小鼠晶体蛋白质组的双向电泳和质谱鉴定研究

目的 应用双向电泳和质谱技术研究5周龄小鼠晶体蛋白质组.方法 提取小鼠晶体总蛋白,进行固相pH梯度 (IPG) 等电聚焦双向电泳,胶体考马斯亮蓝R-250染色,使用P DQuest 7.30图像分析软件分析电泳图像.选择主要蛋白点胶上酶解,应用基质辅助激光解析电离飞行时间/飞行时间 (MALDI-TOF/TOF) 仪器进行串联质谱 (MS/MS) 鉴定. 结果 上样量为882 μg和190 μg时,分别检测370±41蛋白点 (n=3) 和57±5 个蛋白点 (n=3).高上样量能够较好地分离晶体低丰度蛋白,如念珠状纤维结构蛋白BFSP ;低上样量可很好地分离高丰度蛋白-晶体蛋白 (包括αA、αB;βA1～βA4;βB1～β B3;γA～γF和γS等).质谱鉴定得到1种细胞骨架蛋白和16种高丰度晶体蛋白.结论 双向电泳和质谱技术有效考察了晶体总蛋白质,为分析白内障形成过程中蛋白质的表达改变提供了新的方法和途径.     

糖性白内障大鼠晶状体水溶性蛋白的改变

用D一半乳糖诱发大鼠糖性白内障,并对其水溶性蛋白进行了分析。白内障大鼠晶状体水溶性蛋白较正常大鼠降低了55.5％,β_H—和γ—晶体蛋白的相对含量明显降低。与正常晶状体α—晶体蛋白相比,白内障晶状体α—晶体蛋白电泳图谱上增加了三条区带,提示在白内障发生过程中α—晶体蛋白可能发生了降介。晶状体结构蛋白的含量、组成比例和性质上的改变可能是晶状体体混浊的基础。     

晶体蛋白质的研究——Ⅲ 水不溶性晶体蛋白质的分离与初步鉴定

用7M尿素处理猪眼水不溶性晶体蛋白质(WIP),离心,将其分成尿素溶性晶体蛋白质(USP)和尿素不溶性晶体蛋白质(UIP)两部分。通过SephadexG—200凝胶过滤,成功地将USP分成Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ三个组分。UIP采用0.1MNaoH处理,得到晶体纤维细胞膜蛋白(MP)。径SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳初步鉴定,Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ三个组分是不均一的;MP呈现二条电泳区带。     

体外培养晶状体的蛋白质合成研究

猪眼晶状体以不同时间(12～96小时)进行培养,在每次培养的最后6小时用~3H-亮氨酸掺入蛋白质中,提取水溶性蛋白,用凝胶过滤分离晶体蛋白,以~3H-亮氨酸掺入量表示蛋白质合成速度。晶状体在含小牛血清的199培养液中,培养在12小时之内,晶状体合成蛋白质的速度最高,24小时后其速度下降40％,48小时后其速度下降趋于稳定,并保持在一个较低的水平上。在所合成的蛋白质中以α-晶体蛋白合成能力最强,除合成晶体蛋白外,还合成大量小分子肽,这些可能是晶体蛋白的片段,它们的合成速度尤为显著。     

晶体蛋白的研究 Ⅰ、晶体蛋白的分离与鉴定

用SephadexG—200凝胶过沪法,成功地将猪眼水溶性晶体蛋白分离成α-、βH-、βL-和γ-晶体蛋白,它们在10％SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱中,显出不同区带,α-晶体蛋白显出二条区带,βH-晶体蛋白显出六条区带,βL-晶体蛋白显出三条区带,γ-晶体蛋白显出二条区带。用7.6M尿素处理水不溶性晶体蛋白,将其分成尿素溶性晶体蛋白和尿素不溶性晶体蛋白两部分,由10％SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱可知,尿素溶性晶体蛋白的主要成分的分子量为20000和43000,而尿素不溶性晶体蛋白的主要成分的分子量是20000。     

