As2O3诱导白血病细胞凋亡过程中活性氧自由基的变化

目的 研究As2O3对白血病细胞株NB4，K562，HL－60的活性氧自由基（ROS）的影响。方法 细胞内活性氧（ROS）用DCFH－DA标记，并用流式细胞仪检测。结果 0.6μmol/L As2O3作用72h能诱导NB4发生44.9%的凋亡，提高其浓度至2.7和8.1μmol/L，也能诱导K562和HL－60分别发生58.3％和62.3％。As2O3能显著降低三种细胞内ROS水平，且随浓度增加而降低。As2O3无论高浓度短时间作用或低浓度长时间作用对细胞内ROS抑制作用是相似的。结论 ROS水平下降在As2O3的诱导凋亡作用过程起了重要作用。     

As2O3与STI571单用及联用对K562细胞bcr-abl磷酸化的影响

目的 研究As2O3单用及联用ST1571对K562细胞bcr-abl蛋白酪氨酸磷酸化的影响。探讨其抗白血病的分子机制,为As2O3和ST1571联合应用治疗CML提供理论依据。方法 采用细胞增生实验检测细胞生长;采用Annexin-V／PI双染实验、DNA的PI染色及DNA电泳等方法检测细胞凋亡：运用免疫沉淀和Western blot检测K562细胞bcr-abl蛋白酪氨酸磷酸化水平。结果 As2O3和ST1571明显抑制K562细胞生长。并检测出凋亡细胞群。DNA电泳出现“梯”状条带;bcr-Abl蛋白酪氨酸磷酸化水平出现时间剂量依赖性下调。结论 As2O3和ST1571能诱导K562细胞凋亡和抑制其增生．两药联用具有协同作用．机制似与下调K562细胞bcr-abl蛋白酪氨酸磷酸化有关。     

ω-3多不饱和脂肪酸诱导多发性骨髓瘤细胞凋亡及抗增殖机制的研究

目的 探讨ω-3多不饱和脂肪酸(ω-3PUFA)单药或联合糖皮质激素地塞米松(DEX)诱导多发性骨髓瘤(MM)细胞凋亡及抗增殖作用机制。方法 采用不同浓度的两种ω-3PUFA单药二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA),或与DEX联合处理DEX耐药细胞系MM1R 24 h或48 h后,采用MTT法检测细胞的增殖,流式细胞术检测细胞周期的细胞凋亡,Western blot检测相关凋亡蛋白的表达水平。结果 不同浓度EPA或DHA(10、20、50、100 μM),及50 μM EPA或DHA单药与10 μM DEX联合均能够抑制MM1R细胞的增殖,且呈剂量和时间依赖性,联合加药组抑制效果均较单药组明显(P＜0.05);不同浓度EPA或DHA作用MM1R细胞48 h后,随着药物浓度增加,G₀/G₁期细胞逐渐增加,S期和G₂期细胞逐渐减少,细胞阻滞在G₀/G₁期,细胞凋亡率逐渐增加。而联合加药组较单药组细胞阻滞和细胞凋亡增加更明显(P＜0.05)。凋亡相关蛋白(Cleaved caspase-3、Bax)水平逐渐增加,Pro-caspase-3、BCL-2蛋白水平逐渐减少,且呈剂量依赖性。结论 ω-3PUFA能够抑制DEX耐药MM细胞增殖,阻滞细胞周期,诱导细胞凋亡,与DEX联合应用对MM细胞具有协同作用,是一种新型的、有效的逆转MM耐药的治疗药物。     

As2O3在肿瘤治疗中的不良反应防治策略研究进展

三氧化二砷(As2O3)作为一种化疗药物,在多种肿瘤的治疗中取得了一定的疗效,被广泛应用于基础研究和临床研究中.然而不良反应限制了其在临床中的应用,因此如何减少不良反应是As2O3在肿瘤治疗中的研究重点.本文就As2O3在肿瘤治疗中的不良反应机制及减少不良反应的方法 做一综述.     

