拓扑异构酶与卵巢恶性肿瘤耐药关系的研究进展

拓扑异构酶(topoisomerase，topo)是参与DNA拓扑结构调整和转录、复制、修复的重要工具酶，由活性即残基向DNA发动亲核攻击，导致DNA单股或双股断裂。Topo蛋白的含量、活性、功能改变是卵巢癌耐药发生的重要机制之一，作用于相关信号传导通路的上游。Topo II蛋白表达增加的卵巢癌患者预后较差。TopoI、II抑制剂如TPT、VP-16等在复发卵巢癌的有效率大致为13％-25％，现已成为二线用药的首选。     

卵巢癌拓扑异构酶Ⅱα表达与化疗敏感性的关系

目的 :研究卵巢癌拓扑异构酶Ⅱα表达与化疗敏感性的关系。方法 :采用免疫组化Envision法检测 81例上皮性卵巢癌TopoⅡα的表达 ,并予以 3～ 8个疗程以铂类为主的联合化疗。结果 :低分化卵巢癌TopoⅡα的表达明显高于中、高分化者 (P =0 .0 4 7) ,术前行化疗的卵巢癌TopoⅡα表达明显低于术前未化疗者 (P =0 .0 0 2 ) ,而复发性卵巢癌TopoⅡα表达再次升高 ;不考虑MDR1因素时 ,TopoⅡα与化疗敏感性间未见明显的相关性 (P =0 .0 73) ,而在排除MDR1影响后 ,TopoⅡα表达与化疗疗效间具有明显相关性 (P=0 .0 2 6 ) ,阳性表达时化疗效果好 ,未发现TopoⅡα的表达强度与化疗疗效间有相关性(P =0 .98)。结论 :TopoⅡα表达与卵巢癌分化程度有关 ,化疗影响TopoⅡα的表达 ,复发病例TopoⅡα表达重新增强 ,MDR1阴性时 ,TopoⅡα表达与化疗敏感性间具有明显相关性。因此 ,可以根据卵巢癌TopoⅡα表达情况 ,制定合理的化疗方案     

肿瘤细胞对DNA拓扑异构酶Ⅰ抑制剂的耐药研究进展

DNA拓扑异构酶(Topo)抑制剂作为一种新的抗癌靶点,在恶性肿瘤的治疗中有广阔的应用前景,然而耐药性的出现极大限制了其临床应用.Topo分Ⅰ,Ⅱ两型,就TopoⅠ抑制剂的耐药机理及可能的逆转途径进行综述.     

RNA干扰技术抑制卵巢上皮性癌耐药细胞Topo Ⅱα基因表达并逆转耐药的体外研究

目的 探讨RNA干扰技术抑制卵巢上皮性癌(卵巢癌)耐药细胞TopoⅡα基因的表达是否能逆转耐药.方法 (1)设计并筛选针对Topo Ⅱα基因的、沉默效果最佳的小分子干扰RNA(siRNA),将其克隆到psilencer4.1-CMV-neo载体上;将psilencer4.1-CMV-neo-Tope Ⅱα重组质粒转染至受试细胞,建立稳定转染重组质粒的细胞Topo Ⅱα siRNA(+)SKOV3/DDP.(2)采用RT-PCR技术和蛋白印迹法测定稳定转染细胞中TopoⅡαmRNA和蛋白的表达;分别采用四甲基偶氮唑蓝比色法、流式细胞仪和高效液相色谱法测定TopeⅡαRNA干扰前后细胞的耐药指数、细胞周期和细胞内顺铂含量的变化.结果 (1)转染psilencer4.1-CMV-neo-Topo Ⅱα质粒后能抑制SKOV3/DDP细胞中TopoⅡα基因的表达,TopeⅡα siRNA(+)SKOV3/DDP和SKOV3/DDP细胞中TopoⅡα mRNA的表达水平分别为0和0.92±0.08;两种细胞中TopoⅡα蛋白的表达水平分别为0.51±0.04和1.95±0.09,两者比较,差异有统计学意义(P<0.01).(2)SKOV3/DDP细胞转染Topo Ⅱα siRNA后耐药指数下降,TopoⅡα siRNA(+)SKOV3/DDP和SKOV3/DDP细胞的耐药指数分别为3.46和5.05,两者比较,差异有统计学意义(P<0.05).(3)TopoⅡα siRNA(+)SKOV3/DDP细胞的G_0/G_1期、G_2/M期细胞比例较SKOV3/DDP细胞增加,S期细胞比例减少(P均<0.05).(4)Topo Ⅱα siRNA(+)SKOV3/DDP细胞经20 μg/ml顺铂处理24 h后,其顺铂含量(157.20 ng)较SKOV3/DDP细胞(63.99 ng)升高,两者比较,差异有统计学意义(P<0.05).结论 阻断卵巢癌耐顺铂细胞中Topo Ⅱα基因的表达能逆转其对顺铂的耐受性.     

