生物膜结构对白色念珠菌的耐药性的影响

白色念珠菌生物膜是一种可黏附并生长于植入性生物医学材料具有高度耐药特性的膜样生物集落,可造成植入失败和持续的感染源,对患者产生不良的影响。这种耐药的机制十分复杂,迄今尚未完全查明,本文就其结构形态与耐药机制有关的研究近况作一综述。     

铜绿假单胞菌脂多糖对白色念珠菌生物膜的影响

目的研究铜绿假单胞菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对白色念珠菌生物膜形成的抑制作用。方法甲基四氮盐[(2,3-bis-(2-methoxy-4-nitro-5-sulphophenyl)-2H-tetrazolium-5-carboxanilide,XTT]减低法用于检测铜绿假单胞菌LPS对白色念珠菌生物膜形成不同阶段生成量的影响,同时,利用倒置显微镜观察生物膜形态学改变;实时定量聚合酶链式反应(quantitative real time polymerase chain reaction,qRT-PCR)法检测铜绿假单胞菌LPS对白色念珠菌生物膜菌丝特异基因(hypha specific genes,HSGs)表达的影响。结果铜绿假单胞菌LPS可以抑制白色念珠菌生物膜的形成,以及使菌丝特异基因HWP1、ALS1、ALS3、ECE1和SAP4的表达分别下调8.3~12.8、1.1~3.0、2.0~4.6、1.3~3.8和6.2~7.6倍。结论铜绿假单胞菌LPS可以通过抑制白色念珠菌菌丝的形成从而抑制其生物膜的形成。     

厚朴煎剂对白色念珠菌及其生物膜影响的初步研究

目的 观察厚朴煎剂对白色念珠菌(Candida albicans)芽管形成、早期黏附基因及成熟期生物膜的影响。方法 采用芽管形成试验检测厚朴煎剂对白色念珠菌芽管形成的影响;实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测厚朴煎剂作用后,凝集素样序列1(agglutinin-like sequencefamily1,ALS1)、ALS2、ALS3基因的表达情况;荧光显微镜及扫描电镜观察厚朴煎剂对白色念珠菌成熟期生物膜的影响;共聚焦显微镜观察厚朴煎剂对生物膜中菌活性的影响。结果 芽管形成试验结果显示,厚朴煎剂可抑制白色念珠菌的芽管形成且抑制作用具有浓度依赖性(P＜0.05)。厚朴煎剂能使ALS1、ALS2、ALS3基因表达下调且具有浓度依赖性(P＜0.05)。荧光显微镜下空白对照组生物膜以菌丝为主,厚朴煎剂作用24、48及72 h后生物膜结构被破坏。扫描电镜结果也提示厚朴煎剂可以破坏生物膜的结构。共聚焦显微镜下空白对照组白色念珠菌以活菌为主,15.625 mg/L厚朴煎剂作用48 h后死菌数量明显增加。结论 厚朴煎剂可通过下调ALS1、ALS2、ALS3基因抑制白色念珠菌早期黏附,同时可通过破坏成熟期生物膜的结构促进药物进入生物膜内抑制芽管形成和发挥杀菌作用。     

白色念珠菌生物膜的形成及其机制的研究进展

深部真菌感染较难治愈,且研究发现深部真菌多伴随有真菌生物膜的出现,影响深部真菌的治疗效果。了解生物膜形成过程的特点及其机制对治疗深部真菌感染具有重要意义。本文综述了白色念珠菌生物膜的形成及其分子生物学机制和耐药机制的最新进展,为白色念珠菌的研究及临床防治策略提供参考。     

白色念珠菌生物膜生长动力学分析和形态学观察

【目的】了解白色念珠菌生物膜生长动力学特点及白念菌生物膜的动态形成过程。【方法】白色念珠菌菌株Ca40在经过血清处理的灭菌血盖片上形成生物膜,经过结晶紫染色后在连电脑光学显微镜下,动态观察生物膜的形成过程,采用甲基四氮盐（tetrazolium salt,XTT）减低法测定生物膜生长动力学。【结果】白色念珠菌可以在血盖片上形成典型的、成熟的生物膜结构,其形成过程有早期、中期、晚期3个阶段。白念菌生物膜活性随培养时间延长而增加,48h后代谢活性相对稳定。【结论】白色念珠菌生物膜具有三维立体空间结构,其结构具有多样、不均质、开放的特点。     

