异槲皮苷对MC3T3-E1成骨细胞增殖与分化的影响作用

目的研究异槲皮苷对体外培养MC3T3-E1成骨细胞增殖、分化的影响作用。方法以细胞矿化结节染色鉴定MC3T3-E1成骨细胞株骨矿化功能,以MTT法测定成骨细胞的增殖率,以试剂盒法测定细胞内碱性磷酸酶(ALP)的活性。结果在终浓度为1.08×10-6mol·L-1、1.08×10-7mol·L-1、1.08×10-8mol·L-1时,异槲皮苷能极显著促进MC3T3-E1成骨细胞增殖(P<0.01);终浓度为1.08×10-6mol·L-1时,异槲皮苷作用96h后能极显著提高细胞内ALP的活性(P<0.01)。结论一定浓度的异槲皮苷能够显著促进MC3T3-E1成骨细胞增殖和分化。     

马氏珠母贝糖胺聚糖对体外成骨细胞增殖、分化及矿化功能的影响

目的观察珠母贝糖胺聚糖在体外对新生大鼠颅骨成骨细胞增殖、分化及矿化功能的影响。方法应用MTT法、PNPP法、茜素红染色 (ARS)矿化骨结节及用图像分析仪计算骨结节的面积等方法观察细胞的增殖、碱性磷酸酶 (ALP)活性及矿化结节形成的影响。结果珠母贝糖胺聚糖 0 .0 0 8～ 0 .5 g·L- 1在不同时间MTT测得的A值均低于空白对照组 ,不促进细胞的增殖 ;各浓度组在培养 5d时 ,碱性磷酸酶的活性显著高于空白对照组 ;培养 31d后茜素红染色显示 ,0 .0 6 3g·L- 1组所形成的骨结节面积显著大于空白对照组。结论珠母贝糖胺聚糖对体外培养的SD新生大鼠颅骨成骨细胞有显著促进分化和矿化的作用 ,但不促进细胞的增殖。     

补骨脂素与异补骨脂素对乳鼠颅骨成骨细胞分化成熟影响的比较研究

目的比较研究中药补骨脂中两种重要组分——补骨脂素与异补骨脂素对体外培养乳鼠颅骨成骨细胞(rat cal-varial osteoblasts,ROB)分化成熟的影响。方法取新生SD大鼠颅骨,多次酶消化法培养ROB,每3天换液1次,铺满80%皿底后传代培养。以1×10-5mol.L-1的补骨脂素和异补骨脂素对ROB的分化成熟进行药物干预,比较补骨脂素组、异补骨脂素组和不加药的对照组之间碱性磷酸酶(ALP)活性、碱性磷酸酶阳性克隆数(CFU-FALP)、骨钙素分泌量、钙盐沉积量以及钙化结节数量的差异,Real Time RT-PCR检测IGF-1、Osterix、Runx-2和collagen I的基因表达情况。West-ern blot法检测Ⅰ型胶原蛋白的分泌量。结果补骨脂素和异补骨脂素均可促进ROB的分化成熟,具体表现在明显提高ROB的ALP活性,促进钙盐的沉积以及骨钙素的分泌,增加CFU-FALP和钙化结节数量,提高IGF-1、Osterix、Runx-2和collagen I的mRNA水平,增强Ⅰ型胶原的蛋白表达,但异补骨脂素的活性明显高于补骨脂素。结论异补骨脂素促进ROB分化成熟的活性明显高于补骨脂素,提示异补骨脂素是中药补骨脂发挥抗骨质疏松活性的主要有效成分,具有开发为抗骨质疏松新药的潜力。     

