碱性成纤维细胞生长因子对兔皮肤成纤维细胞增殖的作用

目的：评价碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）对兔皮肤或成纤维细胞增殖的影响。方法：在培养的兔皮肤成纤维细胞中添加浓度为10^-1-10^2μg/L的bFGF，应用甲基噻唑基四唑（MTT）法测定细胞增殖情况。结果与结论：10^-1－10^2μg／L的bFGF对兔皮肤成纤维细胞增殖有促进作用，且以50μg／L浓度作用最佳。     

维甲酸对hLECs生长特性的影响

目的探讨维甲酸对传代培养的人晶状体上皮细胞生长特性的影响。方法选取第2～5代hLECs，利用倒置显微镜观察RA对细胞形态的影响；MTT法观察RA对细胞增殖的影响，计算RA对细胞增殖的抑制率；间接免疫荧光法观察RA对整合素β1表达阳性率和波形蛋白形态的影响。结果倒置显微镜下，10^-8～10^-6mol／L组上皮细胞增多，成纤维细胞减少，10^-5mol／L组2种细胞都减少；MTT法显示，10^-7～10^-5mol／L组细胞增殖受抑制，抑制作用呈剂量、时间依赖性（F检验，P〈0．05），抑制率在10．8％～32．0％。10^-6～10^-5mol／L组整合素β1表达明显增高（Х^2检验，P〈0．05），10^-7～10^-5mol/L组波形蛋白在细胞内铺展较均匀。结论RA具有抑制传代细胞增殖的作用，但表现为抑制成纤维细胞和促进上皮细胞二者作用的总和，只是抑制作用远远大于促进作用。     

黄芪对人肾间质成纤维细胞增殖和转化生长因子-β1表达的影响

目的：探讨黄芪对肾间质纤维化改善的作用机制。方法：体外培养人肾间质成纤维细胞（KFB），传至3代后分为3组：对照组（常规培养），血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）培养组（在培养液中分别加入10^-8mol／L、10^-7mol／L和10^-6mol／L的AngⅡ），黄芪注射液干预组（分别于培养液中加入10^-6mol／L的AngⅡ和10mg／L、20mg／L和40mg／L黄芪注射液）。作用48h后，各组用MTT比色法测定细胞增殖情况，用ELISA法测定细胞培养上清液中TGF-β1的水平。结果：AngⅡ可促进KFB增殖，刺激TGF-β1的分泌，且呈剂量依赖性（r分别为0.612和0.723，P〈0.05）；黄芪注射液可抑制AngⅡ的上述作用，且呈剂量依赖性（r分别为-0．561和-0．689，P〈0．05）。结论：黄芪可以通过抑制成纤维细胞增殖和TGF-β1的分泌，延缓肾间质纤维化进展。     

牛磺酸抑制新生大鼠心肌成纤维细胞胶原合成及其机制的初步研究

目的研究牛磺酸对新生大鼠心肌成纤维细胞增殖、胶原合成及TGF—Bl蛋白表达的影响，初步探讨其抗纤维化的作用和机制。方法在培养的心肌成纤维细胞中加不同浓度的牛磺酸72h，用羟脯氨酸法及MTT比色法分别测胶原量和细胞增殖情况，ELISA法测TGF—β1，蛋白含量。结果牛磺酸能明显抑制心肌成纤维细胞的增殖及胶原的合成，并减少TGF—βl蛋白的表达。结论牛磺酸能通过下调TGF—β1蛋白的表达，抑制心肌成纤维细胞增殖和胶原合成，起到抗心肌纤维化的作用。     

