Em18重组抗原特异性抗体的制备及对循环抗原检测的初探

目的 用Em18重组抗原ReEm18制备特异性抗体,建立双抗体夹心ELISA,检测患者血清中的循环抗原.方法 ReEm18经亲和纯化,免疫BALB/c小鼠和新西兰兔,分别制备单克隆抗体(单抗)和多克隆抗体(多抗).用获得的单抗和多抗建立双抗体夹心ELISA,检测患者血清中Em18循环抗原.结果 免疫兔血清抗ReEm18抗体效价达1∶204 800以上.经ReEm18和多房棘球蚴病(AE)患者血清及健康人血清阻断ELISA试验双重筛选融合细胞,共获得14株抑制率＞50%的特异性阳性细胞克隆.将特异性单抗和多抗自由组合进行双抗体夹心ELISA,结果以9号单抗与多抗的配对检测抗原为最优,检测ReEm18的灵敏度达3 ng/m1.用建立的双夹心ELISA方法检测血清,11份AE血清中6份为阳性.结论 获得针对ReEm18的特异性单抗和多抗,建立了敏感的双抗体夹心ELISA方法,血清学初步检测结果表明AE血清中存在可检测的Em18循环抗原.     

水疱性口炎病毒纯化抗原制备多克隆抗体的检测结果分析

目的水疱性口炎病毒纯化抗原制备兔抗VSV多克隆抗体,免疫学方法检测其结果分析比较。方法纯化的抗原制备兔抗VSV多克隆抗体,采用双向琼脂扩散试验,间接ELISA方法和中和试验测定效价。结果兔抗VSV多克隆抗体最高效价双向琼脂扩散试验为1∶32,间接ELISA法为1∶640,中和试验为1∶256。结论试验结果分析比较表明,建立纯化抗原制备的兔抗VS多克隆抗体,中和试验特异性好、敏感性高,可做为VSV的血清学检测和流行抗学调查抗供技术保障。     

人TGF融合疫苗诱导抗体在貂肺上皮细胞的活性检测

目的TGF-β1疫苗诱导Balb/c小鼠产生抗体及对TGF-β1体外中和活性.方法通过已构建成功的TGF-β1疫苗免疫小鼠,诱导产生高效价中和抗体,抗TGF-β1抗体及合成的抗原肽ELISA法检测免疫血清抗体滴度,经貂肺上皮细胞生长抑制法,检测抗体血清对TGF-β1体外中和活性.结果抗TGF-β1疫苗可以诱导高滴度的抗体产生,可与抗TGF抗体及抗原肽结合,可以阻断TGF-β1对貂肺上皮细胞的抑制活性.结论构建的抗TGF-β1疫苗可以诱导高滴度的中和抗体产生,在体外阻断TGF-β1活性,可以作为抗纤维化疫苗用于抗纤维化动物模型研究.     

兔抗霍乱弧菌O139血清群rMSHA多克隆抗体的制备和鉴定

目的制备兔抗霍乱弧菌O139血清群rMSHA多克隆抗体。方法用经Ni-NTA亲和层析法纯化的重组蛋白(rMSHA)免疫日本大耳兔,收集免疫兔血清。Western Blot检测重组蛋白的免疫原性;ELISA测定该抗体的效价。结果兔抗rMSHA抗体能与重组蛋白发生特异性反应;间接ELISA法测定该抗体效价为1∶25 600。结论成功地制备了兔抗rM-SHA抗体,该抗体能够识别原核表达的重组蛋白rMSHA,为研制霍乱弧菌疫苗及相关诊断试剂盒奠定了基础。     

用虫体抗原进行斑点酶联免疫吸附试验检测弓形虫抗体的研究

应用完整弓形虫速殖子为抗原,以HRP-SPA代替酶标第二抗体进行Dot ELISA检测58例兔血清中弓形虫抗体,同时用速殖子可溶性抗原检测比较。两种抗原检测结果一致。阳性反应最高稀释度为1:25600。本法检测阿米巴阳性兔血清、感染球虫的兔血清,血吸虫阳性兔血清无交叉反应。阻抑试验显示高抗体滴度的阳性兔血清经抗原吸收后,反应明显抑制。实验表明本法特异性强、敏感性高、重复性好抗原制备简单不需特殊设备。为人畜弓形虫病临床诊断、流行病学现场调查、单克隆抗体杂交瘤细胞的筛选提供了一种较理想的简易可行的方法。     

夹心免疫-PCR检测旋毛虫循环抗原的研究(英文)

