姜黄素通过上调miR-34a抑制人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的恶性生物学行为

目的 探讨姜黄素对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞恶性生物行为的影响及其可能作用机制。方法 CCK8法检测姜黄素(0、6.25、12.5、25、50和100μmol·L^-1)作用下细胞活力并筛选出后续姜黄素处理浓度(0、6.25、12.5、25μmol·L^-1),流式细胞法、划痕实验、Transwell实验和Western blot分别检测细胞凋亡、迁移、侵袭及相关蛋白水平。使用qRT-PCR法检测SH-SY5Y细胞miR-34a表达水平,构架miR-34a低表达SH-SY5Y细胞系(miR-34a inhibitor组)及其阴性对照(NC组)、对照组(Control组),三组细胞系均给予姜黄素(25μmol·L^-1)处理分别记为黄素+miR-34a inhibitor组、姜黄素+NC组、姜黄素组,另设置空白对照组,采用上述相同方法检测各组细胞凋亡、迁移、侵袭及相关蛋白水平和p-p65、p-IκBα蛋白水平。结果 当姜黄素干预浓度达到12.5μmol·L^-1时,SH-SY5Y细胞存活率显著低于无姜黄...     

槲皮素通过靶向GAS5/Notch1信号通路促进乳腺癌细胞凋亡的研究

目的探讨槲皮素对乳腺癌细胞促凋亡作用的可能机制。方法用槲皮素处理乳腺癌MCF-7细胞后,采用MTT法检测细胞活力;平板克隆实验检测细胞增殖克隆能力;Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡;同时,分别采用槲皮素(40、80、160μmol·L^-1)、GAS5小干扰RNA(siGAS5)、槲皮素(80μmol·L^-1)协同siGAS5处理细胞后,qRT-PCR法和Western blot法检测GAS5、Notch1、Jagged1、Hes1、Bcl-2、Bax、Caspase-3的表达。结果槲皮素(40、80、160μmol·L^-1)处理MCF-7细胞后,发现40μmol·L^-1槲皮素可明显抑制增殖,而80、160μmol·L^-1槲皮素不仅明显抑制增殖且诱导凋亡;槲皮素(40、80、160μmol·L^-1)可上调GAS5、Bax和Caspase-3的表达,下调Notch1、Jagged1、Hes1和Bcl-2的表达;细胞转染siGAS5后,与sncRNA组相比,GAS5、Bax和Caspase-3表达下调,Notch1、Jagged1、Hes1和Bcl-2表达上调;当siGAS5与槲皮素(80μmol·L^-1)共处理细胞后,与sncRNA加槲皮素对照组相比,GAS5、Bax和Caspase-3表达下调,Notch1、Jagged1、Hes1和Bcl-2上调。结论槲皮素通过靶向GAS5/Notch1信号通路促进乳腺癌细胞凋亡。     

淫羊藿苷调控mTOR/Akt/CREB通路对高糖诱导的足细胞自噬及凋亡的影响

目的 探讨淫羊藿苷对高糖诱导的足细胞自噬、凋亡及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(Akt)/环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)通路的影响。方法 将小鼠足细胞MPC5分为5组：正常对照组(5.5 mmol·L^-1葡萄糖)、高糖组(30 mmol·L^-1葡萄糖)、淫羊藿苷组(30 mmol·L^-1葡萄糖+5μmol·L^-1淫羊藿苷)、GDC-0349组(30 mmol·L^-1葡萄糖+50μmol·L^-1 GDC-0349)、淫羊藿苷+GDC-0349组(30 mmol·L^-1葡萄糖+5μmol·L^-1淫羊藿苷+50μmol·L^-1 GDC-0349)。培养48 h后，噻唑蓝法检测MPC5细胞活力；吖啶橙染色观察MPC5细胞自噬情况；流式细胞术检测MPC5细胞凋亡；蛋白印迹法检测MPC5细胞自噬[微管相关蛋白1轻链3(LC3)Ⅱ、LC3Ⅰ、自噬相关蛋白(Beclin-1...     

