中药胃康宁防治胃癌作用的机制探讨

目的 :观察健脾解毒散结中药胃康宁含药血清对胃癌细胞周期调控因子CyclinD1,CyclinD2,Cdk4(Cyclin dependant kinase4,CDK4),Cdk6和p16^INK4amRNA及其蛋白表达的作用。 方法: 分别将高、中、低不同剂量的中药胃康宁制剂ig SD大鼠,制备含药血清,然后分别用不同剂量含药血清培养胃癌细胞;采用免疫组织化学SABC法及RT-PCR法检测各组胃癌细胞中CyclinD1,CyclinD2,Cdk4,Cdk6和p16^INK4amRNA和蛋白的表达。 结果: 免疫组化结果显示,与空白对照组比较,胃康宁高、中、低剂量组CyclinD1灰度值变化,无统计学意义(P>0.05);CyclinD2,Cdk4,Cdk6灰度值均有明显升高,而p16^INK4a灰度值则显著降低(P<0.05,P<0.01);RT-PCR结果显示,胃康宁高、中、低剂量组CyclinD1 OPTDI值变化,无统计学意义(P>0.05);但能明显降低CyclinD2,Cdk4和Cdk6 OPTDI值,同时升高p16^INK4a OPTDI值(P<0.05,P<0.01)。 结论 :中药胃康宁可抑制胃癌细胞促细胞周期相关因子CyclinD2,Cdk4和Cdk6的表达,同时增强胃癌细胞周期抑制因子p16^INK4a的表达,这可能是健脾解毒散结中药胃康宁抑制胃癌细胞生长的作用机制。     

中药胃康宁对胃癌细胞周期因子Cyclin E、CDK2和p27表达的影响

目的:观察中药胃康宁含药血清对胃癌细胞Cyc lin E、CDK2(Cyc lin dependant k inase 2,CDK2)和p27mRNA及其蛋白表达的作用。方法:分别以高、中、低不同剂量的胃康宁制剂对W istar雄性大鼠进行灌胃,制备含药血清,然后分别用不同剂量组含药血清培养胃癌细胞,采用免疫组织化学SABC法检测各组胃癌细胞中Cyc linE、CDK2和p27蛋白的表达,RT-PCR法检测各组胃癌细胞中Cyc lin E、CDK2和p27 mRNA的表达。结果:免疫组化法结果显示,胃康宁高、中、低剂量组Cyc lin E和CDK2灰度值均有明显升高,与空白对照组比较,P<0.05~0.01,而p27灰度值则显著降低(P<0.05~0.01);RT-PCR结果显示,与空白对照组比较,胃康宁低、中、高剂量组均能明显降低Cyc lin E和CDK2 OPTD I值(P<0.05~0.01)。同时,还能升高p27 OPTD I值(P<0.05~0.01)。结论:中药胃康宁可抑制胃癌细胞周期因子Cyc lin E、CDK2及其mRNA的表达,促进细胞周期抑制因子p27及其mRNA的表达,这可能是胃康宁抑制胃癌细胞生长的机制之一。     

人参皂苷Rg1在造血干/祖细胞连续移植中抗细胞衰老的作用机制

目的 探讨人参皂苷Rg₁在造血干/祖细胞（HSC/HPC）连续移植中抗细胞衰老的作用机制。方法 免疫磁性分选法分离纯化的雄性供体小鼠Sca-1⁺HSC/HPC连续移植3代构建HSC/HPC衰老体内模型。经⁶⁰Co γ射线致死剂量辐射的雌性受体小鼠分成4组：对照组、模型组、人参皂苷Rg₁（20 mg/kg）治疗给药组、人参皂苷Rg₁（20 mg/kg）预防给药组,每天给药1次,连续给药30 d。荧光定量PCR法检测各组小鼠Sca-1⁺HSC/HPC p16^INK4a、p19^Arf、p53、p21^Cip1/Waf1基因的表达,Western blotting法检测p16^INK4a、p21^Cip1/Waf1、CDK4、CDK2、CyclinD1、Cyclin E蛋白的表达。结果 与模型组比较,各代移植Sca-1⁺HSC/HPC雌性小鼠中,人参皂苷Rg₁治疗给药组及预防给药组小鼠Sca-1⁺HSC/HPC p16^INK4a、p19^Arf、p53、p21^Cip1/Waf1基因及p16^INK4a、p21^Cip1/Waf1、CyclinD1蛋白表达下调;CDK4、CDK2、CyclinE蛋白表达上调。人参皂苷Rg₁预防给药组小鼠各项检测指标的改善均优于其治疗给药组。结论 人参皂苷Rg₁可能通过调控p16^INK4a-Rb和p19^Arf-p53-p21^Cip1/Waf1信号转导通路,对Sca-1⁺HSC/HPC连续移植衰老模型发挥拮抗作用。     

