GDF11对肝细胞癌SMMC-7721细胞增殖能力及顺铂敏感度的影响

目的 研究GDF11（growth differentiation factor 11）过表达对肝细胞癌SMMC-7721细胞体外增殖能力及顺铂敏感度的影响。方法 前期成功构建GDF11过表达的SMMC-7721细胞,同时以空载体感染细胞组及野生型细胞组为对照。CCK-8法检测细胞增殖能力,平板克隆形成实验检测细胞克隆形成能力。CCK-8法检测GDF11过表达对细胞顺铂药物敏感度的影响。结果 Western blot结果验证,已成功构建GDF11过表达的SMMC-7721细胞。GDF11过表达可明显抑制SMMC-7721细胞的体外增殖能力,在96、120及144 h时抑制作用最显著（P<0.05）,且实验组细胞较对照组克隆形成能力明显减弱（P<0.05）。GDF11过表达能够增强肝细胞癌SMMC-7721细胞对顺铂的敏感度,顺铂浓度取20 μg/ml及40 μg/ml时,与对照组相比差异有统计学意义（P<0.05）。结论 肝细胞癌SMMC-7721细胞过表达GDF11蛋白后,其体外增殖及克隆形成能力明显降低,对化疗药物顺铂的敏感度增强。     

沙利度胺对人肝癌细胞株SMMC-7721体外生长的抑制作用

目的 研究沙利度胺对人肝癌细胞株SMMC-7721体外生长的抑制作用及其可能的机制.方法 将不同浓度的沙利度胺作用于人肝癌细胞株SMMC-7721,采用四甲摹偶氮唑蓝(MTT)法检测沙利度胺对SMMC-7721细胞的增殖抑制作用.将SMMC-7721细胞培养至对数生长期,采用DNA琼脂糖凝胶电泳、荧光显微镜观察、流式细胞仪检测等方法 观察沙利度胺处理后SMMC-7721细胞的凋亡梯度、形态学变化和凋亡率,并对凋亡调控蛋白caspase-3的表达进行测定.采用酶联免疫吸附(ELISA)法测定不同浓度的沙利度胺处理后SMMC-7721细胞表达血管内皮生长因子(VEGF)的变化.结果 沙利度胺的浓度从3.125μg/ml增至200μg/ml时,其对SMMC-7721细胞的增殖抑制率从11.7%增至34.2%;当沙利度胺的浓度>25 μg/ml时,其对SMMC-7721细胞的增殖抑制作用明显强于空白对照组(P<0.05).200 μg/ml的沙利度胺处理SMMC-7721细胞24 h后,行琼脂糖凝胶电泳,可见到DNA梯形条带;48 h后梯形条带更明显,并且在荧光显微镜下可见SMMC-7721细胞出现核固缩和核裂解现象.200μg/ml的沙利度胺处理SMMC-7721细胞12、24、48和72 h时,碘化丙啶(PI)法检测SMMC-7721细胞的凋亡率分别为3.1%±0.5%、8.4%±1.3%、19.4%±3.5%和25.8%±2.1%,24 h起的凋亡率均明显高于空白对照组SMMC-7721细胞48 h的自然凋亡率(1.6%±0.6%,均P<0.05).50、100和200μg/ml的沙利度胺处理SMMC-7721细胞48 h时,Annexin V-FITC/PI双标法检测SMMC-7721细胞的凋亡率分别为8.7%±1.2%、16.8%±2.5%和25.4%±4.5%,均明显高于空白对照组SMMC-7721细胞48 h的自然凋亡率(2.1%±0.5%,均P<0.05).随着沙利度胺浓度的增加,表达caspase-3蛋白的SMMC-7721细胞数量不断增加,而SMMC-7721细胞中VEGF的含量却逐渐下降.结论 沙利度胺可能通过诱导肝癌细胞的凋亡、抑制肿瘤血管的生成而发挥双重抗肿瘤生长的作用.     

