芹菜素影响非小细胞肺癌A549细胞顺铂敏感性的RAD51基因调控机制研究

目的:从RAD51基因途径研究芹菜素对非小细胞肺癌(NSCLC)A549细胞顺铂敏感性的影响及其机制。方法:取人肺癌顺铂耐药细胞A549/DDP,分为对照组(空白培养基)、顺铂组(5 g/L)和芹菜素低、高剂量组(10、20μmol/L),采用MTT法检测A549/DDP细胞生长,采用AnnexinⅤ/PI双染色法结合流式细胞术检测其凋亡情况。取A549/DDP细胞,分为顺铂单用组(1、2、4、8、16μg/mL)和芹菜素联用组(10μmol/L,在顺铂基础上加用),采用MTT法测定并计算细胞增殖抑制率;采用回归分析模型计算药物的半数抑制浓度(IC_(50)),并以此计算芹菜素的逆转指数。将18只裸鼠随机分为对照组、顺铂单用组和芹菜素联用组,每组6只,接种A549/DDP细胞使形成移植瘤后,分别腹腔注射生理盐水、顺铂(2 mg/kg,隔天给药1次)、顺铂(剂量、用法同前)+芹菜素药液(30 mg/kg,每天给药1次),连续给药18 d,测量小鼠的体质量和移植瘤质量并计算抑瘤率。取人肺癌细胞A549和A549/DDP,分为正常组(A549细胞)、对照组(A549/DDP细胞)、顺铂组(5 g/L,A549/DDP细胞)和芹菜素低、高剂量组(10、20μmol/L,A549/DDP细胞),分别采用实时荧光定量聚合酶链反应和Western blotting法检测细胞中RAD51的mRNA及其蛋白表达情况。结果:与对照组比较,芹菜素低、高剂量组细胞增长数均显著降低,凋亡率均显著升高且显著高于顺铂组(P<0.05或P<0.01)。联用芹菜素后,A549/DDP细胞的增殖抑制率均较相应质量浓度的顺铂单用组显著升高(P<0.05);芹菜素联用组的IC_(50)为(5.81±0.47)μg/mL,显著低于顺铂单用组的IC_(50)(14.44±0.52)μg/mL(P<0.05);逆转指数为2.49。裸鼠抑瘤实验结果显示,联用芹菜素后,A549/DDP荷瘤裸鼠抑瘤率为68.72%,显著低于顺铂单用组的33.82%(P<0.05)。与正常组A549细胞比较,对照组A549/DDP细胞中RAD51mRNA及其蛋白的相对表达量均显著升高(P<0.05);与对照组A549/DDP细胞比较,芹菜素低、高剂量组A549/DDP细胞中RAD51 m RNA及其蛋白的相对表达量均显著降低(P<0.05);与顺铂组A549/DDP细胞比较,芹菜素低、高剂量组A549/DDP细胞中RAD51 m RNA及其蛋白的相对表达量均显著降低(P<0.05)。结论:芹菜素能够有效逆转人肺癌顺铂耐药细胞A549/DDP的耐药性,其机制可能与下调RAD51基因转录及其蛋白表达有关。     

盐酸表柔比星联合奥沙利铂对肝癌HepG2细胞凋亡的抑制作用

目的:探讨盐酸表柔比星联合奥沙利铂对肝癌细胞HepG2的抑制作用.方法:盐酸表柔比星和奥沙利铂单独及联合给药用MTT法测定HepG2细胞的增殖,用Hoechst 33258染色法检测细胞核凋亡情况,用DNA ladder检测DNA的裂解情况.结果:人肝癌HepG2细胞经奥沙利铂、盐酸表柔比星以及两者联合作用后,在不同时间、不同浓度均能出现细胞抑制作用,并且均呈现剂量-时间依赖效应,与单药组相比,联合用药组抑制率明显增高,q值大部分为0.85～1.15,呈现明显的相加作用,在(35+5)μg/mL组作用24 h,(20+2) μg/mL组作用48、72 h时两组实验组q值＜0.85,出现拮抗作用.(25+3) μg/mL组作用24 h为最佳作用时间和作用浓度.结论:奥沙利铂及盐酸表柔比星对肝癌HepG2细胞有增殖抑制及促凋亡作用,两药联合作用表现为相加作用,其机制需进一步研究.     