胃康宁含药血清对胃癌细胞生长与血管内皮生长因子及其受体KDR、Flt-1表达的影响

目的观察中药胃康宁含药血清对胃癌细胞生长和VEGF及其受体表达的作用。方法分别以高、中、低等不同剂量的胃康宁制剂对Wistar雄性大鼠进行灌胃,制备含药血清,然后分别用不同剂量组合药血清培养胃癌细胞,以倒置显微镜及流式细胞仪观测各组胃癌细胞的生长状况,免疫组织化学SABC法检测各组胃癌细胞中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)及其受体Flt-1的表达,RT- PCR法检测各组胃癌细胞中VEGF及其受体KDR,Flt-1 mRNA的表达。结果与对照组比较,用药组胃癌细胞的生长及细胞周期明显改变(P＜0．01),用药组G_0-G_1期细胞增多,S期细胞减少,凋亡率增加,并呈一定的量效关系。VEGF的灰度值由对照组的147．82±0．15升高到低剂量组的174．80±0．81,中剂量组的178．65±0．56,高剂量组的182．44±0．54(P＜0．01)。Flt-1的灰度值由对照组144．31±0．71升高到低剂量组148．20±0．69,中剂量组162．01±0．52,高剂量组168．51±0．81(P＜0．01)。胃康宁含药血清培养的胃癌细胞中V...     

胃康宁对胃癌细胞血管内皮生长因子(VEGF)及其受体表达的影响

目的研究胃康宁对胃癌细胞血管内皮生长因子(VEGF)及其受体Flt、KDR表达的调控作用.方法以不同剂量的中药复方胃康宁制剂给SD大鼠灌胃制备含药血清,然后以含药血清培养胃癌细胞,共同培养两代后,分别用免疫组化法和RT-PCR检测不同剂量组胃癌细胞中VEGF及其受体Flt、KDR的表达情况.结果胃康宁高、中、低剂量组对P53、VEGF和Flt的免疫组化检测与对照组比较,差异有非常显著性意义(P＜0.01);中、低剂量组与高剂量组比较,差异有非常显著性意义(P＜0.01).胃康宁高、中、低剂量组对VEGF及其受体Flt、KDRmRNA表达检测与对照组比较,差异有非常显著性意义(P＜0.01);中、低剂量组与高剂量组比较,差异有非常显著性意义(P＜0.01),提示与用药剂量有一定的关系.结论胃康宁对胃癌细胞血管内皮生长因子及其受体Flt、KDR的表达有抑制作用.     

告达庭下调β-catenin/survivin抑制神经胶质瘤C6细胞迁移实验研究

目的 观察告达庭对大鼠神经胶质瘤C6细胞增殖和迁移能力的影响,并初步探讨其内在的分子机制。方法 MTT法检测告达庭对C6细胞存活力的影响;流式细胞术检测细胞周期的变化;细胞划痕实验及Transwell迁移小室检测告达庭对C6细胞体外迁移能力的抑制作用;免疫印迹实验检测告达庭对C6细胞内β-catenin、Survivin以及细胞周期相关蛋白CyclinD1和Cdk4蛋白表达的影响。结果 告达庭能够剂量依赖性地抑制C6细胞的增殖并阻滞细胞于G₁期,其机制与下调细胞周期素CyclinD1和Cdk4的表达相关;告达庭给药后,C6细胞的迁移能力明显受到抑制,同时β-catenin及其下游因子Survivin的表达呈显著下降趋势。结论 告达庭具有抑制C6细胞的增殖和体外迁移能力的作用,其机制可能与抑制β-catenin蛋白及Survivin的表达相关。     

胃康宁含药血清对胃癌MGC-803细胞增殖的抑制作用及机理研究

目的:观察胃康宁含药血清对胃癌细胞的增殖影响,从细胞凋亡角度探讨作用机理。方法:制备胃康宁含药血清培养胃癌细胞,采用MTT法检测细胞增殖,Hoechst DNA荧光染色法检测细胞凋亡,并计数凋亡率。结果:胃康宁各剂量组在初期均有抑制细胞增殖的作用,而高、中剂量抑制时间更持久。胃康宁高剂量组具有诱导细胞凋亡的作用。结论:胃康宁含药血清可明显抑制细胞增殖,其机理除与诱导细胞凋亡有关,还与细胞周期受阻也有关系。     

薯蓣皂苷元对人骨肉瘤U-2OS细胞周期调控蛋白表达的影响

目的 研究薯蓣皂苷元对人骨肉瘤U-20S细胞周期调控蛋白表达的影响,探讨薯蓣皂苷元的药理机制.方法 采用RT-PCR方法检测U-2OS细胞CyclinD1、CyclinE、CDK2、CDK6和P27 mRNA的表达.结果 用药后细胞周期正调控因子CyclinD1、CyclinE、CDK2、CDK6 mRNA的表达减弱,负调控因子P27 mRNA的表达增强.结论 薯蓣皂苷元可能通过影响细胞周期调控蛋白的表达,诱导U-20S细胞周期阻滞于G1期,抑制其增殖.     

