狂犬疫苗免疫后抗体测定实验室分析

<正> 对狂犬病预防的有效措施是注射人用狂犬病疫苗及抗狂犬病血清。我站1991年始用间接免疫荧光染色法(IFA)对抂犬疫苗免疫者进行了血清IgG抗体水平检测,现将结果报告如下。 材料与方法 (一)抗原片:由浙江省卫生防疫站提供,用lep狂犬病毒株感染Vero细胞制备,—30C保存。 (二)羊抗入IgG荧光抗体:浙江省卫生防疫站提供,批号91—6,有效期2年,染色单位1:64,工作浓     

检测狂犬疫苗免疫抗体水平初步观察

<正> 我们采用狂犬病梅花鹿脑冰冻切片为抗原,用IFA 法检测抗狂犬病病毒抗体,用细胞抗原片及ELISA 法进行了阳性检出率比较,现将结果报告如下。 材 料 与 方 法 一、狂犬病鹿脑冰冻切片 取由狂犬咬伤致死的梅花鹿脑组织作冰冻切片,厚3μm,贴附在10孔镀膜     

胃液中肿瘤标志物的放射免疫测定:pH变异所致的方法学上缺陷

测定胃液中肿瘤标志物CEA、CA19-9、组织多肽抗原和铁蛋白均采用放射免疫法(RIA)。有人认为测定时应注意两点:(1)在不同的胃病,胃液的pH有很大变异;(2)胃液标本的pH值在放免法测定中会影响抗原-抗体结合反应。本文研究检测上述4种肿瘤标志物时,pH对抗原-抗体结合和抗原免疫稳定性的影响。材料和方法:CEA用两种方法测定,一种用单克隆抗体作双向直接免疫放射法测定,另一种先将标本浸于70℃乙酸中15分钟,然后作双向免疫放射法测定。CA19-9用双向免疫放射法测定。组织多肽抗原和铁蛋白用直接放免法测定。用微电极pH计在25℃下测定pH,并用盐酸或碳酸氢钠调节。为测定pH对抗原稳定性的影响,用未经处理血清标本以及酸化和中和的标本进行抗原-抗体免疫反应,结果用未经处理血清中抗原抗体结合的百分数表示。结果:抗原抗体结合动力学:所用CEA(用多克隆抗体)的浓度为0、15、3和10ng/ml。孵育混合液的pH从6.5调至2.2。孵育时间延长至48小时。结果示     

间接免疫荧光技术在狂犬病抗原抗体检测中的应用

<正> 鉴于直接荧光(DFA和中和试验(SIV)检测狂犬病抗原抗体为一般实验室所不能承受。寻求一个通用的既能用于检测抗原又能检测抗体的方法,以推动狂犬病研究工作开展则是至关重要的。为此,我们于1986年秋至今以间接荧光技术(IFA)对狂犬病抗原抗体检测进行了方法学的探讨,现将结果报告如下。 材料和方法 一、被检标本狂犬脑取自连续伤多人后的疯犬;小鼠乳鼠脑为国际标准固定毒(CVS)株颅内接种发病处死,无菌取出;病人脑为临床诊断为狂犬病死亡     

免疫组织化学技术在我国寄生虫学研究中的应用

免疫组织化学 ( Immunohistochemistry)又称免疫细胞化学( Immunocytochemistry) ,是组织化学的分支。它是用标记的特异性抗体 (或抗原 )对组织内抗原 (或抗体 )的分布进行细胞和组织原位的检测技术。194 1年首次用荧光素标记抗体检测肺组织内肺炎双球菌获得成功 ,开创了细胞化学中“免疫细胞化学”的新篇章。近年来免疫细胞化学迅猛发展 ,继酶标记抗体技术后 ,建立了辣根过氧化物酶 -抗过氧化物酶 ( PAP)技术。使免疫细胞化学得到了日益广泛的应用。 80年代 ,抗生物素 -生物素 ( ABC)法建立后 ,免疫金 -银染色法、半抗原标记法、免疫电…     

SPA—ELISA法检测狂犬病抗体的实验研究

测定狂犬病人或免疫治疗的特异性抗体,是一种评价病人免疫水平的好方法。传统的测定方法是用LD_(50)的实验来完成。但该法较繁琐,需时过长,费用又高,不易被广大患者和实验人员所接受。我们采用了SPA-ELISA法,检测狂犬免疫特异性抗体,实验证明该法简便,重复性好,现报告如下。     