肿瘤细胞对DNA拓扑异构酶Ⅰ抑制剂的耐药研究进展

DNA拓扑异构酶(Topo)抑制剂作为一种新的抗癌靶点，在恶性肿瘤的治疗中有广阔的应用前景，然而耐药性的出现极大限制了其临床应用。Topo分Ⅰ，Ⅱ两型，就TopoⅠ抑制剂的耐药机理及可能的逆转途径进行综述。     

宫颈鳞状细胞癌ATP-TCA法体外药敏试验与耐药相关蛋白表达的关系

目的:探讨代表不同耐药机制的P糖蛋白(P-gp)、谷胱甘肽S-转移酶(GST-π)、DNA拓扑异构酶Ⅱ(TopoⅡ)、胸苷酸合成酶(TS)在原发宫颈鳞癌组织中的表达及其与临床病理参数的关系;分析三磷酸腺苷生物荧光法体外药敏试验(ATP-TCA)结果与耐药蛋白表达的关系。方法:收集32例宫颈鳞癌患者的新鲜癌组织制成单细胞悬液,采用ATP-TCA法成功检测上述细胞对11种化疗药物(共16种组合)的体外敏感性;采用EnVision二步法免疫组化检测32例宫颈鳞癌组织中P-gp、GST-π、TopoⅡ、TS蛋白的表达,并分析其与临床分期、肿瘤分化程度的关系。结果:耐药蛋白P-gp、GST-π、TopoⅡ、TS在宫颈鳞癌组织中的表达与临床分期、肿瘤分化程度无相关性;耐药蛋白P-gp表达与体外PTX+CBP耐药正相关(P=0.040);耐药蛋白TS表达与体外5-FU、5-FU+MMC、5-FU+DDP耐药正相关(P=0.015,0.012,0.006);TopoⅡ,GST-π蛋白表达与宫颈鳞癌体外耐药均无相关性。结论:体外药敏试验联合免疫组化检测,有可能用于宫颈鳞癌化疗前药敏预测。     

HER2/neu蛋白过度表达与卵巢癌研究进展

HER2/neu蛋白是原癌基因HER2/neu编码的一种具有酪氨酸激酶活性的跨膜糖蛋白,在卵巢癌的发生、转移及恶性表型维持中起着重要作用.约15%～30%的卵巢癌存在HER2/neu蛋白过度表达.HER2/neu蛋白过度表达与卵巢癌患者较短存活期相关,可作为预后因素.HER2/neu蛋白表达高低与卵巢癌对化疗药物敏感性有关,对临床化疗药物的选择起指导作用.但以HER2/neu蛋白为靶点的抗卵巢癌治疗效果需进一步临床实验验证.     

微血管密度、细胞增殖指数与子宫肉瘤生存分析探讨

目的:通过检测原始造血细胞抗原(CD34)和DNA拓扑异构酶IIα(TopoⅡα)的表达水平,反映子宫肉瘤生长、转移、复发的临床特点,探讨两种标记物用于监测子宫肉瘤病情及判断预后的意义。方法:应用免疫组织化学(IHC)法检测子宫肉瘤中CD34、TopoⅡα的表达水平。结果:除病理类型及分期外,CD34和TopoⅡα表达与患病年龄、初潮年龄、孕产次、月经周期及经期、是否绝经无关。低微血管密度(MVD)组和低细胞增殖指数(LI)组患者经不同范围的手术治疗,生存期有差别。手术治疗+辅助治疗组的两种标记物低值组与高值组对生存期的影响无统计学意义。高值组总体生存率低于低值组,Log-Rank检验,P分别为0.0035和0.0039。Cox模型多因素回归分析示:子宫肉瘤预后与病理类型、分期、是否切除双侧卵巢、TopoⅡα、CD34表达有关,与其它临床病理特征无关。结论:CD34-MVD可能是反映子宫肉瘤侵袭转移的特异性指标。TopoⅡα有望作为子宫肉瘤细胞增殖的特异性标记物。     