醛固酮及其受体拮抗剂对肾小球系膜细胞转化生长因子β1基因表达的影响

目的研究醛固酮（aldosteroen，ALD）及其受体拮抗剂螺内酯（spironolactone，SPI）对大鼠肾小球系膜细胞转化生长因子β1（TGF-β1）基因表达的影响。方法以不同浓度的ALD（10^-11、10^～9、10^-7mol／L）及／或10^-7mol／L SPI刺激系膜细胞24h后，应用半定量RT—PCR方法检测细胞TGF—β1 mRNA的表达；以10^-9mol／L浓度的ALD刺激系膜细胞不同时间（12h、24h、48h）后，应用半定量RT—PCR方法检测细胞TGF—β1 mRNA的表达。结果半定量RT—PCR结果显示，ALD促进培养的大鼠肾小球系膜细胞TGF—β1 mRNA的表达，且具有浓度依赖性和时间依赖性的特点，SPI能够拮抗ALD的作用。结论ALD促进肾小球系膜细胞TGF—β1的基因表达，进而导致肾小球硬化。SPI能够拮抗ALD的作用，从而可能有益于延缓肾小球硬化的进展。     

祛疤汤对成纤维细胞增殖和Ki-67表达的影响

[目的]研究祛疤汤及外源性TGF-β1对人体皮肤成纤维细胞增殖和Ki-67表达的影响,进一步探讨祛疤汤在皮肤创面修复过程中的可能机制。[方法]MTT法观察0、5、10、25、50、100 ng·m L-1的TGF-β1对成纤维细胞的增殖效果,选取最佳浓度;根据最佳浓度将成纤维细胞分为1640培养基组、25ng·m L-1 TGF-β1组、50mg·m L-1祛疤汤组、25ng·m L-1 TGF-β1+50mg·m L-1祛疤汤组,用MTT法检测各组对成纤维细胞增殖的影响。用Western blot法检测各组药物作用下成纤维细胞内增殖相关抗原Ki-67表达的影响。[结果]TGF-β1呈浓度依赖性促进成纤维细胞增殖,在25 ng·m L-1时促成纤维细胞增殖效应达到最高峰(P0.05),祛疤汤可抑制TGF-β1的促成纤维细胞增殖作用(P0.05);TGF-β1促进成纤维细胞内增殖相关抗原Ki-67的表达,祛疤汤可抑制TGF-β1促成纤维细胞内增殖相关抗原Ki-67的表达。[结论]祛疤汤能有效抑制成纤维细胞增殖,可能与祛疤汤抑制TGF-β1促成纤维细胞内Ki-67的表达有关。     

血管紧张素-（1-7）对TGF-β1诱导的大鼠心肌成纤维细胞Smad3、Smad7 mRNA表达的影响

目的：观察血管紧张素-（1—7）对TGF-β1诱导幼年大鼠心肌成纤维细胞增殖以及Smad3、Smad7mRNA表达的影响。方法：分离培养SD仔鼠心脏成纤维细胞,以Ang-（1—7）、TGF-β1、Ang-（1—7）＋TGF-β1组、TGF-βI型受体抑制剂等干预,通过WST-1法检测细胞增殖,RT—PCR测定心脏成纤维细胞Smad3、Smad7mRNA的表达。结果：①与空白对照组比较,TGF-β1组心脏成纤维细胞的OD值增加（P〈0．05）;与TGF-β1组比较,0．001～1．0μmol／L血管紧张素－（1-7）和5μg／TGF-β1共同干预后OD值逐渐降低（P〈0．05）。②与对照组比较,TGF-β1组心脏成纤维细胞的Smad3mRNA表达升高（P〈0．05）,Smad7mRNA表达降低（P〈0．05）。结论：血管紧张素-（1—7）能有效抑制TGF-β1引起的心脏成纤维细胞的增殖,其作用不通过TGF-βI型受体介导。     