大黄素对体外培养新生大鼠颅骨成骨细胞的影响

目的　观察大黄素(emodin)对体外培养新生大鼠颅骨成骨细胞增殖、分化作用特点及量效关系,并观察大黄素对骨保护蛋白(Osteoprotegerin,OPG)mRNA表达的影响。方法　在新生大鼠颅骨成骨细胞体系中加入不同浓度的大黄素,加药后 1、2、3d用MTT法检测细胞增殖, 3、5、7、9d用PNPP法检测细胞内碱性磷酸酶含量,加药后 7d检测细胞内OPGmRNA表达的量, 24d检测细胞上清中钙和细胞内羟脯氨酸含量。结果　大黄素能促进大鼠颅骨成骨细胞ALP活性,实验中最佳作用浓度为 1×10-6 mol·L-1,最佳作用时间是 7d。大黄素能增加细胞内羟脯氨酸含量,促进OPGmRNA的表达。结论　大黄素可促进成骨细胞分化,增加OPGmRNA的表达。     

脱水淫羊藿素与山柰素对体外培养成骨细胞成熟矿化影响的比较研究

比较研究脱水淫羊藿素与山柰素对体外培养大鼠成骨细胞(rat osteoblasts,ROB)增殖与成熟矿化的影响。取新生SD大鼠颅骨,多次酶消化法获得成骨细胞,培养于含10%FBS的MEM培养液中,3天后首次换液,铺满皿底90%以上后传代培养。分别用1×10 4、1×10 5、1×10 6和1×10 7mol.L 1的脱水淫羊藿素和山柰素进行药物干预,增殖分析采用MTT法,诱导培养9天后检测碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性,筛选出最佳浓度。采用最佳浓度的脱水淫羊藿素和山柰素进行药物干预,比较脱水淫羊藿素、山柰素和对照组之间的ALP、钙盐沉积量、骨钙素分泌量、CFU-FALP和矿化结节数量等成骨性指标。提取总RNA,实时荧光定量PCR(real time PCR)检测BMP-2、Osterix(OSX)及Runx-2的mRNA表达情况,同时提取总蛋白,Western blotting法检测Ⅰ型胶原蛋白的分泌量。结果表明,1×10 4mol.L 1脱水淫羊藿素和山柰素对细胞增殖有抑制作用;1×10 5mol.L 1脱水淫羊藿素虽对ROB增殖无明显影响,但能显著提高成骨细胞中ALP活性、钙盐沉积量和骨钙素分泌量,增加CFU-FALP和矿化结节数量,与成骨细胞成熟矿化相关的因子BMP-2、OSX和Runx-2的基因表达量也显著升高,同时I型胶原蛋白的分泌量也明显增多;而山柰素并没有表现出促进体外培养ROB成熟矿化的特性。脱水淫羊藿素促进成骨细胞成熟矿化的作用明显高于山柰素,很可能是由脱水淫羊藿素8位C原子上存在的异戊烯基引起的。     

补骨脂对体外培养新生大鼠颅骨成骨细胞的影响

目的观察由补骨脂乙醇提取物中分离得到的单一化学成分对体外培养新生大鼠颅骨成骨细胞增殖、分化的影响。方法在新生大鼠颅骨成骨细胞体系中加入不同化合物,检测细胞内碱性磷酸酶含量,并用MTT法检测细胞增殖活性。结果由补骨脂乙醇提取物中分离出的化合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅷ、Ⅸ、Ⅹ能提高大鼠颅骨成骨细胞ALP活性及促进其增殖。结论化合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅷ、Ⅸ、Ⅹ可促进成骨细胞分化、增殖,为补骨脂治疗骨质疏松的有效成分。     