胃宁方对人胃癌细胞侵袭能力的影响

目的:观察胃宁方对人胃癌细胞侵袭能力的影响及可能机制。方法:CCK-8法检测胃宁方对人胃癌细胞与层粘连蛋白(FN)的黏附的影响;重组基底膜细胞运动实验观察胃宁方对人胃癌细胞运动的影响;重组基底膜细胞侵袭实验观察胃宁方对人胃癌细胞侵袭的影响;酶联免疫吸附法测定胃宁方作用后对人胃癌细胞金属蛋白酶-2(MMP-2)和金属蛋白酶-9(MMP-9)含量的影响。结果:胃宁方能显著抑制人胃癌细胞与FN的黏附、抑制细胞运动和侵袭(P<0.05或P<0.01),抑制率与剂量呈依赖关系;胃宁方能显著降低人胃癌细胞MMP-2和MMP-9的含量(P<0.01)并与剂量呈依赖关系。结论:胃宁方能抑制人胃癌细胞侵袭能力,其机制可能与胃宁方能降低人胃癌细胞MMP-2和MMP-9的含量有关。     

Cyclin E / CDK2 及 p27 在胃癌细胞周期 G1/ S 调控中的研究

目的探讨胃癌组织中CyclinE／CDK2和p27蛋白表达及细胞增殖与胃癌发生及发展的关系。方法采用流式细胞术检测CyclinE／CDK2及p27蛋白在胃癌组织及正常胃壁组织细胞中的表达,结合患者的年龄、性别以及肿瘤细胞分化程度、癌组织浸润深度及有无淋巴结转移等临床病理因素进行综合分析。结果胃癌组织及正常胃组织细胞增殖指数分别为（40．62±5．07）％和（24．99±3．11）％,二者比较有显著性差异（P〈0．01）;FCM检测胃癌组织及正常胃组织细胞中CyclinE蛋白表达荧光强度分别为（482．67±19．45）A．U．和（442．46±20．49）A．U．,CDK2蛋白表达荧光强度分别为（469．04±21．62）A．u．和（436．64±11．24）A．U．,p27蛋白表达A．u分别为（449．10±19．98）A．u．和（502．17±18．78）A．U．,二者比较均有显著性差异（P〈0．叭）。结论胃癌具有旺盛的增殖能力。CyclinE、CDK2及p27蛋白的异常表达引起了细胞异常增殖,从而引起早期胃癌的发生。联合检测CyclinE、CDK2及p27蛋白的表达可为临床上胃癌早期诊断提供实验依据,对于提高临床上胃癌早期诊断的准确率具有重要的意义。     

蜂毒素对人胃癌细胞株BGC-823凋亡及其细胞周期的影响

目的：观察蜂毒素体外对人胃癌细胞株BGC-823增殖、凋亡及细胞周期的影响。方法：采用MTT法观察不同浓度的蜂毒素（32,16,8,4,2μg/mL）体外对人胃癌细胞株BGC-823增殖的影响,并用流式细胞仪检测其诱导的细胞凋亡和周期阻滞效应。结果：①与对照组比较,蜂毒素有抑制人胃癌细胞株BGC-823增殖的作用（P〈0.01）,随着药物浓度的增大,其对细胞的抑制率也明显增大,呈现剂量依赖性。②蜂毒素浓度从4μg/mL开始,即可诱导细胞产生凋亡,随着剂量的增加诱导凋亡的效果更加明显。③在细胞周期方面,与阴性对照比较,蜂毒素作用24小时后S期细胞比例上升,而G0/G1期比例明显下降,蜂毒素浓度达到16μg/mL时G0/G1期前出现明显的亚二倍体区。结论：蜂毒素对人胃癌细胞株BGC-823的增殖具有抑制作用,且能够引起该细胞的凋亡及改变其细胞周期。     