细粒棘球绦虫Eg95基因疫苗和重组抗原诱导小鼠免疫应答的比较研究

目的观察比较细粒棘球绦虫Eg95重组抗原和基因疫苗诱导小鼠的免疫应答状况。方法实验组和对照组小鼠分别注射Eg95重组抗原(rEg95)、费氏佐剂(FCA)、pcDNA3-Eg95基因疫苗、pcDNA3质粒和生理盐水,收集各组血清用酶联免疫吸附(ELISA法)检测抗体IgG和IgG2a亚类水平;采集脾细胞用四甲基偶氮唑盐试验(MTT法)检测免疫小鼠的脾淋巴细胞增殖反应。结果rEg95免疫组小鼠在第二次免疫后开始检测到抗Eg95抗原的IgG,并随着免疫次数的增多,血清抗体效价升高,在第1次免疫后第10周时,免疫抗体滴度可达到1∶25,600。Eg95基因疫苗免疫的小鼠产生抗体滴度随免疫次数的增加而升高,最高可达1∶3,200,但是低于Eg95重组蛋白免疫小鼠产生的抗体滴度水平。pcDNA3-Eg95免疫组产生IgG2a亚类抗体水平明显高于对照组和rEg95组。在第四次免疫后,进行淋巴细胞转化试验,MTT法检测证实rEg95和pcD-NA3-Eg95免疫的小鼠,其脾细胞均可在体外被特异性刺激增生。结论细粒棘球绦虫Eg95重组抗原和基因疫苗均可诱发小鼠产生特异性免疫应答。     

狂犬病病毒G基因的克隆表达及间接ELISA检测方法的初步建立与应用

目的以重组G蛋白为检测抗原,应用间接ELISA方法检测狂犬病病毒抗体。方法根据GenBank 公布的狂犬病病毒LEP Flury株基因序列设计引物,PCR扩增出目的基因,连接pGM T载体,重组质粒经BamH I和XhoⅠ双酶切,连接到表达载体pGEX 6P 1,构建重组表达载体pGEX G。将重组表达载体转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,在IPTG诱导下表达目的蛋白,表达蛋白纯化后SDS PAGE电泳分析并经Western blotting鉴定。纯化的G蛋白作为包被抗原,建立间接ELISA方法检测93份犬血清抗体。结果成功构建了克隆载体pGM G和表达载体pGEX G,高效表达了狂犬病病毒G蛋白,融合蛋白分子量大小为79kDa,表达蛋白可与狂犬病病毒抗血清发生特异性反应。建立的检测方法灵敏度达到1∶1 600,与商品化的试剂盒相比符合率为96.8%。结论成功表达狂犬病病毒G蛋白,表达产物可作为检测抗原用于间接ELISA方法中狂犬病病毒抗体的检测。     

狂犬病病毒P基因的原核表达及间接ELISA方法的应用

目的以狂犬病病毒P蛋白作为检测抗原,用间接ELISA方法检测狂犬病病毒抗体。方法根据GenBank发表的狂犬病病毒(Rabies Virus,RV)LEP-Flury株的基因序列设计引物,通过RT-PCR扩增出P基因的全长序列,克隆于pGM-T载体中,获得重组质粒pGM-T-P,将重组质粒用限制性内切酶NotI和EcoRI进行双酶切,酶切产物定向克隆于原核表达载体pET-32a(+)中,构建原核重组表达质粒pET-32a-P,阳性重组质粒转化原核表达宿主菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达。SDS-PAGE和Western-blot分析确定蛋白表达量和特异性。用纯化的蛋白作为诊断抗原,通过对反应条件的优化,初步将间接ELISA方法应用于狂犬病病毒抗体的检测中。结果扩增RV P基因,构建了克隆质粒pGM-T-P、原核表达质粒pET-32a-P,高效表达了主要以可溶性形式存在的P蛋白,并能与RV阳性血清发生特异性反应。用表达的狂犬病病毒重组P蛋白建立了用于RV抗体检测的间接ELISA方法。结论成功表达了磷蛋白,用其作为固化抗原以间接ELISA方法检测RV抗体。     

人工合成gp210多肽抗原在原发性胆汁性肝硬化中的应用

目的 尝试用gp210抗原的羧基末端氨基酸序列合成多肽做抗原,探索一种简单实用的抗gp210抗体的检测方法.方法 采用棋盘试验法建立抗gp210抗体的酶联免疫吸附试验(ELISA)检测方法,分别用ELISA方法与免疫印迹法检测原发性胆汁性肝硬化(PBC)组与对照组的抗gp210抗体.结果 gp210抗原的工作浓度为5 μg/ml.血清抗gp210抗体的吸光度(A)值>0.61(x+3s)为阳性.两种方法在检测抗gp210抗体之间差异无统计学意义(p=0.617),二者之间有很强的相关性(r=0.868,P=0.000).结论 人工合成gp210多肽抗原与天然纯化抗原敏感性和特异性基本一致,可以用于临床检测抗gp210抗体.     