东亚钳蝎毒抗癌多肽对人肿瘤细胞系和动物移植瘤的作用

目的研究东亚钳蝎毒抗癌多肽(APBMV)对人早幼粒白血病细胞系HL-60和人肝癌细胞系SMMC-7721及对小鼠肝癌H22移植瘤的作用.方法体外应用MTT法、生长抑制实验和集落形成实验,观察APBMV对HL-60、SMMC-7721及H22瘤细胞的作用;体内实验采用小鼠H22实体瘤模型,检测肿瘤生长抑制率(IR)、白细胞计数(WBC)和脾脏指数(SI),观察APBMV对H22带瘤小鼠的影响.结果APBMV 对HL-60和SMMC-7721细胞均具较强的毒性作用,其IC50值分别为10.74 μg/ml和11.33 μg/ml; APBMV可显著抑制两种细胞的生长,剂量效应关系明显,HL-60和SMMC-7721细胞24h、48h和96h的IC50值分别为19.41 μg/ml、9.90 μg/ml、11.41 μg/ml和l5.87 μg/ml、13.05 μg/ml、8.70 μg/ml;APBMV浓度>8 μg/ml时,可明显抑制SMMC-7721细胞的集落形成(P<0.01),IC50为10.83 μg/ml.H22细胞经APBMV处理后,代谢MTT的能力明显低于对照组,但剂量效应关系不明显(P>0.05).APBMV能显著抑制H22带瘤小鼠的肿瘤生长,IR最高达40.30%( P<0.01), 小鼠WBC和SI无明显变化或略高于对照组,而5-Fu组小鼠WBC和SI均明显下降(P<0.01).结论APBMV是东亚钳蝎蝎毒中有效低毒的抗肿瘤成分,对HL-60、SMMC-7721细胞和小鼠H22肿瘤有显著抑制作用.     

小白菊内酯及顺铂对人结肠癌细胞SW620凋亡和增殖的作用

[目的]探讨小白菊内酯及顺铂对人结肠癌细胞SW620增殖及凋亡的影响.[方法]不同浓度的小白菊内酯和顺铂分别处理SW620细胞,MTr法检测细胞增殖的变化情况,流式细胞仪检测细胞凋亡的情况.[结果]小白菊内酯和顺铂对SW620细胞增殖均具有抑制作用;分别作用48h后,小白菊内酯和顺铂对SW620细胞增殖的抑制作用呈浓度依赖性;5 μmol/L顺铂联合10μmol/L小白菊内酯作用SW620细胞时,对细胞增殖具有协同抑制作用.小白菊内酯和顺铂可以诱导SW620细胞凋亡.[结论]小白菊内酯和顺铂联用具有协同作用,能抑制SW620细胞增殖并诱导细胞凋亡.     

辛伐他汀联合吡喃阿霉素对肝癌SMMC-7721细胞的协同抑制作用

目的:研究辛伐他汀联合吡喃阿霉素对人肝癌细胞SMMC-7721的增殖抑制作用。方法:辛伐他汀、吡喃阿霉素分别及联合处理细胞48小时,MTT法测量细胞的增殖抑制,按公式计算相互作用指数。结果:按照文献报道计算相互作用指数,相互作用指数小于1。结论:辛伐他汀和吡喃阿霉素对于SMMC-7721有协同抗瘤作用。     

苦参碱和顺铂联合应用对人骨肉瘤细胞株MG-63增殖抑制作用的研究

[目的]观察苦参碱和顺铂单药及联合应用对人骨肉瘤细胞株MG-63细胞增殖的抑制作用。[方法]采用MTT法（四甲基偶氮唑蓝比色法）,利用中效原理判断药物联合应用的效应。[结果]苦参碱与顺铂联合应用对骨肉瘤细胞株MG-63细胞增殖抑制作用加强,低浓度（≤1．0mg／ml）苦参碱与顺铂联合应用时两者为拮抗作用,〉1．5mg／ml苦参碱与顺铂合用时为相加作用。在苦参碱浓度〉2．0mg／ml联合用药的抑制率接近95％。顺铂以20μg／ml的浓度作用于MG-63细胞48h．增殖抑制率是86．7％,而顺铂以5μg／ml的浓度与2mg／ml的苦参碱联合作用48h,增殖抑制率是92．6％,说明苦参碱和顺铂联用可使顺铂在小剂量时即有较好的杀伤作用。[结论]苦参碱和顺铂联合应用可使顺铂在小剂量时有较好的作用,从而避免了顺铂的毒副作用。     

