人肺腺癌细胞A549转导HSV1—TK基因体内外表达研究

目的：观察Ａ５４９细胞转导ＴＫ基因在体外和体内的表达。方法：将已构建的 转录病毒表达载体ＰＬＸＳＮ－ＴＫ用电转化法转化Ａ５４９细胞，原位杂交检测ＴＫｍＲＮＡ在Ａ５４９－ＴＫ和由它接种裸鼠形成肿瘤组织中的表达。斑点杂交检测外源基因在细胞中整合，并体外观察Ａ５４９－ＴＫ对ＧＣＶ的敏感性。结果：原发杂交表明Ａ５４９－ＴＫ细胞及其形成肿瘤组织ＴＫｍＲＮＡ表达阳性，对照细胞无表达，斑占杂交证明Ａ５４９－ＴＫ     

HSV1—TK／GCV系统对人肺腺癌细胞S549生物学特性的影响

目的 观察转ＴＫ基因肺癌细胞对丙氧鸟苷（ＧＣＶ）的敏感性及ＴＫ／ＧＣＶ系统杀灭肿瘤机制。方法 观察转ＴＫ基因，转空载体Ａ５４９细胞（下分别简称Ａ５４９－ＴＫ、Ａ５４９－ｐＬＸＳＮ）和Ａ５４９细胞形态学改变、生长增殖特性。ＧＣＶ对３种细胞生长抑制（ＭＴＴ法）。电镜、流式细胞仪观察Ａ５４９－ＴＫ、Ａ５４９细胞经５０μｍｏｌ／Ｌ ＧＣＶ作用３ｄ后细胞凋亡。结果 转基因细胞变为不规则，呈多角型，透亮度下降     

ACV治疗转TK基因人肺腺癌细胞A549裸鼠皮下成瘤的实验研究

目的 观察活体内转ＴＫ基因肺腺癌细胞对ＡＣＶ（无环鸟苷）的敏感性。方法 转ＴＫ基因肺腺癌细胞Ａ５４９－ＴＫ、亲代细胞Ａ５４９分别接种于裸鼠腹部皮下左右侧成瘤后,给予腹腔注射ＡＣＶ治疗２周,测量治疗前后肿瘤大小,并做病理观察。结果 Ａ５４９－ＴＫ细胞接种的肿瘤治疗前后体积增大不明显（Ｐ〉０．０５）;Ａ５４９细胞接种的肿瘤治疗后体积明显大于治疗前,光镜发现Ａ５４９－ＴＫ细胞接种的肿瘤有局部坏死,胞核裂     

HSV1-TK基因转导人肺腺癌细胞A549体内外表达的研究

目的:观察TK基因转导A549细胞后在体外和体内的表达.方法:将已构建的逆转录病毒表达载体PLXSN-TK用电穿孔法转化A549细胞,原位杂交检测TKmRNA在A549-TK细胞和由它接种裸鼠形成肿瘤组织中的表达.斑点杂交检测外源基因在细胞中整合.并体外观察A549-TK细胞对GCV的敏感性.结果:原位杂交表明A549-TK细胞及由其所形成的肿瘤组织中TKmRNA表达阳性,对照细胞无表达,斑点杂交证明A549-TK细胞中有TK基因整合.A549-TK细胞对GCV的敏感性是亲代细胞的46倍.结论:TK基因在A549-TK细胞中表达阳性,转基因细胞对GCV敏感.     

内皮素—1及其基因在早期STZ糖尿病大鼠肾组织中的表达及其意义

为探讨内皮素－１（ＥＴ－１）及其基因在早期ＳＴＺ糖尿病大鼠肾脏组织的表达及其人意义,作者采用免疫组化ＡＢＣ法和原位杂交技术检测了２４只早期ＳＴＺ糖尿病大鼠肾组织中ＥＴ－１及ＥＴ－１ｍＲＮＡ的定位及半定量表达。实验分为４组,每组６只。结果：ＥＴ－１和ＥＴ－１ｍＲＮＡ的分布一致,主要分布于肾小球内皮细胞、系膜细胞、血管内皮细胞、平滑肌细胞及肾小以细胞之中。随质中ＥＴ－１和ＥＴ－１ｍＲＮＡ的表达高于波细     