免疫荧光法和酶联免疫法测定狂犬病疫苗免疫后抗体的比较

<正> 1989年我们用免疫荧光法(简称荧光法)和酶联免疫吸附法(简称酶免法),对注射狂犬病疫苗后不同时间采集的血清标本进行了狂犬病抗体测定,现将结果报道如下。 一、材料和方法 (一)标本收集:从我站狂犬病门诊采集注射狂犬病疫苗第一针后9～81天者静脉血标本分离血清后低温保存备用。疫苗为兰州生物制品研究所制品,用前     

结核菌抗原在酶联免疫试验中的应用

自Van Weemen和Engvall等推荐酶联免疫吸附法(ELISA)以来,经此法检测结核病人血清中特异性抗体已成为结核病诊断的辅助方法。ELISA是一种敏感性较高的免疫测定法,可定量测定抗原和抗体。已知结核病患者常伴有不同程度的抗体水平增高,其中主要为IgG,IgA和IgM含量较少。近年来许多研究者认为,采用ELISA测定这些抗体时,抗原的质量对检测结果影响甚大,因而从纯化抗原方面做了大量工作。本文介绍几种结核菌抗原的性质及其应用     

抗U1RNP抗体阳性患者血清抗人类肺动脉内皮细胞自身抗体的发现及其意义

目的检测抗U1RNP抗体阳性的自身免疫性疾病患者血清中抗人类肺动脉内皮细胞（HPAEC）自身抗体，并探讨其对肺动脉血管内皮损害的作用机制。方法通过RNA免疫沉降法筛选抗U1RNP抗体阳性血清，免疫印记分析检测血清中抗HPAEC自身抗体。通过流式细胞分析术，确定抗体靶抗原是否位于细胞的表面。用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定含有该自身抗体IgG的HPAEC培养上清中活化T细胞调节的正常T细胞表达和分泌的因子（RANTES）的浓度。结果抗U1RNP抗体阳性血清中新发现一种同HPAEC表面相对分子质量31000抗原（HPA31抗原）反应的自身抗体，把含抗HPA31抗体的血清IgG分离纯化后加入HPAEC培养上清中，RANTES的量明显增加。结论自身免疫性疾病患者血清中存在与抗U1RNP抗体有一定相关的抗HPA31抗体，该抗体同细胞表面的靶抗原结合，可以活化HPAEC，促进RANTES产生及分泌，导致肺动脉血管内皮细胞的炎症损害。     

Em18重组抗原特异性抗体的制备及对循环抗原检测的初探

目的 用Em18重组抗原ReEm18制备特异性抗体,建立双抗体夹心ELISA,检测患者血清中的循环抗原.方法 ReEm18经亲和纯化,免疫BALB/c小鼠和新西兰兔,分别制备单克隆抗体(单抗)和多克隆抗体(多抗).用获得的单抗和多抗建立双抗体夹心ELISA,检测患者血清中Em18循环抗原.结果 免疫兔血清抗ReEm18抗体效价达1∶204 800以上.经ReEm18和多房棘球蚴病(AE)患者血清及健康人血清阻断ELISA试验双重筛选融合细胞,共获得14株抑制率＞50%的特异性阳性细胞克隆.将特异性单抗和多抗自由组合进行双抗体夹心ELISA,结果以9号单抗与多抗的配对检测抗原为最优,检测ReEm18的灵敏度达3 ng/m1.用建立的双夹心ELISA方法检测血清,11份AE血清中6份为阳性.结论 获得针对ReEm18的特异性单抗和多抗,建立了敏感的双抗体夹心ELISA方法,血清学初步检测结果表明AE血清中存在可检测的Em18循环抗原.     

包虫病人循环免疫复合物的初步研究

用包虫病人血清与亲和层析纯化的包虫病抗原制成人工免疫复合物,证实了可溶性免疫复合物主要为抗原轻度过剩的复合物成分。提示其具有致病的作用。用PEG沉淀法检测49例包虫病人血清免疫复合物的阳性率为22.45％。用Pernice法检测特异性免疫复合物的阳性率仅为8.16％。PEG沉淀物经8M尿素解离后,包虫抗原的检出率为20.4％。36例肝包虫病人pEG沉淀法阳性者10例(27.77％)尿素解离物中检出抗原者9例(25％)。8例肝包虫病人用pEG沉淀法未检出阳性,而解离物中检出抗原者1例(12.5％)。经IHA和间接ELISA法未检出血清抗体的包虫病人中,在pEG沉淀的解离物中检出抗原者各为18.18％(4/22)和10％(1/10)认为在血清pEG沉淀的解离物中检测包虫抗原是测定特异性免疫复合物的较好方法。     

