铜绿假单胞菌假阳性株的鉴定方法比较及应用

目的 探讨提高GB 8538—2016《食品安全国家标准饮用天然矿泉水检验方法》中铜绿假单胞菌的检测准确性。方法 按照GB 8538—2016，检测1份桶装饮用水样品中铜绿假单胞菌，并用16S rRNA基因测序法、API 20E试剂盒、VITEK2鉴定仪、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）对分离到的“阳性菌”ZH-1和ZH-2进行确认。同时比较42℃生长试验、硝酸盐还原产气试验、API 20E试剂盒、VITEK2鉴定仪和MALDI-TOF MS的应用。结果 经多种方法确证，菌株ZH-1为铜绿假单胞菌，菌株ZH-2为恶臭假单胞菌，是GB 8538—2016检出的假阳性菌。在42℃生长试验和硝酸盐还原产气试验中，菌株ZH-2为阴性反应，不同来源的38株铜绿假单胞菌则均为阳性。此外，API 20E试剂盒和VITEK2系统对铜绿假单胞菌鉴定准确率分别为92.1%、97.4%，但API 20E试剂盒必须进行补充试验，耗时、繁琐；MALDI-TOF MS能够将铜绿假单胞菌鉴定到属水平，但种水平一致性准确率仅为43.2%。结论 在国家标准的鉴定方法基础上，增加42℃生长试验...     

江西省矿泉水和包装饮用水中铜绿假单胞菌污染情况分析

目的对江西省矿泉水和包装饮用水中的铜绿假单胞菌污染情况进行调查,分析原因并提出针对性的控制措施。方法采用GB/T 8538—2008中铜绿假单胞菌检测的滤膜法,对江西省产品质量监督检测院2015年5月24日-2016年5月24日49份矿泉水和150份包装饮用水水样进行检测。结果 49份矿泉水中检出铜绿假单胞菌2份,阳性率为4.1%;150份包装饮用水中检出铜绿假单胞菌22份,阳性率为14.7%。经统计,矿泉水阳性样品中共检出104株典型菌株,其中100株蓝绿色菌,4株非蓝绿色产荧光菌,分别占典型菌株的96.2%和3.8%;包装饮用水阳性样品中共检出2 169株典型菌株,其中1 856株蓝绿色菌,313株非蓝绿色产荧光菌,分别占典型菌株的85.6%和14.4%。结论矿泉水和包装饮用水均存在铜绿假单胞菌污染现象,而包装饮用水污染率明显高于矿泉水,且污染水平较高,阳性菌株检出量高达270 cfu/250 ml。有关部门应加大矿泉水,尤其是包装饮用水的检查力度,保障居民成品饮用水安全。     

保健食品中检出铜绿假单胞菌的情况分析

目的了解市场保健食品的卫生状况。方法依据《中国药典》2010年版,对市场随机抽检的51批保健食品中检出的疑似阴性杆菌,用绿脓杆菌生化管、API 20E、VITEK-2 Compact全自动微生物分析鉴定系统进行鉴定。结果确认有5批保健食品被检出铜绿假单胞菌,这5株菌的氧化酶试验和绿脓菌素试验均为阳性反应。API 20E鉴定结果显示,其中4株菌与阳性对照菌的鉴定数码相同。VITEK-2 Compact鉴定结果显示,5株菌的VITEK生物号码与阳性对照菌存在较大的差异。而其在API 20E与VITEK-2 Compact上相同生化试验的反应结果均一致。结论保健食品受铜绿假单胞菌污染,已存在潜在危害,建议加强卫生监督管理,在修订保健食品卫生学国家标准中增加铜绿假单胞菌的检验项目。     

223份桶装天然矿泉水和包装饮用水中铜绿假单胞菌的检测结果分析

目的了解惠州市桶装饮用天然矿泉水和包装饮用水中铜绿假单胞菌污染状况,为桶装饮用水卫生监督管理和相关水源性疾病的预防及控制提供科学依据。方法采用国标《GB/T 8538-2008饮用天然矿泉水检验方法》,对2013-2015年桶装饮用天然矿泉水和包装饮用水进行铜绿假单胞菌检测并对检出菌株进行药敏试验。结果 3年间223份桶装饮用水中有24份样品检出铜绿假单胞菌,总阳性率为10.76%;各类型桶装水均有检出,饮用天然矿泉水、纯净水、山泉水及其他饮用水的阳性率分别为12.86%、9.28%、9.76%和13.33%;24株典型菌株中,17株产绿脓菌素,6株产荧光色素,1株产脓红素;铜绿假单胞菌检出与大肠菌群检验结果无显著相关性;药敏试验结果显示24株阳性菌株对哌拉西林、头孢吡肟等11种抗生素均无耐药性,对氨苄西林、头孢唑啉等7种抗生素耐药,耐药率100.00%。结论惠州市桶装饮用天然矿泉水和包装饮用水中均存在铜绿假单胞菌污染风险隐患,阳性样品中存在3种典型菌株的菌落形态,建议桶装饮用水生产企业采取控制措施,相关监督部门应加强监督管理。     