目的建立以多抗为捕获抗体和单抗为检测抗体的夹心免疫-PCR检测旋毛虫循环抗原。方法利用杂交瘤技术制备抗旋毛虫单抗;旋毛虫抗原免疫家兔,分离纯化兔血清,制备兔抗旋毛虫多抗。多抗作为捕获抗体包被酶标板,单抗为检测抗体,选择适宜多抗和单抗浓度,建立夹心ELISA方法,再利用亲和素和生物素的高结合力连接起标记了生物素的抗体和DNA片段,将抗原抗体特异反应的免疫技术同无限扩增DNA片段的基因检测技术结合,利用PCR反应对DNA片段的扩增能力,提高检测灵敏度。结果制备了兔抗旋毛虫多抗,间接ELISA法筛选出与多种寄生虫抗原无交叉反应的单抗F4C6,夹心ELISA检测旋毛虫抗原最低浓度为0.05μg/ml,免疫PCR方法检测最低浓度为0.1ng/ml。结论首次建立夹心免疫-PCR检测旋毛虫抗原的方法,检测旋毛虫抗原的灵敏度高于传统ELISA方法104倍。     

HIV-1CN54合成gp120基因(syngp120)的DNA疫苗鼻内免疫小鼠诱导全身的和粘膜的免疫应答

目的 初步探讨HIV-1CN54合成gp120基因的DNA疫苗（pcDNA3.1-syngp120）鼻内接种小鼠是否诱发免疫应答。方法　DNA疫苗免疫后,制备脾和肠系膜淋巴结（MLN）淋巴细胞,在体外测其增殖应答和CD8+CTL应答。间接ELISA法测血清和粘膜洗液抗原-特异的IgG和IgA抗体滴度。中和实验测免疫血清和阴道洗液是否中和 HIV-1SF33。结果 在 DNA疫苗未次免疫后,小鼠第 1周检测到脾和 MLN CD8+CTL应答较弱,而第 5周未检测到。另外,在末次免疫后的第1、5周检测到MLN而未检测到脾淋巴细胞发生增殖应答。并且检测到特异的血清IgG抗体和粘膜的（包括粪便和阴道洗液）IgA抗体,但未检测到血清的IgA抗体和粘膜的（包括粪便和阴道洗液）IgG抗体。中和实验发现末次免疫后第5周的血清能中和实验室毒株HIV-1SF33（B亚型）,而阴道洗液则没有。结论 该DNA疫苗鼻内免疫小鼠可诱导粘膜免疫应答,包括 MLN淋巴细胞增殖应答和 CD8+CTL应答,同时诱导较弱的粘膜IgA抗体应答。此外,能诱导脾CD8+CTL应答和血清IgG抗体应答。免疫血清中和HIV-1S F33,而阴道洗液不能。     

基于上转发光免疫层析检测鼠疫抗体方-法的初步优化与评价

目的 优化基于上转发光免疫层析检测鼠疫抗体的方-法(YPAb-UPT-LF)并对其进行评价。方法 依据《中国生物制品规程》收录方-法改进制备的F1抗原免疫家兔,制备兔多抗作为质控品和质控带;通过筛选试纸上的最适F1抗原对YPAb-UPT-LF进行优化,再用健康人血清稀释的多种血清和多抗进行评价。结果 质控品兔抗F1抗体的ELISA效价为31.25 ~ 62.5 μg/L。优化后的YPAb-UPT-LF对质控品的检测灵敏度为1 mg/L,比之前提升了10倍;已被ELISA方-法滴定的F1疫苗接种者血清和多种鼠疫菌株兔免血清稀释100倍后均可被YPAb-UPT-LF检出,覆盖度良好;对F1免疫兔血清、兔抗EV76和羊抗EV76的检测灵敏度分别为1:40 960、1.25 mg/L、0.625 mg/L,考虑到免疫层析的样本需经10倍稀释处理,判定YPAb-UPT-LF的检测能力与ELISA基本持平。结论 本研究成功优化了YPAb-UPT-LF,为鼠疫免疫诊断和F1疫苗评估等提供了备选方-法。     

