一种与人蛋白激酶CK2α'亚基相互作用蛋白的cDNA序列测定

目的：测定一种与人蛋白激酶CK2α’亚基相互作用蛋白的cDNA序列。方法：选择一个与人蛋白激酶CK2α’亚基相互作用蛋白的重组质粒pCADT7-Library cDNA，使用BigDyeTM荧光标记终止底物循环测序试剂盒，用载体pGADT7的T7-启动子为测序引物，在ABI PRISM310型基因分析仪上进行DNA测序。结果：该重组质粒的插入片段与泛素一核糖体蛋白S27a cDNA序列只有一个碱基的差别。结论：通过DNA测序，该种与人蛋白激酶CK2α’亚基相互作用蛋白为泛素一核糖体蛋白S27a的变体。     

阻断酪氨酸蛋白激酶Src表达对蛋白磷酸酯酶2A活性和tau蛋白磷酸化的影响

研究细胞内酪氨酸蛋白激酶Src对蛋白磷酸酯酶2A（PP2A）酪氨酸307位点（Y307）磷酸化和活性以及tau蛋白磷酸化的影响，为阿尔茨海默病脑内PP2A活性下调和tau蛋白异常磷酸化机制提供实验依据。体外培养小鼠成神经瘤N2a细胞，转染特异性阻断Src表达的siRNA，检测转染不同时间点PP2A Y307的磷酸化水平、PP2A的活性以及tau蛋白在不同位点的磷酸化水平。     

蛋白激酶CK2-β在SACC-83及SACC-LM细胞中的活性变化

目的：探讨蛋白激酶CK2—β在涎腺腺样囊性癌(SACC)及肺转移涎腺腺样囊性癌(SACC-LM)中的活性变化。方法：利用激酶活性测定方法进行活性测定分析。结果：与未转移SACC(SACC-83)细胞相比。SACC-LM细胞中蛋白激酶CK2-B具有较高的活性；在两种细胞中，细胞核中的活性都高于在细胞质中的活性。结论：蛋白激酶CK2—13的活性与SACC的肺转移呈正相关。     

黄酮类化合物对抑制重组人蛋白激酶CK2全酶的二维定量构效关系

目的研究黄酮类化合物对抑制重组人蛋白激酶CK2全酶的二维定量构效关系作用.方法采用密度泛函理论、分子力学和统计学相组合的方法,对一系列对重组人蛋白激酶CK2全酶具有抑制作用的黄酮类化合物进行二维的定量构效关系（2D-QSAR）的相关性进行分析.结果所建立的2D-QSAR方程具有较好的回归性（R2达到0.829）.结论黄酮类化合物分子的最高占据轨道的能量（EHOM）O对重组人蛋白激酶CK2全酶的抑制活性起着关键的作用,同时,黄酮类化合物分子的体积大小也对CK2的抑制活性起着重要的作用.     

C5位上羟基对染料木黄酮抑制重组人蛋白激酶CK2活性的影响

目的观察染料木黄酮C5位上的羟基对其抑制重组人蛋白激酶CK2全酶活性的影响。方法将利用基因工程技术获得的重组人CK2α’及β亚基在体外等摩尔混合构成CK2全酶。通过测定药物作用后转移到CK2底物上的[γ-32P]ATP的32P的放射性活度,探讨染料木黄酮和大豆甙元对重组人CK2全酶活性的抑制作用,并采用半数效量概率单位法计算其IC50值。结果染料木黄酮和大豆甙元能明显抑制重组人CK2全酶活性,其IC50值分别是27.95μmol/L和2.38μmol/L,作用效果接近或者强于目前已知的CK2抑制剂N-(2-氨乙基)-5-氯萘-1-硫胺(A3)。结构效应分析表明:C5位上的羟基可减弱染料木黄酮对重组人CK2全酶的抑制作用。结论染料木黄酮和大豆甙元是两种有效的重组人CK2全酶的抑制剂。     

槲皮素对重组人蛋白激酶CK2全酶的抑制作用及其动力学分析

目的 观察槲皮素对重组人蛋白激酶CK2全酶的直接作用及其酶动力学机制。方法 利用基因工程克隆，表达和纯化获得重组人蛋白激酶CK2α和β亚基，在体外等摩尔数混合构成有最大生物活性的重组CK2全酶，在不同条件下测定CK2的活性，CK2活性通过测定转移到CK2底物上的[γ-^32P]ATP的[^32P]放射活度来检测。结果 重组人蛋白激酶CK2是一种Ca^2 ,cAMP和cGMP等第二信使非依赖性蛋白激酶，与天然CK2的性质一致，槲皮素对重组人CK2全酶具有很强的抑制作用，IC50为522nmol/L，抑制作用大于CK2已知抑制剂DRB和A3，槲皮素对重组人蛋白激酶CK2的动力学研究表明；它与ATP和酪蛋白分别呈竞争性和非竞争性抑制作用。结论 槲皮素是CK2有效抑制剂，该抑制作用可能是槲皮素抗肿瘤作用又一分子机制。为今后筛选更有效的CK2抑制剂提供了一种较为简便的筛选方法。     

