二甲基酰胺对肝脏钙稳态影响的实验研究

采用二甲基甲酰胺短期染毒实验方法观察了它对肝脏钙稳态的影响，结果表明：二甲基甲酰胺可明显降低线粒体，微粒体的钙离子的转运能力，抑制Ｃａ＾２＋ＡＴＰａｓｅ活力，使胞浆中钙离子浓度升高，病理及超微结构观察它可致肝细胞的损伤甚至坏死，其损伤的主要部位的线粒体及内质网。     

缺氧及血管紧张素Ⅱ对血管内皮细胞内钙离子浓度及线粒体膜电位的影响

目的 观察缺氧及血管紧张素Ⅱ(Ang-Ⅱ)对血管内皮细胞(VEC)内钙离子浓度及线粒体膜电位的影响.方法 建立VEC缺氧损伤模型;实验设空白对照组、缺氧组、Ang-Ⅱ作用组、缺氧加Ang-Ⅱ作用组.细胞经过Fluo-3/AM负载后,用激光共聚焦显微镜测定VEC内钙离子浓度;细胞经过Rhodamine 123负载后,用激光共聚焦显微镜测定VEC线粒体膜电位.结果 VEC分别经过缺氧及Aug-Ⅱ损伤后,细胞内钙离子浓度(51.66±8.94)明显升高,线粒体膜电位明显降低,差异有统计学意义(P<0.01);缺氧条件下Ang-Ⅱ可引起VEC钙离子浓度(51.66±8.94)进一步升高,线粒体膜电位的变化(16.02±6.09)较单纯缺氧或单纯Ang-Ⅱ作用(分别为24.72±8.31、21.77±7.19)进一步降低.结论 缺氧及Ang-Ⅱ可引起VEC内钙离子浓度明显升高,线粒体膜电位明显降低.     

90 dB次声作用后大鼠下丘脑神经细胞钙离子的分布

目的观察16Hz、90dB次声连续作用后大鼠下丘脑内钙离子的分布变化规律。方法用16Hz、90dB次声连续作用1、7、14、21d，每天1次，2h／次，分别于作用后0．5、12h观察大鼠下丘脑内钙离子的分布。结果空白组、对照组下丘脑神经细胞结构正常，钙离子呈规则的圆形黑色小颗粒，边缘整齐，主要分布于神经细胞核、线粒体、内质网、神经细胞和胶质细胞的突起中。次声组下丘脑神经细胞的超微结构都有损伤改变并伴随钙离子颗粒减少。结论次声可损伤大鼠下丘脑内神经细胞，损伤程度和次声作用参数及机体代偿作用有关。     

缺氧及血管紧张素Ⅱ体外诱导人大动脉内皮细胞损伤与银杏叶提取物的保护效应

目的 实验以缺氧及血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)体外诱导的人大动脉损伤内皮细胞为对象,观察血管内皮细胞(VEC)钙离子浓度及线粒体膜电位(MMP)的变化,探讨银杏叶提取物金钠多对VEC可能的保护作用机制.方法 建立VEC缺氧损伤模型;实验分别设空白对照组、缺氧组、缺氧加金钠多组、Ang Ⅱ作用组、Ang Ⅱ加金钠多组、缺氧和Ang Ⅱ作用组及缺氧和AngⅡ加金钠多组等7组.各组细胞经过Fluo-3/AM负载后,用激光共聚焦显微镜测定VEC内Fluo-3的荧光强度代表钙离子浓度;各组细胞经过Rbedamine 123负载后,用激光共聚焦显微镜测定VEC内Rbedamine 123的荧光强度代表MMP.结果 VEC分别经过缺氧及Ang Ⅱ损伤后,细胞内钙离子浓度明显升高(P<0.01),MMP明显降低(P<0.01);缺氧条件下,Ang Ⅱ可引起VEC钙离子浓度进一步升高(P<0.05),MMP较单纯缺氧或单纯Ang Ⅱ作用进一步降低(P<0.05);金钠多可抑制细胞内钙离子浓度的升高并提高受损伤细胞的MMP.结论 缺氧及Ang Ⅱ等因素可引起VEC内钙离子浓度明显升高,MMP明显降低,金钠多明显减轻上述损伤,具有细胞保护作用.     