增生性瘢痕增生过程中转化生长因子β表达的动态研究

通过对３４例不同时期增生性瘢痕组织标本进行了ＴＧＦβ－ｍＲＮＡ斑点杂交和原位杂交检测，结果发现：随着增生瘢痕的发生，发展成熟，ＴＧＦβ－ｍＲＮＡ的总表达量明显呈由强至弱的变化，在１至６个月瘢痕组织内表达丰富，９个月时明显减弱，１２个月以后的瘢痕组织及正常皮肤对照标本中含有少ＴＧＦβ－ｍＲＮＡ表达的定位检测显示，除真皮层组织细胞有部分表达外，许多瘢痕表皮基底细胞内有较强表达，由此可见，（１）ＴＧＦβ     

低密度脂蛋白对肾小珠系膜细胞,TGF—β和FN mRNA表达的影响

目的：观察低密度脂蛋白（ＬＤＬ）对体外培养的大鼠肾小球系膜细胞（ＭＳＣ）生长及转化生长因子β（ＴＧＦ－β）和纤维连接蛋白（ＦＮ）基因表达的影响。方法：体外培养的ＭＳＣ培养液中加入ＬＤＬ共同孵育,采用＾３Ｈ－ＴｄＲ渗入法检测ＭＳＣ增殖情况,应用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ检测ＴＧＦ－β ｍＲＮＡ、ＦＮ ｍＲＮＡ的表达,应用斑点杂交法检测抗ＴＧＦ－抗体对ＦＮ ｍＲＮＡ表达的影响。结果（１）ＬＤＬ刺激ＭＳ     

HSV1-TK逆转录病毒载体构建及表达

目的　构建含ＴＫ基因逆转录病毒载体并检测其在转染细胞中的表达,为肺癌基因治疗积累实验资料。方法从 ＰＨＳＶ１０６质粒中切下约２．４ｋｂ ＴＫ基因片段,插入逆转录病毒载体ＰＬＸＳＮ多克隆位点,酶切筛选正、反向连接质粒。正 向连接子电穿孔法转化肺癌细胞Ａ５４９,用ＰＣＲ、细胞原位杂交法分别检测ＴＫ基因整合和表达。结果　经酶切鉴定得到 正向连接子,电穿孔法转导Ａ５４９细胞,经Ｇ４１８筛选出了转基因细胞,ＴＫ基因已整合在转染细胞中并阳性表达。结论 成功构建了含ＴＫ基因逆转录病毒载体,转导该载体的肺癌细胞可表达ＴＫ基因。     

转移性和非转移性乳腺癌组织中KAI1基因的表达

目的：探讨肿瘤转移抑制基因ＫＡＩ１与乳腺癌转移的相关性。方法：运用原位杂交法观察ＫＡＩ１ ｍＲＮＡ在转移性和非转移性乳腺癌组织中的表达。结果：在无淋巴结转移的１２例乳腺癌病例中ＫＡＩ１ ｍＲＮＡ阳性表达为９例，有淋巴结转移的８例中阳性表达１例。前者阳性率显著高于后者（Ｐ〈０．０５）。结论：ＫＡＩ１基因的低表达或不表达可能是某些高转移潜能乳腺癌的特征。     

严重体表烧伤早期大鼠肾脏内皮素－1的基因表达

应用分子斑点杂交、原位杂交技术，观察了大鼠烧伤早期肾脏各时相点的内皮素－１（ＥＴ－１）ｍＲＮＡ的表达和定位变化。结果表明：烧伤早期肾脏ＥＴ－１ｍＲＮＡ含量明显上升，分布有所变化，且为肾脏自身分泌释放（自分泌／旁分泌）。文中还简要讨论了上述变化的原因     