姜黄素抗抑郁作用的研究

目的 研究姜黄素在西罗莫司介导后的抗抑郁作用。方法 在细胞实验中,实验分为空白组、模型组、阳性对照组(1μmol·L^-1氟西汀)、对照组(1μmol·L^-1姜黄素)、实验组(0.1 nmol·L^-1西罗莫司)、联合组(0.1 nmol·L^-1西罗莫司+1μmol·L^-1姜黄素)。除空白组外,其余各组用皮质酮建立SH-SY5Y细胞损伤模型,用CCK-8法检测细胞存活率,用荧光显微镜观察细胞突触变化。在动物实验中,将40只雄性ICR小鼠随机分为空白组、对照A组(50 mg·kg^-1姜黄素)、对照B组(150 nmol·L^-1西罗莫司)、实验组(150 nmol·L^-1西罗莫司+50 mg·kg^-1姜黄素)。各组均给予小鼠急性应激造模,并考察行为学指标变化。结果 模型组、对照组和联合组的细胞存活率分别为(32.38±5.45)%,(61.67±4.53)%和(39.40±12.33)%,突触长度分...     

褐藻素对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响

目的:探究褐藻素对人乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖和凋亡的影响。方法:不同浓度褐藻素处理MDA-MB-231细胞后,采用CCK-8法测定细胞抑制率、Live/Dead^TM细胞成像试剂盒进行活死细胞荧光分析,TUNEL法、Annexin V/PI染色法检测细胞凋亡,Western blotting方法检测Bcl-2、Bax、JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3蛋白的表达,采用试剂盒检测Caspase-9和Caspase-3/7活性。结果:褐藻素处理MDA-MB-231细胞24 h时,16μmol·L^-1褐藻素明显抑制细胞增殖,IC₅₀为68.79μmol·L^-1;处理48 h时,8μmol·L^-1褐藻素明显抑制细胞增殖,IC₅₀为38.08μmol·L^-1;褐藻素对乳腺癌细胞的细胞活力和增殖的抑制作用表现出一定的时间和剂量依赖性(P<0.05)。与阴性对照组相比,16,32,64μmol·L^-1     

