灵芝多糖拮抗前列腺素E2对小鼠脾细胞IFN-γ和TNF-αmRNA表达的抑制作用

目的 观察灵芝多糖拮抗前列腺索E2（PGE2）对小鼠睥细胞干扰素γ（IFN-γ）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）mRNA表达的抑制作用。方法 混合淋巴细胞培养反应作为实验模型,半定量RT-PCR方法检测IFN-γ和TNF-α mRNA的表达水平。结果 PGE2连续作用4h后,脾细胞IFN-γ mRNA的表达与对照组比较受到不同程度的抑制,当PGE2浓度在10μmol／L以上时具有统计学意义（P〈0．01）。固定PGE2浓度为20μmol／L,合用不同浓度的灵芝多糖,当灵芝多糖为100mg／L以上时可部分对抗PGE2的抑制作用。培养8h后,PGE2明显抑制TNF-α mRNA的表达,灵芝多糖为100mg／L以上时可部分对抗。结论 灵芝多糖可部分拮抗PGE2对小鼠脾细胞IFN-γ和TNF-α mRNA表达的抑制作用。     

灵芝多糖（GL—B）对肿瘤坏死因子α和γ干扰素产生及其mRNA表 …

探讨灵芝多糖对小鼠腹腔巨噬细胞,肿瘤坏死因子α,脾细胞γ干扰素的产生及其ｍＲＮＡ表达的影响。方法;采集小鼠ＰＭ和脾淋巴细胞,体外给药,分离细胞培养上清。生物法测定ＴＮＦα,ＥＬＩＳＡ测定ＩＦＮγ;ＲＴ－ＰＣＲ方法检测ｍＲＮＡ的表达。结果;ＧＬ－Ｂ２５－４００ｍｇ．Ｌ＾－１使正常小鼠ＰＭ培养上清中ＴＮＦα活性升高,并呈剂量依赖关系,２４ｈ在高峰,７２ｈ后开始减少。     

幽门螺杆菌在不同培养基上生长情况的比较

探讨灵芝多糖（Ｇａｎｏｄｅｒｍａ　ｌｕｃｉｄｕｍ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ Ｂ, ＧＬ－Ｂ）对小鼠腹腔巨噬细胞（ｐｅｒｉｔｏｎｅａｌｍａｃｒｏｐｈａｇｅ,ＰＭ）、肿瘤坏死因子α（ｔｕｍｏｒ　ｎｅｃｒｏｓｉｓ　ｆａｃｔｏｒ　ａｌｐｈａ, ＴＮＦα）、肿细胞 γ干扰素（ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ－γ,ＩＦＮγ）的产生及其ｍＲＮＡ表达的影响。方法;采集小鼠ＰＭ和脾淋巴细胞,体外给药,分离细胞培养上清。生物法测定ＴＮＦα。ＥＬＩＳＡ测定ＩＦＮγ;ＲＴ－ＰＣＲ方法检测ｍＲＮＡ的表达。结果：ＧＬ－Ｂ２５～４００ｍｇ·Ｌ~（－１）使正常小鼠ＰＭ培养上清中ＴＮＦα的活性升高,并呈剂量依赖关系,２４ ｈ达高峰,７２ ｈ后开始减少。 ＧＬ－Ｂ对小鼠 ＰＭ的 ＴＮＦα ｍＲＮＡ表达有显著促进作用。ＧＬ－Ｂ１２．５～２００ｍｇ~（－１）明显增加正常小鼠脾细胞培养上清中ＩＦＮγ产生。２４ｈ内随培养时间的延长而增加,４８ ｈ后开始减少。ＧＬ－Ｂ对ＩＦＮγｍＲＮＡ的表达有促进作用。结论：灵芝多糖ＧＬ－Ｂ明显促进小鼠ＰＭ及脾细胞 ＴＮＦα和 ＩＦＮβ ｍＲＮＡ的表达,增加 ＴＮＦα和 ＩＦＮβ的产生。     

