药动学软件计算药动学参数.结果:红花单独给药、红花-苏木配伍给药,HSYA在体内代谢动力学模型均为二室开放模型;配伍后,HSYA的分布半衰期t1、2α、吸收半衰期t1/2Ka、表观分布容积VL/F显著减小,达峰时间tmax有所提前.结论:苏木可加快HSYA在体内的吸收和分布,加快HSYA在体内的代谢过程,减少HSYA在体内的蓄积.     

The effects of hydroxysafflor yellow A on blood pressure and cardiac function

Aim of the study

This work aims to investigate the effects of HSYA on cardiac function and blood pressure.

Materials and methods

To evaluate changes in mean arterial pressure (MAP) and heart rate (HR), different groups of pentobarbitone-anesthetized normotensive and spontaneously hypertensive rats (SHR) were treated with intravenous HSYA (0.1-3 mg/kg). Isolated WKY rat hearts in Langendorff system were employed for examining the effect of HSYA on hemodynamic. After 30 min equilibration time the isolated hearts were perfused with HSYA (30 μmol/L) in a stepwise fashion. Potassium channel inhibitors were used to determine the role of potassium channel activation in HSYA effect.

Results

Intravenous injection of the HSYA significantly reduced MAP and HR in both normotensive rats and SHR in a dose-dependent manner. HSYA reduced left ventricular systolic pressure (LVSP), left ventricular end-diastolic pressure (LVEDP), the maximum rate of increase of left ventricular pressure (+dp/dt_max) and heart rate (HR) in a dose-dependent manner. HSYA had no remarkable effect on the maximum rate of decrease of left ventricular pressure (−dp/dt_max); BK_Ca and K_ATP blocker can weakened the inhibitory effect of HSYA on heart function and HR, but K_V and K_ACh blocker did not significantly weaken the HSYA effects.

Conclusion

Our results show that HSYA could significantly reduce blood pressure and heart rate, which may be related to activation of BK_Ca and K_ATP channels.     

大孔树脂柱色谱法制备红花黄色素和羟基红花黄色素A

目的 建立简便有效的制备红花有效部位红花黄色素(safflor yellow，SY)及有效成分羟基红花黄色素A(hydroxysafflor yellow A，HSYA)的方法。方法 室温水提减压浓缩所得红花水提液上D-4020型非极性大孔树脂柱，水洗脱糖类等杂质，以30％和10％乙醇洗脱分别得SY和HSYA；采用分光光度法和HPLC法分析水洗脱除糖过程中SY和HSYA的损失率及醇洗脱SY和HSYA的回收率。结果 聚酰胺薄膜色谱结果显示SY和HSYA洗脱液分别可见4～5个和1个黄色荧光斑点。HPLC分析结果表明，两洗脱液中所含SY和HSYA纯度分别为92．4％和83．0％。在水洗除杂质和稀醇洗脱过程中，损失率和回收率分别为SY：7．5％和80．6％，HSYA：1．64％和77．3％。结论 本法适于大规模制备SY和HSYA。     

冠状动脉结扎制备大鼠心肌梗死模型及评价实验研究

[目的]探讨建立稳定可靠、易操作和高存活率的大鼠心肌梗死模型制备方法及其有效的评价手段。[方法]40只雄性SD大鼠腹腔麻醉后,开胸手术结扎其冠状动脉左前降支。术后24 h,超声心动图观察左室功能变化,左室导管术检测大鼠血流动力学,取出心脏,观察心脏外形,切片进行2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色,全自动生化仪检测血液心肌酶学指标。[结果]该法的手术存活率高达91.67%,术后24 h取出心脏可见左心室梗死区心室壁颜色较周围心肌浅,超声心动图和血流动力学结果显示模型组大鼠左室功能及室壁运动情况明显弱于假手术组。TTC染色显示模型组大鼠心肌梗死明显。[结论]该方法提高了大鼠急性心肌梗死模型的存活率,模型稳定,重复性好,可满足一次结扎或缺血再灌注的需求。     