增生性瘢痕和瘢痕疙瘩组织中Ⅰ、Ⅲ型前胶原及TGF-β_1 mRNA的表达

目的：探讨增生性瘢痕（Ｈ）和瘢痕疙瘩（Ｋ）组织中Ⅰ、Ⅲ型前胶原及ＴＧＦ－β１基因表达改变的相互关系及临床意义。方法：总ＲＮＡ抽提试剂盒抽提总ＲＮＡ,斑点杂交检测Ⅰ、Ⅲ型前胶原及ＴＧＦ－β１ｍＲＮＡ稳态水平的改变。结果：Ｈ和Ｋ组织中ＴＧＦ－β１ｍＲＮＡ（１．１９７±０．２３７,１．２０４±０．２４３）表达均高于正常瘢痕和正常皮肤（０．３２７±０．０８１,０．３３１±０．０７８）,Ｐ＜０．０１;Ｋ选择性地Ⅰ型前胶原ｍＲＮＡ表达增强,而Ｈ组织中Ⅰ、Ⅲ前胶原ｍＲＮＡ表达均增强,导致ＫⅠ、Ⅲ前胶原ｍＲＮＡ比值明显高于Ｈ（８．１６４±０．３００,１．６６６±０．２０１,Ｐ＜０．０１）。结论：Ｋ和Ｈ组织中胶原蛋白基因表达类型及强度不同,提示在Ｋ和Ｈ发生发展中具有不同的分子机理：ＴＧＦ－β１在增生性瘢痕疙瘩的发病机理中具有不同的分子机理;ＴＧＦ－β１在增生性瘢痕和瘢痕疙瘩的发病机理中具有一定作用。     

四君子汤体外对ConA诱导的小鼠脾细胞表达IL—3mRNA的影响

用斑点杂交法分析了四君子汤体外对ＣｏｎＡ诱导的小鼠脾细胞表达ＩＬ－３ｍＲＮＡ的影响。结果四君子汤使鼠脾细胞表达ＩＬ－３ｍＲＮＡＤ ２０ｈ左右达高峰，有效剂量范围较大（２５ｍｇ／ｍｌ￣４００ｍｇ／ｍｌ），尤以１００ｍｇ／ｍｌ浓度效果为佳，提示四君子汤促进造血的作用与其提高Ｔ细胞表达ＩＬ－３ｍＲＮＡ有关。     

感染日本血吸虫小鼠CD4^＋,CD8^＋T细胞凋亡相关基因转录水平

探讨日本血吸虫感染过程中，宿主ＣＤ４＾＋和ＣＤ８＾＋细胞凋亡的相关基因ＴＧ－β在转录水平上的变化。方法：用地高辛标记的探针作原位杂交，观察促凋亡基因ＴＧＦ－β在ＣＤ４＾＋和ＣＤ８＾＋细胞的ＴＧＦ－βｍＲＮＡ的表达随感染时间的延长而升高，感染后１０周起ＣＤ４＾＋Ｔ细胞ＴＧＦ－βｍＲＮＡ的表达明显高于ＣＤ８＾＋细胞，差异有显著性意义。结论在日本血吸虫感染过程中，ＣＤ４＾＋细胞凋亡比率超过ＣＤ８＾＋细胞     

严重体表烧伤早期大鼠肾脏内皮素—1的基因表达

应用分子斑点杂交，原位杂交技术，观察了大鼠烧伤早期肾脏各时相点的内皮素－ｍＲＮＡ的表达和定位变化。结果表明：烧伤早期肾脏ＥＴ－ｍＲＮＴ含量明显上升，分布有所变化，且为肾脏自身分泌释放。文中还简要讨论了上述变化的原因。     

食管癌Ⅰ型纤溶酶原激活物抑制剂的表达研究

目的：探讨食管癌组织中Ⅰ行溶酶原激活物抑制剂（ＰＡⅠ－１）的表达特征。方法：采用定量的逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）方法检测基因的表达。结果：食管癌组织中ＰＡⅠ－１的ｍＲＮＡ的表达水平显著高于正常粘膜组织（Ｐ〈０．０１）,组织原位杂交显示ＰＡⅠ－１的ｍＲＮＡ主要分布于肿瘤细胞的胞浆中。结论：ＲＡⅠ－１的ｍＲＮＡ在食管癌中的表达上调,ＲＴ－ＰＣＲ的定量分析可用于肿瘤诊断的辅助方法。     

消瘀片对粥样硬化兔血管壁组织ET-1 mRNA和NOSmRNA表达的影响

采用原位杂交和ＲＴ－ＰＣＲ方法,观察消瘀片治疗１６周动脉粥样硬化兔后对血管壁组织ＥＴ－１ｍＲＮＡ和ＮＯＳｍＲＮＡ表达的影响。结果显示,粥样硬化组的ＥＴ－１ ｍＲＮＡ和ｉＮＯＳｍＲＮＡ表达较多,而ｃＮＯＳｍＲＮＡ表达较少。使用消瘀片后动脉 的ＥＴ－１ｍＲＮＡ表达明显减少,提示血浆和血管壁组织中的ＥＴ－１减少是由于ＥＴ－１ｍＲＮＡ转录水平降低所致。     