苏州市包装饮用水中铜绿假单胞菌污染调查

目的了解苏州市包装饮用水中铜绿假单胞菌的污染状况。方法按GB 19298—2014 《食品安全国家标准包装饮用水》要求,采用GB/T 8538—2008 《饮用天然矿泉水检验方法》、GB 8538—2016《食品安全国家标准饮用天然矿泉水检验方法》对送检包装饮用水进行检测。结果 2016—2017年,共检测992批次包装饮用水,铜绿假单胞菌检出率为7.66%,桶装水检出率(11.41%)高于瓶装水(1.11%),2017年检出率(3.56%)低于2016年(11.48%),差异均有统计学意义(χ2值分别为15.247、21.972,P值均0.05)。不同品种的水样检出率差异无统计学意义(P0.05);夏秋季检出率较高(分别为8.36%、9.68%),冬春季较低(分别为未检出、0.71%)。结论苏州市包装饮用水存在铜绿假单胞菌污染现象,应加强监管。     

基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱在铜绿假单胞菌鉴定中的应用

目的 评价基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱仪（MAL-TOF-MS）鉴定铜绿假单胞菌的效果。 方法 使用MALDI-TOF-MS对15株铜绿假单胞菌和8株干扰菌进行质谱采集,应用BioTyper和FlexAnalysis对图谱进行离子分析和比对鉴定,并将比对结果与全自动微生物生化鉴定仪（VITEK）进行比较。 结果 MALDI-TOF-MS对15株铜绿假单胞菌鉴定结果和VITEK完全一致。 结论 MALDI-TOF-MS可用作铜绿假单胞菌的准确快速的鉴定方法。     

临床常见革兰阴性菌的耐药性分析

目的:了解我院临床常见的3种革兰阴性菌近2年来的耐药情况,为临床正确合理使用抗生素提供参考.方法:细菌鉴定和药敏试验均使用VITEK2及配套革兰阴性鉴定和药敏板,启用VITEK2高级专家系统对鉴定及药敏结果进行分析.结果:临床检出率最高的革兰阴性菌分别为大肠埃希菌(277株),肺炎克雷白菌(217株),铜绿假单胞菌(114株);产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的菌株比例:肺炎克雷白菌(40.6%)大于大肠埃希菌(38.6%);铜绿假单胞菌与其他2种菌的耐药性有显著差别.结论:合理使用抗生素,避免耐药菌株增多.完善院感监测,为抗生素合理使用提供平台.     

铜绿假单胞菌代谢产物体外对白假丝酵母菌等的抑菌活性研究

目的观察铜绿假单胞菌代谢产物对假丝酵母菌属的体外抑菌活性。方法用交叉条带实验方法测定铜绿假单胞菌对54株假丝酵母菌属的体外抑制活性。结果铜绿假单胞菌产生的抗菌物质对白假丝酵母菌及光滑假丝酵母菌的抑菌作用最强,抑菌带最宽。产蓝绿色素的第6株铜绿假单胞菌对白假丝酵母菌和热带假丝酵母菌的抑制率均达100%,产黄绿色素的第8株铜绿假单胞菌对白假丝酵母菌、热带假丝酵母菌和克柔假丝酵母菌的抑制率也均达100%,铜绿假单胞菌产色素菌株的抗真菌活性优于不产色素的菌株。结论铜绿假单胞菌产生的抗菌物质对白假丝酵母菌、光滑假丝酵母菌具有较强的抗真菌活性。     

产妇医院感染铜绿假单胞菌产AmpC酶耐药基因分析

目的回顾性分析本院产妇医院感染分离的铜绿假单胞菌产AmpC酶基因型。方法采用VITEK 2 Compact全自动微生物分析仪鉴定细菌;采用头孢西丁纸片扩散法筛选产AmpC酶菌株;采用细菌基因组提取试剂盒提取细菌DNA;采用PCR和DNA测序检测分析AmpC酶基因型别。结果 47株铜绿假单菌经头孢西丁敏感试验选出疑产AmpC酶菌株9株,9株疑产AmpC酶菌株经PCR检测均在405 bp处出现阳性条带,经DNA测序证实均为DHA-1型AmpC酶。结论本院产妇医院感染铜绿假单胞菌检出率较高,AmpC酶基因型以DHA-1型为主要流行株。     