灵芝多糖对前列腺素E2抑制小鼠脾细胞增殖及IL-1α,IL-2 mRNA表达的拮抗作用

[目的]观察灵芝多糖(GLB)对前列腺素E2(PGE2)抑制小鼠脾细胞增殖及IL-1α、IL-2 mRNA表达的拮抗作用.[方法]采用混合淋巴细胞培养反应作为实验模型,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖程度,半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测IL-1α及IL-2 mRNA的表达水平.[结果]PGE2连续作用48 h后,脾细胞增殖反应受到不同程度的抑制作用,当PGE2浓度在10 μmol/L以上时差异有显著性意义(P＜0.01);固定PGE2的浓度为20 μmol/L,并合用不同浓度的GLB(25、50、100、200 mg/L),当GLB为100 mg/L以上浓度时可部分对抗PGE2(20 μmoL/L)的抑制作用(P＜0.05);培养8 h及12 h后,PGE2(20 μmol/L)可抑制IL-1α及IL-2 mRNA的表达,GLB为100 mg/L以上浓度时可部分拮抗PGE2的抑制作用(P＜0.05或P＜0.01).[结论]灵芝多糖可部分拮抗前列腺素E2对小鼠脾细胞增殖及IL-1α和IL-2 mRNA表达的抑制作用.     

肿瘤坏死因子α介导内皮素所致人肾小球系膜细胞增殖

目的:探讨内皮素-1(endothelin-1,ET-1)致人肾小球系膜细胞(human mesangial cell, HMC)增殖的介导途径.方法:用ET-1和抗肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor α,TNFα)中和抗体孵育HMC,3H-胸腺嘧啶参入法测定HMC增殖,Northern杂交方法测定mRNA表达及放射免疫法测定TNFα蛋白质水平.结果:10-7 mol·L-1 ET-1能刺激HMC增殖,使TNFα mRNA表达上调及TNFα蛋白质分泌增多(12、24 h两组与对照组比较,差异有显著性);抗TNFα中和抗体(0.10～1.00 mg·L-1)能部分抑制ET-1所致HMC增殖,但对ET-1所致HMC TNFα mRNA表达上调无明显影响.结论:ET-1能够刺激HMC增殖并使HMC合成和分泌TNFα;ET-1所致HMC该增殖效应可能部分由TNFα介导.     

过氧化物酶体增殖物激活受体γ对TNFα诱导的肾脏内髓集合管上皮细胞损伤的保护作用

目的:观察过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)γ高表达对小鼠肾脏内髓集合管上皮细胞(IMCD)炎性刺激的反应.方法:实验分为4组:IMCD空白对照组,IMCD TNFα刺激组,转染PPARγ野生型质粒的转染空白组(PPARγ-IMCD组)和PPARγ-IMCD TNFα刺激组.TNFα刺激:采用TNFα 50 ng/ml作用24 h;质粒转染:将小鼠野生型PPARγ1质粒转染于IMCD细胞使PPARγ高表达.ELISA方法检测细胞上清液MCP-1、TGFβ1分泌量.结果:转染PPARγ野生型质粒的IMCD细胞PPARγ mRNA和蛋白高表达.1MCD空白对照组和PPARγ-IMCD转染空白组相比,细胞上清液MCP-1和TGFβ1含量无显著性差异;IMCD TNFα刺激组培养上清液中MCP-1和TGF-β1表达明显增加(与IMCD空白对照组相比,P＜0.005),PPARγ-IMCD TNFα刺激组培养上清液中MCP-1和TGFβ1的分泌与IMCD TNFα刺激组相比显著减少(P＜0.05和P＜0.005).结论:IMCD细胞转染PPARγ野生型质粒使得PPARγ高表达后具有抗炎和抗纤维化作用.     