橙皮素对转化生长因子-β_1诱导心肌成纤维细胞增殖的影响

目的探讨橙皮素(HES)对转化生长因子-β_1(TGF-β_1)诱导心肌成纤维细胞增殖的影响,并探讨其可能的机制。方法取SD大鼠30只,取其心肌组织进行成纤维细胞的培养。而后采用TGF-β_1(10 ng/ml)刺激成纤维细胞,采用4种不同浓度梯度的HES(25μmol/L、50μmol/L、75μmol/L、100μmol/L)干预成纤维细胞24 h,以台盼蓝染色检测其对细胞活性的影响;荧光酶标仪检测法用于检测细胞内活性氧(ROS)的水平;活细胞计数试剂盒(CCK-8)用以检测成纤维细胞的增殖情况。结果台盼蓝染色结果提示,HES对成纤维细胞的细胞活性无显著影响,各组活性值分别为空白对照组:100%,HES 25μmol/L组:95%,HES 50μmol/L组:94%,HES 75μmol/L组:93%,HES100μmol/L组:93%。酶标仪检测结果表明,与空白对照组相比,TGF-β_1可增加成纤维细胞内ROS的水平(P<0.01),当HES与TGF-β_1同时作用时,ROS水平随着HES浓度的增加逐渐降低,均存在统计学意义(P<0.05);TGF-β_1可刺激成纤维细胞增殖(P<0.01),当HES(100μmol/L)或N-乙酰半胱氨酸(NAC)(1 mmol/L)与TGF-β_1同时作用时,可明显抑制成纤维细胞增殖(P<0.01)。结论 HES可通过抑制TGF-β_1诱导的氧化应激进而抑制心肌成纤维细胞增殖,提示其对于预防心肌纤维化可能具有潜在效果。     

转化生长因子-β1对人眼眶成纤维细胞增殖的影响

目的：观察转化生长因子β1(TGF—β1)对人眼眶成纤维细胞(orbital fibroblasts．OFs)增殖的影响．探讨增殖性玻璃体视网膜病变(proljferative vitreoretinopathy．PVR)的发病机制。方法：OFs体外培养，用不同浓度TGF—β1(0.1、1.0、5．0、10．0、100．0μg／L)对细胞进行处理。计算细胞的数量，绘制细胞生长曲线；椎虫蓝染色计算活细胞比例、MTT比色法测定吸光度(A)值：流式细胞仪(FCM)检测细胞周期分布。结果：0．1、1．0、5、0、10、0μLg／L的TGF-β1作用后OFs生长曲线上移，活细胞数增加，A值上升，处于增殖期(S G2)的细胞比例增多。100.0μg／L的TGF-β1对OFs作用相反。结论：TGF-β1对人眼眶成纤维细胞增殖有双相调节性．其不同作用的发挥依赖TGF—β1的浓度，TGF—β1的促成纤维细胞的增殖作用可能诱发PVR。     

α-促黑素细胞激素对瘢痕疙瘩成纤维细胞分泌转化生长因子-β1的影响

目的：研究α-促黑素细胞激素(α-MSH)对体外培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞分泌转化生长因子-β1(TGF—β1)的影响，为研究瘢痕疙瘩的病因提供新的依据。方法：取人的瘢痕疙瘩组织，利用组织块培养法进行成纤维细胞原代培养，DMEM培养液传代、扩增培养，加入10^-6mmol／L浓度的α-MSH，应用ELISA方法检测其水平，分析α-MSH对人瘢痕疙瘩成纤维细胞分泌TGF-β1的影响。结果：10^-6mmol／L浓度的α-MSH可明显促进瘢痕疙瘩成纤维细胞TGF-β1的分泌。结论：一定剂量的α-MSH对体外培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞TGF-β1的分泌具有促进作用。     

肾上腺髓质素对血管紧张素Ⅱ诱导的血管外膜成纤维细胞增殖及转化的影响

目的观察肾上腺髓质素（ADM）对血管紧张素Ⅱ的促成纤维细胞增殖及转化作用的影响。方法原代培养大鼠主动脉外膜成纤维细胞，随机分为对照组、ADM组、AngⅡ组及AngⅡ加不同浓度ADM（10^-9～10^-4mol／L）组。用四氮唑蓝（MTT）比色法测定细胞增殖活性，流式细胞分析仪检测细胞周期，蛋白免疫印迹法测定细胞内α—SM actin表达情况。结果与对照组相比，AngⅡ组S期和G2/M期细胞增多，MTTA值检测细胞增殖抑制率为-23．8％；ADM对基础水平的细胞周期中各期细胞构成比及细胞增殖抑制率并无明显影响：与AngⅡ组相比，AngⅡ加ADM组S期细胞构成比明显减少，细胞增殖抑制率提高了。经AngⅡ刺激后主动脉外膜成纤维细胞表达α～SM acfin转变为肌成纤维细胞。ADM可抑制AngⅡ上述作用，下调α—SMacdn表达。结论ADM对成纤维细胞的增殖及转化无明显影响，但ADM抑制AngⅡ诱导的血管成纤维细胞增殖及转化。     