65例早期宫颈癌耐药基因产物与临床预后关系的初步探讨

目的:探讨耐药基因产物P-糖蛋白(P-gp)、谷胱甘肽-s-转移酶(GST-π)、拓扑异构酶Ⅱ(TopoⅡ)、胸苷酸合成酶(TS)在宫颈癌中的表达及临床意义.方法:应用免疫组织化学方法检测65例宫颈癌中P-gp、TopoⅡ、GST-π、TS的表达,并分析其与临床预后之间的关系.结果:P-gp的表达与肿瘤分化程度、淋巴结转移有关(P<0.05),与UICC分期、局部复发无关(P>0.05);TopoⅡ的表达与淋巴结转移、局部复发有关(P<0.05),与肿瘤分化程度、UICC分期无关(P>0.05);GST-π的表达与各个指标之间均有关(P<0.05);TS与淋巴结转移、UICC分期有关(P<0.05),与局部复发、肿瘤分化无关(P>0.05)。经多因素Cox比例风险模型分析显示:局部复发、淋巴结转移及TopoⅡ、GST-π的表达与宫颈癌患者术后生存率有关(P<0.05)。结论:联合检测宫颈癌中P-gp TopoⅡ、GST-π、TS对判断宫颈癌的预后十分必要;局部复发、淋巴结转移及TopoⅡ、GST-π的表达可作为宫颈癌患者独立的预后因素。     

基于网络药理学探讨半枝莲治疗卵巢癌的作用机制

目的 基于网络药理学和分子对接方法探讨半枝莲治疗卵巢癌的作用机制。方法 利用TCMSP数据库筛选半枝莲的潜在活性成分;采用Genecards数据库获取卵巢癌相关靶点及对应致病基因,利用Venny2.1.0平台取交集获取关键基因;应用Cytoscape软件构建“半枝莲-卵巢癌”蛋白互作网络;对关键基因进行GO和KEGG富集分析,最后利用分子对接验证分析结果。结果 经TCMSP筛选获得半枝莲的潜在有效活性成分29个;疾病靶点基因996个,取交集共获得125个关键基因;这些基因主要参与泛素样蛋白连接酶结合、DNA结合转录因子结合、受体配体活性等生物功能过程;半枝莲可能通过调控PI3K-Akt等多种信号通路影响卵巢癌的生物学行为,分子对接结果显示重要化合物对AKT1和VEGFA等蛋白具有一定亲和能力。结论 半枝莲是一个潜在治疗卵巢癌的候选药物,其可以通过多靶点、多通路协同作用的机制发挥抗癌保护效应。     

卵巢癌患者外周血T淋巴细胞核仁形成区嗜银蛋白的研究

目的 :研究卵巢癌患者外周血T淋巴细胞核仁形成区嗜银蛋白 (AgNORs)与卵巢癌的临床特点及生物学行为的关系。方法 :以卵巢癌患者 36例为研究组 ;以良性卵巢肿瘤患者 17例及健康妇女 2 0例为对照组。利用KL型肿瘤免疫图像分析系统计数T淋巴细胞核仁银染面积与细胞核面积比值 (integratedsquare ,IS)。结果 :卵巢浆液性腺癌、子宫内膜样腺癌、粘液性腺癌及未分化腺癌的IS均值分别为 9.31± 1.96 %、7.4 1± 0 .39%、7.98± 2 .95 %、6 .78± 0 .70 % ;高分化、中分化、低分化卵巢癌患者IS均值分别为 9.6 6±1.85 %、8.37± 1.95 %、8.16± 2 .0 5 % ;Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期及Ⅳ期卵巢癌患者的IS均值分别为 8.80± 1.35 %、10 .6 5± 0 .96 %、9.12± 1.6 3%、6 .0 1± 0 .4 5 % ;良性卵巢肿瘤及健康妇女的IS均值分别为 9.0 9± 1.83%、9.6 3± 1.5 2 %。不同组织学类型、不同分化级别卵巢癌患者其外周血T淋巴细胞AgNORs表达差异无显著性 (P >0 .0 5 )。Ⅳ期卵巢癌与Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期卵巢癌及对照组患者的外周血T淋巴细胞AgNORs表达有高度显著性差异 (P <0 .0 1)。结论 :Ⅳ期卵巢癌患者较Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期卵巢癌及对照组患者外周血T淋巴细胞rD NA转录活性及细胞免疫功能明显降低 ,这可能是导致卵巢癌进展的因素之一     