2-APB对顺铂诱导人卵巢癌SKOV3细胞内质网应激途径凋亡的影响

目的观察2-APB对顺铂诱导人卵巢癌SKOV3细胞内质网应激途径凋亡的影响。方法体外培养SKOV3细胞,分别加入3.5、7和14μg/ml顺铂作用12和24 h后,用MTT法检测顺铂对SKOV3细胞的抑制率,应用激光共聚焦显微镜观察细胞质内钙离子浓度变化;将SKOV3细胞随机分为空白对照组、顺铂组、2-APB组和顺铂+2-APB组,分别处理24 h后,用倒置相差显微镜观察顺铂对SKOV3细胞形态的影响,用激光共聚焦显微镜观察细胞质内钙离子浓度变化;分别处理12 h后,采用Western blot检测Caspase-3、CHOP和GRP78蛋白表达。结果 MTT结果显示,3.5、7和14μg/ml顺铂作用SKOV3细胞12和24 h,SKOV3细胞存活率明显降低,作用12和24 h的IC50分别为(14.7±0.1)μg/ml和(6.6±0.1)μg/ml。激光共聚焦显微镜检测发现,随顺铂浓度及作用时间的增加,SKOV3细胞质游离钙离子浓度逐渐增加。顺铂与2-APB联合作用后,经倒置相差显微镜观察,与顺铂组比较,顺铂+2-APB组细胞密度明显增多。MTT结果显示,与顺铂组比较,顺铂+2-APB组细胞存活率由56.8%±0.9%上升至74.4%±1.0%,激光共聚焦显微镜检测发现,游离钙荧光点数由(58.4±0.2)×10~3个降低至(23.8±0.3)×10~3个,差异有统计学意义(P0.01)。Western blot结果表明,与顺铂组比较,顺铂+2-APB组的Caspase-3、CHOP和GRP78蛋白表达显著降低,差异有统计学意义(P0.05或P0.01)。结论细胞内钙离子参与调控顺铂诱导的SKOV3细胞凋亡。     

美洲大蠊提取物YS-F对人非小细胞肺癌细胞A549增殖及凋亡的影响

目的:探讨美洲大蠊提取物对人非小细胞肺癌细胞A549增殖、凋亡的影响及其可能机制。方法:将美洲大蠊干燥虫体以90%乙醇冷浸提取后,经聚酰胺柱色谱以水-甲醇梯度洗脱,得20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%甲醇洗脱部位(YS-A～H)。采用MTT法筛选活性部位,并检测不同剂量活性部位作用后的细胞增殖抑制率;采用流式细胞术检测不同剂量活性部位作用后的细胞凋亡、细胞周期和线粒体膜电位变化情况。结果:YS-A～H的半数抑制浓度分别为(95.25±8.42)、(129.93±7.24)、(221.28±12.68)、(275.39±14.87)、(276.76±16.32)、(31.90±5.34)、(163.15±6.97)、(122.81±8.36)μg/mL,以YS-F的活性最强。经YS-F 3、9、27、81μg/mL作用24、48、72 h后,各时间点的细胞增殖抑制率均显著升高,且药物作用48、72 h时的细胞增殖抑制率显著高于同组24 h,作用72 h时的细胞增殖抑制率均显著高于同组48 h(P<0.01)。除YS-F 3μg/mL作用24 h、YS-F 9μg/mL作用72 h对坏死晚期细胞百分比,YS-F 3μg/mL作用24 h对G_2/M期细胞比例以及YS-F 3μg/mL作用48 h对细胞线粒体膜电位降低率均无显著影响(P>0.05)外,其余各剂量组各时间点凋亡早期、凋亡晚期和坏死早期、坏死晚期细胞百分比以及Sub-G_0/G_1期、S期细胞比例均显著升高,G_0/G_1期、G_2/M期细胞比例均显著降低(P<0.01);且药物作用48、72 h时各剂量组凋亡早期、凋亡晚期和坏死早期、坏死晚期细胞百分比(除YS-F 9μg/mL作用72 h时的坏死晚期细胞百分比外)以及Sub-G_0/G_1期、G_2/M期(除48 h YS-F 3、9μg/mL组外)细胞比例均显著高于同组24 h,而G_0/G_1期、S期、G_2/M期(除48 h YS-F 9μg/mL组外)细胞比例均显著低于同组24 h(P<0.01);药物作用72 h时各剂量组凋亡早期、凋亡晚期和坏死早期、坏死晚期细胞百分比(除YS-F 27μg/mL作用72 h时的凋亡晚期和坏死早期细胞百分比以及YS-F 3、9μg/mL作用72 h时的坏死晚期细胞百分比显著降低外)以及S期(除72 h YS-F 3μg/mL组外)、Sub-G_0/G_1期细胞比例均显著高于同组48 h,而G_0/G_1期、G_2/M期细胞比例均显著低于同组48 h(P<0.01)。经YS-F 9、27、81μg/mL作用48 h后,细胞线粒体膜电位降低率均显著升高,且YS-F 27、81μg/mL组显著高于YS-F 9μg/mL组,YS-F 81μg/mL组显著高于YS-F 27μg/mL组。结论:YS-F可通过阻滞细胞从S期向G_2/M期转化、降低线粒体膜电位等途径来抑制A549细胞的增殖并促进其凋亡,且这种作用具有时间或剂量依赖性。     