IL-5上调体外培养的人嗜酸性粒细胞TGF-β1的表达

目的研究白细胞介素-5（IL-5）对人嗜酸性粒细胞（Eos）中转化生长因子-β1（TGF—β1）表达的调控作用。方法采用改良的密度梯度离心法分离并体外培养人外周血Eos，实验组加入相同浓度的白细胞介素-4（IL-4）、IL-5和干扰素γ（IFNγ）以及不同浓度的IL-5共同培养，ELISA和RT—PCR法检测细胞培养上清液TGF—β1蛋白和mRNA的表达。结果与对照组相比，浓度均为10^-9mol／L的IL-4、IL-5在蛋白水平和转录水平对TGF-β1的表达均有上调作用，而IFNγ则表现为抑制；10^-11，10^-9、10^-7mol／L IL-5均能显著增强体外培养的Eos中TGF—β1蛋白的表达。结论Th2型细胞因子IL-5可以上调人嗜酸性粒细胞中TGF—β1的表达。     

内皮素1及内皮素受体A拮抗剂对人肾间质成纤维细胞的作用

目的 探讨内皮素1（ET－1）受体A拮抗剂（ETaRA）对人肾间质成纤维细胞（hRIF）的作用。方法 在体外培养的hRIF中进行如上试验：（1）MTT比色法检测细胞增殖情况。（2）逆转录多聚酶链反应法（RT－PCR）观察Ⅰ型胶原（ColⅠ）、转化生长因子β（TGF－β）、基质金属蛋白酶1（MMP－1）、金属蛋白酶组织抑制物1,2（TIMP－1,TIMP－2）mRNA表达的变化。结果 （1）ET－1（10^-11-10^-7mol/L,24h）可以促进hRIF增殖,10^-7mol/L增殖最显著（P＜0.05）,呈剂量相关;10^-7mol/L刺激8h,hRIF即明显增殖,24h达高峰（P＜0.01）。（2）ET－1（10^-11-10^-7mol/L,16h）可上调hRIFr ColⅠ、TGF-β、MMP-1、TIMP-1、TIMP-2mRNA表达,10^-7mol/L作用最显著（P＜0.05）,呈剂量相关。10^-7mol/L刺激hRIFs时,ColⅠmRNA在8h表达显著增加（P＜0.05）,24h达高峰;TGF－βmRNA在8h表达显著增加（P＜0.05）且达高峰;TIMP－1及TIMP－2mRNA在16h表达显著增加（P＜0.05）,24h达高峰;MMP－1mRNA在16h表达显著增加（P＜0.05）,且达高峰。（3）上述作用可特异地被ETaRA阻断。结论 ET－1可刺激hRIF增殖,并上调ColⅠ、TGF－β、MMP－1、TIMP－1、TIMP－2mRNA的表达,ETaRA可抑制上述反应。ET－1可能在上参与肾间质纤维化过程。     

罗格列酮对转移生长因子诱导的大鼠肺纤维化的影响及其作用机制研究

目的采用转化生长因子（TGF-β1）诱导肺成纤维细胞,给予罗格列酮（过氧化物体增殖活化受体γ激动剂）干预,明确其对肺纤维的治疗作用及其作用机制。方法以组织贴块法培养肺成纤维细胞。实验分为0.4%血清组、TGF-β1刺激组、罗格列酮＋TGF-β1处理组,采用免疫细胞化学染色法检测TGF-β1和罗格列酮对肺成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原合成的作用;采用Westernblot法检测肺脏成纤维细胞ERK1/2及磷酸化ERK1/2蛋白的表达。结果罗格列酮能够抑制TGF-β1诱导的大鼠肺成纤维细胞的增殖,抑制了Ⅰ型、Ⅲ型胶原的表达。同时磷酸化的ERK1/2蛋白的表达下降,而ERK1/2表达无明显改变,表明罗格列酮抑制了肺成纤维细胞的ERK1/2信号转导途径的活化。结论 TGF-β1能够通过激活ERK1/2途径促进大鼠肺成纤维细胞的增殖和胶原合成,而罗格列酮能够通过阻断TGF-β1介导的ERK1/2通路的激活进而抑制大鼠肺成纤维细胞增殖和胶原合成,对肺间质纤维化存在一定治疗作用。     