1999-2007年铜绿假单胞菌感染分布及耐药性动态变迁

目的 了解铜绿假单胞菌对多种抗菌药物耐药性的动态变迁及感染病例科室分布,为临床治疗铜绿假单胞菌感染提供参考依据.方法 采用法国生物梅里埃公司的API鉴定系统及VITEK2系统进行细菌鉴定,用K-B纸片扩散法进行药敏试验,用WHONET5.4软件分析铜绿假单胞菌的耐药性.结果 9年来铜绿假单胞菌对12种抗菌药物的耐药率逐年上升,只有美罗培南、亚胺培南、头孢他啶和环丙沙星的耐药率<30%,多药耐药铜绿假单胞菌共有94株,主要分布在重症监护病房、呼吸内科.结论 铜绿假单胞菌对多种抗菌药物耐药,且耐药率逐年增加,在治疗时应根据药敏试验合理谨慎使用抗菌药物,以有效控制及延缓耐药株的产生.     

ICU铜绿假单胞菌耐药性和消毒剂-磺胺耐药基因的检测及分析

目的了解医院ICU铜绿假单胞菌临床分离菌株的耐药特征,检测分析铜绿假单胞菌消毒剂-磺胺耐药基因的携带情况,为指导临床合理应用抗菌药物和合理调整消毒剂的使用提供参考依据。方法选取医院2015年6月-2016年6月ICU病房送检的住院患者包括血、尿、痰、胸腹水及分泌物等各类标本,共获得不重复患者的菌株105株,采用VITEK-2全自动微生物分析仪进行菌株鉴定及药敏试验。结果 105株铜绿假单胞菌对头孢替坦、头孢唑林、磺胺甲噁唑/甲氧苄啶、氨苄西林、氨苄西林/舒巴坦、呋喃妥因耐药率高,均>95.0%;105株铜绿假单胞菌检测qac E△1-sul1基因阳性43株,阳性率40.95%。结论 ICU铜绿假单胞菌的耐药情况已非常严重,应加强对铜绿假单胞菌的耐药性监测,根据药敏结果合理使用抗菌药物,减少耐药株的产生;分离的铜绿假单胞菌qac E△1-sul1基因携带率较高,医院常用消毒剂对铜绿假单胞菌的灭菌效果良好,重症监护室应进一步加强耐消毒剂基因菌株的监控,并根据耐消毒剂情况合理调整消毒剂的使用,尽量避免应用季铵盐类和双胍类消毒剂,严格执行消毒隔离措施,控制医院感染的发生。     

产ESBLs铜绿假单胞菌耐药性分析 FREE

目的了解某院临床分离的铜绿假单胞菌产超广谱β 内酰胺酶(ESBLs)情况及其耐药性。方法对2007年7月1日-2008年6月30日间分离的细菌,采用API半自动微生物鉴定系统进行鉴定和药敏试验;采用改良三相水解试验检测产ESBLs铜绿假单胞菌。结果共收集64株铜绿假单胞菌,其中ESBLs阳性株33株,占51.56%;ESBLs阳性菌株对青霉素及头孢菌素类抗生素大多耐药,而对美罗培南敏感（耐药率18.18%）;ESBLs阳性菌株对多种抗菌药物的耐药率显著高于ESBLs阴性菌株（P＜0.01或P＜0.05）。结论铜绿假单胞菌产ESBLs率较高,这也是其对青霉素及头孢菌素类抗生素耐药的重要机制;及时监测产ESBLs铜绿假单胞菌的发生率及耐药趋势对指导临床用药至关重要。     

院内感染重要细菌——铜绿假单胞菌基因诊断的研究

目的:铜绿假单胞菌的外膜脂蛋白基因(major outer membrane lipoprotein I oprI)具有高度保守性,本文通过利用oprI基因,找到一种快速诊断铜绿假单胞菌的方法.并且为了了解本地区PA的医院感染现状,对临床分离的63株PA的感染分布和药敏结果进行分析.方法:采用实时定量PCR技术检测oprI基因,法国生物梅里埃公司的VITEK 32微生物鉴定系统进行菌种鉴定,根据美国临床实验室标准化研究所CLSI(原NCCLS)2004年版标准进行抗菌药物敏感性判断.结果:63份铜绿假单胞菌进行的oprI基因检测全部阳性,而其他种类细菌此基因检测全部阴性.结论:可以应用荧光定量PCR对铜绿假单胞菌中oprI基因进行定量测定来早期诊断铜绿假单胞菌感染.     

