母血清及血浆中胎儿游离DNA的研究进展

发现母血浆及血清中胎儿游离DNA，为无创性产前诊断技术开辟新途径。利用母血中有男胎睾丸确定基因(SRY)特异性序列确定胎儿DNA存在。用PCR技术扩增SRY的单拷贝序列(DYSl4)，确定性别敏感性60％～100％。利用实时定量PCR技术测定母血清和血浆中胎儿DNA浓度，妊娠7周母血清中可确定胎儿DNA，随妊娠周增加胎儿DNA量也增高。另证明非整倍体核型胎儿在母血浆中的DNA浓度高于正常核型胎儿，母血浆中定量测定胎儿游离DNA技术可能成为筛查染色体非整倍体核型胎儿的一种手段。     

孕妇血浆中游离胎儿DNA测定在产前诊断中的应用

传统的羊膜腔穿刺和绒毛吸取是目前许多医院较为常用的产前诊断技术，因其操作易导致流产、胎儿损伤或死亡、宫内感染、羊膜破裂等，使其在临床上的推广和应用受到了限制。利用孕妇外周血中的胎儿细胞进行遗传学诊断一直是无创性产前诊断的重要探索途径。但由于孕妇外周血中的胎儿细胞数量少，而且存在个体差异，目前很难从外周血中分离出完整的胎儿细胞，这无疑限制了这种方法在临床上的应用。1997年，有学者研究发现，孕妇血液循环中存在较丰富的游离胎儿DNA，这一发现为无创性产前诊断和筛查开辟了新领域。     

孕妇血浆中胎儿游离DNA检测在唐氏综合征产前诊断中的应用

唐氏综合征又称先天愚型或21三体综合征,是新生儿最常见的先天性染色体病,其发病率约为1/600～1/800,高龄产妇多发.新生儿出生后多智力低下,给社会和家庭带来了极大的负担,本研究采用实时定量PCR技术,测定正常孕妇及妊娠唐氏综合征患儿的孕妇血浆中胎儿游离DNA水平的变化,旨在寻找一种非创伤性、快捷、经济的产前筛查唐氏综合征的新指标.     

利用孕妇血浆游离胎儿DNA产前诊断胎儿RhD血型的研究

目的探讨无损伤性产前诊断胎儿RhD血型的方法。方法西安交通大学第二医院1999年2月至2001年12月，以妊娠14～40周的单胎孕妇为对象，其中RhD阴性孕妇8例，RhD阳性孕妇12例，利用PCR技术对孕妇血浆中游离胎儿DNA进行RhD基因第10外显子的特异性扩增，扩增片段长度为186bp，另外以等位基因RhCE基因为内对照，扩增片段长度为136bp，结果能同时扩增出186bp和136bp两条带，判断所妊娠胎儿血型为RhD阳性；扩增出136bp一条带，判断所妊娠胎儿血型为RhD阴性。8例RhD阴性孕妇中，5例扩增出136bp一条特异性片段，3例同时扩增出136bp和186bp两爷特异性片段；12例RhD阳性孕妇血浆标本，均同时扩增出136bp和186bp两条特异性片段，所有RhD-PCR扩增结果均得到脐血血清学检测结果的证实。结论利用孕妇血浆中游离胎儿DNA对胎儿RhD血型进行诊断，是一种简便、快速、特异性较高的产前诊断方法，值得临床推广应用、     

孕妇血浆中胎儿DNA检测在产前诊断中的应用

目的 探讨孕妇血浆中提取胎儿游离DNA,鉴别胎儿性别以诊断胎儿遗传性疾病的方法。方法 选择妊娠7-38周,B超确诊为单胎,经绒毛和羊水细胞染色体检测,确诊为妊娠男性胎儿的正常孕妇16例,妊娠女性胎儿的正常孕妇8例;X性连锁遗传病（假性肥大性肌营养不良,血友病,色盲,无汗性外胚层发育不良症）家族史行产前诊断者4例,用酚提取法,纯化孕妇血浆中胎儿DNA,然后用巢式聚合酶链反应（PCR）技术测定男性胎儿睾丸决定因子（SRY）。结果 16例妊娠男性胎儿孕妇血浆中,胎儿游离DNA第1次巢式PCR测定,检出SRY基因扩增片段10例,第1次检出率为62.5%;经第2次巢式PCR测定。另6例全部检出SRY基因扩增片段,累计检出率为100%,妊娠女性胎儿的8例孕妇血浆中,均未检出SRY基因扩增片段,4例X性连锁遗传病家族史者均检出SRY基因扩增片段。结论 从孕妇血浆中提取胎儿游离DNA行胎儿性别诊断是一种快速,简便,准确的产前诊断方法。     