参松养心粉剂对转化生成因子诱导的心脏成纤维细胞激活的影响

目的:本实验拟采用转化生长因子(TGF)β1刺激原代大鼠乳鼠心脏成纤维细胞诱导其分化激活,探讨参松养心粉剂在心脏成纤维细胞激活中的作用。方法:体外分离培养大鼠乳鼠心脏成纤维细胞,采用TGFβ1诱导心脏成纤维细胞的激活,同时给予不同浓度的参松养心粉剂处理后,检测各组成纤维细胞增殖、激活程度;采用免疫印迹法探讨其机制。结果:参松养心单独处理成纤维细胞不影响细胞活性;不同浓度的参松养心抑制TGFβ1诱导的心脏成纤维细胞的增殖;50,100μg/ml的参松养心明显抑制细胞的转化激活,抑制促胶原因子的转录水平。免疫印迹结果显示参松养心抑制蛋白激酶B(Akt)、mTOR、GSK3β以及eIF4e的磷酸化。结论:参松养心能够保护TGFβ1诱导的心脏成纤维细胞的增殖、分化以及激活,其主要通过抑制Akt通路发挥抗纤维化的作用。     

地塞米松抑制人肺成纤维细胞增殖和丝裂原活化蛋白激酶信号转导途径

目的探讨地塞米松对人肺成纤维细胞周期和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号转导通路的作用.方法不同浓度的地塞米松作用于培养的人肺成纤维细胞,采用直接计数法测定细胞的增殖,PI(propidium iodide)染色流式细胞仪分析细胞周期和细胞凋亡,用特异的抗磷酸化抗体、Western印迹法分别检测c-Jun N-末端激酶(JNK)、细胞外信号调节激酶(ERK)和p38蛋白的磷酸化,用特异的MAPK抗体分别检测相应的JNK、ERK和p38蛋白.结果1×10-7mol/L和1×10-6mol/L地塞米松抑制肺成纤维细胞增殖,4 d时细胞增殖分别减少了34%和72%,呈剂量依赖关系;地塞米松阻断肺成纤维细胞的细胞周期,G0/G1期细胞比率从(81.9±3.0)%增加到(90.1±1.4)%(P＜0.05),但地塞米松不能诱导肺成纤维细胞的凋亡;地塞米松抑制ERK的磷酸化,但不影响肺成纤维细胞中JNK和p38的激活.结论地塞米松能够抑制肺成纤维细胞的增殖,这种作用部分是通过抑制MAPK信号转导通路的ERK途径实现的,对JNK和p38途径影响较少;地塞米松不能直接诱导肺成纤维细胞的凋亡.     

普伐他汀对血管紧张素Ⅱ诱导大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

目的：观察普伐他汀对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导大鼠血管平滑肌细胞（VSMCs）增殖的影响,以探讨他汀类药可能的非调脂抗动脉粥样硬化作用。方法：组织贴块法培养的大鼠VSMCs随机分为对照（正常VSMCs）组、AngⅡ（10^-6moL／L）模型组、普伐他汀高剂量（10^-5mol／L＋AngⅡ10^-6mol／L）、中剂量（10^-6mol／L＋AxeⅡ10^-6mol／L）、低剂量（10^-7mol／L＋AngⅡ10-6mol／L）组、溶剂（体积分数0．1％的DMSO＋AngⅡ10^-6moL／L）组,分别测定活细胞数量和细胞周期中各期细胞构成比。观察普伐他汀对VSMCs增殖和迁移的影响。结果：AngⅡ（10^-6mol／L）作用24h能使活细胞数量明显增加,并使VSMCs的G0／G1期细胞减少。细胞增殖指数增大。与AngⅡ模型组比,普伐他汀组活细胞数减少,G0／G1期的细胞构成比增加,细胞增殖指数减少。结论：AngⅡ对VSMCs有促增殖作用,能被普伐他汀所拮抗。     