PFC测定在寄生虫免疫学研究中的应用

溶血空斑形成细胞(PFC)测定可用于检测机体体液免疫功能,已被广泛地应用于免疫学基础理论、免疫病理学、免疫药理学、临床免疫学和寄生虫免疫学的研究中。一、PFC测定及其基本原理PFC测定系1963年Jerne首先建立的。其基本原理是用一定量羊红细胞或其它抗原免疫动物,若干天后取出脾脏(或淋巴结)制成细胞悬液,与靶细胞共同孵育一些时间,靶细胞便可被细胞悬液中抗体形成细胞     

狂犬病病毒基质蛋白的原核表达及其间接ELISA方法的建立

目的以原核表达的狂犬病病毒M蛋白作为检测抗原,建立间接ELISA方法用来检测狂犬病病毒抗体。方法为表达狂犬病病毒(RV)基质蛋白(M),采用RT-PCR方法从狂犬病病毒Flury-LEP株中扩增RV基质蛋白基因,双酶切后定向克隆至原核表达载体pET-32a(+),构建重组质粒pET-M。将重组质粒pET-M转化至宿主菌E.coli Rosetta中进行表达。SDS-PAGE和Western blot分析确定蛋白表达量和特异性。用纯化的重组M蛋白作为包被抗原建立检测犬RV抗体的间接ELISA方法,通过优化反应条件,确定抗原最佳包被量、血清的最佳稀释度、Protein A-HRP的最佳稀释度。结果经PCR、双酶切及测序鉴定,重组质粒pET-M构建成功,将重组质粒进行转化后诱导表达,经SDS-PAGE电泳分析得到高效表达的M蛋白,重组蛋白可被RV阳性血清特异性识别,表明基质蛋白具有良好的反应原性。用表达的狂犬病病毒M蛋白建立了检测RV抗体的间接ELISA方法,用该间接ELISA方法与以狂犬病病毒作为诊断抗原的商品化ELISA试剂盒分别对93份临床血清样品进行检测,结果两者的符合率为89.2%。结论用原核表达的重组M蛋白作为包被抗原建立的间接ELISA方法可用做检测犬RV抗体水平的参考。     

艾滋病实验室诊断新进展

艾滋病实验室诊断技术主要包括HIV抗体检测、P24抗原测定、病毒分离、HIV病毒载量测定和HIV核酸检测等。HIV抗体检测是常规使用的HIV实验室诊断检测方法。其他检测方法或作为抗体检测方法的补充用作辅助诊断,或作为判断预后和指导治疗用药的依据,主要用于一些特殊情况(窗口期、婴儿诊断、HIV抗体检测结果不确定等),一般不用作常规诊断。HIV病毒载量测定和CD4细胞计数是判断预后的2项重要指标。 1 HIV抗体检测 HIV抗体检测是HIV感染诊断的常规方法。检测步骤包括筛查试验和确认试验。 1.1 HIV抗体筛查试验 1.1.1 酶联免疫试验(ELA)目前国内外主要使用第3代(双抗原夹心法)检测试剂,少数使用第2代试剂。血源     

检测狂犬病毒的胶体金免疫层析法的建立及应用

目的 建立一种简易快速、适用于野外的胶体金免疫层析法(GICA)用于检测动物脑或唾液中的狂犬病街毒抗原。方法采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒，标记抗狂犬病毒单抗。制成免疫层析测试条。样品中的狂犬病毒抗原与测试条上金标记抗体结合后沿着硝酸纤维素膜移动，与膜上的固相抗体结合形成肉眼可见的红色线条。结果 GICA测试条只与狂犬病毒抗原有特异性反应，与乙型脑炎病毒、正常小鼠脑组织等无交叉反应。GICA与EIA比较检测了48份可疑狂犬病犬唾液样品，两法的符合率为88．2％。结论 GICA检测样品中的狂犬病毒抗原特异性强、灵敏度高、简便快速、无需仪器设备，对基层单位开展初步鉴定狂犬病毒样品工作而言。不失为一种有效的方法。     

重组Sj26(rSj26)抗原免疫酶测定新方法诊断日本血吸虫病的研究

将日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)和重组Sj26(rSj26)抗原致敏的硝酸纤维素膜片(NCD)用于膜片免疫酶测定(D-IEA),分别检测同批日本血吸虫病人、卫氏并殖吸虫病人、华支睾吸虫病人和健康人血清104例的特异性抗体,同时用目测及光密度(OD)值测定两种方法判断反应结果。结果显示,分别采用上述两种抗原检测所获的阳性率或假阳性率间无显著性差异。此结果首次提示rSj26抗原的血清诊断效果与目前血吸虫病血清学方法常用抗原SEA相似。本文报告的免疫酶测定新方法,可同时采用两种方法判断结果,迄今尚未见到类似报道。试验结果均表明用D-IEA检测时显示高度的敏感性(92.1％—94.7％)和特异性(0.0％—2.9％),具有实用价值。