阿帕替尼联合阿霉素对外周T细胞淋巴瘤的抑制作用及机制研究

目的探讨抗血管生成药物阿帕替尼与常用化疗药物阿霉素联合应用对外周T细胞淋巴瘤Hut78细胞株的抑制作用以及相关分子作用机制,为开发外周T细胞淋巴瘤治疗新方法提供实验依据。方法将Hut78细胞分为不同浓度药物处理组:阿帕替尼单药(10、20、40、60μmol·L^-1)、阿霉素单药(1、2、4μmol·L^-1)、阿帕替尼+阿霉素[(40+1)μmol·L^-1、(40+2)μmol·L^-1、(60+1)μmol·L^-1、(60+2)μmol·L^-1],分别作用72 h,采用CCK-8法检测药物对细胞的增殖抑制作用。采用流式细胞术检测不同浓度药物处理组{阿帕替尼单药(40μmol·L^-1)、阿霉素单药(1、2μmol·L^-1)、阿帕替尼+阿霉素[(40+1)μmol·L^-1、(40+2)μmol·L^-1]}作用24 h后对Hut78细胞凋亡的影响。采用流式细胞术检测不同浓度阿帕替尼(10、20、40μmol·L^-1)作用24 h后对Hut78细胞周期的影响。采用蛋白印迹法检测不同浓度药物处理组{阿帕替尼单药(40μmol·L^-1)、阿霉素单药(1、2μmol·L^-1)、阿帕替尼+阿霉素[(40+1)μmol·L^-1、(40+2)μmol·L^-1]}作用24 h后,Hut78细胞中PI3K/Akt信号转导通路相关蛋白PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt及凋亡相关蛋白Bcl-2、Casepase-3、Bax的表达变化。结果不同浓度(10、20、40、60μmol·L^-1)的阿帕替尼作用72 h后,细胞抑制率分别为(13.42±2.19)%、(19.52±4.16)%、(31.49±3.16)%、(52.88±3.37)%,72 h的IC₅₀值为(59.34±0.31)μmol·L^-1,各药物处理组与对照组两两比较,差异具有统计学意义(χ²=10.116,P=0.018);不同浓度(1、2、4μmol·L^-1)的阿霉素分别作用72 h后,细胞抑制率分别为(15.82±3.23)%、(31.70±4.79)%、(42.34±5.23)%,72 h的IC₅₀值为(5.52±0.18)μmol·L^-1,各药物处理组与对照组两两比较,差异具有统计学意义(χ²=10.532,P=0.015);阿帕替尼+阿霉素[(40+1)μmol·L^-1、(40+2)μmol·L^-1、(60+1)μmol·L^-1、(60+2)μmol·L^-1]作用72 h的细胞抑制率分别为(51.70±2.09)%、(56.62±4.83)%、(61.35±1.79)%、(65.13±3.88)%。两药的联合指数(CI)<1,说明二者具有药物协同作用。阿帕替尼单药(40μmol·L^-1)、阿霉素单药(1、2μmol·L^-1)作用24 h的细胞凋亡率分别为(15.65±0.75)%、(13.85±2.15)%、(23.60±1.30)%,阿帕替尼+阿霉素[(40+1)μmol·L^-1、(40+2)μmol·L^-1]作用24h的细胞凋亡率分别为(27.00±1.90)%、(33.20±2.30)%,各药物处理组与对照组[(6.10±0.90)%]比较,差异有统计学意义(χ²=16.251,P=0.006)。不同浓度(10、20、40μmol·L^-1)的阿帕替尼作用24 h后,G₀/G₁期细胞比例随浓度升高而升高[(49.27±0.45)%、(50.34±1.24)%、(59.16±1.23)%],S期细胞比例随浓度升高而降低[(42.81±2.22)%、(39.19±2.71)%、(34.08±1.01)%],各药物处理组与空白对照组[G₀/G₁期(39.26±0.65)%,S期(49.40±2.52)%]比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。阿帕替尼单药(40μmol·L^-1)、阿霉素单药(1、2μmol·L^-1)以及阿帕替尼+阿霉素[(40+1)μmol·L^-1、(40+2)μmol·L^-1]作用24 h后,PI3K/Akt信号通路相关蛋白PI3K、p-PI3K、p-Akt和抗凋亡蛋白Bcl-2的表达水平呈下降趋势,促凋亡蛋白Casepase-3和Bax的表达水平呈上升趋势,Akt蛋白的表达水平无明显变化,各药物处理组p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、Bcl-2、Casepase-3及Bax蛋白表达水平与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论阿帕替尼可抑制外周T细胞淋巴瘤细胞的增殖并诱导其凋亡,同时具有细胞周期阻滞作用,其作用可能是通过抑制PI3K/Akt信号通路激活实现的。阿帕替尼联合阿霉素对外周T细胞淋巴瘤细胞具有协同抑制作用。     

小剂量氯胺酮联用丁基苯酞的抗抑郁作用及其机制

目的 研究小剂量氯胺酮(Ket)联用丁基苯酞(NBP)的抗抑郁作用及其机制。方法 建立皮质酮(CORT)诱导PC12细胞损伤的体外抑郁模型,PC12细胞分成6组：空白对照组、模型对照组(CORT 400μmol·L^-1)、对照A组(CORT 400μmol·L^-1+NBP 1μmol·L^-1)、对照B组(CORT 400μmol·L^-1+Ket 0.01μmol·L^-1)、阳性对照组(CORT 400μmol·L^-1+Ket 0.1μmol·L^-1)、联合组(CORT 400μmol·L^-1+Ket 0.01μmol·L^-1+NBP 1μmol·L^-1)。CCK-8法检测细胞存活率,荧光显微镜观察细胞神经元形态变化,蛋白免疫印迹法评价联合用药对损伤细胞p-ERK/ERK、脑源性神经营养因子(BDNF)、synapsin蛋白表达变化。将ICR小鼠随机分为模型对照组、NBP...     