姜黄素对肝癌HepG2和Bel-7404细胞增殖的抑制作用

目的研究姜黄素对人肝癌HepG2和Bel-7404细胞增殖的影响。方法不同浓度的姜黄素(2.5,10.0,25.0,50.0,100.0μg/mL),0.2%二甲基亚砜的RPMI 1640培养基加细胞为空白对照,2μg/mL顺铂为阳性对照。MTT法检测肝癌HepG2和Bel-7404细胞的增殖。结果姜黄素对肝癌细胞HepG2和Bel-7404的增殖抑制有量效关系,并呈时间依赖性。在相同作用时间下,姜黄素组、顺铂组对肝癌细胞HepG2和Bel-7404增殖有明显的抑制作用,与空白对照组比较均有显著性差异(P<0.05)。与空白对照组比较,2.5,10.0μg/mL姜黄素对肝癌细胞HepG2和Bel-7404的增殖没有明显的抑制作用(P>0.05),而25.0,50.0,100.0μg/mL姜黄素以及顺铂组对肝癌细胞HepG2和Bel-7404的增殖均有明显的抑制作用(P<0.05)。结论姜黄素可以明显的抑制肝癌细胞HepG2和Bel-7404的生长,且存在剂量-时间的关系。     

复合应用紫杉醇和顺铂对胃癌细胞SGC放疗的增敏作用

目的观察紫杉醇、顺铂及两者联合应用加放疗对胃癌细胞株SGC的细胞增殖与细胞周期的影响。方法将体外培养的胃癌细胞株SGC种于96孔板。实验分为P1组(紫杉醇0.1μg/ml)、P2组(紫杉醇0.01μg/ml)、C1组(顺铂0.1μg/ml)、C2组(顺铂0.01μg/ml)、PC1组(紫杉醇0.1μg/ml+顺铂0.1μg/ml)、PC2组(紫杉醇0.01μg/ml+顺铂0.01μg/ml)。无菌环境下实施4Gy照射。采用MTT法观察SGC细胞增殖抑制率;以流式细胞技术检测细胞凋亡及周期变化。结果 PC1组和PC2组胃癌SGC细胞抑制率分别为(76.6±7.7)%和(68.3±2.6)%,明显高于P1组的(46.7±4.5)%、P2组的(39.2±5.3)%、C1组的(41.4±0.2)%和C2组的(25.6±1.3)%(P<0.01)。联合应用紫杉醇和顺铂加放疗组的胃癌SGC细胞主要阻滞在G2/M期;而对照组的多数细胞处于G1期(P<0.05)。结论紫杉醇复合顺铂密集化疗对离体胃癌细胞放疗有明显增敏作用。     