核苷酸切除修复与卵巢癌顺铂耐药

DNA损伤修复能力增强是导致卵巢癌顺铂耐药的主要原因之一,由铂-DNA加合物引起的DNA损伤修复主要通过核苷酸切除修复途径,该途径涉及多种蛋白,包括损伤识别、切开、切除、修复合成和DNA连接等5个步骤.大量基础和临床研究表明核苷酸切除修复基因表达水平的增加与卵巢癌顺铂耐药相关联.应用基因治疗、化疗增效剂或联合化疗抑制肿瘤细胞的DNA修复能力将增加卵巢癌患者顺铂敏感性.     

卵巢癌顺铂耐药的分子机制研究进展

顺铂耐药是卵巢癌术后复发和预后不良的重要原因之一.卵巢癌的顺铂耐药机制复杂,除抑癌基因、癌基因、耐药相关基因的改变外,还涉及染色体改变、细胞解毒过程及DNA损伤修复能力的增强以及细胞骨架、热休克蛋白表达异常等,对其分子机制的了解有助于指导卵巢癌临床治疗方案的选择.     

卵巢上皮性癌DNA异常甲基化模式的建立及其应用

目的 建立卵巢上皮性癌(卵巢癌)的DNA异常甲基化模式,探讨其在寻找新的卵巢癌特异性标志物中的应用价值.方法 用激光显微切割技术从20例卵巢癌组织冰冻切片中获取的肿瘤细胞作为实验对象,用原代培养的5例正常卵巢上皮细胞作为对照,用基于芯片技术的差异甲基化杂交(DMH)方法检测卵巢癌的DNA异常甲基化模式.选择7个DMH结果显示在卵巢癌中低甲基化的基因启动子区胞嘧啶-磷酸-鸟嘌呤二核苷酸岛(CGI),用甲基化实时荧光定量PCR技术检测其在87例卵巢癌和42例卵巢良性病变患者病变组织中的甲基化状态.结果 182个过甲基化位点和64个低甲基化位点(阳性率为25%以上的位点分别有18个和31个)组成了卵巢癌的DNA异常甲基化模式.87例卵巢癌和42例卵巢良性病变患者组织DNA中,基因LSM2、EGFLAM和CDKN2A的甲基化率依次为11%(10/87)和33%(14/42)、8%(7/87)和21%(9/42)、9%(8/87)和31%(13/42),与卵巢良性病变相比,卵巢癌中3个基因甲基化率均有显著下降,分别比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 建立卵巢癌的DNA异常甲基化模式是卵巢癌研究中非常重要的基础环节.基因EGFLAM、CDKN2A和LSM2启动子区CGI有可能成为新的卵巢癌特异性的低甲基化肿瘤标志物.     

卵巢癌化疗耐药相关基因与预后的研究进展

卵巢癌是妇科常见的恶性肿瘤,死亡率居妇科之首.化疗是目前治疗卵巢癌的重要手段之一.化疗耐药是影响晚期卵巢癌患者预后的主要原因.卵巢癌化疗耐药是多基因多因素共同参与的结果.近年来卵巢癌化疗耐药相关基因成为监测预后的指标.主要从细胞内有效药物浓度的降低(MDR基因,MRP,LRP,GST),药物作用的靶点异常(微管蛋白基因),DNA损伤修复功能异常(MMR,BRCA1基因)及细胞凋亡异常(p53、bcl-2基因、caspase,survivin 基因)这四个方面对卵巢癌化疗耐药相关基因及其与预后作一综述.     

ATM对卵巢癌细胞株CaOV3顺铂敏感性的影响

目的:探讨ATM激酶表达水平和活性对卵巢癌细胞Ca OV3顺铂敏感性的影响,以及可能的机制。方法:以ATM-siRNA转染Ca OV3细胞48h下调ATM蛋白水平,以KU-55933预处理Ca OV3细胞12h下调ATM激酶活性。CCK8试验检测细胞活性,Western blot法检测ATM及r-H2AX蛋白表达,荧光共聚焦confocal检测细胞DNA双链损伤标志蛋白r-H2AX表达及同源重组修复关键蛋白RAD51表达及两者细胞核中共定位,应用碱性慧星试验检测细胞内DNA双链损伤情况,流式细胞术检测细胞周期分布。结果:卵巢癌细胞系Ca OV3具备相对完整的同源重组修复能力,下调ATM或抑制ATM激酶活性均可降低DNA双链损伤情况下的同源重组修复能力,增加其对c DDP敏感性,同时减少c DDP引起的G0/G1期周期阻滞。结论:抑制ATM可影响卵巢癌细胞同源重组修复过程,增加DNA双链损伤,缓解G0/G1期周期阻滞,增加其对顺铂敏感性。     