硫芥对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的毒效应及机制

目的 建立硫芥(SM)染毒的神经细胞损伤模型，研究SM的神经细胞毒性效应及潜在机制。方法 采用SM 0(溶剂，0.2%乙醇)，0.1,1.0,10,50,100,200,400和800μmol·L^-1孵育人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞30 min，而后去除药物，换用正常培养基孵育24 h。应用IncuCyte ZOOM长时间动态活细胞成像及数据分析系统观察细胞融合率和细胞形态；CCK-8法检测细胞活力；SM 0,1.0,10,25,50,100和400μmol·L^-1以同样方式处理细胞，calcein-AM/PI荧光染色检测活细胞比例和死细胞比例；试剂盒检测细胞乳酸脱氢酶(LDH)释放率；5-乙炔基-2′-脱氧尿苷(EdU)-488细胞增殖试剂盒检测细胞增殖；免疫荧光法测定细胞DNA双链断裂标志物γ-H2AX。SM 0,1.0,10和100μmol·L^-1以同样方式处理细胞后，流式细胞仪检测细胞内活性氧(ROS)相对含量；试剂盒检测细胞内NAD⁺/NADH和ATP含量；SM 10μmol·L     

木犀草素上调miR-384对胶质瘤细胞增殖、侵袭和凋亡的影响

目的 研究木犀草素(luteolin)对胶质瘤细胞增殖、侵袭和凋亡的作用及机制。方法 以质量浓度2.5、25和50μmol·L^-1Luteolin1处理U251和U87细胞。分别以克隆形成实验、流式细胞术、Transwell实验检测细胞克隆形成、凋亡和侵袭。采用Lipofectamine 2000将antagomir-NC、miR-384 antagomir转染胶质瘤细胞U251。以RT-qPCR检测胶质瘤细胞中miR-384的表达水平。转染miR-384 antagomir后用质量浓度50μmol·L^-1的luteolin处理,以蛋白免疫印迹法(western blot)检测各组细胞中Ki67、p21、VEGF、Bax、Bcl-2和N-cadherin蛋白相对表达水平。结果 结果表明CCK-8浓度>25μmol·L^-1时luteolin可显著降低U251和U87细胞活力;与对照组相比,以质量浓度25和50μmol·L^-1 luteolin处理可明显降低细胞克隆形成率和侵袭率、提升细胞凋亡率。...     

重建线粒体动态平衡对NK细胞NK2型活化影响

目的立于“线粒体功能紊乱-细胞异常活化”视角,探讨NK细胞NK2型活化机制。方法将NK-92MI细胞分为空白组、TSLP组、1、5、10μmol·L^-1 Mdivi-1组。ELISA法测定各组IL-4、IL-5、IFN-γ水平;蛋白印迹法分析各组p-Drp1、MnSOD蛋白表达;DHE染色及流式检测各组ROS水平;激光共聚焦观察各组线粒体形态。结果ELISA显示,与对照组比较,TSLP组IL-4、IL-5水平明显升高,IFN-γ水平下调(P<0.05);与TSLP组比较,5、10μmol·L^-1 Mdivi-1组IL-4、IL-5水平降低,10μmol·L^-1 Mdivi-1组IFN-γ浓度有所回升(P<0.05)。DHE染色及流式显示,TSLP组ROS水平较对照组升高;而5、10μmol·L^-1 Mdivi-1组ROS水平较TSLP组降低(P<0.05)。共聚焦显示,TSLP刺激后,细胞内大量圆球状线粒体生成,5、10μmol·L^-1 Mdivi-1干预后该现象得到改善。蛋白印迹显示,TSLP组p-Drp1水平明显上调,MnSOD表达下降,Mdivi-1干预则有效逆转了上述变化。结论线粒体动态失衡可能是NK细胞异常活化内在机制之一,其或是调控NK细胞NK2型活化介导的变应性炎症反应的重要靶点。     