人眼α-晶体蛋白分子伴娘活性的研究

目的 了解不同年龄人α-晶体蛋白分子伴娘活性,进一步探索α-晶体蛋白的分子伴娘活性与年龄相关性白内障形成间的关系。方法(1)用凝胶过滤法分别分离成年人及老年人水溶性晶体蛋白。在55℃高温条件,观察不同年龄人α-晶体蛋白对β-low晶体蛋白的凝集和变性的抑制程度差异。结果(1)两组不同年龄的人α-晶体蛋白对热诱导的β-low晶体蛋白的凝集和变性的抑制程度有差异,成年人α-晶体蛋白对热诱导的β-low晶体蛋白的凝集和变性的抑制作用比老年人α-晶体蛋白强。结论(1)随着年龄的增加,人α-晶体蛋白的分子伴娘活性呈下降趋势。     

βB2晶体蛋白在晶状体内外功能及相关机制研究

βB2晶体蛋白是β族晶体蛋白中含量最多的一种,是脊椎动物眼晶状体中的主要蛋白成分之一,对维持晶状体的透明性和屈光度起主要作用。近年来,研究发现βB2基因不仅在晶状体内表达,而且在晶状体外也有高表达,并行使一定功能,尤其对生殖功能有重要影响。βB2晶体蛋白在晶状体外的功能及相关作用机制成为研究的新热点。该文就βB2晶体蛋白在晶状体内外的功能及可能作用机制进行探讨,以期加深对特殊晶体蛋白新特性的了解。     

阿司匹林的独特新用

一、糖尿病相关疾病 1.防治糖性白内障 糖性白内障发病的主要原因是血糖浓度升高,导致晶体内葡萄糖含量增加,干扰了晶体蛋白的正常代谢。使透明的晶体变性及致混浊,从而形成白内障。     

全蝎药材商品中水溶性蛋白质含量测定

目的:建立全蝎商品药材中水溶性蛋白质含量测定方法,为评价全蝎药材质量通过依据。方法:冰箱低温水浸渍、提取,考马斯亮蓝G-250溶液显色,可见分光光度法测定,10批不同全蝎药材商品中水溶性蛋白质的含量。结果:各样品中水溶性蛋白质的含量,以牛血清蛋白计,在60~464μg范围内线性关系良好,其回归方程为Y=0.001 6X+0.0734,相关系数r=0.9997。结论:该方法适用于全蝎药材的水溶性蛋白质的含量测定,可作为控制全蝎药材质量的方法之一。     

晶体上皮细胞的氧化损害与谷胱甘肽

氧化是老年性白内障产生的主要原因。正常晶体中谷胱甘肽(GSH)含量较高,而在白内障晶体中含量很低,说明GSH对保持晶体的透明起了一定的作用。本文用实验的方法增加晶体上皮细胞内GSH的含量,了解在此情况下细胞受氧化损害后细胞膜的改变及细胞内ATP含量的变化,得出:受H_2O_2的作用,细胞膜上的Na-K-ATP酶受到抑制,细胞膜通透性增加,细胞内ATP含量下降。细胞内升高的GSH不能防止或减轻外界氧化物质对晶体上皮细胞的氧化损害。     

六味地黄丸治疗卵巢早衰的实验研究

目的:观察六味地黄丸对大鼠卵巢早衰的作用。方法:造成大鼠早衰模型,然后检测六味地黄丸对β-内啡肽、血清雌、孕激素含量以及对卵巢、子宫组织形态学的影响。结果:六味地黄丸能够提高β-内啡肽含量,增加大鼠阴道脱落细胞涂片内角化上皮细胞和表层细胞。结论:六味地黄丸具有雌激素样作用,可能通过调理下丘脑—垂体—卵巢轴的功能,使卵巢功能恢复。     