华蟾素和顺铂对骨肉瘤MG-63细胞联合杀伤作用的研究

目的：探讨比较华蟾素（ cinobufagin ）协同顺铂（ cisplatin ）对人骨肉瘤细胞株 MG-63的杀伤作用。方法体外培养骨肉瘤细胞株 MG-63细胞,取对数生长期细胞进行实验;采用 MTT 比色法测定MG-63细胞的生长抑制作用并计算细胞抑制率;流式细胞仪检测骨肉瘤细胞的凋亡率和细胞周期,观察细胞凋亡率的变化情况和药物对细胞周期的抑制作用;原位末端标记法（ TUNEL ）观察骨肉瘤细胞的凋亡情况并检测细胞凋亡率;相差显微镜观察骨肉瘤细胞生长状况及形态学上的改变。结果华蟾素和顺铂均对骨肉瘤细胞有生长抑制作用,华蟾素组、顺铂组及华蟾素＋顺铂组在药物浓度不同时对骨肉瘤细胞的生长抑制作用各不相同,在药物浓度低于80μg/ml时,各实验组药物对细胞的生长抑制作用随药物浓度的增加而上升;当药物浓度达到80μg/ml时,华蟾素组和顺铂组药物对骨肉瘤细胞的生长抑制作用不再增加,但华蟾素＋顺铂组药物对细胞的生长抑制作用在药物浓度达到160μg/ml时,抑制作用仍强于其浓度为80μg/ml时。各实验组在药物浓度相同时华蟾素＋顺铂对骨肉瘤细胞的生长抑制作用明显强于单独应用华蟾素或者顺铂。结论华蟾素＋顺铂对骨肉瘤 MG-63细胞的联合杀伤作用明显强于单独应用顺铂或者华蟾素;在抑制骨肉瘤 MG-63细胞生长方面,华蟾素协同顺铂对细胞的杀伤作用效果显著,并且具有时间和浓度依赖性。     

Celecoxib联合羟基喜树碱对缺氧诱导的人肝癌细胞增殖与凋亡的影响

目的:探讨选择性环氧合酶-2(COX-2)抑制剂Celecoxib联合羟基喜树碱对缺氧诱导的人肝癌细胞株SMMC-7721细胞增殖和凋亡的影响。方法:应用三气培养箱在缺氧环境下培养人肝癌细胞株SMMC-7721细胞。预实验筛选Celecoxib、羟基喜树碱最小有效终浓度,设24、48、72小时为干预时间并筛选最佳作用时间。分别以Celecoxib及羟基喜树碱单独实验筛选的最小有效浓度为联合组浓度;以Celecoxib单独实验筛选最佳作用时间为实验时间。倒置显微镜观察细胞形态学变化;应用四氮唑盐比色法(MTT法)监测细胞增殖活力;Annexin V/PI双染色法检测细胞凋亡;免疫细胞化学法（SP法）检测凋亡蛋白Bax、Bcl-2、COX-2的表达。结果:不同浓度Celecoxib及不同时间对SMMC-7721细胞表现出的生长抑制作用呈剂量依赖性及时间依赖性。Celecoxib（30 mg/L)单用在作用72 h时即可抑制SMMC-7721细胞的增殖。选72 h为作用时间,不同浓度羟基喜树碱对SMMC-7721细胞表现出的生长抑制作用呈剂量依赖性,浓度为0.625 μmol/L羟基喜树碱即可抑制SMMC-7721细胞的增殖。选用羟基喜树碱(0.625 μmol/L)与Celecoxib（30 mg/L)联合作用72 h时,联合抑制作用结果呈现协同作用(Q>1.15)。流式细胞仪检测分析,两种药物均可有效诱导 SMMC-7721细胞的凋亡,并且在上述浓度联合作用时具有协同效应。免疫细胞化学结果显示,Celecoxib（30 mg/L)组和联合用药组细胞质内棕黄色颗粒较对照组染色浅,表明Bcl-2和COX-2蛋白表达有所下降,而Bax蛋白表达在Celecoxib（30 mg/L)和联合用药组中黄色颗粒的阳性细胞较对照组增多,表明Bax蛋白表达有所上调;并且此变化与Celecoxib（30 mg/L)组比较联合用药组有协同作用(P<0.05)。结论:缺氧状态下Celecoxib与羟基喜树碱对SMMC-7721细胞株均有抑制增殖与促进凋亡作用,并且两者联合作用有协同作用;Celecoxib的作用机制除了抑制COX-2外,还可能与下调Bcl-2、上调Bax的表达有关。     