佛波酯诱导人卵巢癌细胞株SKOV3线粒体DNA突变的研究

目的:研究佛波酯(TPA)对体外培养的人卵巢癌细胞株SKOV3线粒体DNA(mtDNA)突变的诱导作用.方法:提取细胞DNA,进行mtDNA突变的分析,比较各组细胞之间mtDNA突变率和突变类型的差异.结果:mtDNA的突变热点依次是CoⅡ基因、ND5基因、Crytb基因和ND4基因,在mtDNA突变的测序中发现多个基因突变,突变类型主要为A→T,T→A,G→A,T→C,A→G,C→T,其中C→T为突变热点.结论:Cytb基因的突变可能会对线粒体的氧化过程产生显著的影响.人卵巢癌细胞株SKOV3株mtDNA编码区的C0Ⅱ、Cytb、ND4、ND5基因是一个具有高度多态性和突变性的区域,它与卵巢癌的发生、发展有重要关系.     

血清DNA定量及基因甲基化状态检测在卵巢上皮性癌诊断中的应用

卵巢恶性肿瘤是病死率最高的女性生殖系统肿瘤,其中90%为卵巢上皮性癌(卵巢癌),而70%的患者诊断时已达Ⅲ期或Ⅳ期,5年生存率仅为15%～20%[1].因此发现新的既敏感又特异的肿瘤标志物,对卵巢癌的早期诊断、提高生存率具有重要意义.近年的研究发现,作为表观遗传的主要方式之一,DNA异常甲基化是肿瘤发生的早期事件,可早于基因及其表达产物的改变[2].而且,肿瘤患者血清DNA含量明显升高,虽然其来源尚未十分明确,但其具有与肿瘤DNA类似的遗传学和表观遗传学改变[3].因此,血清DNA的异常甲基化用于肿瘤的早期诊断具有明显的优势和极大的潜力.本研究通过定量检测卵巢癌患者血清DNA含量,以及基因EGFLAM、CDKN2A和LSM2的启动子区胞嘧啶-磷酸-鸟嘌呤二核苷酸岛(CpG island,CGI)甲基化状态,探索新的可用于辅助卵巢癌早期诊断的血清DNA甲基化标志物.     

同源重组修复基因在卵巢癌中的研究进展

卵巢癌是女性生殖器常见的三大恶性肿瘤之一,由于卵巢位于盆腔深部,起病隐匿,约70%～75%的患者出现症状时已达晚期,严重威胁着女性的健康。目前已知的大多数卵巢癌易感基因通过同源重组在修复DNA双链断裂中发挥作用,乳腺癌易感基因1（BRCA1）和BRCA2是卵巢癌最常见的两大基因,是双链DNA断裂同源重组修复过程中的关键因子,以其为核心组成的BRCA肿瘤抑制因子网络中多种致病性突变均可损伤基因组的完整性和稳定性,增加卵巢癌的易感性。多项研究表明同源重组相关基因或蛋白的表达与肿瘤对放疗及基因药物的敏感性相关,并可成为生物标记物被用于肿瘤的个体化治疗。现对同源重组修复通路中与卵巢癌关联最密切的几种重要基因突变与卵巢癌的关系进行初步探讨,为卵巢癌的筛查和早期预防奠定临床基础。     

卵巢癌早期诊断的血清肿瘤标志物研究进展

卵巢癌死亡率居妇科恶性肿瘤之首.由于早期临床症状隐匿,缺乏有效的早期诊断方法,超过70%的患者就诊时已是临床晚期.早期卵巢癌患者5年生存率为70%～90%,而晚期卵巢癌患者的5年生存率仅为20%.因此,早期诊断对卵巢癌的预后有重要影响.近年研究者致力于寻找特异度、灵敏度高的血清肿瘤标志物,如CA125、卵巢癌差异蛋白4(HFA)、可溶性问皮素相关蛋白(SURF)、人激肽释放酶(Hk)、CA72-4和骨桥蛋白(OPN)等,以及血清标记物的联合检测,并取得一系列进展.对卵巢癌早期诊断的血清肿瘤标志物研究进展综述.