去甲亚精胺对白色念珠菌生物膜形成的抑制作用

目的：研究去甲亚精胺对白色念珠菌生物膜形成的作用及可能的机制。方法：通过结晶紫染色、甲基四氮盐（XTT）检测、菌落形成单位（CFU）计数、扫描电镜（SEM）成像和qRT-PCR分别检测或观察去甲亚精胺对白色念珠菌生物膜生物量、代谢活性、菌落数、真菌形态和毒力相关基因表达的影响。结果：结晶紫染色结果显示不同浓度去甲亚精胺对白色念珠菌生物膜形成的抑制作用不同;XTT检测结果表明去甲亚精胺能显著抑制白色念珠菌生物膜的代谢活性;CFU计数结果显示去甲亚精胺能显著减少生物膜中白色念珠菌的菌落数;SEM结果显示去甲亚精胺能显著抑制生物膜形成,高浓度的去甲亚精胺能促进酵母相形成;qRT-PCR结果显示去甲亚精胺能显著抑制白色念珠菌毒力相关基因hwp、als3、csh1的表达。结论：去甲亚精胺能显著抑制白色念珠菌生物膜形成的作用并抑制毒力基因的表达,是一种潜在的抑制白色念珠菌生物膜的多胺类药物。     

大气压低温等离子体射流对白色念珠菌生物膜的杀灭效果

  目的  评价大气压低温等离子体射流对白色念珠菌生物膜的杀灭效果。  方法  将对数生长期的白色念珠菌悬液接种于24孔板上,培养白色念珠菌生物膜,通过活菌计数评价生物膜的培养稳定性;将大气压低温等离子体射流作用于白色念珠菌生物膜不同时间后,平板计数法计算残余活菌的量,荧光染色观察死亡真菌的情况,透射显微镜观察真菌形态变化。  结果  白色念珠菌培养72 h后,可在24孔板上形成典型的、成熟的、稳定的生物膜结构;大气压低温等离子体射流对白色念珠菌生物膜具有较好的杀灭效果,作用20 s可杀灭90%真菌,作用时间超过55 s,则无活菌检出;随着作用时间的增加,荧光素标记的死细胞面积也相应增加;透射显微镜结果显示大气压低温等离子体射流对白色念珠菌的细胞结构具有显著的破坏作用。  结论  大气压低温等离子体射流可破坏白色念珠菌结构,对白色念珠菌生物膜具有较强的杀灭作用。     

调查分析白色念珠菌医院感染因素

目的调查白色念珠菌引起医院感染原因,制定预防控制医院内白色念珠菌感染措施。方法对2010年1～12月106例白色念珠菌引起医院感染患者调查分析。结果免疫抑制剂、广谱抗生素广泛应用,各种侵入性操作和临床严重疾病不断上升,是引起医院内白色念珠菌感染的主要原因。结论严格按照药敏试验使用抗生素,防止菌群失调,严格无菌操作,防止减少医院感染。     

黄根醇提取物体外抗白色念珠菌生物膜作用的实验研究

目的观察黄根醇提取物体外对白色念珠菌生物膜及相关基因的影响。方法 M27-A2测定黄根醇提取物对白色念珠菌的最小抑菌浓度(MIC);XTT法评价黄根醇提取物对白色念珠菌生物膜形成的影响;实时荧光定量RT-PCR(q RT-PCR)检测黄根醇提取物作用后,ALS基因的表达情况。结果黄根醇提取物对白色念珠菌的MIC为8μg/m L;随着浓度的增加,黄根醇提取物对白色念珠菌生物膜的抑制作用增强,呈正相关性;16μg/m L黄根醇提取物对不同生长阶段的白色念珠菌生物膜均有抑制作用,抑制率随生物膜成熟逐渐降低;q RT-PCR结果显示,药物作用后ALS2、ALS3基因表达降低(7.87±0.27比5.15±0.34;6.24±0.51比2.13±0.23,P0.05),ALS1基因表达无明显变化(6.11±0.14比5.95±0.31,P0.05)。结论黄根醇提取物对体外白色念珠菌生物膜有较明显的抑制作用,可能通过抑制ALS2、ALS3基因的表达而实现。     

白色念珠菌对Ca试剂的影响

酶试剂的有效存贮时间与环境中的细菌污染有关( 1) ,是因为酶试剂中有大量有机成分可被细菌所利用。然而 ,我室在使用 Ca试剂的过程中也发生了类似情况 ,现报道如下。1　试剂与仪器1 . 1　试剂 :上海申能公司生产的液体单一试剂。1 . 2　仪器 :日立 71 70 A全自动生化分析仪 ,贝克曼 - 70 0半自动生化分析仪。2　实验与结果我室在使用全自动生化分析仪 71 70 A测定 Ca时 ,连续两次在做每日质控前的定标时 ,仪器报警提示超标 ,查看定标时的工作曲线 ,其试剂空白的吸光度为 1 . 32 7,标准液 浓度为 2 . 2 5mmol/L,吸光度为 1 . 8561 ,标准…     