淫羊藿苷对血管平滑肌细胞周期及周期相关蛋白表达的影响

目的 研究淫羊藿苷（icariin．ICA）对同型半胱氨酸（homocysteinemia,HCY）诱导增殖的血管平滑肌细胞（vascular smooth musckle cell．VSMC）细胞周期的影响及其机制。方法建立HCY诱导的兔VSMC增殖模型,与不同浓度的ICA共同培养48h后,用流式细胞仪检测VSMC细胞周期变化及细胞周期调控相关蛋白Cyclin D1和CDK4的表达。结果0．2mg／L、0．4mg／L ICA组G0／G1期细胞数明显增多,s期细胞数明显减少,与HCY组相比有统计学意义（P〈0．01）;CyclinDl和CDK4的表达量均随ICA剂量增加而减少。结论 ICA桔抗HCY诱导的兔VSMC增殖．其主要机制可能与Cyclin D1及CDK4的低表达所致的细胞周期抑制有关。     

Cytotoxic Impact of Costunolide Isolated from Costus speciosus on Breast Cancer via Differential Regulation of Cell Cycle—An In‐vitro and In‐silico Approach

Costunolide, a sesquiterpene lactone, is a biologically active molecule found in most of the medicinally valuable plants. The present study aims to evaluate the anticancer property of costunolide isolated from Costus speciosus against breast cancer cell lines (MCF‐7 and MDA‐MB‐231). Costunolide effectively reduced the viability of both MCF‐7 and MDA‐MB‐231 cell lines at an IC₅₀ value of 40 μM. Flow cytometric analysis revealed costunolide mediated cell cycle arrest at G2/M phase in both the cell types. Western blotting results confirmed the alterations in the expression of cell cycle regulators (cyclin D1, D3, CDK‐4, CDK‐6, p18 INK4c, p21 CIP1/Waf‐1 and p27 KIP1) and apoptosis inducers (caspase‐3 and caspase‐9) upon costunolide treatment in comparison with their expressions in normal breast cell line (MCF‐10A). Costunolide mediated downregulation of positive cell cycle regulators and upregulation of negative cell cycle regulators were related to the induction of apoptosis in cancer cells. The above results were validated with in‐silico results that predicted stable interactions between costunolide and cancer targets. Thus costunolide effectively induced breast cancer cell apoptosis targeting cell cycle regulation, and the compound can be used as an effective herbal therapeutic molecule to treat breast cancer with further explorations. Copyright © 2015 John Wiley & Sons, Ltd.     

不同体质血清对A549肺癌细胞周期蛋白表达的影响

目的:探讨不同体质血清对A549肺癌细胞生长的影响及可能的机制。方法:A549肺癌细胞经平和、阴虚、阳虚体质血清培养72h,用MTT、流式细胞、蛋白印迹法(Western blots)的方法分别测定平和、阴虚、阳虚体质血清对A549肺癌细胞增殖、细胞周期和周期蛋白D1、E(CyclinD1,CyclinE)及细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶4(CDK4)的影响。结果:MTT的结果显示阴虚、阳虚体质血清中的A549肺癌细胞吸光度值(A)明显明显高于平和质;流式细胞的结果表明阴虚、阳虚体质血清培养的A549肺癌细胞的S期细胞明显高于平和质(P0.05),而细胞周期G0/G1期的细胞低于平和质,其中阴虚体质血清与平和质比较有统计学意义(P0.05);Western blots的结果表明阴虚、阳虚体质CyclinD1和CDK4基因表达的产物均高于平和质,CyclinE基因表达产物均低于平和质(P0.05,P0.01)。结论:阴虚、阳虚体质血清均可促进A549肺癌细胞增殖,可能的机制是促进细胞周期从G0/G1期向S期推进,提高CyclinD1、CDK4的表达。     