转化生长因子β1对同种反应性T细胞增殖能力及CD25表达的影响

目的：研究转化生长因子β1（TGF-β1）对同种反应性T细胞增殖能力及CD25表达水平的影响。方法：以丝裂霉素处理的Balb／C（H-2^d）小鼠脾细胞为刺激细胞，羧基荧光素乙酰乙酸（CFDA-SE）标记的C57BL／6（H-2^b）小鼠T细胞为反应细胞进行混合淋巴细胞培养（MLC）。分别设立对照组（TGF—β10ne／ml）、低浓度组（TGF—β1ng／ml）、中浓度组（TGF—β15ng／ml）和高浓度组（TGF-β1 20ng／ml）。MLC结束后利用Alamar Blue检测T细胞增殖活性，流式细胞仪检测CD3、CD25表达水平。同时设立白细胞介素．2（IL-2）组（TGF—β15ng／ml＋IL-2100U／ml），以观测其对TGF-β1生物学效应的影响。结果：TGF-β1可明显降低同种抗原活化T细胞的增殖反应强度，而且随着TGF-β1剂量加大，免疫抑制能力增强。TGF-β1在抑制T细胞增殖的同时，也可使CD25^＋T细胞比例上调，但并无明显的剂量依赖性。加入外源性IL-2后，T细胞增殖活性增强，同时CD25^＋T细胞比例降低。结论：TGF-β1可明显抑制同种抗原活化T细胞的增殖，并使CD25^＋T细胞比例增加，而外源性IL-2则可逆转TGF-β1的免疫抑制功能，下调CD25^＋T细胞比例，说明外源性IL-2可以影响TGF-β1的生物学效应。     

丹参抑制瘢痕形成的机制研究

目的 探讨丹参抑制瘢痕形成的作用机制。方法 将不同浓度及不同作用时间的丹参加入体外培养的人成纤维细胞,测细胞抑制率、成纤维细胞自分泌转化生长因子－β1（TGF－β1）及胶原。结果 丹参可抑制成纤维细胞增殖,随浓度增大及作用时间的延长,抑制率增加;而且,丹参可抑制成纤维细胞自分泌TGF－β1及减少胶原的合成（P＜0．05）,且二者成正相关关系。结论 丹参抑制成纤维细胞的增殖及TGF－β1的自分泌,减少胶原的合成。     

碱性成纤维细胞生长因子在P物质诱导肉芽组织成纤维细胞增殖中的作用

目的探讨感觉神经肽P物质(substance P, SP)对碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor, bFGF)表达的调控作用及其在SP促离体培养的肉芽组织成纤维细胞增殖中的作用.方法采用MTT法测定SP对原代培养的肉芽组织成纤维细胞的促增殖作用;采用RT-PCR和Western blotting方法检测SP对成纤维细胞bFGF基因和蛋白表达的调控作用,观察时间及剂量-效应关系.结果 10-9～10-5mol/L的SP在体外对原代培养的肉芽组织成纤维细胞均具有明显的促增殖作用(P<0.01),且具有明显的剂量依赖性(r=0.594,P<0.01),bFGF抗体只能部分抑制这一作用(与对照组比较,P<0.01; 与10-7mol/L SP组比较, P<0.05).10-7mol/L SP可诱导成纤维细胞bFGF mRNA的表达,在作用后3,6 h与对照组相比,差异有非常显著性意义(P<0.01);12 h后可检测到bFGF蛋白明显表达增强(P<0.01),24 h达高峰,48 h后逐渐有所回落.SP在10-9～10-5mol/L范围内可显著促进成纤维细胞bFGF mRNA表达,在10-8～10-5mol/L范围可诱导bFGF蛋白的表达,均在10-7 mol/L剂量点达到峰值(P<0.01).结论 SP对肉芽组织成纤维细胞具有明显的促增殖作用,这种作用与其诱导内源性 bFGF表达有关.