1,4-二羟蒽醌是一种有效的重组人蛋白激酶CK2的抑制剂

目的观察1,4-二羟蒽醌对重组人蛋白激酶CK2全酶的作用。方法在体外等物质的量混合CK2α与＇α亚基构成重组CK2全酶。以重组人CK2全酶为分子靶点,通过测定转移到CK2底物ATP的32P放射活度,来检测不同浓度5-氯苯并三唑对CK2活性的影响,并进行动力学分析。结果 1,4-二羟蒽醌对重组人CK2全酶具有抑制作用,且该作用随浓度的增加而增强,其IC50为63.15μmol/L;它与ATP呈竞争性抑制CK2的活性,抑制常数Ki为40.49μmol/L;与酪蛋白呈非竞争性抑制CK2的活性,抑制常数Ki为44.72μmol/L。结论 1,4-二羟蒽醌是重组人蛋白激酶CK2的有效抑制剂。     

蛋白激酶A对精子顶体酶活性的影响

蛋白激酶A（protein kinase A,PKA）是第二信使cAMP通路中的关键分子,介导跨膜信号的信号传导。本篇重点介绍蛋白激酶A在男性不育方面,特别是对精子顶体酶活性的影响。     

藤黄菌素体外对重组人蛋白激酶CK2全酶的抑制作用

目的:观察体外藤黄菌素对重组人蛋白激酶CK2的抑制效果及进行酶动力学分析以确定其抑制作用类型. 方法:利用基因工程技术进行克隆、表达和纯化,获得重组人CK2的α′及β亚基,并在体外等摩尔混合构成CK2全酶. 通过测定药物作用后转移到CK2底物上的[γ-32P]ATP的32P的放射性活度来检测藤黄菌素对酶的抑制作用及采用Line-weaver-Burk作图法分析其动力学. 结果:藤黄菌素能显著抑制重组人蛋白激酶CK2的活性(IC50=0.86 μmol/L). 酶动力学分析表明,藤黄菌素与ATP呈竞争性抑制CK2的活性(Ki=0.19 μmol/L),与酪蛋白则呈混合性抑制CK2的活性(Ki=0.11 μmol/L). 结论:藤黄菌素是一种较强的体外蛋白激酶CK2的抑制剂.     

三种Tyrphostin对重组人蛋白激酶CK2全酶的影响

目的：观察三种Tyrphostins AG1109、AG555和AG1394对重组人蛋白激酶CK2全酶的直接作用。方法：利用基因工程克隆、表达和纯化获得重组人蛋白激酶CK2α和β亚基,在体外等摩尔数混合构成有最大生物活性的重组CK2全酶,在不同条件下测定CK2的活性。CK2活性通过测定转移到CK2底物上的[γ－^32P]ATP或[γ-^32P]GTP的[^32P]放射活度来检测。结果：重组人CK2是一种Ca^2 、cAMP和cGMP二信使非依赖性蛋白激酶,与天然CK2的性质一致。AG1109对重组人CK2全酶具有较强的抑制作用,IC50为9．7μmol／L,抑制作用稍大于已知CK2抑制剂DRB和A3。AG555对重组人CK2全酶具有一定的抑制作用,而AG1394则对人CK2全酶基本无影响。AG1109对重组人CK2的动力学研究表明：它与GTP呈现以竞争性为主的混合型抑制作用,与酪蛋白呈非竞争性抑制作用。结论：AG1109不仅是酪氨酸蛋白激酶的抑制剂,而且是一种十分有效的激酶CK2的抑制剂。重组人蛋白激酶CK2可作为一种较为简便筛选和开发有效的CK2抑制剂的分子靶点。     

蛋白激酶CK2与Wnt信号转导途径

蛋白激酶CK2是一种真核中普遍存在的信使非依赖性丝/苏氨酸蛋白激酶,到目前为止,已发现其300多种底物,且数目还在增加,涉及到许多细胞生命过程,如从DNA复制、转录到细胞生长的信号转导、增殖、转化、细胞凋亡等。近来研究发现,CK2与Wnt信号转导途径存在着很大的联系,CK2可以与-βcatenin和dishevelled等Wnt信号蛋白相结合使它们磷酸化,正性调节Wnt信号转导途径。在肿瘤发生和早期胚胎发育过程中CK2增强Wnt信号转导,本文将从这两个方面加以综述。     