槲皮素对婴幼儿血管瘤内皮细胞凋亡的影响

目的 研究槲皮素对婴幼儿血管瘤内皮细胞凋亡的影响和机制。方法 分离婴幼儿血管瘤内皮细胞,分成对照组、实验低剂量组(80μmol·L^-1槲皮素)、实验中剂量组(160μmol·L^-1槲皮素)、实验高剂量组(320μmol·L^-1槲皮素)、实验高剂量+pcDNA组(转染阴性对照载体,320μmol·L^-1槲皮素)、实验高剂量+高迁移率蛋白1(HMGB1)组(转染HMGB1过表达载体,320μmol·L^-1槲皮素处理)。用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)分析细胞增殖情况,用流式细胞术分析细胞凋亡情况,用蛋白质印迹法检测HMGB1、剪切的胱天蛋白酶3(C-caspase-3)、CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)、糖调节蛋白78(GRP78)蛋白表达。结果 对照组、实验低剂量组、实验中剂量组、实验高剂量组、实验高剂量+pcDNA组、实验高剂量+HMGB1组细胞中HMGB1蛋白表达水平分别为0.89±0.09,0.76±0.08,0.63±0.06,0.55±0.05,0.56...     

橘红素预处理对过氧化氢诱导成骨细胞损伤的保护作用及机制

目的 研究橘红素预处理对过氧化氢(H₂O₂)诱导的成骨细胞氧化损伤的保护作用和机制。方法(1)酶消化法分离培养大鼠颅骨来源的原代成骨细胞,分别培养7和21 d后,采用碱性磷酸酶(AKP)染色和茜素红染色鉴定细胞。(2)橘红素5～40μmol·L^-1孵育成骨细胞48 h后,加H2O2300μmol·L^-11 h,采用CCK-8法测定细胞存活率,AKP试剂盒测定AKP活性。(3)培养的成骨细胞分为细胞对照组、模型组(H2O2300μmol·L^-1,孵育1 h)、模型+橘红素组(橘红素10μmol·L^-1预处理48 h后加H2O2300μmol·L^-1,1 h)。茜素红染色检测钙化结节数量,流式细胞术检测成骨细胞内活性氧(ROS)水平,超氧化物歧化酶(SOD)活性检测试剂盒检测SOD活性,Western印迹法检测成骨细胞转录因子(OSX)和骨保护素(OPG)蛋白表达水平。结果 (1) AKP染色成骨细胞细胞胞质呈蓝色,茜素红染色可见钙化结节...     

灵芝酸D通过调控p53/Bax通路对人结直肠肿瘤细胞的作用机制研究

目的 探究灵芝酸D（GAD）对人结直肠肿瘤细胞凋亡的影响及其分子机制。方法 将直肠癌细胞系SW620分为6组：空白对照组（完全培养基）、低(5μmol·L^-1 GAD)、中(10μmol·L^-1 GAD)、高(20μmol·L^-1 GAD)3个剂量实验组、Pifithrin-α组(3μg·mL^-1 Pifithrin-α)和联合组(3μg·mL^-1 Pifithrin-α+20μmol·L^-1 GAD)。用细胞计数试剂盒-8（CCK-8）法检测细胞增殖能力,用Caspase-3/Caspase-8/Caspase-9检测试剂盒检测相应蛋白活性,用蛋白质印迹法检测抑癌蛋白p53（p53）,B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）,Bcl-2相关X蛋白（Bax）的蛋白质的表达水平。结果 空白对照组和低、中、高3个浓度实验组细胞增殖活性分别为（96.33±2.62）%,（95.00±1.63）%,（70.33±5.91）%和（49.00±3.56）%;4组Caspase-...     

灯盏细辛通过VDAC1/ROS/NLRP3通路减轻H2O2诱导的心肌细胞损伤

目的 探讨灯盏细辛(EB)对过氧化氢(H₂O₂)诱导的心肌细胞损伤的影响及其作用机制。方法 建立体外H₂O₂诱导的心肌细胞氧化应激损伤模型。将体外培养的HL-1小鼠心肌细胞分为空白组(常规培养)、对照组(4 mg·L^-1 EB 1 h)、模型组(800μmol·L^-1 H₂O₂ 1 h)、实验组(4 mg·L^-1 EB+800μmol·L^-1 H₂O₂ 1 h)。用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测细胞活力；用乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测细胞损伤情况；用流式细胞术检测活性氧(ROS)含量；用蛋白质印迹法检测核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、消皮素D(GSDMD)和电压依赖性阴离子通道1(VDAC1)蛋白表达水平；用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测白细胞介素-1β(IL-1β)含量；用钙黄绿素乙酰甲酯(Ca...     