HIV-1膜蛋白gp140三聚体疫苗的构建和免疫原性研究

目的构建表达中国流行株HIV-1CRF_07B/C亚型(HIV-1CN54)膜蛋白gp140和gp140FdFc三聚体疫苗,比较其免疫原性。方法构建gp140和gp140FdFc重组质粒,将质粒分别瞬时转染293F细胞,120小时后收获上清液,经纯化、浓缩、PBS置换、BCA试剂盒检测蛋白质浓度后,利用SDS-PAGE电泳检测蛋白分子量大小及纯度,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测其与阳性病人血清的反应性。通过肌肉注射的方式分别免疫兔子,取兔子血清,ELISA检测血清抗体,并通过假病毒系统检测血清中和抗体滴度,比较gp140和gp140FdFc的免疫原性。结果成功获得基因重组gp140和gp140FdFc蛋白。免疫兔子后,gp140和gp140FdFc蛋白质均有很强的体液免疫应答,抗gp160抗体滴度分别为2.24×105和4.48×105,但gp140组未诱导出中和抗体,gp140FdFc组对4种假病毒具有一定的中和活性。结论 Gp140FdFc三聚体能诱导兔子产生较强的结合抗体和一定的中和抗体反应,可作为潜在的HIV-1免疫原进行疫苗研究。     

HIV—1CN54合成gp120基因（syngp120）的DNA疫苗鼻内免疫小鼠诱导全身的和粘膜的免疫应答

目的 初步探讨HIV－1CN54合成gp120基因的DNA疫苗（pcDNA3．1－syngp120）鼻内接种小鼠否诱发免疫应答。方法 DNA疫苗免疫后，制备脾和肠系膜淋巴结（MLN）淋巴细胞，在体外测其增殖应答和CD8^ CTL应答。间接ELISA法测血清和粘膜洗液抗原－特异的IgG和IgA抗体滴度。中和实验免疫血清和阴道洗液是否和HIV－1SF33。结果 在DNA疫苗末次免疫后，小鼠第1周检测到脾和MLNCD8^ CTL应答较弱，而第5周末检测到。另外，在末次免疫后的第1、5周检测到MLN而未检测到脾淋巴细胞发生增殖应答。并且检测到特异的血清IgG抗体和粘膜的（包括粪便和阴道洗液）IgA抗体，但未检测到血清的IgA抗体和粘膜的（包括粪便和阴道洗液）IgG抗体。中和实验发现末次免疫后第5周的血清能中和实验室毒株HIV－1SF33（B亚型），而阴道洗液则没有。结论 该DNA疫苗鼻内免疫小鼠可诱导粘膜免疫应答，包括MLN淋巴细胞增殖应答和CD8^ CTL应答，同时诱导较弱的粘膜IgA抗体应答。此外，能诱导脾CD8^ CTL应答和血清IgG抗体应答。免疫血清中和HIV－1SF33，而阴道洗液不能。     

ELISA检测脑囊虫病人脑脊液循环抗原

应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测脑囊虫病人循环抗原(CAg)一些学者已做了不少工作。我们于1990年用 ELISA 检测瞄囊虫病人脑脊液 CAg 获得了较好的效果。一、材料与方法(一)抗原制备自新鲜病猪肉摘取囊尾蚴,抽取囊液,经离心和上清液透析后为抗原,保存于-20℃备用。(二)兔抗囊尾蚴抗体制备取囊尾蚴囊液抗原多点注射健康兔,效价在 ELISA 1∶5000时,取血分离血清,分装冰冻干燥,置于-20℃备用。(三)脑脊液(CSF) 脑囊虫病患者的 CSF 均采自本所根据临床症状、皮下结节活检及头颅 CT 扫描等确诊的住院病人,共68份。其他脑部疾病(病毒性脑炎、脊     

霜天蛾昆虫变应原多克隆抗体的制备及免疫特性分析

目的制备兔抗霜天蛾变应原多克隆抗体,分析其与特异性过敏患者血清抗体成分的异同,为免疫筛选cDNA文库,制备基因重组霜天蛾变应原奠定基础。方法应用霜天蛾变应原提取液免疫家兔获得霜天蛾变应原多克隆抗体,用酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定混合免疫兔血清抗体效价;应用免疫印迹的方法对比分析免疫兔血清与特异性过敏患者血清抗体成分的异同。结果混合免疫兔血清效价经ELISA检测,效价>1:10000,免疫印迹检测兔抗血清免疫球蛋白G(IgG)可以特异性识别霜天蛾10种蛋白组分,相对分子质量分别为100000、92000、79000、74000、66000、49000、43000、36000、25000和16000;患者血清IgG可以识别6种蛋白组分,相对分子质量分别为79000、74000、66000、49000、36000和25000。结论制备出的兔抗血清与特异性霜天蛾过敏患者血清特异性识别霜天蛾变应原的结果接近,比患者可以识别更多的蛋白条带,可以应用免疫兔血清作为筛选霜天蛾cDNA文库的探针及重组霜天蛾变应原表达蛋白的鉴定分析。     