葛根素对UMR106细胞增殖及碱性磷酸酶活性的影响

目的:研究葛根素对UMR106细胞增殖及碱性磷酸酶活性的影响.方法:UMR106细胞培养于α-MEM培养基中,葛根素处理后光学显微镜下观察其形态学变化,绘制细胞生长曲线,并采用对硝基苯磷酸钠基质动力学法测定UMR106细胞内、外碱性磷酸酶活性.结果:UMR106细胞经葛根素和10-8mol·L-1雌二醇处理后d1,d2和d3,与空白对照组相比,增殖速度均加快,d2差异最显著.与对照组相比,10-8,10-7,10-6mol·L-1葛根素组的增殖率分别为9.3%,23.3%和40.9%,10-8mol·L-1雌二醇组增殖率为49.7%.与对照组相比,细胞经10-6mol·L-1葛根素处理后1 d和2 d时,细胞内ALP活性显著增加(P＜0.01);细胞经10-6mol·L-1葛根素处理1 d后,细胞外ALP活性显著增加(P＜0.05).结论:葛根素可以促进成骨样细胞UMR106细胞合成和分泌ALP,提示其具有促进成骨细胞增殖和分化的作用.     

福莫特罗对雌激素刺激大鼠成骨细胞分化与增殖的影响

目的 研究β_2肾上腺素受体阻滞剂福莫特罗对雌激素刺激大鼠成骨细胞分化与增殖的影响.方法 将不同浓度的福莫特罗加入到含雌激素(17β-E_2)培养的第二代大鼠成竹细胞中,分别于培养3、6、9、12 d后,用PNPP法检测成骨细胞的碱性磷酸酶(ALP)活性,采用ELISA方法检测骨钙素浓度,用MTT法检测成骨细胞的增殖率.结果 福莫特罗可降低雌激素刺激成骨细胞碱性磷酸酶活性,并抑制成骨细胞细胞增殖,尤其当其浓度为10~(-5)及10~(-5)mol/L时.并降低成骨细胞骨钙素.结论 福莫特罗能够显著抑制雌激素刺激大鼠成骨细胞的分化和增殖作用.     

地塞米松对人骨髓间充质干细胞增殖、成骨分化及凋亡的影响

目的观察地塞米松对体外培养人骨髓间充质干细胞增殖、成骨分化及凋亡的影响。方法利用Percoll分离液以梯度密度分离法获取人骨髓间充质干细胞（hMSCs）,体外培养时分别以10-9、10-8、10-7和10-6mol/L地塞米松加以干预,MTT法检测各组细胞的增殖率;测定各组的碱性磷酸酶（ALP）活性;流式细胞仪定量分析hMSCs凋亡率。结果低浓度（10-9mol/L）地塞米松对细胞增殖无明显抑制（P〉0.05）,10-8mol/L及以上浓度地塞米松可明显抑制细胞的增殖（P〈0.01）;低浓度（10-9mol/L）地塞米松对ALP的表达无明显影响（P〉0.05）,而高浓度（≥10-8mol/L）地塞米松可明显增加ALP的活性（P〈0.01）,其ALP可达到对照组的2～3.5倍;hMSCs凋亡率随地塞米松浓度的增加而升高（P〈0.01）。结论10-8mol/L及以上浓度的地塞米松可显著hMSCs成骨分化,同时可抑制细胞的增殖并促进细胞凋亡。     

葛根素促进体外培养大鼠颅骨成骨细胞增殖和分化过程中对cAMP/PKA信号通路的影响

目的 研究葛根素对体外培养大鼠颅骨成骨细胞(rats osteoblast,ROBs)增殖和分化及cAMP/PKA信号通路的影响.方法 体外分离培养ROBs,观察不同浓度(1×10-4～1 ×10-8 mol/L)葛根素对ROBs增殖和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性的影响;分析葛根素对骨形态发生蛋白(Bone morphogenetic protein,BMP-2)、Ⅰ型胶原(Col Ⅰ)、成骨特异性转录因子-2(Runx-2)和Oxterix mRNA表达水平的影响;观察1×10-6 mol/L葛根素对BMP-2、Col-Ⅰ、Runx-2、Oxterix、PKA和磷酸化PKA(p-PKA)蛋白表达水平,测定细胞中cAMP的变化.结果 细胞增殖结果显示1×10-7 mol/L ROBs细胞浓度高于对照组,1×10-4 mol/L组ROBs细胞浓度低于对照组(P＜0.01).1×10-5、1×10-6、1×10-7mol/L组ROBs ALP活性均高于对照组(P＜0.05,P＜0.01).1×10-6 mol/L葛根素处理ROBsRunx-2、Oxterix、BMP-2、Col Ⅰ mRNA和蛋白及p-PKA、cAMP表达水平均高于对照组(P＜0.05,P＜0.01).结论 1×10-6 mol/L葛根素为促进ROBs增殖和分化的最适浓度,其可促进体外培养ROBs分化过程中cAMP/PKA信号通路的激活.     