紫草素对人绒毛膜滋养层细胞HTR-8/Svneo线粒体自噬和功能的影响

目的 研究紫草素对HTR-8/Svneo细胞线粒体自噬和线粒体功能的影响。方法 将人绒毛膜滋养层细胞分为4组：对照组、Mdivi-1组、紫草素组和紫草素+Mdivi-1组。对照组正常培养;Mdivi-1组以5μmol·L^-1 Mdivi-1处理;紫草素组用0.8μmol·L^-1紫草素干预;紫草素+Mdivi-1组以0.8μmol·L^-1紫草素+5μmol·L^-1 Mdivi-1干预处理。用流式细胞术检测细胞凋亡率;用ATP检测试剂盒测定细胞ATP含量;用Dihydroethidium(DHE)荧光检测探针测定细胞内超氧化物水平;用蛋白质印迹法测定线粒体自噬相关蛋白表达水平。结果 细胞分组处理24 h后,对照组、Mdivi-1组、紫草素组、紫草素+Mdivi-1组的凋亡率分别为(6.86±0.37)%,(7.14±0.23)%,(39.97±1.52)%和(14.63±1.19)%;这4组的ATP含量为100%,(89.13±6.23)%,(52.03±9.12)%和(67.84±10.03)%;这4...     

利拉鲁肽抗CXC趋化因子配体16诱导的人足细胞脂质沉积作用及机制

目的 探讨利拉鲁肽(liraglutide)抗CXC趋化因子配体16(CXCL16)诱导的人足细胞脂质沉积的作用及机制。方法 (1)葡萄糖40 mmol·L^-1刺激人足细胞24 h，棕榈酸250μmol·L^-1刺激人足细胞6 h,Western印迹法检测足细胞CXCL16蛋白表达水平。(2)重组CXCL16 100μg·L^-1刺激足细胞0,6,12和24 h,Western印迹法检测足细胞裂隙素蛋白表达水平。(3)足细胞分为细胞对照组、CXCL16 100μg·L^-1组、CXCL16+利拉鲁肽10,50和100 nmol·L^-1组及CXCL16+辛伐他汀100 nmol·L^-1组，加药2 h后加重组CXCL16 100μg·L^-1继续培养24 h，油红O染色检测足细胞脂滴面积。(4)足细胞分为细胞对照组、CXCL16100μg·L^-1组、CXCL16+利拉鲁肽100 nmol·L^-1组和CX...     

芸香苷改善椎间盘退变大鼠髓核细胞焦亡的研究

目的 从细胞水平探究芸香苷对椎间盘退变大鼠髓核细胞焦亡的影响及作用机制。方法 将大鼠椎间盘髓核细胞随机分为对照组、模型组[白细胞介素-1β(IL-1β)诱导]、低剂量实验组(25μmol·L^-1芸香苷+10 ng·mL^-1 IL-1β)、中剂量实验组(50μmol·L^-1芸香苷+10ng·mL^-1 IL-1β)、高剂量实验组(100μmol·L^-1芸香苷+10 ng·mL^-1 IL-1β)、高剂量+SIRT1激动药组[100μmol·L^-1芸香苷+10 ng·mL^-1 IL-1β+1μmol·L^-1沉默信息调节因子1(SIRT1)激动药SRT1720]。用实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)实验、蛋白质印迹法检测相关基因和蛋白的表达水平,用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)实验检测细胞活力,用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测炎性因子的表达水平。结果 对照组、模型组、高剂量实验组、高剂量+...     