TRAIL联合化疗或热疗抑制人肝癌细胞SMMC-7721体外增殖作用的研究

目的:在国内外现有的研究基础上探讨数种化疗药物:顺铂、羟基喜树碱、丝裂霉素、健择或热疗联合肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumornecrosisfac-tor-relatedapoptosis-inducingligand,TRAIL)体外抑制肝癌细胞增殖的效果,以确定联合方案是否具有协同效应。方法:使用MTT法测定单独或联合应用TRAIL及化疗药物羟基喜树碱、顺铂、丝裂霉素、健择或热疗对人肝癌SMMC-7721细胞的体外增殖的抑制作用,使用流式细胞仪检测不同方案对SMMC-7721细胞凋亡率的影响。结果:TRAIL联合应用4种化疗药物均可以显著提高化疗药物引起的细胞增殖抑制及细胞凋亡。以亚毒性剂量浓度的顺铂为例,对照组、化疗组、TRAIL组、TRAIL联合化疗组的细胞增殖抑制率分别为0、14·91%、17·92%和62·45%;细胞凋亡率分别为1·59%、3·38%、8·78%和27·58%。但TRAIL联合热疗并不表现出明显的协同作用。结论:联合应用TRAIL与化疗药物对SMMC-7721细胞体外增殖的抑制及诱导细胞凋亡具有显著的协同作用,联合应用TRAIL与热疗未表现出明显的协同作用。     

重组人血管内皮抑制素联合顺铂抗血管形成作用的实验研究

目的:揭示新型重组人血管内皮抑制素(恩度,YH-16)与顺铂(CDDP)联合使用的抗血管形成作用.方法:首先以细胞增殖抑制、克隆形成实验和细胞凋亡分析,考察YH-16联合CDDP对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)、肝癌细胞系QGY-7701和SMMC-7721生物学活性的影响;其次,在HUVECs体外培养体系上,评价两药联合使用对细胞迁徙/侵袭和管道形成的抑制作用.结果:YH-16与CDDP联合使用能协同地抑制HUVECs增殖和克隆形成,并增强了诱导细胞凋亡,上述作用具有血管内皮细胞特异性.两药联合使用对HUVECs的迁徙/侵袭和管道形成也有协同的抑制作用.结论:在血管形成的多个环节上,YH-16与CDDP联合使用提高了抗血管形成的效能,联合用药模式具有临床推广价值.     

Apoptosis in Human Hepatoma Cell Line SMMC-7721 Induced by Water-soluble Macromolecular Components of Artemisia capillaris Thunberg

The aim of this study was to investigate the effect of water-soluble macromolecular components of Artemisia capillaris Thunberg (ACT) on human hepatoma cell line SMMC-7721 (SMMC-7721). The morphological changes of SMMC-7721 were observed under a light microscope and an electron microscope. Inhibition of proliferation was measured with a colorimetric MTT assay. It was discovered that ACT extract-treated cells exhibit morphological changes typical of apoptosis, including condensed chromatin and a reduction in volume. ACT extract at 25–200 μg/ml dosedependently inhibited the proliferation of SMMC-7721. The 50% effective dose, evaluated on day 3 of exposure to the extract, was 64.52±3.53 μg/ml. Upon gel electrophoresis, the fragmented DNA showed a characteristic ladder pattern. Cell cycle analyses revealed that ACT induced cell cycle arrest at the G₀/G₁ phase.     