窒息后新生儿心肌线粒体的损伤

新生儿窒息缺氧对心肌线粒体的损伤在心脏损害的过程中起着重要的作用。心肌线粒体是产生内源性自由基的主要场所，氧自由基攻击导致膜流动性下降，影响线粒体功能和膜内酶活性。心肌细胞缺血缺氧时细胞内钙超载继发线粒体钙超载，使线粒体内膜钙离子依赖小孔开放，线粒体心肌细胞缺血缺氧时细胞内钙超载继发线粒体钙超载，使线粒体内膜钙离子依赖小孔开放，线粒体膜电位降低和氧化磷酸化脱偶联。缺氧缺血时心肌线粒体内一氧化氮活酶（NOS）类似物活性增强，NO产生增多，抑制线粒体呼吸链复合物活性和正常电子流，增加超氧阴离子的形成，导致心肌线粒体NO产生增多，抑制线粒体呼吸逻复合活性和正常电子流，增加超氧阴离子的形成，导致心肌线粒体呼吸链功能受损，最终使ATP合成受阻，心肌能量供应不足，出现窒息新生儿心脏损害的临床表现。     

强迫体位致骨骼肌线粒体动态变化的研究

为探讨处于强迫体位时骨骼肌损伤的机理及损伤的动态变化规律，应用电镜形态计量学方法对处于强迫体位不同时间的家兔骨骼肌线粒体的数目和形态变化进行了研究。结果表明，家兔腰部处于强迫体位１周，其Ｌ４～５处骨骼肌的线粒体发生损伤，表现为线粒体水肿，至４周损伤进一步加重，有些损伤的线粒体坏死，使线粒体数目减少，第７周时线粒体开始修复，产生一些新生线粒体。提示强迫体位作用下肌肉线粒体首先出现损伤，这可能成为以后的肌肉损伤的启动因素。随时间延长，线粒体可发生适应性变化，进行自身修复。     

溴氰菊酯对大鼠肝线粒体、微粒体钙离子转运的影响

采用体外放射性同位素测定技术，观察了溴氰菊酯对雄性大鼠肝线粒体、微粒体钙离子转运的影响，结果表明溴氰菊酯能明显降低大鼠肝线粒体、微粒体４５Ｃａ主动摄取的能力，与对照组相比均具有非常显著性差异（Ｐ＜０．０１），且存在明显的剂量效应关系。而溴氰菊酯对大鼠肝线粒体、微粒体４５Ｃａ被动释放的动力学表明，它可显著增加４５Ｃａ从线粒体、微粒体内的被动流出，与对照组相比差异均显著（Ｐ＜０．０５或ｐ＜０．０１），且有明显的剂量效应关系。另外，溴氰菊酯还能明显抑制大鼠肝线粒体、微粒体Ｃａ２＋－ＡＴＰ酶的活力，与对照组相比差异均显著（Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０．０１），也存在明显的剂量效应关系。     

除虫菊酯类农药对大鼠肝线粒体、微粒体~(45)Ca摄取的影响

为探讨除虫菊酯类农药对钙离子转运的影响，采用体外放射性同位素４５Ｃａ测定技术，观察了溴氰菊酯、氯氰菊酯对雄性ＳＤ大鼠肝线粒体、微粒体４５Ｃａ主动摄取的影响，以及对线粒体、微粒体Ｃａ２＋－ＡＴＰ酶活力的影响。结果表明：溴氰菊酯、氯氰菊酯均能明显降低大鼠肝线粒体、微粒体４５Ｃａ主动摄取的能力，抑制肝线粒体、微粒体Ｃａ２＋－ＡＴＰ酶的活力，与对照组相比，差异均有显著或非常显著意义（Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０．０１），且随剂量增加，线粒体、微粒体４５Ｃａ摄取率及Ｃａ２＋－ＡＴＰ酶的活力有显著下降的趋势。提示：溴氰菊酯、氯氰菊酯对肝脏钙稳态影响的作用部位主要是线粒体和内质网钙隔离和调节系统，使其钙封闭作用失调、钙离子转运障碍、细胞正常生理生化功能紊乱。     