脑肠肽Ghrelin对血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠脑主动脉血管平滑肌细胞胞内钙浓度上升的影响

目的研究脑肠肽Ghrelin对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞（VSMCs）胞内钙离子浓度上升的作用,并初步探讨其机制。方法采用细胞培养的方法获得大鼠胸主动脉VSMCs,经Fluo-4-AM染色后,采用激光共聚焦显微镜技术分别检测加入AngⅡ后,1×10^-7mol·L^-1和1×10^-5mol·L^-1的Ghrelin对胞内钙荧光强度（FI）的影响,以及腺苷酸环化酶抑制剂Sq22536对Ghrelin作用的影响。结果①2×10^-8mol·L^-1的AngⅡ可以使得VSMCs胞内钙FI上升到静息状态的（165±76）％;②随后加入1×10^-7mol·L^-1的Ghrelin可以使FI下降到（117±34）％（P〈0．01vs①）;③加入1×10^-5mol·L^-1的Ghrelin可以使FI下降到（87±22）％（P〈0．01vs①,P〈0．05vs②）;④预先以1×10^-5mol·L^-1的Sq22536孵育,再加入2×10^-8mol·L^-1AngⅡ和1×10^-7mol·L^-1的Ghrelin,胞内FI为原来的（143±24）％（P〈0．01vs②）。结论Ghrelin能够降低AngⅡ引起的大鼠胸主动脉VSMCs胞内钙离子升高作用,其机制可能与激活胞内cAMP／PKA信号通路有关。     

地黄活性成分梓醇对小鼠成骨细胞MC3T3-E1增殖、分化和矿化的影响

目的检测地黄活性成分梓醇对成骨细胞株MC3T3-E1细胞增殖、分化和矿化的影响。方法制备不同浓度地黄活性成分梓醇提取液。以小鼠成骨细胞株MC3T3-E1作为药物筛选的细胞模型;用MTT法测定不同浓度的梓醇溶液的促细胞增殖作用;采用ALP活性和骨钙素定量检测分别观察不同浓度的梓醇溶液的促细胞分化作用;以Vonkos-sa钙化染色法了解不同浓度的梓醇溶液的促细胞钙化作用。结果梓醇在1×10-7～1×10-9mol·L-1浓度范围内培养24及48h促进成骨细胞株MC3T3-E1细胞增殖。梓醇在浓度1×10-5～1×10-6mol·L-148及72h提高成骨细胞株MC3T3-E1细胞内碱性磷酸酶的活性。梓醇在浓度1×10-5～1×10-6mol·L-1培养8及12d时能明显促进成骨细胞MC3T3-E1骨钙素合成和分泌。梓醇在浓度1×10-5～1×10-6mol·L-1培养19d时成骨细胞株MC3T3-E1细胞的矿化结节(mineralized bone nodular structure,MBNS)数目增多。结论梓醇可以提高成骨细胞株MC3T3-E1增殖和分化能力,梓醇可能是地黄治疗骨质疏松作用的活性成分之一。     