自然杀伤细胞对多发性骨髓瘤细胞株KM-3影响的研究

 目的　研究自然杀伤（NK）细胞对多发性骨髓瘤细胞株KM-3杀伤及诱导凋亡的作用。方法　WST-1法观察不同效靶比的NK细胞对KM-3细胞的杀伤作用;流式细胞术检测Annexin-V+／PI-凋亡细胞、线粒体跨膜电位。结果　NK细胞作用于KM-3细胞后,能显著杀伤KM-3细胞,呈剂量和时间依赖性（P＜0.05）;NK细胞作用于KM-3细胞48 h后,Annexin-V+／PI－细胞比例明显增加,呈剂量依赖性（P＜0.05）;NK细胞作用于KM-3细胞效靶比为10∶1时,Annexin-V+／PI－细胞比例明显增加,呈时间依赖性（P＜0.05）;NK细胞作用于KM-3细胞后,KM-3细胞线粒体跨膜电位明显降低,呈剂量和时间依赖性（P＜0.05）。结论　NK细胞能明显杀伤KM-3细胞并诱导其凋亡,均呈剂量和时间依赖性。     

姜黄素对人多发性骨髓瘤细胞的抑制作用及其机制

目的：探讨姜黄素（curcumin）对人多发性骨髓瘤（multiple myeloma，MM）细胞H929、RPM18226的抑制作用及其机制。方法：姜黄素处理细胞后，采用MTT法检测细胞的增殖抑制作用；FCM分析细胞凋亡和周期的变化；RT－PCR法检测存活蛋白（survivin）、Bcl-2和BaxmRNA表达的变化。结果：姜黄素可抑制细胞H929和RPM18226的增殖，并呈时间和浓度依赖性。姜黄素诱导RPM18226细胞凋亡，发生G2／M期阻滞。姜黄素处理H929和RPM18226细胞后，survivin和BCl-2 mRNA的表达明显下调，而BaxmRNA的表达明显上调。结论：姜黄素可抑制人MM细胞增殖并诱导其凋亡，推测姜黄素在转录水平影响survivin、Bcl-2、Bax的表达，可能是其抑制肿瘤的作用机制之一。     

NK细胞治疗多发性骨髓瘤的研究进展

多发性骨髓瘤（multiple myeloma,MM）是一种表达高水平HLA-E分子的血液系统常见的恶性肿瘤,其发病率占血液系统恶性疾病的第二位,至今仍无法治愈。HLA-E主要与自然杀伤细胞(natural killer cells,NK cells)表面的抑制性受体NKG2A相结合,起到抑制NK细胞杀伤功能的作用。从而使MM细胞逃逸NK细胞的免疫杀伤。而NK细胞具有强大的抗肿瘤作用以及良好的安全性,阻止HLA-E与NKG2A相互作用,恢复NK细胞的功能,可能对MM的治疗提供重大的帮助。本文将重点探讨NK细胞在治疗MM中的作用,包括恢复NK细胞自身功能以及过继性输注NK细胞的疗效。     

AQP9在As2O3联合AZT治疗肝癌中的作用探讨

目前,化疗仍然是肝癌治疗的主要手段,将三氧化二砷(As2O3)应用于肝癌的治疗虽大大地提高了疗效,但是毒副作用较大.为此,本实验组将3'-叠氮-2',3'-脱氧胸腺核苷(AZT)作为As2O3的增敏剂与As2O3联合起来用于肝癌的治疗,在保证疗效的基础上有效地减少了As2O3的用量,但AZT的增敏机制未明,水通道蛋白9 (AQP9)的深入研究为明确AZT的增敏机制提供了重要线索.     