伊曲康唑对白色念珠菌生物膜形成不同时期抑制作用分析

目的观察白色念珠菌生物膜生长动力学特征,分析伊曲康唑对其生物膜形成不同时期的抑制作用。方法用微孔板法建立白色念珠菌生物膜模型,采用CCK-8法检测生物膜不同时期的细胞活性;分别测定伊曲康唑对白色念珠菌临床株游离态和生物膜态的半数抑制浓度（MIC50、SMIC50）,比较生物膜形成不同时期对伊曲康唑的敏感性。结果白色念珠菌生物膜态在4～8h内,细胞代谢活性逐渐升高,18h时代谢水平趋于稳定;不同浓度的伊曲康唑对白色念珠菌有抑制作用,随着伊曲康唑浓度的增加,A值逐渐减小;白色念珠菌生物膜态对不同浓度伊曲康唑产生明显的耐药性;伊曲康唑对生物膜形成有抑制作用,随着生物膜形成,耐药性逐渐增强。结论形成生物膜的白色念珠菌对伊曲康唑的抵抗力比游离菌强。伊曲康唑对早期生物膜抑制率较高,到了中晚期生物膜则产生明显的耐药性。     

白色念珠菌对人肺上皮细胞的黏附作用及其影响因素

目的　在体外研究白色念珠菌临床分离株对人肺上皮细胞的黏附作用及其影响因素。方法　将不同浓度的白色念珠菌和人肺上皮细胞在体外作用不同的时间 ,固定后经革兰染色 ,在倒置显微镜下计数白色念珠菌黏附人肺上皮细胞的黏附数。观察胰酶、白色念珠菌培养上清液、加热等处理因素对白色念珠菌黏附人肺上皮细胞的影响。结果　白色念珠菌的黏附与浓度、时间有关 ,在 5× 10 3～ 5× 10 7CFU/ml范围内 ,黏附数随浓度的增加而增加。该黏附作用 15min后趋于饱和。在 15min内 ,白色念珠菌对肺上皮细胞的黏附随时间的延长而增强。白色念珠菌经胰酶或 10 0℃ 30min处理后黏附数降低 ,培养上清液及上清液经加热或胰酶处理后都能抑制白色念珠菌的黏附作用。结论　白色念珠菌对人肺上皮细胞的黏附作用与浓度和时间有依赖的关系 ,是特异性黏附过程。不同因素处理白色念珠菌和肺上皮细胞 ,其黏附数发生改变 ,说明黏附作用与白色念珠菌表面黏附因子和人肺上皮细胞表面的黏附受体的数量和结构有关。     

氟康唑对近平滑念珠菌生物膜的影响

目的研究近平滑念珠菌不同时期生物膜对氟康唑的药物敏感性及氟康唑对其生物膜生成的影响。方法甲基四氮盐（XTT）减低法检测不同阶段生物膜对氟康唑的敏感性及生物膜的生成量。结果对氟康唑敏感的近平滑念珠菌在生物膜生成12 h后即对氟康唑耐药。在12、24和48 h时间点,治疗浓度为8μg/mL的氟康唑均可显著抑制氟康唑耐药株生物膜的生成;浓度0.5μg/mL的氟康唑可显著抑制氟康唑敏感株生物膜形成,但要抑制耐药株生物膜的形成则需更高浓度的氟康唑（≥1μg/mL）。结论近平滑念珠菌不同阶段生物膜对氟康唑耐药性不同,氟康唑可显著抑制近平滑念珠菌敏感株和耐药株生物膜的生成。     

黄芩苷对白色念珠菌超微结构的影响

目的 探讨黄芩苷对白色念珠菌超微结构的影响,进一步评价黄芩苷的抗真菌作用.方法 将黄芩苷作用12、24、48 h后的白色念珠菌制成超薄切片,置透射电镜下观察.结果 作用12 h透射电镜下可见细胞壁和细胞膜开始出现皱缩;24 h可见细胞壁有缺损,胞质内有空泡状结构及斑片状低电子密度区形成;48 h细胞壁界限模糊,部分溶解,细胞器及细胞核消失,整个细胞坏死,溶解.结论 黄芩苷通过破坏白色念珠菌的细胞壁使其超微结构发生明显的变化.     