脂多糖对人肺微血管内皮细胞细胞骨架及TNF-α, IFN-γ表达的影响

摘 要 目地 探讨脂多糖 (lipopolysaccharide LPS) 直接诱导人肺微血管内皮细胞 (HPMVEC)后,细胞骨架的改变,肿瘤坏死因子α（TNF-α）、干扰素γ（IFN-γ）mRN的表达及细胞培养上清中TNF-α、IFN-γ的表达水平的改变。方法 HPMVEC生长至80 %以上融合时,加入LPS 以 500 ng/ml浓度刺激细胞分别至 0、4、6、8 h,经鬼笔环肽染色后采用激光共聚焦观察HPMVEC细胞骨架的变化。至预定时相点离心收集培养液上清,利用实时荧光定量RT-PCR法检测TNF-α、IFN-γ mRNA的表达,采用 ELISA方法测定细胞培养上清中TNF-α、IFN-γ的表达水平,并进行统计学分析。结果 发现LPS 刺激培养后,8h组细胞开始出现细胞骨架改变;4h组TNF-α、IFN-γ mRNA表达与0h组无差异（P>0.05）,6h组TNF-α、IFN-γ mRNA表达则高于0h组（P<0.05）,8h组TNF-α、IFN-γ表达高于0h组（P<0.05）;4h 组细胞培养上清TNF-α、IFN-γ的表达水平与0h组比较无差异（P>0.05）,6h 组细胞培养上清TNF-α、IFN-γ的表达水平与0h组比较升高（P<0.05）,8h组细胞培养上清TNF-α、IFN-γ的表达水平与0h组比较升高（P<0.05）。结论 表明细菌致病因子LPS能直接刺激HPMVEC使细胞结构发生改变,同时影响细胞因子( cytokine, CK)的分泌,使促炎因子TNF-α、IFN-γ分泌升高,参与肺损伤。这可能是LPS发挥其毒性作用诱发ALI/ARDS的一个重要途径。     

脂多糖对人肺微血管内皮细胞骨架及TNF-α和IFN-γ表达的影响

目的 探讨脂多糖 (LPS) 直接诱导人肺微血管内皮细胞 (HPMVEC)后细胞骨架的改变,肿瘤坏死因子α(TNF-α)、γ干扰素(IFN-γ)mRNA的表达及细胞培养上清液中TNF-α、IFN-γ的表达水平的改变.方法 HPMVEC生长至80 %以上融合时,加入LPS 以 500 ng/mL浓度刺激细胞分别至 0、4、6、8 h,经鬼笔环肽染色后采用激光共聚焦显微镜观察HPMVEC细胞骨架的变化.至预定时相点离心收集培养液上清液,利用实时荧光定量RT-PCR法检测TNF-α、IFN-γ mRNA的表达,采用 ELISA方法测定细胞培养上清液中TNF-α、IFN-γ的表达水平,并进行统计学分析.结果 LPS 刺激培养后,8 h组细胞开始出现细胞骨架改变;4 h组TNF-α、IFN-γ mRNA表达与0 h组差异无统计学意义(P>0.05),6 h组TNF-α、IFN-γ mRNA表达高于0 h组(P<0.05),8 h组TNF-α、IFN-γ表达高于0 h组(P<0.05);4 h 组细胞培养上清液TNF-α、IFN-γ的表达水平与0 h组比较差异无统计学意义(P>0.05),6 h 组细胞培养上清液TNF-α、IFN-γ的表达水平高于0 h组(P<0.05),8 h组细胞培养上清液TNF-α、IFN-γ的表达水平高于0 h组(P<0.05).结论 细菌致病因子LPS能直接刺激HPMVEC使细胞结构发生改变,同时影响细胞因子的分泌,使促炎因子TNF-α和IFN-γ分泌升高,参与肺损伤.这可能是LPS发挥其毒性作用诱发急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征的一个重要途径.     

IFN-γ与TNF联合在小鼠体内抗结核菌能力的研究

目的 :研究IFN -γ和TNF对结核分枝杆菌感染小鼠的疗效及部分作用机制。方法 :小鼠感染结核分枝杆菌后第 5天给予IFN -γ和 /或TNF治疗 ,观察治疗后半数死亡时间、一定时间内的死亡率、脾内活菌数 ,检测Mφ产生NO水平 (用Griess试剂 )。结果 :联用IFN -γ和TNF组与单纯攻毒组比较明显延长感染小鼠半数死亡时间、降低感染小鼠 35天内的死亡率、显著减少感染小鼠脾内活菌数 ,Mφ产生NO水平明显增加。 结论 :IFN -γ和TNF联用对结核分枝杆菌感染小鼠产生保护效应 ,其机制可能与增强Mφ释放NO水平有关。     