茶多酚诱导人多发性骨髓瘤RPMI8226细胞的凋亡及其作用机制

目的:研究茶多酚对人多发性骨髓瘤RPMI 8226细胞生长及凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制.方法:通过MTT法、瑞氏染色法和FCM法分别检测不同浓度的茶多酚对RPMI 8226细胞增殖和凋亡的影响;FCM法检测对细胞线粒体膜电位的影响;蛋白质印迹法检测△caspase-3片段和凋亡相关蛋白bc1-2的表达;ELISA法检测对RPMI 8226细胞分泌细胞因子白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)水平的影响.结果:与对照组相比,茶多酚浓度129.6和259.1 μmol/L处理RPMI 8226细胞1～3 d后均能明显抑制细胞的增殖,且呈时间-剂量相关性;统计显示,24 h时的半数细胞抑制浓度(half inhibitory concentration,IC50)值为165.7μmol/L.茶多酚(129.6μmol/L)作用24 h后,RPMI 8226细胞出现典型的凋亡形态学改变;茶多酚(129.6和259.1 μmol/L)作用24 h后,RPMI 8226细胞凋亡率分别为(24.6±2.3)％和(43.5±3.9)％,与对照组比较差异均有统计学意义;细胞的线粒体膜电位降低,活性△caspase-3片段产生,bc1-2蛋白表达水平下降,IL-6分泌水平降低.结论:茶多酚能抑制RPMI 8226细胞增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与产生活性△caspase-3片段,抑制bc1-2蛋白表达,降低细胞分泌IL-6水平相关.     

AS2O3对多发性骨髓瘤细胞凋亡及其对自分泌VEGF的影响

目的研究三氧化二砷(AS2O3)对多发性骨髓瘤(MM)细胞株KM3凋亡及其对自分泌VEGF的影响。方法不同浓度AS2O3分别作用于KM3细胞24、48及72小时，用锥虫蓝拒染法检测细胞生长抑制率，经形态学(光镜，透射电镜)和DNA电泳观察KM3细胞凋亡；用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测培养液上清血管内皮生长因子(VEGF)的含量。结果AS2O3可抑制KM3细胞的生长，诱导KM3细胞凋亡；AS2O3对KM3细胞白分泌VEGF的抑制作用具有代偿机制，且与时间浓度有关。24小时时，随着AS2O3浓度的增加，VEGF分泌逐渐增强；48和72小时时，随着AS2O3浓度的增加，VEGF分泌则先上升后下降。结论AS2O3可诱导MM细胞凋亡，同时可抑制MM细胞自分泌VEGF。     

三氧化二砷联合环腺苷酸拟似物诱导骨髓瘤细胞凋亡的实验研究

背景与目的：近年来随着新型药物和免疫疗法的成功应用，多发性骨髓瘤（multiple myeloma，MM）患者的缓解率、缓解深度和无病生存率较以往显著提高，然而仍有相当一部分MM患者属于复发/难治性病例。我们的前期研究发现，环腺苷酸（cyclic adenosine monophosphate，cAMP）拟似物和三氧化二砷（arsenic trioxide，As₂O₃）可以抑制MM细胞增殖并诱导其凋亡，成为MM治疗的新途径。该研究进一步探究As₂O₃单独和联合环腺苷酸拟似物8-对氯苯硫基环腺苷酸［8-(4-chlorophenylthio) adenosine 3’, 5’-cyclic monophosphate，8-CPT-cAMP］对MM细胞的影响及可能作用机制。方法：以不同浓度As₂O₃和8-CPT-cAMP单独和联合处理MM细胞系U266细胞，采用细胞计数试剂盒（cell counting kit-8，CCK-8）检测其增殖，应用药物联合指数（combination index，CI）分析两药是否存在协同效应，同时采用流式细胞术检测细胞周期和凋亡率，进一步利用蛋白质印迹法（Western blot）检测细胞凋亡相关蛋白caspase-3和Bcl-2表达的变化。结果：U266细胞经As₂O₃和8-CPT-cAMP单独或联合处理72和120 h后，联合用药组细胞增殖抑制率分别为（18.01±0.13）%和（28.01±0.14）%，明显高于单独用药组［As₂O₃组为（11.35±0.01）%和（16.01±0.14）%，8-CPTcAMP组为（12.26±0.30）%和（15.43±0.23）%，P均<0.05］；但两药联合处理U266细胞的CI值均大于1。联合用药组72和120 h后U266细胞凋亡率分别达到（22.26±0.13）%和（31.03±0.14）%，显著高于单药组［As₂O₃组为（10.06±0.01）%和（12.35±0.14）%，8-CPT-cAMP组为（13.26±0.30）%和（18.76±0.23）%，P均<0.05］。同时联合用药组U266细胞内caspase-3蛋白剪切活化和Bcl-2表达下降。结论：As₂O₃联合8-CPT-cAMP对MM细胞凋亡诱导效应强于单药，但无协同效应。     