应用巢式PCR检测孕妇血浆及尿液中Y染色体特异DNA

为应用无创伤性巢式PCR术检测不同孕期孕妇血浆和尿液中胎儿Y染色体特异DNA进行研究。由于正常非孕育龄妇女染色体中不含有Y染色体特异DNA,故在对孕妇血液及尿液的PCR检测中,如出现Y染色体特异DNA扩增片断则说明系为胎儿所携带的遗传物质,证明该胎儿为男婴。     

孕妇血浆和血清中胎儿DNA在产前诊断中的应用

长久以来许多学者致力于研究利用孕妇外周血中的胎儿细胞进行非创伤性产前诊断 ,虽然取得了一些重要进展 ,但母血中的胎儿细胞数量稀少 ,富集效率不高且价格昂贵 ,成为常规应用的主要障碍。母体血浆中存在较高浓度胎儿DNA的发现 ,为非创伤性产前诊断开辟了一个新途径。一、孕妇血浆和血清中的胎儿DNA肿瘤患者的血浆和血清中癌源性DNA的发现[1 ,2 ] ,激发了研究人员将血浆用于分子分析的兴趣。由于胎盘的滋养层和恶性肿瘤细胞的生物学行为类似 ,均有侵入性和致癌基因表达 ,故一些研究人员把胎盘喻为“假恶性物”[3] 。这就提示 :癌症患者…     

运用O型血孕妇血浆中游离胎儿DNA检测胎儿ABO血型

目的:探讨利用O型血孕妇血浆中游离胎儿DNA检测胎儿ABO血型的可行性。方法:用酚/氯仿法从39例O型血孕妇(孕36~40+3周)且孕男性胎儿的血浆中提取胎儿DNA,巢式PCR扩增血浆中的SRY基因证实胎儿DNA存在,再用特异性序列-聚合酶链反应(SSP-PCR)检测胎儿ABO血型。用常规血清学方法测母体及新生儿血型。结果:10例孕A型血胎儿的孕妇血浆中扩增出A基因8例,6例孕B型血胎儿的孕妇血浆中扩增出B基因6例,23例孕O型血胎儿扩增出O基因而无A或B基因21例,准确性和敏感性分别为89.7%(35/39)和87.5%(14/16)。结论:利用孕妇外周血中游离胎儿DNA检测胎儿ABO血型可行,对诊断和预防新生儿ABO血型不合性溶血病的发生具有积极意义。     

母体循环中游离胎儿DNA的起源及诊断潜力研究进展

有关母体循环中游离胎儿DNA的研究一直是热点.胎儿核酸以惊人的稳定性存在于母体循环中,可能由于凋亡体中存在某些保护机制,游离胎儿DNA在母体循环中大量产生和快速变化更为妊娠过程提供了动力学依据.综合各学科理论和现有数据,认为母体循环中游离胎儿核酸主要来源于胎盘,其次也有部分来自胎儿造血细胞系统.由于母体循环中胎儿DNA的相对容易检测,胎儿非整倍体病、子痫前期、胎儿RhD基因型和一些单基因遗传病的诊断与鉴别手段应运而生.有关非性别依赖基因多态性、外遗传标志物以及循环mRNA序列研究的进展最终将使此类技术不受胎儿性别限制而推广应用.     

孕妇外周血中胎儿细胞及胎儿DNA的检测

目的　建立从孕妇外周血中分离有核红细胞 (NRBC)及DNA的可靠方法 ,并鉴定其来源。方法　对88例孕妇外周血分别通过密度梯度离心法 ,流式细胞术 (FCM )和荧光激活细胞分离技术 (FACS)分离NRBCs。应用套式PCR技术对 6 5例孕妇血浆DNA进行正常男性SRY基因检测。结果　①NRBCs:2 7例样品经密度梯度离心 ,其中 14例分选到 1～ 10个NRBCs。FACS技术对 6 1例样品进行转铁蛋白受体阳性细胞 (CD71+ )分选 ,所有样品均有CD71+ 细胞 ,其浓度为 (0 35± 0 2 5 )× 10 -2 。②胎儿DNA :4 6例怀男胎孕妇血浆DNA中SRY基因检测出率为 6 5 2 2 % (30 / 4 6 ) ,怀女胎的 19例样品SRY基因未检出率为 94 74 % (18/ 19)。结论　从孕妇外周血中分选胎儿NRBCs和血浆中胎儿DNA的方法已取得较大进展。利用母血中胎儿细胞及DNA诊断遗传性疾病可望成为最佳非创伤性产前诊断技术     