Apoptosis in human hepatoma cell line SMMC-7721 induced by water-soluble macromolecular components of Artemisia capillaris Thunberg.

The aim of this study was to investigate the effect of water-soluble macromolecular components of Artemisia capillaris Thunberg (ACT) on human hepatoma cell line SMMC-7721 (SMMC-7721). The morphological changes of SMMC-7721 were observed under a light microscope and an electron microscope. Inhibition of proliferation was measured with a colorimetric MTT assay. It was discovered that ACT extract-treated cells exhibit morphological changes typical of apoptosis, including condensed chromatin and a reduction in volume. ACT extract at 25-200 microg/ml dose-dependently inhibited the proliferation of SMMC-7721. The 50% effective dose, evaluated on day 3 of exposure to the extract, was 64.52+/-3.53 microg/ml. Upon gel electrophoresis, the fragmented DNA showed a characteristic ladder pattern. Cell cycle analyses revealed that ACT induced cell cycle arrest at the G0/G1 phase.     

塞来昔布抑制肝癌细胞株增殖及其机制的实验研究

目的:研究特异性环氧化酶-2(COX-2)抑制剂塞来昔布对人肝癌细胞株SMMC-7721是否有抑制增殖、诱导凋亡作用并初步探讨其作用机制。方法:采用四氮唑盐比色法(MTT法)观察不同浓度的塞来昔布作用后细胞增殖活力改变;流式细胞仪检测细胞凋亡百分率及细胞周期变化;免疫组化观察Bcl-2蛋白和Bax蛋白表达情况。结果:MTT法显示随着塞来昔布浓度和作用时间增加,细胞增殖抑制率上升;流式细胞仪测定空白对照组未见明显凋亡峰,塞来昔布组出现凋亡峰,凋亡率随着时间及药物浓度变化而变化,二者呈正相关;免疫组化显示经塞来昔布干预后,凋亡蛋白Bax表达增加,而Bcl-2表达减少,并随时间和药物浓度变化而明显。结论:塞来昔布抑制SMMC-7721细胞增殖,促进SMMC-7721细胞凋亡,并呈剂量和时间依赖性。其作用机制之一可能是通过减少Bcl-2的表达,增加Bax的表达,从而启动细胞凋亡途径。     

复方苦参注射液联合奥沙利铂对人肝癌细胞株ＳＭＭＣ-７７２１增殖与凋亡的影响

目的　通过观察复方苦参注射液、奥沙利铂（ＯＸＡ）及其两药联合对人肝癌细胞株ＳＭＭＣ-７７２１增殖与凋亡的影响,探讨中药与化疗药物联合应用的协同增效作用。方法　采用ＭＴＴ法观察复方苦参注射液、ＯＸＡ及其两药联合对ＳＭＭＣ-７７２１细胞增殖的影响;应用流式细胞术分析对细胞周期的影响;采用原位末端标记法（ＴＵＮＥＬ）和荧光染色法观察对细胞凋亡的作用。结果　复方苦参注射液和ＯＸＡ对ＳＭＭＣ-７７２１细胞均有明显的抑制增殖作用,该作用随着药物作用时间的延长、剂量的增加而逐渐增强（Ｐ＜００１）;两药联合表现为相加或协同作用,与单药比较,有显著性差异（Ｐ＜０.０５）。ＴＵＮＥＬ法检测结果表明,复方苦参注射液（２５μｌ／ｍｌ）、ＯＸＡ（１μｇ／ｍｌ）以及两药联合作用于ＳＭＭＣ-７７２１细胞后均可诱导肝癌细胞凋亡,凋亡指数（ＡＩ）分别为２５.２％、１６.２％和３６.３％,联合组明显优于单药组（Ｐ＜０.０５）。流式细胞术分析显示,复方苦参注射液、ＯＸＡ均可使细胞被阻滞于Ｇ０／Ｇ１期,两药联合较单药更为显著（Ｐ＜０.０５）。结论　复方苦参注射液、ＯＸＡ均能抑制人肝癌细胞株ＳＭＭＣ-７７２１的增殖和诱导细胞凋亡,将细胞阻滞于Ｇ０／Ｇ１期,两药联合后作用加强,提示复方苦参注射液和ＯＸＡ联合应用治疗肝癌可能会起到协同增效的作用。     

