小儿肾母细胞瘤p16基因启动子区甲基化观察

目的：观察小儿肾母细胞瘤ｐ１６基因启动子区有无甲基化及有甲基化者与组织类型和预后之间关系。方法：２０例肾母细胞瘤（５例肾组织作对照）进行甲基化观察，使用三种内切酶分别为ＦｎｕＤⅡ、ＳａｃⅡ、ＨｐａⅡ。结果：肿瘤组有６例出现甲基化（对照组无甲基化），除１例属于预后良好型（ＦＨ）之外，余５例均属预后不良型（ＵＨ）。甲基化与组织类型有关。随访结果有甲基化病例（ＵＨ组），１例术后１．５年死亡，１例术后半年复发，证明甲基化影响着预后。结论：肾母细胞瘤ｐ１６基因启动子区存在甲基化，甲基化者属于组织预后不良类型者多。     

儿童急性白血病p16基因甲基化研究

为探讨ｐ１６基因甲基化与儿童急性白血病（ＡＬ）的发生、发展、预后的关系,采用酶切加ＰＣＲ技术研究３３例初治儿童ＡＬ,１５例复发儿童ＡＬ及３０例对照组ｐ１６基因甲基化情况,并观察ｐ１６基因甲基化与化疗结果的关系。结果３３例初治ＡＬ有３例、１５例复发ＡＬ有６例、３０例对照组中０例存在ｐ１６基因甲基化。可评价疗效的３１例初治ＡＬ中,３例甲基化患者未缓解;２８例非甲基化者中３例获完全缓解,２３例部分缓解,     

儿童急性白血病p16基因甲基化研究

为探讨p1 6基因甲基化与儿童急性白血病 (AL)的发生、发展、预后的关系 ,采用酶切加PCR技术研究 33例初治儿童AL ,1 5例复发儿童AL及 30例对照组p1 6基因甲基化情况 ,并观察p1 6基因甲基化与化疗结果的关系。结果 33例初治AL有 3例、1 5例复发AL有 6例、30例对照组中 0例存在p1 6基因甲基化。可评价疗效的 31例初治AL中 ,3例甲基化患者未缓解 ;2 8例非甲基化者中 3例获完全缓解 ,2 3例部分缓解 ,2例未缓解 (总有效率 92 .86 % )。结果表明 :(1 )在初治儿童AL中p1 6基因甲基化率低 ,可能不是儿童AL的主要发病机制 ;(2 )p1 6基因甲基化率儿童AL复发病例显著上升 ,值得重视 ,同时对指导治疗及预测病程和预后具有重要意义。     

小儿横纹肌肉瘤p16基因甲基化的研究

目的：探讨小儿横纹肌肉瘤ｐ１６基因有否高甲基化状态及其临床意义。方法：对７例（８份）横纹肌肉瘤标本和７例肉瘤周围正常组织应用甲基化敏感的ＨｐａⅡ、ＦｎｕＤⅡ、ＳａｃⅡ３种限制性内切酶和甲基不敏感ＭｓｐⅠ限制性内切酶结合ＰＣＲ扩增手段，对ｐ１６基因第１外显子的二核苷酸胞嘧啶（５’ＣｐＧ）岛区进行甲基化检测。结果：对照７例ｐ１６基因第１外显子５’ＣｐＧ岛３个酶切位点无甲基化，３例肉瘤组织中存在这３个酶切位点的甲基化现象。结论：小儿横纹肌肉瘤在ｐ１６基因第１外显子５’ＣｐＧ岛存在高甲基化现象，它可能导致ｐ１６基因转录受阻，从而失去了对细胞增殖的负性调控作用，导致了横纹肌肉瘤发生和发展     

急性髓性白血病p15INK4B基因表达和基因甲基化状态的研究

p15^INK(p15)基因被认为是一个重要的肿瘤抑制基因,对细胞周期起负调控作用。p15基因的启动区中有一Cpg岛,许多血液系统恶性病变表现为CpG岛异常的高甲基化状态。虽然有关急性白血病p15基因启动区中CpG岛甲基化异常已有不少的研究报道,但主要见于成人,CpG岛异常甲基化与该基因表达水平的关系研究则较少见。本研究同时检测儿童急性髓性白血病(acute myeloid leukemia,AML)p15基因表达水平和甲基化状态,以探讨两者之间的相互关系以及在急性白血病发病中的作用。     