免疫刺激序列对大鼠实验性变应性鼻炎的作用研究

目的 探讨免疫刺激序列(CpG DNA)对大鼠变应性鼻炎模型形成的干扰作用.方法 在大鼠变应性鼻炎模型初始致敏阶段,给予CpG DNA腹腔注射,观察其对模型形成的影响.观测指标包括症状得分、鼻黏膜局部及骨髓嗜酸粒细胞表达、鼻黏膜IL-4和IFN-γ mRNA表达、脾细胞培养IL-4和IFN-γ表达情况.结果 与阳性对照组相比,给予CpG DNA后大鼠变应性鼻炎模型症状得分减少,鼻黏膜局部及骨髓中嗜酸性粒细胞减少,鼻黏膜IL-4 mRNA产生减少,而IFN-γ mRNA产生显著增多.脾细胞培养上清中IL-4明显减少,IFN-γ浓度则显著增高(均P<0.05).结论 在致敏初始阶段给予CpG DNA对大鼠变应性鼻炎模型形成具有明显的干扰作用,可抑制变应性鼻炎模型的形成.     

LPS对BALB/C小鼠肾小管上皮细胞TLR4和TNFα、IL-6表达的影响

目的 探讨TLR4在BALB/C小鼠肾小管上皮细胞(TEC)的表达和内毒素/脂多糖(LPS)刺激后TLR4的变化,以及对产生肿瘤坏死因子α(TNFα)、白细胞介素-6(IL-6)的影响.方法 通过RT-PCR方法 检测TLR4 mRNA、TNFα mRNA和IL-6 mRNA在TEC的表达;流式细胞术检测TEC的TLR4膜蛋白水平;ELISA检测培养的TEC上清中TNFα、IL-6的含量.结果 正常TEC有TLR4 mRNA表达,但TNF αmRNA、IL-6 mRNA表达甚弱.经LPS刺激后,TEC中的TLR4 mRNA、TNF αmRNA和IL-6 mRNA表达均显著增强,TLR4膜蛋白以及培养上清中的TNFα、IL-6水平亦相应增加.结论 TLR4在LPS激活的TEC中表达显著增强,同时TEC分泌的炎症因子TNFα、IL-6的水平也相应上调.     

绞股蓝总皂甙对小鼠产生IFN—r的影响

本文报道了绞股蓝总皂甙对正常和大黄脾虚模型小鼠IFN—r产生的影响。实验结果表明:ConA能诱导小鼠脾细胞产生IFN—γ;大黄脾虚模型小鼠IFN—γ水平比正常小鼠明显降低.绞股蓝总皂甙10～40mg/L以7/50～200mg/kg在体外、体内均可明显提高ConA诱导正常小鼠脾细胞产生的IFN—γ水平.其增加ConA诱导IFN—γ产生的最适浓度在体外为20mg/L,在体内为100mg/kg;绞股蓝总皂甙10～80mg/L以及50～100mg/kg在ConA协同下在体外、体内均能使大黄脾虚模型小鼠低下的IFN—γ水平明显提高,并使之恢复、甚至超过正常水平,其提高ConA诱导IFN一γ产生的最适浓度在体外、体内分别是20mg/L和50～100mg/kg.绞股蓝总皂甙能使大黄脾虚小鼠低下的IFN—γ水平恢复的实验结果进一步提示IFN—γ可能与机体的“正气”和“脾”的本质存在某种内在联系,IFN—γ可能是中医“脾气”的免疫学物质基础之一。     