用Lowry's法检测医用天然橡胶手套中水溶性蛋白质的含量

医用天然橡胶手套中的水溶性蛋白质被抽提到缓冲溶液中,然后将其浓缩,同时也将溶于水的杂质分离,这些杂质会影响测定结果,将抽提到的蛋白质再一次溶解,使用蛋白质标样,借助Lowry’s实验,通过比色法确定水溶性蛋白质的含量。     

温补肾阳药对激素依赖性肾阳虚动物肝线粒体蛋白质组影响的研究

目的 利用双向凝胶内差异显示电泳技术,分析温补肾阳药对激素依赖性肾阳虚动物肝线粒体蛋白质组影响.方法 正常大鼠、肾阳虚大鼠及温补肾阳药治疗大鼠肝线粒体蛋白质样品分别用荧光染料Cy2,Cy3,Cy5标记,经双向电泳后用不同波长光激发扫描后得到不同样品的蛋白质组图谱,经DeCyder软件分析,以肾阳虚动物与正常动物肝线粒体蛋白质相差1.2倍以上的蛋白作为差异蛋白,共获得16个差异蛋白质,经质谱测定和与蛋白质文库比对,其中11个蛋白质得到鉴定.结果 肾阳虚动物由于肾上腺皮质功能受损,引起热休克蛋白60和70含量增加,可能起到调整处于应激状态的细胞存活、保护细胞免受损伤的作用;肾阳虚动物糖代谢和脂代谢功能降低,而蛋白质代谢和核酸代谢功能增强,表现为二氢硫辛酰胺脱氢酶和脂酰辅酶A脱氢酶活性降低,而肌氨酸脱氢酶、氨甲酰磷酸合成酶和亚硫酸氧化酶活性增加;肾阳虚动物由于三羧酸循环和脂肪酸β-氧化功能障碍,引起ATP合酶、醛脱氢酶和NADH脱氢酶活性代偿性增加,试图通过增加ATP的产量以缓解能量代谢的不足;但肾阳虚动物由于鸟氨酸氨基转移酶活性降低,导致储存能量的肌酸合成降低,使产生的ATP大部分通过热能形式消耗掉,从而导致肾阳虚的临床虚寒症状.应用温补肾阳药治疗后使热休克蛋白60更趋增加,可能加强对细胞的保护作用;温补肾阳药增加二氢硫辛酰胺脱氢酶的活性,可通过改善糖代谢和促进三羧酸循环功能使机体的能量代谢增强;温补肾阳药还可以通过增加ATP合酶和醛脱氢酶的含量,使ATP的产量增加,缓解能量代谢功能障碍.结论 温补肾阳药可以通过调整线粒体内多种与能量代谢相关蛋白质表达而起到治疗肾阳虚的作用.     

尿石基质溶解对晶体溶解的影响

在体外溶石器内观察了尿石基质溶解对结石晶体钙离子溶解的影响。结果基质溶解剂可将ＥＤＴＡ液中钙离子释放量由８８．８７９±７．０１ｎｇ／ｍｍ２提高到１５６．８３６±１１．９４ｎｇ／ｍｍ２，增加７４％（Ｐ＜０．０１）；将Ｓｕｂｙ＇ｓ液中钙离子释放量由５．３４±０．６１ｎｇ／ｍｍ２提高到２０．９１５±１．８９ｎｇ／ｍｍ２，增加２９３％（Ｐ＜０．０１）。说明基质溶解剂可明显增加晶体溶解剂的溶石能力。     

麝香中新的蛋白激酶活化剂及其对豚鼠心肌强心作用的增强

从麝Moschus moscmiferus L.的香囊中的干燥分泌物(即麝香)中分离得到Musclide-A(6-甲基-2,5-庚二醇一5-(硫酸氢盐))。水溶性提取物Musclide(浓度为100μg/ml)和Musclide-A_1(浓度为30μg/ml)作用于豚鼠乳头肌时,能够加强β-肾上腺素能的强心作用。Musclide—A_1(浓度为130μmol/L)或者1,2-二辛酰丙三醇(浓度为200μmol/L)可以强化由最大浓度的异丙去甲肾上腺素(258nmol/L)诱导的正性肌力作用。该强化作用可被3n-mol/L的staurosporine或者1μmol/L的H-7(一种依赖于钙离子的蛋白质激酶的抑制剂)     