小儿急性淋巴细胞白血病p16基因缺失及甲基化的研究

为探讨ｐ１６基因缺失及甲基化在小儿急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）发病中的作用,认识ｐ１６蛋白失活的分子机制。应用差异ＰＣＲ技术检测４２例初治、１７例缓解期小儿ＡＬＬｐ１６基因的纯合缺失及甲基化。结果４２例ＡＬＬ中ｐ１６基因纯合缺失率占３８．１％,Ｔ系ＡＬＬ占８０％,显著高于Ｂ系ＡＬＬ２２．５％,Ｐ〈００１。１７例缓解期ＡＬＬ均无基因缺失。９例ｐ１６基因纯 合缺失是小儿ＡＬＬ,尤其Ｔ系ＡＬＬ最常见的基     

肾母细胞瘤RASSF1A基因启动子区甲基化研究

目的了解肾母细胞瘤RASSF1A基因启动子区甲基化情况。方法手术获取9例肾母细胞瘤及瘤旁残留肾组织,提取DNA后用亚硫酸氢钠处理,巢式PCR扩增RASSF1A基因启动子区DNA片段,测序,检测启动子区甲基化情况。结果发现1例16个CpG岛位点中有10个存在甲基化(10/16),相应瘤旁残留肾组织无甲基化(0/16);在另1例瘤组织中检测到12个CpG岛位点存在甲基化(12/16),但仅有8个CpG岛位点与上例相同,另外4个位点不同。结论肾母细胞瘤中RASSF1A基因启动子区存在甲基化,与瘤旁残留肾组织甲基化情况有差别。     

小儿急性淋巴细胞白血病p16基因缺失及甲基化的研究

为探讨p1 6基因缺失及甲基化在小儿急性淋巴细胞白血病 (ALL)发病中的作用 ,认识p1 6蛋白失活的分子机制。应用差异PCR技术检测 42例初治、1 7例缓解期小儿ALLp1 6基因的纯合缺失及甲基化。结果 42例ALL中p1 6基因纯合缺失率占38.1 % ,T系ALL占 80 % ,显著高于B系ALL2 2 .5 % ,P <0 0 1。 1 7例缓解期ALL均无基因缺失。 9例p1 6基因完整 ,但无蛋白表达的ALL患者 ,无一例发生基因外显子 1的甲基化。结果表明 ,p1 6基因纯合缺失是小儿ALL ,尤其T系ALL最常见的基因缺陷 ,是p1 6蛋白失活的主要分子机制。基因甲基化与p1 6蛋白失活可能无关。     

MSP检测p15基因甲基化在儿童急性白血病微小残留病灶诊断中的价值

对探讨ｐ１５基因甲基化在儿童急性白血病(ＡＬ)微小残留病灶(ＭＲＤ)诊断中的价值,采用甲基化特异性聚合酶链反应(ＭＳＰ)研究４９例初治儿童ＡＬ(包括ＡＬＬ３１例及ＡＭＬ１８例)和２０例对照组的ｐ１５基因甲基化情况。动态观察４例ＡＬＬ及２例ＡＭＬ治疗前后ｐ１５基因甲基化的变化。结果显示,儿童ＡＬ患者ｐ１５基因甲基化阳性率为６７．３%,ＡＬＬ与ＡＭＬ的阳性率(分别为６１．３%和７７．７%),差异无显著性:对照组２０例均阴性。动态观察的６例儿童ＡＬ,初诊时均呈现ｐ１５基因甲基化;完全缓解时,４例仍呈现甲基化,其中３例分别于３个月、５个月、６个月后复发:另一例甲基化转为阴性,未复发:ＭＳＰ敏感度可达１０－３。因此,ＭＳＰ检测ｐ１５基因甲基化有助于检测儿童ＡＬ的ＭＲＤ。     