孕妇血浆中胎儿DNA的数量变化的研究

目的探讨孕妇血浆中胎儿游离DNA的数量变化的规律。方法提取68例孕妇血浆中的DNA,用实时荧光定量聚合酶链式反应(FQ-PCR)技术检测其胎儿SRY基因,并对其中怀男胎孕妇外周血浆中的胎儿DNA的数量进行动态分析。结果在怀男胎的孕妇外周血中均检测到了SRY基因,而在怀女胎的孕妇中未检测到。胎儿游离DNA最早出现的时间平均为7.7周,SRY基因拷贝数平均为5.53copies/ml。随孕期的增加,母血浆中胎儿DNA的含量在逐渐增加,并得出各孕周的标准参考值。在分娩后母血中胎儿DNA的含量就显著下降,到分娩后第二天就完全不能检测到。结论孕妇外周血浆中游离DNA的含量变化具有一定的规律,可以利用其进行无创伤性产前诊断。     

应用套式聚合酶链反应技术检测孕妇血浆中胎儿DNA的研究

目的 依据孕妇血浆中存在游离胎儿ＤＮＡ的理论,寻找一种非创伤性产前基因诊断的新方法。方法 用套式聚合酶链反应技术对１２例１２￣４０孕周的初产妇血浆中游离胎儿ＤＮＡ进行特异性扩增,扩增的基因为Ｙ染色体短臂单拷贝基因片段（ＤＹＳ１４基因）,扩增片段的大小分别为２３９ｂｐ和１９８ｂｐ,１２例孕妇均采用母体血浆直接作为模板进行套式聚合酶链反应扩增。结果 １０例妊娠男性胎儿孕妇中有８例血浆中出现ＤＹＳ１４基     

孕妇外周血胎儿游离DNA的检测及应用研究

从1997年首次在孕妇外周血中发现胎儿DNA以来,众多学者致力于将其应用于无创性的产前诊断。荧光定量PCR实现了胎儿游离DNA浓度的检测,目前研究发现,正常孕妇血浆胎儿DNA浓度稳定于某一水平,有望成为产前诊断和孕期检测的一项新指标。有学者认为,子痫前期母循环中胎儿DNA可有异常增高,而且子痫前期的孕妇在有临床症状前,孕妇血浆胎儿DNA水平异常增高,这与较多胎儿DNA释放到母血中,和肝肾功能异常导致胎儿DNA在母血中清除紊乱有关。此外许多妊娠合并症和并发症都伴有母外周血DNA水平的异常增高,例如:性连锁疾病、Rh血型不合、父系遗传性疾病、染色体非整倍体胎儿、早产等。现就孕妇外周血胎儿游离DNA的检测及临床应用作一综述。     

母血中胎儿DNA与子痫前期关系的研究

目的:探讨孕妇外周血中胎儿DNA的浓度水平与子痫前期之间的关系。方法:留取第一次常规产前检查的472例孕妇的外周血并随访。设置阴性对照后,采用实时PCR方法定量检测怀男性单胎并发展为子痫前期的17例孕妇及34例怀男性单胎正常孕妇的血浆胎儿DNA的SRY基因浓度。结果:发展为子痫前期患者的外周血浆胎儿DNA浓度明显高于正常孕妇,中位数分别为165.41copies/ml和48.75copies/ml,有显著的统计学差异(P<0.001)。结论:发展为子痫前期患者外周血中的胎儿DNA明显增高,而浓度水平与子痫前期的严重程度似乎无关。     

母血中胎儿mRNA用于无创伤性产前诊断的研究进展

约4%的新生儿受一种或多种先天性疾病的影响,而其中35%是遗传性疾病.因此,及早进行产前诊断,对有效预防和控制遗传病患儿的出生具有十分重要的意义.传统的产前诊断方法,如羊膜腔穿刺、绒毛膜取样、脐带取血等均具有创伤性,对胎儿和孕妇都有一定的危险性,有的甚至造成流产、胎儿肢体损伤、短肢畸形、宫内感染、死胎等,所以人们一直在探求无创伤性的产前诊断方法.     