晶状体生化的研究——Ⅱ.正常和白内障大鼠晶状体中可溶性蛋白质的比较

正常大鼠晶状体中可溶性蛋白质可用sephadex G-200分为α、β_Hβ-L及γ晶体蛋白。腹腔注射半乳糖诱发大鼠白内障晶状体中可溶性蛋白质含量明显下降,经Sephadex G-200柱层析的流洗峰形也有改变。用10％聚丙烯酰胺凝胶电泳、SDS电泳及等电聚焦电泳等方法比较了正常及患白内障大鼠晶体中可溶性蛋白质各组份的改变。     

麇角超细粉体表征及其水溶性蛋白质溶出度研究

目的对麋角不同粒度粉体进行表征,比较超细粉和普通粉主要成分水溶性蛋白质的溶出度。方法通过粒径、休止角、堆密度、松密度等参数对麋角不同粒度粉体进行表征;通过考马斯亮蓝G-250法测定水溶性蛋白的溶出度,比较麋鹿角超细粉和普通粉的差异。结果与普通粉比较,麋角超细粉颗粒大小均匀,平均粒径小于32μm,堆积密度和松密度均有所下降;提取温度、时间对麋角粉体的溶出均有影响,超细粉95℃水浴提取180min后,水溶性蛋白质基本完全溶出,而普通粉仅溶出67%,超细粉水溶性蛋白质含量是普通粉的1.41倍。结论麋角经超微粉碎技术后粉体颗粒大小分布均匀,孔隙率增加,比表面积显著提高,细胞膜破碎度增大,有利于药效物质成分的溶出。     

晶体溶解性青光眼诊断及处理的探讨

晶体溶解性青光眼诊断及处理的探讨第一医院眼科张顺昭，李平华中图分类号Ｒ７７５．１晶体溶解性青光眼的命名系Ｆｌｏｃｋｓ等１９５５年首先提出。一直沿用至今，经不断研究，证明了白内障过熟期引起眼压升高的直接原因，是吞噬晶体皮质的巨噬细胞或晶体蛋白阻塞小梁网...     

BAPTA对去甲肾上腺素刺激的大鼠心肌细胞蛋白合成及c-fos和β-MHC表达的影响

目的观察去甲肾上腺素（norepinephrine，NE）刺激导致的心肌细胞肥大中，钙信号通路和心肌细胞蛋白合成以及c—fos和β—MHC表达之间的关系。方法去甲。肾上腺素（10^-5mol／L）刺激原代培养的心肌细胞，细胞内钙离子络合剂BAPTA（20μmol／L）阻断钙信号通路，通过^3H—leucine掺入测定蛋白质合成，RT—PCR测定c—fos及β—MHCmRNA的表达．结果NE刺激组的心肌细胞^3H—leucine摄人量、c—fos及β—MHC的表达均显著高于正常对照组（P〈0．01），BAPTA阻断后明显降低（P〈0．01），单纯BAPTA阻断组的^3H—leucine摄入量和β-MHC的表达低于正常对照组（P〈0．01），在正常对照组及单纯BAPTA阻断组未见c—fos明显表达。结论Ca^2＋信号通路不但参与NE刺激引起的心肌细胞蛋白合成增加、c-fos及β—MHC的过度表达，且在正常心肌细胞蛋白质合成及β—MHC表达中也起重要作用。     

晶体溶解性青光眼的临床分析

晶体溶解性青光眼又称晶体蛋白性青光眼．1955年首先由Flocks等报告，该病发生于过熟期白内障．是由于晶体皮质溶解而引起的继发性开角型青光眼，多发生于老年人．如不及时治疗，有引起失明的危险。我院自1995～2002年共收治本病病例8例，现将有关资料报告如下。