日本血吸虫虫卵组分抗原的分析

日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)经7.5%SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)后可分为23—28条不同分子量的组分带.应用免疫印迹试验(Western Blotting)技术,显示感染血吸虫的兔血清可识别其中18条组分带.经吡喹酮治愈后不同时间的兔血清识别这些组分时,发现针对分子量为107kD和121kD2个组分的抗体消失较其他组分为早(治愈后7wk反应明显减弱,11wk时则消失).应用电洗提技术可把这2个组分抗原提纯,并用于ELISA检测相应抗体,显示治愈后兔血清中的抗体水平可明显下降,提示该2种组分抗原具有潜在疗效考核价值.     

双抗原夹心ELISA法检测登革病毒感染患者血清中的EDⅢ抗体

目的 建立一种检测登革病毒(dengue virus, DENV)特异性抗体的双抗原夹心ELISA方法?方法 利用毕赤酵母系统表达4个血清型登革病毒包膜蛋白Ⅲ区(envelope protein domain Ⅲ, EDⅢ),并采用改良过碘酸钠法对EDⅢ蛋白标记辣根过氧化物酶(Horseradish peroxidase, HRP),建立一种可同时检测4个血清型登革病毒EDⅢ蛋白特异性抗体的双抗原夹心ELISA法?并对2014年广州珠江医院门诊和住院确诊的登革热患者血清标本进行检测,并与澳洲Panbio MAC ELISA检测的敏感性进行比较?结果 本研究成功建立了一种检测4个血清型登革病毒EDⅢ蛋白特异性抗体的双抗原夹心ELISA法,该方法能同时检测到4个血清型登革病毒EDⅢ蛋白免疫的小鼠血清和Ⅰ型登革病毒EDⅢ蛋白免疫的兔血清,而与烟曲霉AF-MP蛋白免疫的小鼠血清和兔血清均无交叉反应?对184份健康人血清标本检测全为阴性,而对168份确诊为登革病毒感染患者血清标本检测结果表明,两种诊断方法检测结果差异无统计学意义,P<0.001(57.1% vs 57.7%),联合NS1抗原检测方法,其敏感性提高到97.6%?结论 双抗原夹心ELISA法检测登革病毒EDⅢ特异性抗体具有高度的特异性,但如果能同时联合抗原检测可明显提高登革热的早期诊断率?     

霜天蛾昆虫变应原多克隆抗体的制备及免疫特性分析

目的 制备兔抗霜天蛾变应原多克隆抗体,分析其与特异性过敏患者血清抗体成分的异同,为免疫筛选cDNA文库,制备基因重组霜天蛾变应原奠定基础.方法 应用霜天蛾变应原提取液免疫家兔获得霜天蛾变应原多克隆抗体,用酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定混合免疫兔血清抗体效价:应用免疫印迹的方法对比分析免疫兔血清与特异性过敏患者血清抗体成分的异同.结果 混合免疫兔血清效价经ELISA检测,效价>1:10 000,免疫印迹检测兔抗血清免疫球蛋白G相似文献   

358例犬伤者接种狂犬疫苗免疫效果观察

随着人民生活水平地提高 ,养狗看家护院或以犬为宠物增多 ,因而犬伤机率骤增。为了解我站现行狂犬疫苗免疫效果 ,从 1996年 8月～ 1997年 12月用酶联免疫法 (ＥＬＩＳＡ)对 358例狂犬伤者进行注射狂犬疫苗后的抗体测定。1　材料与方法1 1　对象　凡在上述时间内被狗咬伤并注射全程(5针 )狂犬疫苗后 1～ 2周者。1 2　免疫程序　采用 0、3、7、14、30ｄ常规注射程序 ,每次肌注 1针。1 3　抗ＲＡ测定法及结果判断标准　取静脉血2ｍｌ释出血清、稀释 50倍 ,用ＥＬＩＳＡ法检测狂犬病血清抗体 ,同时设标准阳性和阴性对照。1 4　狂犬病毒血清抗体…     