三氧化二砷诱导骨髓瘤细胞SOCS-1基因-去甲基化及其对P-STAT3蛋白表达的影响

 目的 探讨三氧化二砷（AS₂O₃) 对多发性骨髓瘤 (MM) 细胞内细胞因子信号转导抑制因子-1（SOCS-1）基因甲基化状态的影响及其对磷酸化的信号转导与转录激活因子-3（P-STAT3）表达的影响。方法 采用甲基特异性PCR法检测AS₂O₃作用前后MM细胞株U266和CZ-1细胞内 SOCS-1基因的甲基化状态,应用蛋白免疫印迹法检测AS₂O₃处理前后细胞内P-STAT3蛋白的表达变化,并采用流式细胞技术检测AS₂O₃作用前后MM细胞增殖和凋亡的变化。结果 MM细胞株内SOCS-1基因存在程度不同的甲基化状态,与对照组相比,AS₂O₃作用后MM细胞内SOCS-1基因甲基化程度明显减弱或消失,P-STAT3蛋白的表达也明显减弱,同时细胞生长受抑,凋亡比率升高。AS₂O₃浓度分别为0、0.5、1.0、2.0 μmol/L时,U266细胞株的总凋亡率分别为0.06%、0.56%、48.96%、61.07%（χ²=9.19,P<0.05）;而CZ-1细胞株的总凋亡率分别为4.20%、40.30%、47.72%、68.49%（χ²=8.96,P<0.05）。结论 AS₂O₃可能通过诱导MM细胞内SOCS-1基因去甲基化作用,进一步抑制细胞增殖信号Janus激酶（JAK）-STAT通路的活化,从而诱导MM细胞的凋亡。     

亚砷酸联合沙利度胺治疗难治性复发性多发性骨髓瘤的疗效

 【摘要】　目的　观察亚砷酸（ATO）联合沙利度胺治疗难治性复发性多发性骨髓瘤（MM）的疗效和安全性。方法　35例难治性复发性MM患者,给予ATO（10 mg／d）及维生素C（2 g／d）静脉滴注,连续应用14 d,每28 d为1个疗程;同时给予沙利度胺口服,起始剂量为50 mg／d,1周后逐步加量并调整至100～150 mg／d,长期维持。连续应用3个疗程后评估疗效和患者不良反应,有效患者继续沙利度胺维持治疗,并随访观察无进展生存（PFS）。采用参照欧洲血液和骨髓移植小组骨髓瘤疗效判定标准判定疗效,并按世界卫生组织（WHO）标准判定不良反应。结果　ATO联合沙利度胺治疗难治性复发性MM总有效率71.43 %（25／35）,完全缓解2例（5.71 %）,部分缓解12例（34.29 %）,微小反应 11例（31.43 %）,无效10例（28.57 %）。25例患者进入维持治疗后,中位随访期为11个月（2～31个月）,中位PFS 9个月。主要不良反应有消化道反应、白细胞减少、肝功能损害、手足麻木等,不良反应轻微,均可耐受。结论　ATO联合沙利度胺治疗难治性复发性MM有效、可行,并有较好的治疗顺从性。     

三氧化二砷诱导骨髓瘤细胞SOCS-1基因去甲基化及其对P—STAT3蛋白表达的影响

目的探讨三氧化二砷（AS2O3）对多发性骨髓瘤（MM）细胞内细胞因子信号转导抑制因子-1（SOCS-1）基因甲基化状态的影响及其对磷酸化的信号转导与转录激活因子-3（P．STA33）表达的影响。方法采用甲基特异性PCR法检测AS2O3作用前后MM细胞株U266和CZ-1细胞内SOCS-1基因的甲基化状态,应用蛋白免疫印迹法检测AS2O3处理前后细胞内P—STAT3蛋白的表达变化,并采用流式细胞技术检测AS2O3作用前后MM细胞增殖和凋亡的变化。结果MM细胞株内SOCS-1基因存在程度不同的甲基化状态,与对照组相比,AS2O3作用后MM细胞内SOCS-1基因甲基化程度明显减弱或消失,P—STAT3蛋白的表达也明显减弱,同时细胞生长受抑,凋亡比率升高。AS2O3浓度分别为0、0．5、1．0、2．0μmol／L时,U266细胞株的总凋亡率分别为0．06％、0．56％、48．96％、61．07％（x2=9．19,P〈0．05）;而CZ-1细胞株的总凋亡率分别为4．20％、40．30％、47．72％、68．49％（X2=8．96,P〈0．05）。结论AS2O3可能通过诱导MM细胞内SOCS-1基因去甲基化作用,进-步抑制细胞增殖信号Janus激酶（JAK）-STAT通路的活化,从而诱导MM细胞的凋亡。     