七种黄酮类化合物对重组人蛋白激酶CK2全酶抑制作用的结构效应关系

目的:观察7种黄酮类化合物时重组人蛋白激酶CK2全酶活性的影响并进行结构效应关系的分析.方法:将利用基因工程技术获得的重组人CK2 α'及β亚基在体外等摩尔混合构成CK2全酶.通过测定药物作用后转移到CK2底物上的[γ-32P]ATP的32P的放射性活度,探讨黄酮类化合物对重组人CK2全酶活性的抑制作用,并采用半数效量概率单位法计算其IC50值.结果:杨梅黄酮、槲皮素、桑色素、毛地黄黄酮、莰非醇、芹菜苷配基和白杨黄素能明显抑制重组人CK2全酶活性,其IC50值分别是1.18,0.51,16.16,0.86,1.88,1.72和13.63 umol/L;其中杨梅黄酮、槲皮素、毛地黄黄酮、莰非醇和芹菜苷配基的作用效果均强于目前已知的CK2抑制剂DRB和A3;而桑色素和白杨黄素的作用效果接近于DRB.结构效应关系分析表明,C6,C3'和C4'上的-OH可能是黄酮类CK2抑制剂发挥抑制作用的药效基团;而在C3上去除1个.OH对其抑制效果基本没有影响;此外,C2'和C5'上的-OH可减弱黄酮类化合物对CK2的抑制作用.结论:黄酮类化合物对体外蛋白激酶CK2的抑制效果可能取决于其羟基的位置.     

Skp2在前列腺癌中的研究进展

Skp2是F-box蛋白家族成员之一,参与多种细胞周期调节蛋白的泛素依赖性蛋白水解过程,从而调控细胞周期,并在多种肿瘤细胞中过表达。Skp2在前列腺癌的发生与发展、分级、分期、术后复发中起着重要的作用。探讨前列腺癌患者中Skp2的不同表达与疾病发生、进展及预后的关系,可进一步明确恶性肿瘤的发生机制,并可以作为抗肿瘤治疗的新靶点。     

不同激酶活性的hPAK6基因原核表达载体的构建及重组蛋白的表达

目的 构建不同激酶活性的hPAK6原核表达载体并诱导和鉴定其融合蛋白表达.方法 野生型、激酶活型和激酶死型pcDNA3.1-PAK6经EcoR Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切后,克隆至GST融合表达载体pGEX-5X-1,在E.coli BL21中诱导不同型GST-hPAK6融合蛋白表达,并经免疫印迹鉴定结果.结果 野生型、激酶活型和激酶死型hPAK6编码序列已被克隆至GST融合表达载体pGEX-5X-1,双酶切及测序鉴定正确,并在E.coli BL21中获得了诱导表达,蛋白的分子量均为101 kDa,免疫印迹检测到了融合蛋白表达.结论 成功构建不同激酶活性的hPAK6基因原核表达载体,并分别诱导表达出GST-PAK6融合蛋白.     

蛋白激酶CK2基因表达沉默对鼻咽癌细胞放射增敏作用

目的 研究蛋白激酶CK2表达沉默对鼻咽癌细胞放射增敏作用,并探讨其可能机制.方法 通过RNA干扰技术下调鼻咽癌5-8F细胞中CK2α蛋白表达,利用Western blotting方法验证干扰效果;利用克隆形成实验观察CK2表达沉默后对鼻咽癌细胞放射敏感性的影响;应用免疫荧光方法检测γ-H2AX灶点形成;Annexin-V和PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡.结果 通过RNA干扰技术可以有效沉默CK2α表达.克隆形成实验结果显示CK2α表达沉默后,鼻咽癌细胞形成克隆能力明显下降,对X线的敏感性明显增加;1 Gy照射后15min,CK2α沉默的细胞γ-H2AX灶点数目明显增加;CK2α沉默的细胞凋亡率明显高于对照组(P<0.01).结论 蛋白激酶CK2与鼻咽癌放射敏感性密切相关,CK2可能是一个非常有潜力的鼻咽癌治疗靶点.

Abstract：

Objective To investigate the effect of protein kinase CK2 gene silencing on the radiosensitization in human nasopharyngeal carcinoma (NPC) cells and its possible mechanism. Methods RNA interference (RNAi) technique was used to down-regulate the protein kinase CK2α expression in 5-8F cells, and clonogenic assay was employed to observe the changes in the radiosensitivity of the cells. DNA double-strand break was assessed by immunofluorescence staining of γ-H2AX foci,and the cell apoptosis was examined using Annexin V-FITC/PI double-staining flow cytometry. Results CK2α protein was successfully silenced by siRNA. CK2α knockdown significantly decreased the clonogenic activity and increased the radiosensitivity of the NPC cells. After a 15-min exposure of the cells to 1 Gy radiation, significant difference occurred in the γ-H2AX foci between CK2α knockdown cells and the control cells (P<0.01). CK2α silencing significantly increased the cell apoptosis after the exposure (P<0.01). Conclusion Protein kinase CK2 plays an important role in the radiosensitivity of the NPC cells, and suppression of its expression might be a potential therapeutic approach of cancer.