内质网应激与细胞凋亡

死亡受体活化和线粒体损伤是两条经典的介导细胞凋亡信号传导通路，近来研究发现过度内质网应激可启动细胞凋亡，是一条新的细胞凋亡信号传导通路，这一信号传导通路包括非折叠蛋白反应和钙离子起始信号等机制，内质网应激可特异性激活Caspase-12，Caspase-12裂解Caspase-3等下游效应蛋白酶，最终导致细胞凋亡。本文对该凋亡途径的研究进展作了简要综述。     

溴氰菊酯对大鼠肝线料,微粒体钙离子转运的影响

采用体外放射性同位素测定技术，观察了溴氰菊酯对雄性大鼠肝线粒体、微本钙离子转运的影响，结果表明溴氰菊酯能明显降低大鼠肝线粒体、微料体＾４５Ｃａ主动摄取的能力，与对照组相比均具有非常显著性差异，且存在明显的剂量－效应关系。     

黄磷对大鼠肝微粒体和线粒体Ca^2＋泵的影响

在体外实验中,用不同浓度黄磷(0.026μg/ml,0.26μg/ml,2.60μg/ml)与大鼠肝微粒体和线粒体共同孵育,发现黄磷对肝微粒体和线粒体Ca~(2 )-ATP酶呈现抑制作用,且随剂量增大,抑制作用加重;在孵育的早期,对微粒体Ca~(2 )ATP酶的抑制更明显。在整体动物实验中,黄磷染毒后6小时,对肝微粒体和线粒体Ca~(2 )-ATP酶发生抑制。染毒后3小时,对肝微粒体~(45)Ca摄取发生抑制;染毒后6小时,对肝线粒体~(45)Ca摄取发生抑制。实验结果表明,黄磷对微粒体和线粒体Ca~(2 )泵机制的损害可能是引起中毒性肝损害的一个重要因素。     

溴氰菊酯对大鼠肝脏钙稳态影响的体外实验研究

采用体外测定方法，研究了溴氰菊酯对雄性ＳＤ大鼠肝线粒体、微粒体钙稳态的影响。结果表明，溴氰菊酯能明显抑制大鼠肝线粒体、微粒体Ｃａ２＋－ＡＴＰ酶的活力；显著降低大鼠肝线粒体、微粒体对４５Ｃａ主动摄取的能力；并显著增加４５Ｃａ从线粒体、微粒体内的被动流出，三者与对照组相比差异均有显著性意义（Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０．０１），都存在明显的剂量、效应关系．     

硒对氟所致大鼠体内体外脂质过氧化作用的影响

采用体外大鼠肝微粒体系统和体内经饮水加氟（５０ｍｇ／Ｌ）同时或单独加硒（０．５ｍｇ／Ｌ）的方法，观察氟致大鼠体内、体外脂质过氧化作用及硒的拮抗作用。体外实验结果表明，加氟可使微粒体系统脂质过氧化物（ＬＰＯ）含量显著增加；同时加硒可结抗氟致微粒体系统的脂质过氧化作用。体内实验结果表明，饮水加氟（５０ｍｇ／Ｌ）可使大鼠血清ＬＰＯ含量显著增加，全血谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＳＨ－Ｐｘ）活性和血清游离维生素Ｅ含量显著降低；饮水同时加硒（０．５ｍｇ／Ｌ）则可拮抗上述氟的效应。     