肺岩宁颗粒干预细胞周期G1/S检测点调控信号抗Lewis肺癌细胞增殖的研究

目的 观察肺岩宁颗粒对Lewis肺癌小鼠肿瘤生长、肿瘤细胞周期分布,以及G1/S检测点调控信号RB－E2F1生物轴的影响。 方法 采用C57BL/6小鼠,造模并随机分为6组：模型组、顺铂组、肺岩宁煎剂组（煎剂组）、肺岩宁颗粒低剂量组（低剂量组,0.3 g）、肺岩宁颗粒中剂量组（中剂量组,0.6 g）、肺岩宁颗粒高剂量组（高剂量组,1.2 g）。造模后顺铂组1、3、5天腹腔注射顺铂0.1 mg,其他各组分别灌胃给药14天,观察各组治疗后抑瘤率、瘤重、体重,流式细胞术检测细胞周期时相分布,RT-PCR测定肿瘤组织视网膜母细胞瘤蛋白（RB）－腺病毒E2启动子结合转录因子（E2F1）的mRNA表达,Western blot检测RB、E2F1蛋白表达。 结果 各用药组瘤重低于模型组（P<0.05,P<0.01）,中剂量组体重明显高于模型组和顺铂组（P<0.05,P<0.01）。流式细胞术发现中剂量组的G0/G1比例较模型组、顺铂组和煎剂组显著增多（P<0.01）,癌细胞增殖指数明显降低（P<0.01,P<0.05）。RT-PCR显示中剂量组E2F1 mRNA水平明显低于模型组、顺铂组和煎剂组(P<0.01);中剂量组RB mRNA表达明显高于模型组、顺铂组和煎剂组 (P<0.01)。Western blot分析显示中剂量组较模型组和顺铂组明显抑制E2F1蛋白表达(P<0.05),并较模型组、顺铂组和煎剂组明显增加RB蛋白表达(P<0.05)。 结论 肺岩宁颗粒抑制Lewis肺癌肿瘤生长与干预细胞周期时相分布有关,能使癌细胞较多的阻滞在细胞周期G0/G1期,通过抑制E2F1,增强RB表达,从而干预细胞周期G1/S检测点信号通路中RB－E2F1生物轴实现抗肺癌增殖。     

β-榄香烯注射液联合紫杉醇注射液对乳腺癌MB-468细胞体外协同作用研究

目的探讨β-榄香烯与紫杉醇对乳腺癌细胞株协同作用及其机制。方法体外分别以β-榄香烯注射液（2．5、5．0、10．0、20．O、40．0、80．0、160．0、320．0、640．0μg／mL）、紫杉醇注射液（0．00100、0．00200、0．00400、0．00800、0．01600、0．03125、0．06250、0．12500、0．25000μg,mL）作用24h和48h以及两药联合处理人乳腺癌细胞株MB-468细胞,SRβ法检测增殖变化,流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期分布,通过Western blot检测干预后细胞周期蛋白依赖性激酶1（cyclin-dependent kinase,CDK1）、细胞周期蛋白β1（cyclinB1）、细胞周期调控蛋白P21cip1和P27kip1表达变化。结果单药β．榄香烯或紫杉醇对MB-468细胞株生长均有抑制作用,β-榄香烯24h和48h的IC50和IC20值分别为34．20、52．59和10．15、17．81阻g,mL,紫杉醇24、48h的IC50值分别为2．449和1．698μg／mL。联合组（β-榄香烯和紫杉醇的浓度分别为20、40和0．016、0．008μg／mL）对乳腺癌Mβ-468细胞株的生长抑制率具有协同作用,Q值〉1．15。β-榄香烯组（52．59μg／mL）cyclin-β1蛋白表达有明显的下降,联合组较紫杉醇单药组（1．698μg／mL）cyclinβ1的表达水平也有降低,联合组P27kip1蛋白的表达较β．榄香烯和紫杉醇单药作用时有增加。结论β-榄香烯对紫杉醇具有协同作用,其可能机制是通过下调细胞周期蛋白cyclinβ1表达和上调P27kip1表达有关。     

PTEN的表达对宫颈癌细胞周期的影响及意义

目的通过观察PTEN在宫颈癌中的表达及构建PTEN过表达载体研究PTEN在宫颈癌发生和发展中的意义。方法首先通过免疫组织化学法检测PTEN在宫颈癌组织的表达情况,进一步在宫颈癌细胞系中用Western blot检测PTEN的表达,根据不同细胞系PTEN的表达水平的差异选取表达水平较低的C33-A细胞系进行过表达载体的转染,并筛选出高表达PTEN的单细胞克隆进行后续的细胞周期的检测及周期相关蛋白P21、P27、Cycli—nA及CyclinD1的蛋白水平检测。结果宫颈癌组织PTEN阳性率与正常宫颈上皮组织、CINⅠ～Ⅱ相比明显减少（P均〈0．05）。过表达PTEN的细胞克隆处于GO期的细胞百分数高于阳性对照（P〈0．05）,而处于S期的细胞百分数低于阳性对照（P〈0．05）。对周期相关蛋白P21、P27、CyclinA及CyclinD1的蛋白表达的检测发现P21、P27表达上调,CyclinD1表达下调。结论PTEN在宫颈癌中的表达是减少的甚至是缺失的。通过人工构建PTEN过表达载体得到PTEN过表达克隆后,高表达的PTEN对细胞周期是抑制的,其可能是通过PI3K—Akt途径调节细胞周期相关蛋白P21、P27及CyclinD1发挥了抑制细胞周期GO／S期转换的作用,进而抑制了宫颈癌细胞的增殖。