单用Acivicin和联用顺铂诱导HepG_2细胞凋亡的实验研究

目的 :观察Acivicin单用及联用顺铂后对HepG2 细胞凋亡及相关基因Bcl -2、c -myc、p53表达的影响。方法 :Acivicin和顺铂分别或联用处理HepG2 细胞 ,采用MTT法测定细胞毒性 ;采用细胞凋亡原位检测法检测细胞凋亡率 ;采用免疫组化法检测凋亡相关基因Bcl -2、c -myc、p53 的表达。结果 :Acivicin为0 28、0 56、0 84、1 12、1 40mmol/L时 ,HepG2 细胞的凋亡率分别为(3±1 25) %、(3 7±2 0) %、(10±1 25) %、(17 4±4 5) %、(16 9±3 5) %。Acivicin(1 40mmol/L)在24、48、72h致HepG2 细胞的凋亡率分别为 (16 9±3 5) %、(27 9±4 3) %、(47 2±3 0) %,与对照组相比差异显著 (P<0 05) ;顺铂 (67μmol/L)致HepG2细胞 (24h)的凋亡率为 (73 4±1 5) %;Acivicin(1 40mmol/L)联用顺铂 (67μmol/L)致HepG2 细胞 (24h)的凋亡率为 (94 7±0 5) %,较两者单用显著增加 (P<0 01)。Bcl-2、c -myc、p53 检测结果显示 ,各组Bcl -2、c -myc、p53 的表达比对照组均有增加。结论 :Acivicin诱导HepG2 细胞凋亡呈剂量/时间依赖性 ;Acivicin与顺铂联用后可增强顺铂致HepG2 细胞凋亡的作用。     

柚皮苷与顺铂联用对骨肉瘤细胞增殖和迁移的影响

目的观察柚皮苷与顺铂联用对MG63细胞增殖和迁移的效果。方法将传代的MG63细胞分为顺铂处理组(顺铂组)、柚皮苷处理组(柚皮苷组)和两种药物联合处理组(联合组),分别使用不同浓度的药物在不同时间点用MTT方法检测MG63细胞光密度值(OD 490),观察细胞增殖情况;在药物作用24 h后观察细胞迁移情况。随后通过Western blot实验检测药物对cyclin d1蛋白和MMP2蛋白表达情况的调节作用。结果对细胞处理24 h后,20μg/m L柚皮苷组、5μg/m L顺铂及二者联合处理对MG63细胞的增殖抑制率分别为7.52%±2.31%、26.89%±0.19%、42.51%±2.53%,联合组抑制率高于各单药组(P<0.01)。顺铂与柚皮苷均可以抑制MG63细胞的迁移,二者联合作用后对细胞迁移的抑制作用更为明显。蛋白检测显示,顺铂和柚皮苷作用MG63细胞24 h后,均可以在一定程度上抑制cyclin d1和MMP2的表达,联合作用后抑制作用增强。结论柚皮苷与顺铂联合使用对抑制骨肉瘤细胞增殖和迁移有协同效果,可以降低顺铂的使用浓度,进而减少治疗时化疗药物的毒副作用。     

青蒿素联合顺铂抑制肝癌细胞HepG2增殖的影响

目的探讨青蒿素联合顺铂对肝癌细胞HepG2增殖的影响并初步探讨其作用机制。方法体外培养人肝癌HepG2细胞,分别用100、200、400、600、800和1 000μmol/L青蒿素或青蒿素联合3μg/ml顺铂作用24 h,采用MTT法测定细胞增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞周期,Hoechst荧光染色法观察细胞凋亡形态,细胞分析仪检测凋亡,Western blot法检测细胞内PCNA、cyclin D1、Bax、Bcl-2、Cyt C和caspase-3蛋白表达。结果同对照组相比,不同浓度青蒿素作用HepG2细胞24 h后,细胞增殖受到抑制(P0.05);青蒿素与顺铂联合作用后,抑制程度明显高于单一药物处理组,表明二者具有协同抑制作用(P0.05);青蒿素与顺铂联合作用后,细胞G0/G1期比例逐渐增加;细胞核出现染色质不均匀,核浓缩聚集、碎裂凋亡形态,凋亡率明显升高(P0.05);PCNA、cyclin D1、Bcl-2蛋白表达下调,Bax、Cyt C和激活型caspase-3蛋白表达升高。结论青蒿素与顺铂联合作用对人肝癌细胞HepG2增殖抑制具有协同作用,其机制可能与阻滞细胞周期进程和促进细胞凋亡有关。     