肾母细胞瘤患儿p73基因的表达及其甲基化研究

目的：探讨肾母细胞瘤患儿血液中p73基因的转录表达、启动子甲基化状态及二者之间关系。方法：收集45例肾母细胞瘤患儿为病例组,以健康体检或因其他原因就诊的性别、年龄匹配的15例（排除肿瘤等恶性疾病）儿童为对照组。采集两组儿童外周血,运用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）和甲基化特异性PCR (MSP)法检测p73基因转录表达水平及其启动子甲基化状态,并分析病例组中p73基因的表达及甲基化与临床资料的关系,及p73基因的甲基化对其转录表达的影响。结果：病例组中p73 mRNA的相对表达量（3.2±0.9）高于对照组（1.6±1.1）,差异有统计学意义（P<0.01）;病例组p73基因甲基化阳性率（20%）低于对照组 (73%),差异有统计学意义（P<0.01）。病例组中甲基化p73 mRNA的相对表达量大于非甲基化p73 mRNA的相对表达量（P<0.01）,且大于对照组中甲基化p73 mRNA的相对表达量（P<0.01）;非甲基化p73 mRNA的相对表达量在两组间差异无统计学意义（P=0.810）。结论：肾母细胞瘤外周血中p73基因启动子的异常甲基化是其基因表达调节方式之一,并与肾母细胞瘤的发生发展有关;发生甲基化的p73基因在肾母细胞瘤中有可能充当癌基因的角色,转录水平的过度表达与其甲基化状态有关。     

儿童血浆促酰化蛋白的测定及意义

目的：介绍一种简易、快速、特异性高的人血浆促酰化蛋白(acylationstimulatingprotein,ASP)的检测技术,并阐明ASP测定意义。方法：161例研究对象,其中健康儿童98例,单纯性肥胖症患儿63例,年龄2～6岁,ELISA方法测定血浆ASP的浓度,波长490nm。结果：该方法最佳线性范围:ASP浓度0.5～10ng/mL,平均批内和批间变异系数(CV)分别为8.17%和9.72%。正常学龄前儿童血浆ASP浓度为69.14±25.58nM;单纯性肥胖症儿童血浆ASP浓度为95.64±36.24nM,明显高于健康儿童(P<0.001);ASP与BMI呈正相关。结论：该检测方法能简易、快速对血浆ASP进行准确定量,在ASP基础和临床相关疾病的研究中有重要的意义。     

促酰化蛋白水平与儿童肥胖的关系

目的：儿童肥胖不仅是体内脂肪过度积蓄,它常延伸至成人,导致心血管疾病、糖尿病发病增高。促酰化蛋白(ASP)与脂肪代谢密切相关,据此该文测定儿童ASP及血脂水平,并分析与肥胖的相关性。 方法：将该院门诊就诊的单纯性肥胖儿童分为肥胖组(n=30);正常体检儿童分为对照组(n=30),分别测定ASP及血脂水平。ASP检测采用ELISA方法检测血浆ASP水平,试剂盒由加拿大麦吉尔大学医学中心皇家维多利亚医院心血管研究室提供,血脂检测采用免疫比浊法在全自动生化分析仪上检测。 结果：肥胖组血浆ASP、胆固醇、甘油三酯、载脂蛋白B依次为 73.87 ± 24.04 g/L , 5.71 ±0.61 mmol/L, 1.77±0.30 mmol/L,0.98±0.20 mmol/L;对照组为 39.47±13.68 g/L,4.29±0.49 mmol/L,1.02±0.25 mmol/L,0.85±0.11 mmol/L。两组比较其差异有显著性意义(P<0.01或P<0.05);ASP与体重指数(BMI)、血浆甘油三酯、胆固醇呈正相关(相关系数分别为r=0.43,0.48,0.68,分别P<0.05,P<0.05,P<0.01);肥胖组中有肥胖家族史患儿血浆ASP水平比无家族史患儿增高更明显 103.4±10.57 g/L vs71.15±24.9 g/L,差异有显著性(P<0.01)。 结论：血浆ASP水平可作为脂质代谢检测的一种新指标,对判断儿童肥胖发展趋势和肥胖儿童未来发生心血管疾病危险度作出初步估价。     

血浆促酰化蛋白在评价儿童肥胖症发展中的意义

促酰化蛋白(Acylation Stimulating Protein,ASP)具有促进脂肪酸酯化和甘油三酯合成的作用,与人类脂肪代谢密切相关。为探讨ASP与肥胖症发病的关系,2000年1月至2002年8月,我们检测了在我院及武汉市妇幼保健院门诊就诊的30例单纯性肥胖症患儿和30例正常健康儿童的血浆ASP及血脂水平,现报告如下。     