干扰PRMT2基因对肝癌细胞系生物学行为的影响

目的:研究抑制蛋白质精氨酸甲基转移酶2(protein arginine methyltransferase 2,PRMT2)基因的表达对肝癌细胞系生物学行为的影响。方法:qRT-PCR检测人肝癌细胞系(HepG2和SMMC-7721)和人正常肝细胞(LO2)中PRMT2的表达情况;设计并合成针对PRMT2基因的3对小干扰RNA,体外通过脂质体Lipofectamine 3000转染到相对高表达PRMT2的人肝癌细胞系HepG2和SMMC-7721中抑制PRMT2基因的表达,并设置阴性对照组（NC组）和空白对照组。qRT-PCR、Western blot检测转染后细胞PRMT2 mRNA水平和蛋白水平的变化。CCK-8法检测转染后细胞增殖能力,Transwell小室检测细胞体外迁移及侵袭能力。结果:与人正常肝细胞LO2相比,PRMT2基因在人肝癌细胞系HepG2和SMMC-7721中相对高表达。将siPRMT2转染HepG2和SMMC-7721细胞后,与NC组相比,siPRMT2-1和siPRMT2-2组的PRMT2 mRNA和蛋白表达均明显降低（P均<0.05）,NC组与空白对照组无明显差异。与NC组相比,将siPRMT2-1和siPRMT2-2转染进HepG2和SMMC-7721细胞后,细胞增殖速度减慢、迁移和侵袭能力显著减弱（P均<0.05）,NC组与空白对照组无明显差异。结论:RNA干扰抑制PRMT2表达后,抑制肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭,PRMT2可能影响肝癌的预后。     

miR－338对人肝癌细胞增殖及迁移的影响

目的：观察过表达miR－338对人肝癌细胞SMMC－7721增殖及迁移能力的影响。方法：化学合成miR－338寡聚核苷酸,并行测序确认。利用pcDNA6．2－GW／Em－GFP－miR 质粒构建miR－338真核表达载体。pcDNA6．2－GW／Em－GFP－miR－338质粒载体瞬时转染SMMC－7721细胞,实时荧光定量PCR检测miR－338的mRNA表达水平。高表达miR－338后,CCK－8法和划痕实验分别检测SMMC－7721细胞增殖能力及迁移能力的变化。结果：设计的miR－338序列与寡核苷酸测序结果比对,匹配程度达100％。pcD-NA6．2－GW／Em－GFP－miR－338质粒瞬转后人肝癌SMMC－7721细胞 miR －338的表达量与对照组相比显著增加（P＜0．05）。miR－338过表达SMMC－7721细胞的增殖能力与各对照组相比均有显著下降（P＜0．05）;miR－338过表达细胞迁移速度降低。结论：上调的miR－338可抑制人肝癌SMMC－7721细胞的增殖及迁移能力。     

TSA对人肝癌细胞SMMC-7721的抑制作用及其机制

目的:研究去乙酰化转移酶抑制剂TSA对肝癌细胞SMMC-7721的作用及其机理。方法:利用细胞计数,流式细胞仪分析细胞凋亡及细胞周期,Tunel试验研究TSA对肝癌细胞SMMC-7721的作用;利用western研究TSA对肝癌细胞蛋白表达的影响。结果:TSA可明显抑制肝癌细胞SMMC-7721的生长,并可诱导细胞凋亡。可阻滞肝癌细胞SMMC-7721细胞周期于G0/G1期。可增加p53,p21,bax等基因的表达,降低BCL-2的表达。结论:去乙酰化转移酶抑制剂TSA可明显抑制肝癌细胞SMMC-7721的生长并诱导其凋亡,其主要通过调控一些肿瘤相关基因的表达起作用。