桶装饮用水中铜绿假单胞菌的检测及耐药性分析

目的 了解舟山市桶装饮用水卫生情况。方法 依据国标GB/T 8538—2008,对随机抽检的94份桶装饮用水,其中48份桶装饮用纯净水,46份桶装矿泉水进行铜绿假单胞菌的检测与鉴定。采用K-B纸片扩散法,对鉴定出的铜绿假单胞菌进行药敏试验。结果 确认有3份水样检出铜绿假单胞菌,检出率为3.2%,其中桶装饮用纯净水检出3份,桶装天然矿泉水检出0份;3份阳性样品中共检测出4株铜绿假单胞菌,污染水平分别为27 cfu/250 ml、38 cfu/250 ml、6 cfu/250 ml、24 cfu/250 ml,其中3株产绿脓菌素,1株产荧光色素不产绿脓菌素。药敏试验结果显示:分离鉴定出的4株铜绿假单胞菌对16种抗生素中的新霉素(NEO)、恩诺沙星(ENR)、氨苄西林(AMP)、复方新诺明(SMZ)、青霉素(PNE)、强力霉素(DOX)6种抗生素均有抗性;对头孢曲松(CEFT)、环丙沙星(CIP)、氧氟沙星(OFL)、庆大霉素(GEN)、诺氟沙星(NOR)、头孢哌酮(CEF)等6种抗生素敏感。结论 桶装饮用纯净水中存在铜绿假单胞菌污染,检出的铜绿假单胞菌具有多重耐药性。     

产ESBLs铜绿假单胞菌耐药性分析

目的了解某院临床分离的铜绿假单胞菌产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)情况及其耐药性。方法对2007年7月1日-2008年6月30日间分离的细菌,采用API半自动微生物鉴定系统进行鉴定和药敏试验;采用改良三相水解试验检测产ESBLs铜绿假单胞菌。结果共收集64株铜绿假单胞菌,其中ESBLs阳性株33株,占51.56%;ESBLs阳性菌株对青霉素及头孢菌素类抗生素大多耐药,而对美罗培南敏感(耐药率18.18%);ESBLs阳性菌株对多种抗菌药物的耐药率显著高于ESBLs阴性菌株(P0.01或P0.05)。结论铜绿假单胞菌产ESBLs率较高,这也是其对青霉素及头孢菌素类抗生素耐药的重要机制;及时监测产ESBLs铜绿假单胞菌的发生率及耐药趋势对指导临床用药至关重要。     

ICU铜绿假单胞菌耐药性和消毒剂-磺胺耐药基因的检测及分析北大核心CSCD

目的了解医院ICU铜绿假单胞菌临床分离菌株的耐药特征,检测分析铜绿假单胞菌消毒剂-磺胺耐药基因的携带情况,为指导临床合理应用抗菌药物和合理调整消毒剂的使用提供参考依据。方法选取医院2015年6月-2016年6月ICU病房送检的住院患者包括血、尿、痰、胸腹水及分泌物等各类标本,共获得不重复患者的菌株105株,采用VITEK-2全自动微生物分析仪进行菌株鉴定及药敏试验。结果 105株铜绿假单胞菌对头孢替坦、头孢唑林、磺胺甲噁唑/甲氧苄啶、氨苄西林、氨苄西林/舒巴坦、呋喃妥因耐药率高,均>95.0%;105株铜绿假单胞菌检测qac E△1-sul1基因阳性43株,阳性率40.95%。结论 ICU铜绿假单胞菌的耐药情况已非常严重,应加强对铜绿假单胞菌的耐药性监测,根据药敏结果合理使用抗菌药物,减少耐药株的产生;分离的铜绿假单胞菌qac E△1-sul1基因携带率较高,医院常用消毒剂对铜绿假单胞菌的灭菌效果良好,重症监护室应进一步加强耐消毒剂基因菌株的监控,并根据耐消毒剂情况合理调整消毒剂的使用,尽量避免应用季铵盐类和双胍类消毒剂,严格执行消毒隔离措施,控制医院感染的发生。     