血浆促酰化蛋白水平与儿童青少年肥胖和代谢综合征的关联性分析

目的探讨儿童青少年血浆促酰化蛋白（ASP）水平与肥胖及代谢综合征（MS）的关系。方法以2004年北京市儿童青少年代谢综合征（BCAMS）调查总样本中1 603名6~18岁儿童青少年为研究对象。采用中国肥胖问题工作组推荐的标准诊断超重和肥胖。符合下述5项指标中的3项及以上者诊断为MS：①腹型肥胖（腰围≥P90）;②高血压（≥P90）;③高密度脂蛋白胆固醇≤1.03 mmol·L-1;④三酰甘油≥1.24 mmol·L-1;⑤高空腹血糖（≥5.60 mmol·L-1)。采用ELISA法检测血浆ASP水平,免疫透射比浊法检测补体3（C3）水平。采用方差分析比较超重、肥胖及MS儿童青少年的血浆ASP水平,多因素Logistic回归分析血浆ASP水平与超重、肥胖及MS的关系。结果1 603名研究对象中男性873名（54.5%）、女性730名（45.5％）;超重和肥胖者分别为291名（18.2%）和709名（44.2%）;MS为376名（23.4%）。正常体重、超重和肥胖组MS检出率分别为2.2%(13/603名)、15.5%(45/291名)和44.9%(318/709名)。正常体重组血浆ASP水平男性低于女性,差异有统计学意义（t=2.527,P<0.05）。正常体重、超重和肥胖组血浆ASP的几何均值（P25~P75）,男性分别为37.52(22.36~64.58)、57.88(34.10~95.11)和60.63(35.30~109.72) nmol·L-1;女性分别为44.16(27.27~74.72)、60.25(35.68~113.15)和66.68(44.56~113.97) nmol·L-1,均呈逐渐升高趋势（男性：F=34.329,P<0.001;女性：F=22.246,P<0.001）。C3水平仅在肥胖女性中升高（P<0.01）。血浆ASP水平随MS组分聚集的数目增加而升高（男性：F=16.422,P<0.001;女性：F=9.661,P<0.001）,与高血压、腹型肥胖和高空腹血糖的关系尤为密切。血浆ASP水平升高与儿童青少年超重、肥胖和MS的患病风险密切相关,相对于最低5分位值,位于最高5分位值的ASP水平与超重、肥胖和MS关系的OR值(95%CI)分别为3.90(2.38~6.39)、6.05(4.06~9.01)和2.89(1.93~4.33)。结论超重、肥胖和MS儿童青少年血浆ASP水平明显升高,血浆ASP水平可能对儿童青少年超重、肥胖和MS的发生具有较好的预测价值。     

血浆促酰化蛋白、脂联素在川崎病早期诊断中的作用

目的 观察川崎病(KD)急性期血浆促酰化蛋白(ASP)、脂联素(ADPN)、血脂与急相反应蛋白变化关系,探索KD早期诊断的敏感指标和判断冠脉损伤(CAL)的依据。方法 将研究对象分KD急性期组、呼吸道感染伴发热组和正常健康对照组,每组20例 ELISA方法检测血浆ASP、ADPN浓度,比浊法检测血脂等生化指标。结果 1.KD急性期血浆ASP水平明显高于感染组和正常对照组(P=0.000,0.001),而血浆ADPN水平KD组与发热组相比无显著性变化(P>0.05)。2.KD急性期血浆HDL-C、HDL3-C、apoAⅠ浓度明显低于正常对照组(P=0.000,0.000,0.015);apoAⅠ与ASP呈负相关(r=-0.408 P=0.05);其他血脂指标组间比较无显著性差异(P>0.05);3.KD急性期有冠状动脉扩张组血浆ASP浓度明显高于无冠状动脉扩张组(P=0.003),而ADPN和血脂组间比较无显著性差异(P>0.05)。结论 KD急性期存在明显脂质代谢紊乱,ASP可作为KD早期诊断和判断CAL的敏感性实验室指标。     

Increased p53 protein expression as a potential predictor of early relapse after hematopoietic stem cell transplantation in children with acute myelogenous leukemia

Dysregulation of genes involved in the cell cycle such as TP53, P21, P16, and PTEN plays a key role in oncogenesis. We have earlier reported increased expression of the TP53 encoded protein p53, in bone marrow samples from pediatric patients with more aggressive, rare chronic myeloid malignancies. The aim of this study was to investigate protein expression of p53, p21, p16, and PTEN before and after HSCT in pediatric patients with AML and evaluate whether any potential alterations could predict relapse after HSCT. Paraffin‐embedded bone marrow samples from 34 pediatric patients with AML were collected retrospectively from time of diagnosis as well as pre‐ and post‐HSCT. IHC was performed on tissue microarrays with antibodies against p53, p21, p16, and PTEN. Study material was analyzed by independent t‐tests and nonlinear regression. t‐Tests showed a statistical significant difference in p53 (p = 0.010) with overexpression in the group of patients who relapsed compared to the relapse‐free patients at >3–6 months post‐HSCT. Analysis of p53 protein expression by IHC may be a potential predictor for relapse after HSCT in children with AML.     