抗坏血酸增强三氧化二砷诱导多发性骨髓瘤细胞凋亡

目的:探讨抗坏血酸(AA)对三氧化二砷(As2O3)诱导人多发性骨髓瘤(MM)细胞株RPMI8226细胞凋亡的作用及其分子机制。方法:采用细胞计数、细胞形态学、透射电镜、吖啶橙溴化乙锭(AOEB)染色、AnnexinⅤ染色以及细胞周期测定,观察As2O3联合AA对RPMI8226细胞的增殖抑制及促凋亡作用;应用流式细胞仪检测RPMI8226细胞死亡受体DR4分子的表达。结果:单用AA对RPMI8226细胞的生长无影响;As2O3抑制RPMI8226细胞的生长,其作用呈时间和剂量依赖性;As2O3联合AA较单用As2O3对RPMI8226细胞的抑制作用强(P<0.01)。单用5μmol/L的As2O3对靶细胞作用后,无明显凋亡形态学改变;100μmol/L的AA联合5μmol/L的As2O3作用靶细胞后:光镜、电镜和AOEB染色显示出典型的凋亡形态学改变;AnnexinV染色检测到早期凋亡细胞;细胞周期显示:G1期细胞比例增高,S期减低,并有凋亡峰。As2O3能上调RPMI8226细胞表达DR4分子,AA联合As2O3可以增强上述效应(P<0.05)。结论:AA对As2O3诱导RPMI8226细胞凋亡有增敏效应,该效应过程可能依赖于死亡受体DR4的过度表达。     

三氧化二砷对多发性骨髓瘤细胞的影响

目的：了解多发性骨髓瘤细胞对Ａｓ２Ｏ３的反应及其可能机制。方法：使用多发性骨髓瘤细胞系ＲＰ－ＭＩ８２２６和Ｕ２６６细胞作为体外模型。细胞凋亡经细胞形态学、流式细胞仪和ＤＮＡ凝胶电泳判定通过测定细胞内荧光染料Ｒｈｏｄａｍｉｎｅ１２３的染色强度分析线粒体跨膜电位（△Ψｍ），并采用蛋白印迹分析蛋白剪切情况。结果：不同浓度的Ａｓ２Ｏ３对ＲＰＭＩ８２２６和Ｕ２２６细胞产生不同的效应：０．１～０．５ｍｏｌ／Ｌ的Ａｓ２Ｏ３抑制其增殖，２．０ｕｍｏｌ／Ｌ的Ａｓ２Ｏ３浓度的Ａｓ２Ｏ３诱导其凋亡，而１．０ｕｍｏｌ／Ｌ的Ａｓ２Ｏ３在抑制细胞增殖的同时轻度诱导细胞凋亡。Ａｓ２Ｏ３诱导的ＭＭ细胞凋亡伴随线粒体△Ψｍ下降的ｃｓａｐａｓｅ－３的活化。结论：Ａｓ２Ｏ３具有一个相对较广的诱导凋亡效应谱，而线粒体△Ψｍ破坏是Ａｓ２Ｏ３诱导细胞凋亡     