米非司酮对胰岛素抵抗人脐静脉内皮细胞功能的影响及其机制

目的：考察米非司酮对单用或合并使用胰岛素和地塞米松诱导的胰岛素抵抗人脐静脉内皮细胞功能的影响,并初步探讨其作用机制。方法：1）将常规培养的人脐静脉内皮细胞随机分为正常对照组,胰岛素（5×10^-6、5×10^-1和5×10^-8mol·L^-1）组,地塞米松（3×10^-5和3×10^-6mol·L^1）组,胰岛素（2．5×10^-8mol·L^-1）＋地塞米松（1．5×10^-6和1．5×10^-7mol·L^1）组。培养24或48h后,测定各组细胞葡萄糖消耗量,以考察人脐静脉内皮细胞胰岛素抵抗的形成情况,并通过胰岛素刺激和模型持续时间研究进一步验证造模效果。2）将人脐静脉内皮细胞随机分为正常对照组,米非司酮（1×10^-5、1×10^-6和1×10^-7mol·L^1）组,胰岛素（5×10^-7mol·L^1）组,胰岛素（5×10^-7mol·L^-1）＋米非司酮（1×10^-5、1×10^-6、1×10～×10^-7mol·L^1）组,地塞米松（3×10^-5mol·L^-1）组,地塞米松（3×10^-5mol·L^-1）＋米非司酮（1×10^-5、1×10^-6和1×10^-7mol·L^1）组,胰岛素（2．5×10^-5mol·L^1）＋地塞米松（1．5×10^-6mol·L^1）组,胰岛素（2．5×10^-8mol·L^-1）＋地塞米松（1．5×10^-6mol·L^-1）＋米非司酮（1×10^-5、1×10^-6和1×10^-7mol·L^1）组。分别加入不同浓度的药物培养24或48h,然后对各组细胞葡萄糖消耗量、一氧化氮含量、一氧化氮合酶活性和抗超氧阴离子自由基活力单位进行测定,以考察细胞功能状态变化。结果：1）胰岛素（5×10^-7mol·L^-1）作用24h可诱导人脐静脉内皮细胞发生胰岛素抵抗并可维持24h,地塞米松（3×10^-5mol·L^-1）作用48h可诱导细胞的胰岛索抵抗并可维持36h,胰岛素（2．5×10^-8mol·L^-1）＋地塞米松（1．5×10^-6molL^-1）共同作用48h可诱导细胞的胰岛素抵抗并可维持24h。2）地塞米松（3×10^-5mol·L^-1）＋米非司酮（1×10^-5和1×10^-6mol·L^-1）组,以及胰岛素（2．5×10^-8mol·L^-1）＋地塞米松（1．5×10^-6mol·L^-1）＋米非司酮（1×10^-5和1×10^-6mol·L^-1）组人脐静脉内皮细胞的葡萄糖摄取量、一氧化氮含量、一氧化氮合酶活性和抗超氧阴离子自由基活力单位分别显著高于地塞米松（3×10^-5mol·L^-1）组和胰岛素（2．5×10^-8mol·L^-1）＋地塞米松（1．5×10^-6mol·L^-1）组;胰岛素（5×10^-5mol·L^-1）＋米非司酮（1×10^-5、1×10^-6和1×10^-7mol·L^-1）组细胞的上述指标则与胰岛素（5××10^-7mol·L^-1）组无显著性差异。结论：胰岛素、地塞米松单独使用及合用均可诱导人脐静脉内皮细胞出现胰岛素抵抗并持续一定时间;米非司酮可改善地塞米松及地塞米松＋胰岛素诱导的胰岛素抵抗内皮细胞的功能紊乱,而对胰岛素诱导的胰岛素抵抗无改善作用。     