急性胆管炎时肝组织ICAM—1与循环PMN表面CD11b,CD18的表？…

目的：观察急性胆管炎时大鼠肝组织ＩＣＡＭ－１与循环ＰＭＮ表面ＣＤ１１ｂ,ＣＤ１８的表达变化。方法：应用原位分子杂交和斑点杂交技术胆道感染时ＩＣＡＭ－１ ｍＲＮＡ在肝组织的定位及转录表达强度;用流式细胞仪测定ＰＭＮ表达ＣＤ１１ｂ及ＣＤ１８的阳性率。结果：ＩＡＭ－１ｍＲＮＡ原位杂交显示胆道感染３ｈ后肝窦内皮细胞,枯否细胞和肝小叶中央静脉内皮细胞阳性反应增强,１２ｈ阳性反应最强。     

原位杂交检测肾母细胞瘤类胰岛素生长因子mRNA表达

为了明确类胰岛素生长因子Ⅱ（ＩＧＦⅡ）基因ｍＲＮＡ在肾母细胞瘤中的表达及分布，采用原位杂交组化方法检测４２例肾母细胞瘤细胞和１０例正常肾组织ＩＧＦⅡ基因ｍＲＮＡ。结果：２８例肾母细胞瘤组织ＩＧＦⅡ基因ｍＲＮＡ高表达，１０例正常肾组织全部低表达，２组间差别显著（Ｐ＜００１）；母细胞优势型肾母细胞瘤ＩＧＦⅡ基因ｍＲＮＡ表达水平显著高于上皮优势型和间质优势型（Ｐ＜００１）；在母细胞优势型和混合型肾母细胞瘤中，有间变肿瘤ＩＧＦⅡ基因ｍＲＮＡ水平显著高于无间变肿瘤（Ｐ＜００５）。提示：ＩＧＦⅡ基因可能在肾母细胞瘤的增殖和分化中起重要作用。     

氧自由基对再灌注损伤大鼠白细胞介素1活性的影响

探索大鼠严重烧伤肾组织内皮素－１（ＥＴ－１）动态变化规律。方法用凝固汽油烧伤Ｗｉｓｔａｒ大鼠背部制成３０％ＴＢＳＡⅢ度烧伤模型，观察正常对照、烧伤后１、３、６、１２、２４小时共６组动物的肾静脉血浆、肾皮质、外髓、内髓ＥＴ－１浓度变化，肾组织ＥＴ－１光镜和电镜免疫组织化学变化，肾组织ＥＴ－１ｍＲＮＡ斑点杂交和原位杂交变化。结果烧伤后１小时肾静脉及肾组织各层ＥＴ－１较对照组明显上升（Ｐ＜０．０１），６小时达到高峰，２４小时仍明显高于正常。免疫组织化学显示ＥＴ－１增强部位主要在血管内皮细胞及平滑肌细胞、系膜细胞、肾小管上皮细胞，且内皮细胞内ＥＴ－１分泌颗粒聚积在细胞基底面，而小管上皮细胞基底面、管腔面均有ＥＴ－１分泌颗粒。斑点杂交及原位杂交均显示ＥＴ－１ｍＲＮＡ烧伤后１小时明显升高，３小时达高峰，２４小时仍高于正常，主要分布与免疫组织化学结果一致。结论严重烧伤早期肾脏ＥＴ－１的分泌和基因表达明显增强。     

人宫颈癌组织中c-myc基因的表达

目的研究人宫颈癌组织中ｃ－ｍｙｃ基因的表达。方法应用Ｄｉｇ标记ｃＤＮＡ探针，ＤＮＡ－ｍＲＮＡ原位杂交技术检测３７例人宫颈鳞状细胞癌内癌基因ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ。结果３７例中１６例有ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ表达，检出率为４３．２４％，ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ主要分布在癌细胞胞浆内。结论ｃ－ｍｙｃ癌基因表达在宫颈癌发生中可能起作用，宫颈癌的发生可能还有更多的癌基因参与。