大蒜油联合顺铂诱导人腺样囊性癌细胞株ACC-M凋亡

目的探讨大蒜油联合顺铂对人腺样囊性癌细胞株ACC—M细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响。方法采用不同浓度大蒜油、顺铂、大蒜油联合顺铂分别处理人腺样囊性癌细胞株ACC—M细胞24、48、72h后,MTT法检测肿瘤细胞体外增殖抑制情况;选取2、8、32μg/mL的大蒜油、顺铂、大蒜油联合顺铂处理肿瘤细胞4、8h后,流式细胞术分析肿瘤细胞周期分布和凋亡率。结果8、16、32μg／mL大蒜油及2、4、8、16、32μg／mL顺铂、大蒜油联合顺铂作用24、韶、72h对ACC-M细胞均有明显抑制作用,随浓度及时间增加,抑制率呈上升趋势。联合组用药肿瘤细胞抑制率明显高于单一用药组。流式细胞术结果显示,不同浓度的大蒜油、顺铂、大蒜油联合顺铂作用能使ACC．M细胞发生G2/M期阻滞,诱导细胞凋亡,随浓度增高及作用时间延长,周期分布越明显,凋亡率增高,联合组用药细胞周期阻滞和促凋亡作用明显强于单一用药组,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论不同浓度的大蒜油、顺铂、大蒜油联合顺铂均能有效抑制ACC-M细胞生长．阻滞细胞于G2／M期并诱导肿瘤细胞凋亡,大蒜油联合顺铂对ACC—M细胞生长抑制作用明显强于大蒜油、顺铂单独应用。     

子宫中隔切除术后预防粘连方法探讨

目的 探讨子宫中隔并不孕患者宫腔镜术后不同处理方法预防宫腔粘连的效果.方法 55例子宫中隔并不孕患者行腹腔镜监护下宫腔镜子宫中隔切除术(TCRS),术后针对不同患者采用不同术后处理措施,包括宫腔放置与不放IUD,是否进行人工周期治疗,部分患者术后使用GnRH-a类药物治疗术后第1、3个月行宫腔镜检查随访,宫内放置IUD的患者;于术后第3个月取环.结果 54例患者术后进行宫腔镜检查随访,其中40例分别于术后第1、3个月完成了术后2次宫腔镜检查,另14例只完成一次检查.宫腔术后放环与否对术后宫腔形态影响无差异(P>0.05),术后使用人工周期治疗患者较未使用者子宫内膜厚,此两者术后第3个月宫腔镜检查发现宫底创面均已有内膜覆盖.使用GnRH-a类药物患者术后官腔形态满意.结论 TCRS术后宫腔放置IUD无助于预防术后粘连的发生;术后人工周期治疗应更个体化并有针对性的使用GnRH-a类药物治疗.术后及时进行宫腔镜检查随访可防止术后宫底新粘连的形成.     

10例狂犬病误诊原因分析

狂犬病近年来发病率有逐年增加的趋势,近十二年来,我们共遇见狂大病２３例,其中１０例被误诊为其它疾病,现就其误诊原因进行分析如下。１临床资料１．１ 一般资料：男８例,女２例;年龄最大７８岁,最小４岁。发病季节为３月～１１月。首诊科室,儿科３例、内科３例、转院３例、急诊科１例。１．２ 临床表现：发热７例,恐风５例,恐水６例,怕光３例,流涎１０例,胸闷、气促、呼吸困难４例,烦躁不安１０例,多汗７例,恐惧６例,肢体麻木４例,抽搐４例,恶心、呕吐２例,昏厥１例。所有病例发病至死亡时间为２天～６天,死亡原因为…     

住院患者精神用药情况调查分析

目的：了解目前住院精神患者的药物使用情况。方法：采用一日法调查西安市精神卫生中心403例住院精神患者诊断和治疗情况，并与上海市精神卫生中心2004年调查结果相比较。结果：①传统精神药物使用显著减少，新型精神药物使用占据首位；②抗精神病药物使用趋向小剂量化；③本组联用丙戊酸盐类药物显著增多；④我院精神药物使用情况与上海精神卫生中心比较有显著差异。结论：近年来精神药物使用情况已发生了显著变化，与新型精神药物疗效好，副作用少，患者依从性高有关。     