连云港市城镇直饮水铜绿假单胞菌分子分型结果

目的分析江苏省连云港市城镇直饮水铜绿假单胞菌分子分型结果,为直饮水卫生监测和风险预警提供依据。方法于2018年5—7月在连云港市城镇公共场所、学校、家庭和企事业单位无菌采集直饮水,按照GB 8538—2016《饮用天然矿泉水检验标准》检测铜绿假单胞菌,采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)进行分子分型,分析不同场所铜绿假单胞菌检出情况及优势带型。结果 73个采样点共采集直饮水水样138份,检出铜绿假单胞菌40份,检出率为54.79%。其中公共场所、学校、家庭和企事业单位分别检出10份、7份、19份和4份,检出率分别为55.56%、43.75%、79.17%和26.67%,以家庭检出率最高,差异有统计学意义(P0.05)。分离出55株铜绿假单胞菌菌株,分为10个PFGE带型,其中5个为优势带型。结论连云港市城镇公共场所、学校、家庭和企事业单位直饮水均有铜绿假单胞菌污染,且存在优势菌株带型,家庭检出率较高。     

脉冲场凝胶电泳技术在铜绿假单胞菌现场调查中的应用研究

目的建立铜绿假单胞菌脉冲场凝胶电泳分子分型方法,对某医院患者送检标本及桶装矿泉水中分离到的铜绿假单胞菌进行分子分型,开展分子流行病学分析。方法将铜绿假单胞菌标准株和分离株进行复苏生化鉴定,用SpeI内切酶对试验株菌悬液凝胶块原位消化酶切后进行脉冲场凝胶电泳,比较获得的分子分型指纹图谱,运用Bionumerics5．1聚类分析。结果6株试验菌株中,有3株分离自患者,3株分离自桶装矿泉水,以及1株标准菌种,均获得清晰指纹图谱,条带数在20至25个之间,可分为A、B、C、D、E、F共6个基因型,相似度在70．6％～100．0％之间,其中两株患者来源的菌株相似度为100．O％。结论铜绿假单胞菌基因组经SpeI内切酶酶切后可获得理想的条带数便于分型。患者标本和饮用桶装矿泉水分离株没有直接相关性,但提醒仍需加强桶装矿泉水污染铜绿假单胞菌的管理;脉冲场凝胶电泳技术可有效应用于铜绿假单胞菌遗传学特征、传播途径及分布规律的分子流行病学研究。     

耐亚胺培南铜绿假单胞菌耐药特征及其耐药机制的研究

目的探讨耐亚胺培南铜绿假单胞菌耐药特征及其耐药机制。方法收集2016年1月至2017年12月东莞地区2家医院110株耐亚胺培南铜绿假单胞菌,采用VITEK2系统分析临床菌株耐药性,脉冲场凝胶电泳(PFGE)行同源性分析,PCR法检测金属β?内酰胺酶相关基因以及oprD基因,并对阳性株进行测序;对oprD基因无中断突变株,利用qRT?PCR检测其mRNA表达情况。结果 110株耐亚胺培南铜绿单胞菌PFGE分析结果显示高度克隆多样性。PCR法检测出18株金属β?内酰胺酶基因阳性的菌株,主要类型是:IMP?25,VIM?2,SIM?2。PCR法检测出107株阳性菌株,测序结果表明有意突变率高达93.46%(100/107),类型包括点突变,缺失突变,插入突变以及提早终止突变。7株oprD mRNA表达量均降低。结论本实验进一步证实了oprD基因缺失,发生广泛有意突变,mRNA表达减少以及金属β?内酰胺酶基因产生是铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药的主要机制。     

广元市85桶桶装水中铜绿假单胞菌污染溯源分析

目的 了解广元市生产销售的桶装水中铜绿假单胞菌的污染状况及污染来源，为保障饮用水安全提供技术支持。 方法 依据GB 8538-2016《饮用天然矿泉水检验方法》对17个批次共85桶桶装水进行铜绿假单胞菌检测，对检出的铜绿假单胞菌进行脉冲场凝胶电泳（PFGE）和多位点序列分析（MLST）。结果 共有7个批次29份样本检出铜绿假单胞菌，不合格率为41.18%（7/17）。PFGE分析了15株菌共得到A-G 7个谱型，相似度为64.2%~100%；MLST分析了27株菌共得到5个ST型别。PFGE和MLST分型结果显示，品牌1、8同属一个型别，与品牌5、6的亲缘关系较近，品牌2、3、7的菌株比较相似，品牌4的菌株则与其他菌株关系较远。 结论 广元地区生产销售的桶装水铜绿假单胞菌污染问题比较严重，不同生产企业之间存在相似度较高的菌株污染，同一品牌不同批次之间存在相同菌株的污染。