细粒棘球绦虫Eg95基因疫苗和重组抗原诱导小鼠免疫应答的比较研究

目的观察比较细粒棘球绦虫Eg95重组抗原和基因疫苗诱导小鼠的免疫应答状况。方法实验组和对照组小鼠分别注射Eg95重组抗原(rEg95)、费氏佐剂(FCA)、pcDNA3-Eg95基因疫苗、pcDNA3质粒和生理盐水,收集各组血清用酶联免疫吸附(ELISA法)检测抗体IgG和IgG2a亚类水平;采集脾细胞用四甲基偶氮唑盐试验(MTT法)检测免疫小鼠的脾淋巴细胞增殖反应。结果rEg95免疫组小鼠在第二次免疫后开始检测到抗Eg95抗原的IgG,并随着免疫次数的增多,血清抗体效价升高,在第1次免疫后第10周时,免疫抗体滴度可达到1∶25,600。Eg95基因疫苗免疫的小鼠产生抗体滴度随免疫次数的增加而升高,最高可达1∶3,200,但是低于Eg95重组蛋白免疫小鼠产生的抗体滴度水平。pcDNA3-Eg95免疫组产生IgG2a亚类抗体水平明显高于对照组和rEg95组。在第四次免疫后,进行淋巴细胞转化试验,MTT法检测证实rEg95和pcD-NA3-Eg95免疫的小鼠,其脾细胞均可在体外被特异性刺激增生。结论细粒棘球绦虫Eg95重组抗原和基因疫苗均可诱发小鼠产生特异性免疫应答。     

重组转化生长因子β1疫苗诱导产生抗体的活性检测及抗纤维化作用

目的探讨重组转化生长因子（TGF）β1疫苗诱导Balb／c小鼠产生的抗体对TGFβ1体外中和活性检测及抗肝纤维化作用。方法TGFDl抗原表位插入乙型肝炎核心抗原（HBcAg）的免疫优势区c／e1区，原核表达蛋白作为重组TGFβ1疫苗免疫小鼠，诱导产生高效价中和抗体，酶联免疫吸附法检测免疫血清抗体滴度，貂肺上皮细胞生长抑制法检测抗体血清对TGFβ1体外中和活性，将疫苗用于四氯化碳造模的小鼠预防肝纤维化。结果重组TGFβ1疫苗可以诱导小鼠产生高滴度的抗-TGFβ1并与表达的融合蛋白及抗原肽结合，可以阻断TGFβ1对貂肺上皮细胞的抑制活性，减轻小鼠肝纤维化。结论HBCAg作为载体蛋白构建的重组TGFβ1疫苗可以诱导高滴度的中和抗体产生，在体外阻断TGFβ1活性，可作为抗纤维化疫苗用于抗纤维化动物模型。     

日本血吸虫线粒体相关蛋白基因原核表达产物的纯化

目的建立日本血吸虫线粒体相关蛋白原核表达产物的纯化方法,获得理想的表达产物.方法菌体经冻融、超声破菌及提取包涵体后,用分子筛层析纯化蛋白质并使之复性,再用Western-blot方法对纯化蛋白的抗原性进行分析.经动物免疫后采用dot-ELISA方法检测兔血清中抗体滴度,分析纯化蛋白的抗原活性.结果经分子筛纯化后的融合蛋白rSj338/26GST经SDS-PAGE电泳鉴定达电泳纯,Westernblot显示纯化蛋白能够被日本血吸虫重感染兔血清及rSj338/26GST免疫兔血清识别.dot-ELISA法检测结果表明经分子筛纯化并复性的rSj338/26GST融合蛋白免疫兔血清中特异性抗体的滴度最高,为1∶51200.结论纯化后的融合蛋白rSj338/26GST具有较高的纯度及较强的免疫活性,可望作为日本血吸虫病疫苗候选分子进一步深入研究.     

鼠疫菌感染兔血清抗体谱分析

目的分析鼠疫耶尔森菌感染的兔血清(鼠疫菌感染兔血清)中抗体产生的种类与规律,为了解鼠疫菌的致病机制及筛选新的疫苗亚单位提供实验依据。方法利用含有145个鼠疫菌毒力相关蛋白的蛋白质芯片检测鼠疫菌感染兔血清抗体谱,并与鼠疫菌活疫苗EV76株免疫兔血清(免疫兔血清)抗体谱比较。结果在鼠疫菌感染兔血清中共检测到41个蛋白相应的抗体,其中28个抗体在免疫兔血清中也检测到,有6个蛋白抗体只在鼠疫菌感染兔血清中检测到。结论鼠疫菌感染兔血清的抗体谱与免疫兔血清的抗体谱不完全一致,通过对鼠疫菌感染兔血清抗体谱的研究,可为深入了解细菌的致病机制及筛选新的疫苗亚单位奠定基础。