不同方法治疗慢性宫颈炎的疗效分析

目的慢性宫颈炎是妇科最常见的疾病之一,可引起盆腔脏器炎症,并且与宫颈癌的发生关系密切。本文诣在探讨不同方法在慢性宫颈炎中的疗效。方法回顾性分析新乡市中心医院收治的210例宫颈炎患者,采用药物保妇康栓、聚焦超声治疗及宫腔镜下宫颈电切术的临床效果进行统计分析。结果宫颈电切术治疗有效率为97.9%,明显高于另外两组,差异有统计学意义。结论宫腔镜下宫颈电切术治愈慢性宫颈炎,并且切除宫颈移行带,减少宫颈癌发生。     

The effect of temperature and of cetrimide on the rate of loss of refractility of spores of Bacillus megaterium

The rate of germination of spores of Bacillus megaterium at 30° is not significantly different from the rate at 37° but the onset of germination is delayed; outgrowth is normal. At 45° germination of some spores occurs but the rate is much slower than at 37°, and there is no lag; emergence occurs from only a proportion of the germinated spores and after 3 or 4 vegetative cells have been produced, replication ceases. A single regression equation can represent the germination rate of the spores at 37° in the presence of from 0.0005 to 0.02% w/v of cetrimide and in its absence. In 0.0005% w/v of cetrimide, germ cells emerge from some of the germinated spores but many of them become swollen and disintegrate. Concentrations of 0.00125% w/v or more progressively inhibit swelling and completely inhibit emergence.     

欧洲药典适用性认证介绍

目的介绍欧洲药典适用性认证程序,为国内药品监管机构和原料药生产企业提供信息,促进我国原料药生产企业的国际化。方法通过查阅调研欧盟相关药品法规和与EDQM同行面对面的交流,详细了解欧洲药典适用性认证的组织机构和具体程序。结果与结论欧洲药典适用性认证程序在对原料药的质量控制有重要作用,加强了药典的监管力度,进一步保证了原料药的质量、安全性和有效性。     

经尿道前列腺汽化电切术与经尿道前列腺电切术治疗前列腺增生症的效果对比

目的 对比分析经尿道前列腺汽化电切术与经尿道前列腺电切术治疗前列腺增生症的效果.方法 将本院2011年3月～2013年2月收治的90例前列腺增生症患者随机分为观察组（n=45）和对照组（n=45）,观察组患者采用经尿道前列腺汽化电切术治疗,对照组患者采用尿道前列腺电切术治疗,比较两组患者的疗效.结果 观察组的手术时间、术中出血量、术后冲洗时间、术后留置导尿管时间、住院时间少于对照组（P＜0.05）,残余尿量、国际前列腺症状评分和生活质量评分优于对照组（P＜0.05）,但是两组患者的并发症发生率差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 经尿道前列腺汽化电切术治疗前列腺增生症具有疗效更确切、出血少、恢复快等优势,可以作为治疗前列腺增生症的首选方法.     

甲巯咪唑治疗甲状腺功能亢进症致白细胞减少12例临床分析

目的探讨甲巯咪唑治疗甲状腺功能亢进症引起白细胞减少的规律及治疗对策。方法回顾分析本院2007年2月至2012年2月使用甲巯咪唑治疗甲状腺功能亢进症致白细胞减少12例的临床资料。结果 75%（9/12）的病例白细胞减少发生在治疗开始的第2～3个月;全部病例白细胞减少均发生在甲巯咪唑15～45mg/d治疗阶段;口服抗白细胞减少药物及皮下注射重组人粒细胞集落刺激因子治疗的有效率为83.3%（10/12）。结论甲巯咪唑药物可导致白细胞减少、粒细胞减少;用药前后应密切监测血常规,掌握白细胞减少的情况,如明显减少应及时停药,予以升白细胞药物对症治疗,必要时给予重组人粒细胞集落刺激因子皮下注射治疗。