产毒性大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位基因克隆及表达

目的研究克隆并表达产毒性大肠杆菌不耐热肠毒素Ｂ亚单位。方法合成２条引物用ＰＣＲ法扩增包括产毒性大肠杆菌不耐热肠毒素（ＥＴＥＣ，ＬＴ）Ｂ亚单位基因编码区及起始密码子上游７９３ｂｐ的ＤＮＡ片段。ＰＣＲ产物克隆入ｐＢｌｕｅＳｃｒｉｐｔＳＫ（－）并转化进入ＸＬ－Ｂｌｕｅ工程菌中。结果经ＥＬＩＳＡ，Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ测定共获得２２株菌表达ＬＴ－Ｂ，表达水平比Ｈ１０４０７高２～３倍。克隆的基因经测序证实有一个碱基置换，但无氨基酸序列改变。结论本工作成功表达了产毒性大肠杆菌不耐热肠毒素Ｂ亚单位。     

酶联免疫吸附试验定量检测产毒性大肠杆菌定居因子

为了特异，敏感和方便地检测产毒性大肠杆菌的ＣＦＡⅠ和ＣＦＡⅡ。方法和结果我们用ＣＦＡⅠ或ＣＦＡⅡ阳性ＥＴＥＣ株免疫的名义抗血所纯化的抗体，建立了检测ＣＦＡⅠ和ＣＦＡⅡ的ＥＬＩＳＡ的试验方法，并探索了简便的标本处理方法。     

产毒性大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位基因克隆及表达

目的 研究克隆并表达产毒性大肠杆菌不耐热肠毒素Ｂ亚单位。方法 合成２条引物用ＰＣＲ法扩增包括产毒性大肠杆功不耐热肠毒素（ＥＴＥＣ，ＬＴ）Ｂ亚单位基因编码区及起始密码子上游７９３ｂｐ的ＤＮＡ片段，ＰＣＲ产物克主ｐＢｌｕｅＳｃｒｉｐｔＳＫ＾（一）并转化进入ＸＬ－Ｂｌｕｅ工程菌中。结果 经ＥＬＩＳＡ，Ｗｅｓｔｒｎｋ－ｂｌｏｔ测定共获得２２株菌表达ＬＴ－Ｂ表达水平比Ｈ１０４０７高２～３倍。克隆的基因经测序     

产毒性大肠杆菌质粒的研究进展

<正> 产毒性大肠杆菌(ETEC)是引起腹泻病的主要病原之一。它引起了各国学者的广泛关注,并以极大的兴趣研究了其致病机理。近年来对大肠杆菌肠毒素的研究进展很快,特别是应用分子生物学和遗传学等方法,不仅证明肠毒素的产生和决定菌毛表面抗原的定居因子都是受质粒控制的,而且已克隆出完整的产肠毒素基因片段,从而更加开阔了人们的眼界,丰富了人们对产毒性大肠杆菌的认识。本文就近年来有关ETEc质粒的研究若干进展综述如下。     

酶联免疫吸附试验定量检测产毒性大肠杆菌定居因子

目的为了特异、敏感和方便地检测产毒性大肠杆菌（ＥＴＥＣ）的ＣＦＡⅠ和ＣＦＡⅡ。方法和结果我们用ＣＦＡⅠ或ＣＦＡⅡ阳性ＥＴＥＣ株免疫的兔抗血清所纯化的抗体,建立了检测ＣＦＡⅠ和ＣＦＡⅡ的ＥＬＩＳＡ试验方法,并且探索了简便的标本处理方法。结论本法特异、敏感、简单易行,适合于临床实验室和流行病学调查应用。     

SPA协同凝集试验检测肠产毒性大肠杆菌不耐热肠毒素的研究

本文报道应用葡萄球菌A蛋白(SPA)协同凝集试验检测55株产毒性大肠杆菌不耐热肠毒素,结果与Y-1细胞培养法基本一致。此外,以血平板上培养菌用多粘菌素及三硝基甲苯溶解制备不耐热肠毒素,用协同凝集试验进行检测,结果较其它测毒方法敏感、特异、简单、经济、是一种检测不耐热肠毒素(LT)可行的方法,特别适用于基层的实验室。     