超微粉通心络对冠脉结扎致大鼠心肌梗死的保护作用及机制探讨

目的：观察超微粉通心络对大鼠实验性心肌梗死的影响，探讨其治疗缺血性心脏病的作用机制。方法：98只SD大鼠随机分为7组：假手术组、模型组、合心爽组(0.15 mg·kg^-1)、通心络原工艺组(1.2 g·kg^-1)、超微粉通心络组(1.2，0.6，0.3 g·kg^-1)。通过结扎冠状动脉制备大鼠心肌梗死模型，采用红四氮唑(TTC)染色法测定大鼠心肌梗死范围，同时测定大鼠血清超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)；将60只Wistar大鼠随机分为6组，即正常组、阿司匹林组(0.15 mg·kg^-1)、通心络原工艺组(1.2 g·kg^-1)、超微粉通心络组(1.2，0.6，0.3 g·kg^-1)，观察药物对二磷酸腺苷(ADP)和胶原诱导大鼠血小板聚集影响。结果：超微粉通心络明显减小梗死区面积，超微粉高、中、低剂量组缺血面积分别为(2.7±2.1)%,(3.4±1.2)%,(2.8±1.8)%，与模型组(8.9±5.9)%相比P<0.05；超微粉高、中、低剂量组缺血质量百分比分别为(8.4±3.5)%,(8.7±4.1)%,(9.7±4.1)%，与模型组(12.2±3.6)%相比P<0.05，P<0.01。对心肌梗死引起的MDA,CK,LDH升高亦有明显抑制作用(与模型组比P<0.05或P<0.01)，同时可升高血清SOD活性(与模型组相比P<0.05)；超微粉通心络高、中、低剂量组ADP诱导的血小板最大聚集率分别为(26.9±9.2)%,(24.4±13.4)%,(30.6±12.2)%，与正常组(44.3±15.7)%相比P<0.05或P<0.01；超微粉通心络高、中、低剂量组胶原诱导的血小板最大聚集率分别为(33.8±6.9)%,(32.1±8.3)%,(41.5±7.8)%，与正常组(49.2±15.9)%相比P<0.05或P<0.01。结论：超微粉通心络对冠脉结扎引起的大鼠心肌梗死有明显的保护作用，其机制可能与其抗氧化作用及抑制血小板聚集有关。     

冠脉通片对实验性心肌梗死大鼠的保护作用及机制

目的:观察冠脉通片对大鼠急性心肌梗死治疗作用及对心肌保护作用机制。方法:采用冠状动脉左前降支结扎术制备大鼠急性心肌梗死模型,术前预防性给药3d,1次/d,术后继续给药7d,通过死亡率、心电图、血浆肌钙蛋白T、心肌梗死重量、心肌缝隙连接蛋白Cx43、心肌胶原纤维天狼星红染色等指标,阐明冠脉通片对心肌梗死的治疗作用及作用机制。结果:冠脉通大鼠冠状动脉结扎即刻死亡率均较模型对照组低,以1.3g生药/kg组最明显,死亡率为0;冠脉通各剂量组术后即刻心电图ST段变化较模型对照组明显改善,且术后7d仍较模型对照组明显改善。冠脉通2.6、1.3g生药/kg组肌钙蛋白T明显低于模型对照组。各剂量组心肌梗死重量百分比均较模型对照组明显减少。心肌Cx染色可见模型对照组Cx表达明显减少,分布紊乱,冠脉通2.6g生药/kg组较模型对照组表达明显增多。模型对照组大鼠心肌经天狼星红染色后可见明显的、大面积红色胶原染色,冠脉通2.6g生药/kg组无1例胶原染色,1.3g生药/kg组可见胶原染色,程度低于2.6g生药/kg组,0.65g生药/kg组可见红色胶原染色,程度与模型对照组接近。结论:冠脉通预防给药后,可明显降低冠状动脉结扎即刻大鼠死亡率,改善心电图ST抬高,降低心肌梗死范围,增加心肌Cx43表达,改善心肌胶原纤维化。