Surgical treatment of hepatoblastoma in children

Hepatoblastoma is the most common liver malignancy in children. With rare exceptions, complete tumour resection is required to cure the patient. Radical tumour resection can be obtained either with standard partial hepatectomy or orthotopic liver transplantation. At present, the surgical approach to hepatoblastoma differs significantly between treatment groups in different parts of the world. Our aim was to review current surgical policy in hepatoblastoma. All aspects of surgery in hepatoblastoma are discussed, including biopsy, tumour resection principles, modern achievements in the field of liver surgery, and the indications and potential contraindications for liver transplantation. Every effort should be made to resect hepatoblastoma completely either by standard partial hepatectomy or by the use of liver transplantation in difficult or clearly unresectable cases.     

Upstream CpG island methylation of the PAX3 gene in human rhabdomyosarcomas

BACKGROUND: Adult tumors can be characterized by hypermethylation of CpG islands associated with 5'-upstream and coding regions of specific genes. This hypermethylation can also be part of the aging process. In contrast, much less is known about gene hypermethylation in childhood cancers, where methylation changes are not part of the aging process but likely represent developmental dysregulation. PAX3 is an important gene in muscle development and muscle-producing neoplasms such as rhabdomyosarcomas. PROCEDURES: We examined the methylation status of a PAX3 5'-CpG island in rhabdomyosarcoma subtypes and in normal fetal skeletal muscle. PAX3 methylation was analyzed in 15 embryonal rhabdomyosarcomas, 12 alveolar rhabdomyosarcomas, and in six normal skeletal muscle samples, using semi-quantitative PCR analysis of DNA digested with methyl-sensitive restriction enzymes. RESULTS: The CpG island in the upstream region of the human PAX3 gene was hypermethylated in the majority of ERMS examined (13 of 15 tumors, mean of 52% methylation), whereas most ARMS (9 of 12 tumors) and all normal muscle samples showed relative hypomethylation (both 18% mean methylation). Various CpG sites differ in contribution to overall PAX3 CpG island methylation, with methylation at a HaeII site being inversely correlated with PAX3 expression. CONCLUSIONS: PAX3 CpG island methylation appears to distinguish embryonal subtype of rhabdomyosarcoma from alveolar, and methylation at certain sites within this CpG island is inversely correlated with PAX3 expression. In addition to exemplifying developmental dysregulation, methylation of PAX3 has potential in the development of an epigenetic profile for the diagnosis of rhabdomyosarcoma.     

14例肝母细胞瘤患儿的临床疗效观察

目的：通过对儿童肝母细胞瘤患儿的临床治疗结果的回顾总结,对ICE化疗方案的有效性和安全性进行评估。方法：自2000年6月至2008年6月,14例初发患儿入选,男7例,女7例,中位年龄：1.33岁（范围0.25～8.25岁）。临床分期：Ⅰ期6例,Ⅱ期1例,Ⅲ期5例,Ⅳ期2例。诊断时血甲胎蛋白（AFP）水平显著升高13例,1例AFP正常。采用多科室协作模式进行治疗,其中一期手术8例,3例进行了二期手术。化疗方案采用ICE方案,14例患儿共接受了73个疗程化疗,其中术前化疗25个疗程。结果：14例患儿治疗后有效12例（85.7%）,其中完全缓解10例（71.4%）,部分缓解2例,2例无效。随访至2008年7月31日,疾病处于长期完全缓解者9例（64.3%）,中位随访时间为35个月（范围：16～96个月）。5年总生存率（OS）为：（70.71±12.37）%,5年无事件生存率（EFS）为：（64.29±12.81）%。1例患儿复发,2例失访。结论：ICE化疗方案联合手术治疗能有效并且安全地治疗儿童肝母细胞瘤,Ⅳ期患儿的治疗有待于进一步研究。［中国当代儿科杂志,2009,11（8）：659-662］