中西医结合治疗产毒性大肠杆菌肠炎1例

笔者采用电针配合TDP(电磁波康复器)治疗肩周炎37例，效果显著，现报告如下。     

产毒性大肠杆菌（ETEC）中毒力岛分布的研究

目的 了解小肠结肠炎耶尔森菌强毒力岛在产毒性大肠杆菌中的分布,以便于进一步深入研究毒力岛在大肠杆菌中的结构的完整性和功能。方法 PCR扩增和原位杂交及基因序列分析,结果 在检测的93株产毒性大肠杆菌（ETEC）的毒力岛的检出率为32.25%(32/93),而且这些阳性菌株中的毒力岛大部分连接到asntRNA(天门冬氨酸tRNA0位点。结论 产毒性大肠杆菌是致病性较强的病原菌之一,而小肠结肠炎耶尔森菌强毒力岛在产毒性大肠杆菌中阳性率较高的分布。对于进一步研究产毒性大肠杆菌的毒力的变化和毒力的调控以及细菌毒力的进化具有重要意义。     

混合菌基因组的合并提取及鉴定

目的为了简便、快速的提取混合病原菌的基因组DNA，进而获得不同病原菌的特异性毒力DNA片断用于进一步的基因诊断。方法改良了裂解试剂，同时提取革兰氏阳性菌(以金黄色葡萄球菌为代表)和革兰氏阴性菌(以产毒性大肠杆菌ETEC为代表)的混合基因组DNA；采用双重PCR法进行扩增鉴定。结果提取得到混合菌的混合基因组，并以此为模板通过双重PCR同时扩增得到两种菌的特异性DNA片断。结论这是一种合并提取混合菌基因组DNA，进而获得不同病原菌DNA片段的简便方法。     

PCR检测技术在结核病诊断中的应用

聚合酶链反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）自创建以来已逐步应用于临床疾病的诊治［１］，特别是对临床结核标本的辅助诊断更具有重要意义。近期，我们对临床送检的各种可疑结核病标本，应用ＰＣＲ技术对结核病的感染情况进行了检测，结果报告如下。１ 资料与方法１．１ 标本来源 临床送检标本８２例，其中痰３０例，胸水１６例，腹水１４例，尿７例，脑脊液８例，肺泡灌洗液７例。１．２ 方法 标本采集后存放于经高压灭菌和紫外线照射后的Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ管中。模板ＤＮＡ提取的主要过程是：取适量组…     

应用多重引物PCR方法检测O157：H7毒力基因的初步研究

目的 研究一种快速、特异的检测大肠杆菌O157：H7毒力的复合RSR方法。方法 选用针对大肠杆菌O157：H7志贺样毒素I、Ⅱ的两对引物，在同一扩增体系中进行PCR，检测不同来源的大肠杆菌O157：H7及E．coli ATEEE5922株。结果 EHEC O157：H7 933W株扩增出两条志贺样毒素基因产物，而E．coli ATOC25922株和EHEC O157：H7 97-l-68的扩增结果均为阴性。结论 应用多重引物RCR方法检测大肠杆菌O157：H7毒力基因，简便、快速、特异、敏感，对流行病学调查分析、制定预防和控制对策有重要的参考价值。     

猴副流感病毒SV5的PCR检测方法建立及初步应用

[目的]建立检测SV5的PCR方法并加以初步应用。[方法]根据Genbank中报道的SV5序列,针对其中的SH基因设计引物进行PCR反应,扩增产物进行测序并用BLAST软件进行同源性比对,同时利用限制性内切酶的酶切反应以证实此PCR反应的特异性。在此基础上设计巢式PCR提高此方法的灵敏度。利用此方法对20份猴肾源细胞培养物和40份血清标本进行检测。[结果]利用设计的引物扩增出的序列测序结果证实与报道的SV5SH基因相对位置的序列一致。AccIII限制性内切酶可对PCR产物进行特异性酶切。巢式PCR比一次PCR的敏感度有所提高。用此方法检测的20份猴肾源细胞培养物和40份血清标本结果为阴性。[结论]本文首次初步建立了检测SV5病毒的PCR方法,排除实验室用20份猴肾源细胞培养物和40份血清标本SV5的污染。     