母血中胎儿游离核酸检测在诊断胎儿非整倍体中的应用

胎儿染色体非整倍体是常见且严重的染色体异常类出生缺陷。目前常用的侵入性检查方式因存在诸多弊端而被部分孕妇拒绝。在过去的15年中,母体血浆中胎儿游离核酸的研究进展使得无创性产前诊断胎儿非整倍体成为可能。而最近胎儿与母体表观遗传学差异及胎儿特异性RNA的发现使得这项技术摆脱了胎儿性别的限制。随着数字PCR及大规模平行测序等新技术的运用,胎儿非整倍体检测的敏感性和特异性得到了提高。本文综述了无创性产前诊断胎儿非整倍体的研究进展,并讨论了其临床应用的可行性。     

游离胎儿DNA高通量基因测序技术在产前筛查的临床应用

目的:探讨应用孕妇血浆中游离胎儿DNA高通量基因测序技术在无创性产前诊断中的可行性.方法:采用化学发光法对22977例孕中期妇女进行唐氏综合征筛查,对筛查结果为高风险的1173例孕妇采用高通量基因测序技术检测母体血浆胎儿游离DNA,分析胎儿染色体拷贝数,检测结果为高危的孕妇再做羊膜腔穿刺及脐血穿刺术进行胎儿染色体核型分析.结果:1173例孕妇中游离胎儿DNA高通量基因测序技术检测出11例染色体高风险胎儿,羊水/脐血核型分析证实其中10例为染色体异常,分别为7例21-三体和2例18-三体,1例13-三体.游离胎儿DNA高通量基因测序技术的敏感度为100.00％(10/10),特异度为99.91％(1162/1163),假阴性率为0(0/1173),假阳性率为0.09％(1/1173).结论:母体血浆游离DNA高通量基因测序技术可用于胎儿染色体拷贝数异常的检测,有准确性高、假阴性和假阳性率低、无创取样的优点,但由于费用较高,可结合血清学唐氏综合征筛查在有条件的地区进行推广应用.     

细胞游离胎儿DNA产前诊断胎儿非整倍体异常

细胞游离胎儿DNA(cffDNA)已被成功在妊娠妇女血循环中检测到。与母体血循环中胎儿细胞不同,cffDNA最早可在妊娠4周检测出,并能在产后迅速消失。cffDNA可能源于胎盘部位的滋养细胞等并通过凋亡机制释放进入母体血循环中。通过检测cffDNA可产前诊断胎儿非整倍体异常,但因其在妊娠妇女血中含量较少,检测具有挑战性。目前已有多种新检测方法用于非整倍体异常的产前诊断,尚需不断完善。     

细胞游离胎儿DNA产前诊断胎儿非整倍体异常

细胞游离胎儿DNA（cffDNA）已被成功在妊娠妇女血循环中检测到。与母体血循环中胎儿细胞不同,cffDNA最早可在妊娠4周检测出,并能在产后迅速消失。cffDNA可能源于胎盘部位的滋养细胞等并通过凋亡机制释放进入母体血循环中。通过检测cffDNA可产前诊断胎儿非整倍体异常,但因其在妊娠妇女血中含量较少,检测具有挑战性。目前已有多种新检测方法用于非整倍体异常的产前诊断,尚需不断完善。     

应用表观遗传学方法检测母体循环中游离胎儿DNA

目的:探讨表观遗传学方法检测孕妇血浆中游离胎儿DNA水平的应用价值。方法:随机选择早、中、晚期妊娠孕妇各20例,以非妊娠妇女20例为对照组。提取血浆中的总游离DNA,用甲基化特异性PCR(MSP)方法检测各组血浆标本中目的基因m-maspin(一种肿瘤抑制基因启动子的甲基化序列)、u-maspin(前者的未甲基化序列)的表达水平,再进行相对定量,对妊娠组和对照组样本均数进行统计学分析。结果:(1)m-maspin在妊娠早、中、晚期孕妇血浆中的浓度分别是非妊娠妇女血浆中浓度的1.0、1.1、1.1倍,差异无统计学意义(P>0.05);(2)u-maspin在正常非妊娠妇女血浆中未能检测到,在60例孕妇血浆中57例可检测到,它在孕妇血浆中的浓度随妊娠进展呈升高趋势,中、晚期妊娠妇女血浆中其浓度相对于早期妊娠分别为1.7倍和3.1倍,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:m-maspin不是妊娠特异性标志物,u-maspin为妊娠特异性标志物。u-maspin基因可作为孕妇血浆中游离胎儿DNA水平变化的表观遗传学标志,相对于以胎儿性别基因作为遗传学标志的检测方法,它有助于扩大非创伤性产前诊断的临床应用范围。