紫草素调控转化生长因子β1/Smad信号通路抑制人非小细胞肺癌A549细胞上皮-间充质转化和迁移能力

目的 探讨紫草素对转化生长因子β₁(TGF-β₁)诱导的人非小细胞肺癌A549细胞迁移、上皮-间充质转化(EMT)的影响及机制。方法 (1)紫草素0.75,1.50和3.00μmol·L^-1作用A549细胞24 h,ELISA法检测细胞培养上清液中TGF-β₁水平。(2)设细胞对照组、TGF-β₁9 pmol·L^-1组、TGF-β₁+紫草素0.75,1.50和3.00μmol·L^-1组,作用A549细胞24 h,分别采用划痕和Transwell实验检测细胞划痕愈合百分率和迁移细胞数,Western印迹法检测N-钙黏蛋白、锌指转录因子Snail、E-钙黏蛋白、Smad4、纤溶酶原激活物抑制剂1(PAI-1)蛋白水平及Smad2和Smad3蛋白磷酸化水平。结果 (1)与细胞对照组比较,紫草素0.75,1.50和3.00μmol·L^-1作用于A549细胞24 h后均未显著改变细胞培养上清液中TGF...     

藁本内酯对帕金森病细胞模型的保护作用及其机制研究

目的 研究藁本内酯对帕金森病细胞模型的保护作用及其作用机制。方法 取对数生长期的SK-N-SH细胞使用200μmol·L^-1的MPP⁺处理48 h,构建帕金森病细胞模型；以正常培养基培养的细胞作为对照组。藁本内酯组加入终浓度为30.0μmol·L^-1藁本内酯进行培养；P79350组加入30.0μmol·L^-1的藁本内酯后，实验结束前1 h加入50μmol·L^-1的P79350处理细胞；对照组和MPP⁺组加入不含药物的培养基培养。用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测细胞活力；以流式细胞术检测细胞周期情况和细胞凋亡率；以蛋白质印迹法检测p38丝裂原活化蛋白激酶/c-Jun氨基末端激酶(p38 MAPK/JNK)信号通路和增殖、凋亡相关蛋白的表达水平。结果 对照组、MPP⁺组和10.0、20.0、30.0、50.0、100.0和200.0μmol·L^-1藁本内酯组的细胞存活率分别为(100.00±1.91)%、(35...     

中脑星形胶质细胞来源的神经营养因子对糖氧剥夺/再灌注诱导的SH-SY5Y细胞损伤的保护作用

目的研究中脑星形胶质细胞来源的神经营养因子(mesencephalic astrocyte-derived neurotrophic factor,MANF)对糖氧剥夺/再灌注(oxygen-glucose deprivation/reperfusion,OGD/R)诱导的人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)损伤的保护作用。方法体外培养SH-SY5Y细胞,对细胞进行糖氧剥夺(OGD)6 h,再灌注(R)12 h。在再灌注时期,根据是否给予重组人MANF蛋白处理(2μmol·L-1,12 h),将细胞分为正常对照组(NC)、NC+MANF组、OGD/R组和OGD/R+MANF组。随后光学显微镜下观察SH-SY5Y细胞形态的改变,MTT法检测细胞存活率,PI染色法检测细胞死亡率,免疫印迹法检测内源性MANF蛋白、内质网(ER)应激相关蛋白GRP78/Bi P、p-IRE1、p-e IF2α及促凋亡蛋白cleaved caspase-3和CHOP的表达。结果光学显微镜下可见OGD/R组SH-SY5Y细胞胞体变小、变圆,突起缩短或消失。进一步研究发现,MANF能明显改善OGD/R诱导的SHSY5Y细胞存活率下降和死亡率增加。免疫印迹法检测发现:OGD/R组细胞内源性MANF蛋白表达增高;ER应激相关蛋白GRP78/Bi P、p-IRE1、p-e IF2α表达增高;促凋亡蛋白CHOP及cleaved caspase-3的表达明显高于NC组。给予重组人MANF蛋白可降低OGD/R组GRP78/Bi P、CHOP及cleaved caspase-3的表达水平。结论 OGD/R可诱导凋亡性ER应激;MANF蛋白可通过抑制OGD/R诱导的凋亡性ER应激而对SH-SY5Y细胞具有保护作用。