疟疾双重PCR检测方法的建立和初步应用研究

目的 建立一种适合于我国恶性疟、间日疟和两混合感染地区,一次性检测人体内或蚊体内的恶性疟原虫(P.f.)和间日疟原虫(P.v,)的双重聚合酶链反应(PCR)法。方法 根据疟原虫红内期SSUrRNA基因特定片段,设计合成3条寡核苷酸特异引物,在一个反应体系中,同时检测P.f．与P．v.的双重PCR技术,操作方法按PCR常规。结果 从P.f.和P．v．感染血样中,分别扩增出274bp和412bp的特异片段,检出水平达1-5个虫／μl血,而人基因组DNA、约氏疟原虫、伯氏疟原虫均未见扩增条带;但食蟹猴疟原虫(P．c,)与P.v．相似,在412bp可见扩增条带。经对采自不同疟区发热待查病人的滤纸干血滴和确诊疟疾病人的静脉血检测,344例血样中,检出阴性112例、P.f．109例、P.v.l114例、P．f. P.v.9例,阳性率67．4％;比常规镜检的阳性率66．3％稍高,尤以检出P．f． P．v．感染病例高。分别检测人工感染P.f．与P.v.各10只大劣按蚊的阳性唾腺,均被检出同种的阳性结果。结论一次性检测P．f.DNA与P.v.DNA的双重PCR法,敏感性高,特异性强,稳定性好,具有简化操作、提高工效、降低耗费的优点。对发热待查病人诊断和蚊媒感染疟原虫调查,以及疟疾病原学的检测质控方面,均有实用价值。     

人白细胞介素—9cDNA的PCR扩增及其在大肠杆菌的表达

利用ＰＣＲ技术从人外周血Ｔ细胞ｃＤＮＡ文库中扩增出人ＩＬ－９的ｃＤＮＡ，将其连入大肠杆菌表达载体后，可大大肠杆菌高效表达出人重组ＩＬ－９融合蛋白，表达量占菌体蛋白的２５％左右，有明显的刺激正常人骨髓细胞集落形成的活性。     

猴副流感病毒SV5 PCR检测方法的建立与初步应用

目的建立检测SV5的PCR方法并加以初步应用。方法根据GenBank中报道的SV5序列,针对其中的SH基因设计引物进行PCR反应,扩增产物进行测序并用BLAST软件进行同源性比对,同时利用限制性内切酶的酶切反应以证实此PCR反应的特异性。在此基础上设计巢式PCR提高此方法的灵敏度。利用此方法对20份猴肾源细胞培养物和40份血清标本进行检测。结果利用设计的引物扩增出的序列测序结果证实与报道的SV5SH基因相对位置的序列一致。AccⅢ限制性内切酶可对PCR产物进行特异性酶切。巢式PCR比一次PCR的敏感度有所提高。用此方法检测的20份猴肾源细胞培养物和40份血清标本结果为阴性。结论初步建立了检测SV5病毒的PCR方法,排除实验室用20份猴肾源细胞培养物和40份血清标本SV5的污染。     

庚型肝炎病毒的RT—PCR法检测

根据国外报道的庚型肝炎病毒基因组序列设计两对５’非编码区引物，用ＲＴ－ＰＣＲ法检测了２４例丙型肝炎和１０例透析病人血清静 标本。结果丙型肝炎病人透析病人各１例检出ＨＧＶ ＲＮＡ，占总受检例数的５．８８％。本研究说明了ＨＧＶ在我国的存在，提示开展ＨＧＶ相关研究的必要性。