小鼠干扰素γ基因克隆、测序及辐射诱导表达质粒pIRESEgr-IFNγ的构建

目的：克隆小鼠干扰素γ（IFN-γ）编码区cDNA序列并构建含Egr-1启动子的辐射诱导表达质粒pIRESEgr-IFNγ。 方法：利用逆转录多聚酶链反应（RT-PCR）法,以小鼠脾细胞mRNA为模板,扩增获得全长IFNγcDNA,与pGEMT载体连接做全自动测序,并利用基因重组技术构建含Egr-1启动子的辐射诱导表达质粒pIRESEgr-IFNγ。 结果：经测序证实获得的小鼠IFNγ cDNA序列与文献报道完全一致,并构建了含Egr-1启动子的辐射诱导表达质粒pIRESEgr-IFNγ。结论：成功克隆了小鼠IFNγ的cDNA序列,构建了辐射诱导表达质粒pIRESEgr-IFNγ。     

IFNγ影响肝星状细胞α1(Ⅰ)mRNA表达信号的传递途径

目的: 探明G蛋白在γ-干扰素诱导抑制胶原基因表达中发挥的作用. 方法: 通过活化的G蛋白及细胞内主要信号传递途径确定IFNγ诱导肝星状细胞(HSC) α1(Ⅰ)mRNA表达的影响. 结果: 与对照比较IFNγ显著降低HSC α1(Ⅰ)胶原mRNA水平(56.7±0.3)% (P<0.01);百日咳毒素(PTX)可阻断IFNγ对α1(Ⅰ)mRNA水平的抑制作用,当为10 μg*L-1时,α1(Ⅰ)mRNA水平提高到(121±16)% (P<0.01),但对阻断cAMP或PKA没有抑制作用. 结论: IFNγ抑制HSC α1(Ⅰ)胶原mRNA表达受PTX敏感的G蛋白调节.     

黄芪总苷对血吸虫虫卵抗原活化的大鼠腹腔巨噬细胞TNFα mRNA表达及分泌的影响

目的:观察黄芪总苷(astragalosides,AST)对血吸虫虫卵抗原(soluble egg antigen,SEA)活化的大鼠腹腔巨噬细胞(PMφs)TNFαmRNA表达及上清液中TNFα分泌的影响。方法:采用RT-PCR技术及放射免疫法检测在SEA(10 mg/L)的刺激下,AST与大鼠腹腔巨噬细胞共育6 h时,TNFαmRNA表达水平及上清液中TNFα分泌水平。结果:黄芪总苷(10,20 mg/L)能明显降低SEA(10 mg/L)刺激的大鼠PMφs中TNFα mRNA表达及上清液中TNFα分泌水平(P<0.05),且呈药物浓度依赖性趋势。结论:AST对SEA刺激引发的大鼠PMφs TNFα mRNA表达及分泌有明显的抑制作用。     

Calpain重组分子免疫小鼠IFN-γ和IL-4表达的变化

目的探讨日本血吸虫疫苗侯选分子-钙离子激活的中性蛋白激酶（Calpain）的保护性免疫和免疫保护机制. 方法用重组纯化的Calpain抗原免疫BALB/c小鼠,RT-PCR分析小鼠-氧化氮激酶（iNos.enos.nNos）mRNA的表达;ELISA分析免疫小鼠体外培养脾细胞产生的细胞因子IFN-γ和IL-4的动态变化.结果重组Calpain抗原免疫小鼠1周后,小鼠iNos mRNA的表达显著增强;培养24h免疫鼠脾细胞上清中IFN-γ浓度显著高于对照组,而IL-4的产生在免役组与对照组之间无显著性差异. 结论Calpain抗原能诱导IFN-γ的产生,提示Calpain诱导Th1的免疫应答反应来抗日本血吸虫的感染.     

多种中药单体对人结肠癌HT-29细胞株TLR4 mRNA表达和IL-8分泌的影响

【目的】观察不同中药单体对人结肠癌细胞株HT-29细胞Toll样受体信使核糖核酸(TLR4 mRNA)表达及白细胞介素8(IL-8)分泌的影响。【方法】选用人结肠癌细胞株HT-29细胞,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测HT-29细胞的TLR4 mRNA的表达;酶联免疫吸附法(ELISA)检测HT-29细胞的IL-8分泌。【结果】黄芪甲苷组和大黄素组可抑制干扰素-γ(IFN-γ)诱导的TLR4 mRNA表达,而姜黄素组、柚皮苷组和栀子苷组则对TLR4 mRNA表达无显著性影响;大黄素能显著性降低IFN-γ 脂多糖(LPS)所诱导的HT-29细胞IL-8的产生。【结论】大黄素抗炎细胞分子机制可能与其能抑制IFN-γ诱导的HT-29细胞TLR4 mRNA表达和IFN-γ LPS诱导的IL-8分泌有关。     