硒对镉在大鼠肝脏亚细胞分布及脂质过氧化作用的影响

采用给大鼠腹腔注射镉(CdCl_2 1mg/kg)或/和硒(Na_2SeO_3 0.4mg/kg)的方法,研究了硒对镉在大鼠肝脏亚细胞分布及脂质过氧化作用的影响。结果表明,给大鼠连续腹腔注射CdCl_2(1mg/kg)3d,可致大鼠肝微粒体和线粒体脂质过氧化物(LPO)含量显著增加,谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性显著下降,肝细胞浆还原型谷胱甘肽(GSH)含量显著降低。同时给大鼠腹腔注射Na_2SeO_3(0.4mg/kg),硒可拮抗上述镉的效应。但硒对大鼠肝脏镉含量及镉在肝脏亚细胞分布没有明显影响。     

丹参酮ⅡA对异烟肼和利福平小鼠肝毒性保护作用的实验研究

目的 观察丹参酮ⅡA对异烟肼和利福平肝毒性的保护作用及其机制探讨.方法 分别测定肝损害组和丹参酮ⅡA大、中、小剂量组小鼠的血清丙氨酸氨基转移酶( ALT)、肝指数、肝匀浆丙二醛(MDA)含量、肝微粒体细胞色素P450和线粒体Ca2+-ATP酶活性,并与对照组比较.结果 丹参酮ⅡA可对抗异烟肼和利福平引起的MDA、ALT...     

氯氰菊酯对大鼠肝线粒体,微粒体钙离子转运的影响

采用放射性同位素４５Ｃａ体外测定技术，观察了除虫菊酯类农药氯氰菊酯对大鼠肝线粒体、微粒体Ｃａ２＋转运的影响。结果表明，氯氰菊酯能明显降低大鼠肝线粒体、微粒体对４５Ｃａ主动摄取的能力，且具有明显的剂量一效应关系。同时，它还能显著增加４５Ｃａ从线粒体和微粒体内被动流出，也具有明显的剂量一效应关系和时间一效应关系。     

拟除虫菊酯类农药对大鼠肝线粒体、微粒体Ca~（2＋）－ATP酶活力的影响

采用离体实验方法，观察了拟除虫菊酯类农药溴氰菊酯、氯氰菊酯对大鼠肝线粒体、微粒体Ｃａ２＋－ＡＴＰ酶活力的影响。结果表明，加入溴氰菊酯、氯氰菊酯１５ｍｉｎ后，各剂量组线粒体、微粒体Ｃａ２＋ＡＴＰ酶均有明显的抑制作用，与对照组相比均具有显著性差异，（Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０．０１），且存在明显的剂量－效应关系。作用３０ｍｉｎ后各剂量组线粒体、微粒体Ｃａ２＋－ＡＴＰ酶仍继续下降，未见有恢复的趋势。     

绿茶及混合茶抑制二乙基亚硝胺诱发大鼠肝癌前期病变的抗氧化机理研究

用二乙基亚硝胺（ＤＥＮ）诱发Ｗｉｓｔａｒ大鼠肝癌前期病变（Ｓｏｌｔ－Ｆａｒｂｅｒ模型）。实验前６周给大鼠饮用２％绿茶水及０．５％混合茶水，于实验第８周末宰杀动物。结果发现，绿茶组及混合茶组肝ｒ－ＧＴ异常病灶数均明显低于阳性对照组（Ｐ＜０．０１）。经ＨＰＬＣ法分离肝微粒体脂质过氧化产物丙二醛（ＭＤＡ）、乙醛（ＡＣＴ）、戊醛（ＰＰ）、丙酮（ＡＣＯＮ），与阳性对照组相比，绿茶组和混合茶组的各种脂质过氧化产物均有不同程度的降低。此外，对多种抗氧化酶和Ⅱ相代谢酶活性进行检测，其中绿茶组ＳＯＤ、ＧＳＴ、ＱＲ活性明显高于阳性对照组；混合茶组ＣＡＴ、ＳＯＤ、ＧＳＴ、ＱＲ活性明显高于阳性对照组。结果表明，绿茶和混合茶对ＤＥＮ诱发大鼠肝癌的发生均有显著的预防作用。其作用机理可能和诱导抗氧化酶及某些Ⅱ相代谢酶活性，以及抑制脂质过氧化作用有关。