淫羊藿甙对体外培养大鼠成骨细胞Cbfa1基因表达的影响

目的观察淫羊藿甙对体外培养大鼠成骨细胞功能及对转录因子核心结合因子a1（Cbfa1）mRNA表达的影响,探讨淫羊藿甙抗骨质疏松的作用机制。方法用酶消化法获得新生（〈24 h）SD大鼠颅盖骨成骨细胞,进行体外原代培养。将不同浓度的淫羊藿甙（1,10,100 ng/ml）分别加入培养液中,观察成骨细胞的形态、增殖和分化功能。用RT-PCR法测定成骨细胞Cbfa1、碱性磷酸酶（ALP）和Ⅰ型胶原（ColⅠ）mRNA表达水平的变化。结果 1、10和100 ng/ml淫羊藿甙均可促进Cbfa1、ALP和ColⅠmRNA表达（P〈0.05）,且以10 ng/ml组作用最显著。结论淫羊藿甙能促进体外培养成骨细胞增殖与分化,通过提高成骨细胞转录因子Cbfa1的基因表达水平诱导骨形成,是其抗骨质疏松作用机制之一。     

8-异戊烯基柑橘素和柑橘素对体外培养大鼠股骨组织代谢活性的影响

目的：比较研究8一异戊烯基柑橘素和柑橘素对体外培养大鼠股骨组织代谢活性的影响。方法：体外分离培养大鼠股骨组织,然后随机分为4组,其中3组分别给予雌二醇（终浓度为1×10^-8mol·L^-1）、8-异戊烯基柑橘素（终浓度为1×10^-8mol·L^-1）和柑橘素（终浓度为1×10^-5mol·L^-1）,另外1组加生理盐水作为对照。分别在培养的第3、6、9、12、15和18d测定大鼠股骨组织中碱性磷酸酶活性和钙含量,并采用RT—PCR检测骨保护素、I-型胶原、Runx-2和骨形态发生蛋白基因的mRNA表达水平。结果：8-异戊烯基柑橘素、柑橘素和雌二醇均可提高股骨组织中碱性磷酸酶的活性,增加钙含量,并上调opg、bmp-2、collagen-1,和runx-2mRNA的表达水平;8-异戊烯基柑橘素活性强于柑橘素。结论：8-异戊烯基柑橘素和柑橘素均能改善体外培养大鼠股骨组织的代谢活性。     

凝胶色谱法测定法罗培南钠颗粒高分子杂质的含量

目的建立使用凝胶色谱法测定法罗培南钠颗粒中法罗培南聚合物的方法.方法采用葡萄糖凝胶G-10(40～120μm)为色谱柱(不锈钢内径为1.3 cm,柱高度为40 cm);以pH7.0的0.1 mol爛L-1磷酸盐缓冲液[0.1 mol爛L-1磷酸氢二钠溶液-0.1 mol爛L-1磷酸二氢钠溶液(61∶39)]流动相A,以水为流动相B,流速:1.0 mL爛min-1,检测波长:254 nm.结果法罗培南钠以法罗培南计浓度在5.1～81.6μg爛mL-1范围内,呈良好的线性关系,相关系数为1.0;供试品溶液以法罗培南计浓度在55.14～551.40 mg爛mL-1范围内,与法罗培南聚合物峰面积呈良好的线性关系,相关系数为0.995 6.结论该方法简便、数据可靠、重现性好.     

光催化降解对氟苯氧乙酸的规律研究

以Pt／TiO2为光催化剂,研究了废水中对氟苯氧乙酸的光催化降解反应。考察了反应时间、溶液初始pH值以及污染物初始浓度对光催化反应的影响。实验表明,反应3h内,氟离子平均检出速率为2.64＆#215;10-5mol／（L· h）;在反应4～7h内,氟离子平均检出速率为5.38×10^-5mol／（ L· h）。反应液的紫外光谱图显示对氟苯氧乙酸浓度不断下降。在溶液初始pH值为3.44～4.95时,光催化生成氟离子的速率最大,在碱性范围内,氟离子的生成速率为零。当C0（对氟苯氧乙酸）＜1.00×10^-3 mol· L-1时,光催化降解反应速率随着对氟苯氧乙酸初始浓度的增大而急剧增大;当C0（对氟苯氧乙酸）＞8.00×10^-3 mol· L -1时,光催化降解速率与污染物初始浓度无关。