念珠菌生物膜的结构、影响因素及其对抗真菌药的敏感性

目的建立念珠菌生物膜模型,探讨其形成的特点、超微结构,唾液及血清对生物膜活性的影响及其对抗真菌药物的敏感性。方法采用96孔微量培养皿,甲基四氮盐(XTT)减低的方法,评价念珠菌生物膜的体外生长动力学,唾液及血清对白念珠菌生物膜活性的影响及生物膜对抗真菌药物敏感性;共焦激光扫描显微镜观察念珠菌生物膜超微结构。结果念珠菌生物膜活性随培养时间延长而增强,血清具有明显增加白念珠菌生物膜活性的作用。念珠菌生物膜对常规抗真菌药物明显耐药。结论生物膜中粘附念珠菌与悬浮菌在形态学上有很大的差异,白念珠菌对常规的系统性抗真菌药物二性霉素B、氟康唑及伊曲康唑明显耐药。     

多酚类化合物对白色念珠菌超微结构的影响

目的 :电镜观察白色念珠菌与多酚类化合物作用后形态和超微结构的改变 ,进一步评价该类化合物的抗真菌作用 ,探讨其抗真菌作用机制。方法 :将临床新分离的白色念珠菌与多酚类化合物共同培养 2 4h后 ,分离菌体 ,按常规方法进行样品处理 ,在扫描电镜与透射电镜下观察其细胞表面形态结构变化与细胞内超微结构变化。结果 :扫描电镜下观察可见酚类化合物作用后的白色念珠菌 ,细胞表面皱缩不平 ,细胞壁膜有严重皱折、变薄、剥脱等现象 ,并且质地变脆 ,有裂纹形成。透射电镜下可见 ,细胞壁不完整 ,局部有缺损 ,质地疏松 ,厚薄不均 ;细胞膜轮廓不清 ,不连续 ,有凸起 ;胞质不均匀 ,细胞内成分聚集固缩成电子密度较高的团块 ,且形成大量电子密度高的光亮区 ,间成有电子光点和空胞状物。结论 :酚类化合物与白色念珠菌作用后 ,可使其超微结构发生明显的改变 ,此改变表明了其抗真菌作用 ,并为其抗真菌作用机制的研究提供了线索。     

基于厚朴酚对白色念珠菌黏附性及其生物膜形成的影响探讨其抗龋作用

目的 观察厚朴酚对白色念珠菌黏附性及生物膜形成的影响,以探讨其能否用于治疗白色念珠菌相关龋病。方法 运用微孔板法复制白色念珠菌体外黏附及生物膜模型,采用XTT〔2,3-bis(2-methoxy-4-nitro-5-sulfophenyl)-2H-tetrazolium-5-carboxanilide〕减低法评价不同浓度厚朴酚对白色念珠菌黏附、生物膜形成的影响。结果 厚朴酚对白色念珠菌的黏附具有抑制作用,其作用具有时间及浓度依赖性,62.5 mg/L和125 mg/L厚朴酚可以显著的抑制白色念珠菌的黏附,与阴性对照组相比,差异均有统计学意义(P < 0.05);实验所选5个浓度的厚朴酚对白色念珠菌的生物膜均有不同程度的抑制作用,其中125 mg/L厚朴酚对生物膜的抑制率达到66.32%。结论 厚朴酚可通过抑制白色念珠菌的黏附而有效降低其致病性,并对已形成的生物膜具有明显的抑制作用,提示其作为抗龋药物有良好的应用前景。     

血浆凝集试验在白色念珠菌与非白色念珠菌鉴别诊断中的应用

目的 建立一种快速、灵敏、准确的白色念珠菌与非白色念珠菌的鉴别试验。方法 采用芽管形成试验和厚膜孢子试验对试验菌株进行鉴定Ⅲ，再对鉴定过的试验菌株分别进行血浆(包括正常人血浆和正常家免血浆)玻片凝集试验与试管凝集试验。结果 91株白色念珠菌中，血浆(正常人血浆和正常家兔血浆)玻片凝集试验的阳性率均为97．8％，血浆(正常人血浆和正常家兔血浆)试管凝集试验均为阴性；67株非白色念珠菌中，血浆(正常人血浆和正常家兔血浆)玻片凝集试验的阳性率均为10．4％，血浆(正常人血浆和正常家兔血浆)试管凝集试验均为阴性。结论 血浆玻片凝集试验可作为一种快速、准确的白色念珠菌与非白色念珠菌的鉴别试验之一，该方法的敏感度高(97．8％)，特异性好(89．6％)，诊断正确率高(94．3％)，诊断指数为187．4％