8-氯腺苷酸诱导多发性骨髓瘤细胞凋亡及三氧化二砷的催化作用

 【摘要】　目的　探究8-氯腺苷酸（8-Cl-cAMP）对多发性骨髓瘤（MM）细胞的作用和三氧化二砷（As2O3）对其影响。方法　以MM细胞株RPMI 8226和U266细胞为体外模型,应用形态学和流式细胞术检测细胞DNA含量分布和细胞凋亡。以罗丹明染色检测线粒体跨膜电位,并以金氏公式评价8-Cl-cAMP 和As2O3之间的协同效应。结果　1～30 mol／L 8-Cl-cAMP能够明显抑制RPMI 8226和U266细胞的生长,并显著降低其细胞活力,呈时间和浓度依赖性。细胞形态学和流式细胞术分析显示,8-Cl-cAMP诱导骨髓瘤细胞凋亡并伴有线粒体跨膜电位的崩塌。As2O3能促进RPMI 8226细胞凋亡,但与8-Cl-cAMP无协同作用。结论　8-Cl-cAMP能够在体外有效地抑制MM细胞生长并诱导其凋亡,线粒体可能是8-Cl-cAMP诱导凋亡的靶点之一,As2O3 催化了这个凋亡过程。     

三氧化二砷对多发性骨髓瘤骨髓间充质干细胞凋亡和细胞因子表达的影响

 目的 分析三氧化二砷（As2O3）对多发性骨髓瘤（MM）患者骨髓间充质干细胞（MSC）凋亡及其IL-6、IL-1β、SCF表达的影响,探讨As2O3可能的新的作用机制和MSC作为治疗靶点的可行性。方法 含10 %FBS的1640培养液培养MSC,以终浓度为0、0.2、0.4、0.6、0.8 μmol／L的As2O3作用MSC 8 h,倒置光学显微镜和Annexin V／FITC-PI双染法荧光显微镜下观察细胞凋亡,RT-PCR检测分析IL-6、IL-1β、SCF细胞因子表达的变化。结果 As2O3以浓度依赖方式诱导MM患者MSC凋亡,细胞胞膜皱缩,胞核解体,凋亡小体形成;As2O3抑制MSC IL-6、IL-1β、SCF的表达,药物浓度在0 ~ 0.6 μmol／L时对IL-1β的抑制与浓度成正比关系,浓度大于0.6 μmol／L时对IL-1β的抑制作用无显著差别,对IL-6和SCF的抑制呈药物浓度依赖性。结论 As2O3能诱导MM患者MSC的凋亡,明显抑制其IL-6、IL-1β、SCF的表达,这可能是有效治疗MM的靶点和机制之一。     

砷诱导肝母细胞瘤HepG2细胞凋亡机理研究

目的 研究三氧化二砷(As203)诱导肝母细胞瘤细胞系HePG2细胞凋亡的机理及其对细胞核基质相关蛋白——前髓白血病蛋白(PML)表达的影响。方法 Hep2细胞培养于MEM培养基中,用不同浓度As2O3分别处理24或96h。运用原位末端脱氧核苷转换酶(TdT)标记法(TUNEL)和DNA阶梯法检测细胞凋亡。以激光共振聚交显微镜及Western杂交观察PML的表达。结果 TUNEL阳性的凋亡细胞及DNA阶梯片段可见于As203处理组。用2μmol/L As203处理的Hep2细胞核基质蛋白内PML表达减弱。激光共振聚交图像显示,经2μmol/L As203处理的Hep2细胞核中,PML蛋白的表达明显减弱;用5μmol/L As203处理后,PML在Hep2细胞核中的微小点状表达几乎消失。结论 As203在体外可明显抑制Hep2细胞生长,其诱导HePG2细胞凋亡的作用依时间及剂量不同而异。As203可降解HepG2细胞核中PML蛋白,且PML的表达降低与细胞凋亡密切相关。核基质相关蛋白PML可能是As203作用的靶蛋白。     

Phase II clinical trial of arsenic trioxide with liposomal doxorubicin, vincristine, and dexamethasone in newly diagnosed multiple myeloma

In patients with multiple myeloma, there is preclinical justification to combine arsenic trioxide (ATO and As₂O₃) with DVd (Doxil™, vincristine, and dexamethasone) for newly diagnosed patients. Eleven patients on this phase II trial received 0.15 mg/kg of ATO for five consecutive days followed by four cycles of DVd plus ATO with the ATO at 0.25 mg/kg IV twice per week. The most common grade 3 toxicities were hyperglycemia, hyponatremia, and hypocalcemia. There were four partial and no complete responses. We could not demonstrate that the addition of ATO with this schedule improved the response rate of MM to DVd.