海藻多糖对小鼠巨噬细胞的免疫调节作用

目的：探讨海藻多糖对小鼠巨噬细胞吞噬功能、产生IL-1以及海藻多糖对小鼠淋巴细胞增殖作用和细胞因子IFN-γ的影响。方法：将不同浓度的海藻多糖加入体外培养的小鼠腹腔巨噬细胞中,采用中性红法、胸腺增殖法分别检测海藻多糖对小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能及其产生IL-1;用MTT法检测细胞增殖;酶联免疫法测定脾细胞培养上清IFN-γ的浓度。结果：海藻多糖对小鼠巨噬细胞吞噬功能具有一定的促进作用,并能促进巨噬细胞IL-1的合成,并通过诱生IFN-γ而发挥免疫调节作用。结论：海藻多糖能够增强小鼠巨噬细胞的免疫作用。     

微囊化CEA转基因细胞疫苗对小鼠免疫功能的影响

目的：探讨微囊化癌胚抗原(CEA)转基因细胞疫苗免疫小鼠后,对小鼠免疫功能的影响。方法：采用³H-TdR掺入法,测定ConA诱导荷瘤小鼠脾淋巴细胞的增殖作用;采用³H-TdR后标记法,测定荷瘤小鼠脾淋巴细胞NK细胞毒;以ELISA法测定小鼠脾淋巴细胞IL-2和IFNγ细胞因子水平;利用流式细胞术检测CEA疫苗免疫对小鼠脾T淋巴细胞亚群CD3、CD4、CD8百分率,CD4/CD8比值和NK细胞的影响;采用RT-PCR方法检测IL-2、IFNγ mRNA的表达水平。 结果：微囊化CEA疫苗免疫可以有效增强ConA诱导的小鼠淋巴细胞增殖能力,促进IL-2、IFNγ的产生以及增强NK细胞的细胞毒活性（P<0.05,P<0.01,P<0.05）;微囊化CEA疫苗能提高荷瘤小鼠CD4/CD8比值及NK细胞数（P<0.05,P<0.05）;促进脾细胞中细胞因子IL-2、INFγ mRNA的表达。 结论：微囊化CEA转基因细胞疫苗具有增强荷瘤小鼠免疫功能的作用,提示该疫苗可作为有效的抗CEA阳性肿瘤的治疗性疫苗。     

肿瘤坏死因子和干扰素对体外培养乳鼠雪旺氏细胞的增殖影响

目的 :探讨肿瘤坏死因子 (TNF -α)与干扰素 (IFN -γ)联合应用对体外乳鼠雪旺氏细胞增殖的抑制作用。方法 :建立体外乳鼠雪旺氏细胞培养体系 ;经分离、纯化、传代的雪旺氏细胞通过免疫组化、电镜鉴定后 ,纯度达到90 %以上后进行实验。实验分为空白组、对照组、TNF -α组、IFN -γ组及TNF -α +IFN -γ组 ,分别作用 72h后 ,应用四氮唑蓝 (MTT)比色法测定各组的OD值 ,计算其抑制率。结果 :TNF -α和IFN -γ对乳鼠雪旺氏细胞生长增殖均有直接抑制作用 ,其中TNF -α在 10 0～ 2 0 0 0U/ml浓度范围内对正常雪旺氏细胞增殖有抑制作用 ,呈剂量依赖关系 ,在10 0 0U/ml抑制率达到最大。联合用药能明显提高TNF -α对乳鼠雪旺氏细胞生长增殖的抑制效应。结论 :TNF -α对乳鼠雪旺氏细胞生长增殖起抑制作用 ,并呈剂量依赖性。IFN -γ与TNF -α联合用药有明显的协同抑制效应。