PI3K/Akt抑制剂LY294002对胃癌细胞化疗增敏作用的探讨

目的 探讨PI3K/Akt特异性抑制剂LY294002与化疗药物5-Fu及奥沙利铂联合使用对3种胃癌细胞系(MGC803、BGC823和SGC7901)化疗效果的影响.方法 将PI3K/Akt特异性抑制剂LY294002联合化疗药物5-Fu及奥沙利铂作用于3种胃癌细胞系,MTT法检测单独使用5-Fu、奥沙利铂及联合LY294002对体外培养的3种胃癌细胞系的增殖抑制作用,流式细胞术检测细胞凋亡.结果 联合LY294002作用后,5-Fu、奥沙利铂对3种胃癌细胞系的增殖抑制作用明显增强(P<0.05),且凋亡率显著提高(P<0.05).结论结果 LY294002能有效提高化疗药物5-Fu、奥沙利铂体外对胃癌细胞的增殖抑制作用,抑制PI3K/Akt信号转导通路可显著提高胃癌的化疗疗效.     

survivin基因shRNA真核表达载体的构建及其对人胃癌细胞株中survivin表达的影响

背景:胃癌是我国最常见的恶性肿瘤之一,survivin是凋亡抑制蛋白家族的新成员,在胃癌组织中高表达。目的:构建survivin基因短发夹RNA(shRNA)真核表达载体并观察其对人胃癌细胞株BGC823和SGC7901中survivin表达的影响。方法:根据GenBank中survivin基因序列设计并合成能转录shRNA的双链DNA序列,插入含有绿色荧光蛋白(GFP)基因和U6启动子的真核表达载体pRNAT-U6.3中,构建重组载体pRNA-shSUR。重组载体经鉴定后转染胃癌细胞株BGC823和SGC7901,以转染pRNA-shControl作为阴性对照。荧光显微镜下观察转染情况,蛋白质印迹法检测survivin蛋白表达,Annexin V-FITC/PI双染法检测胃癌细胞凋亡情况。结果:成功构建了针对survivin基因的shRNA表达载体。转染胃癌BGC823和SGC7901细胞48 h后,与阴性对照组相比,pRNA-shSUR组GFP表达增强,survivin蛋白表达受到明显抑制(P<0.05),胃癌细胞早期凋亡率明显增加。结论:成功构建靶向survivin基因的特异性shRNA真核表达载体,转染胃癌细胞后可抑制survivin蛋白表达并促进细胞凋亡,为进一步研究survivin基因与胃癌生物学行为以及化疗耐药等的相关性奠定了基础。     

ANGPTL2 expression in gastric cancer tissues and cells and its biological behavior

AIM To explore expression of angiopoietin-like protein 2(ANGpT L2) and its effect on biological behavior such as proliferation and invasiveness in gastric cancer. METHODS Western blotting was used to detect expression of ANGp TL2 in 60 human normal gastric tissues, 60 human gastric cancer tissues and gastric cell lines including GES-1, N87, SGC7901, BGC823 and pA MC82. 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide(MTT) and Transwell assay were used to detect the proliferation and invasive ability of gastric cancer cells. RESULTS Compared to normal tissues, ANGp TL2 protein levels were significantly upregulated in gastric tissues, and this level was closely correlated with gastric tumor grade, clinical stage and lymph node metastasis. Compared to GES-1 cells, ANGpT L2 mR NA and protein levels were significantly increased in gastric cancer cells including N87, SGC7901, BGC823 and p AMC82. The expression of ANGpT L2 in highly malignant gastric cancer cell lines BGC823 and pA MC82 was significantly higher than in low malignancy gastric cancer cell lines N87 and SGC7901. MTT and Transwell experiments indicated that the proliferation rate and invasive ability of stable overexpressed gastric cancer cells was faster than in cells transfected with Lv-NC and blank controlcells, and the invasive ability of stable overexpressed gastric cancer cells was higher than that of cells transfected with Lv-NC and blank control cells.CONCLUSION ANGp TL2 contributed to proliferation and invasion of gastric cancer cells. In clinical treatment, ANGpT L2 may become a new target for treatment of gastric cancer.     

胃癌细胞对细小病毒H-1敏感性差异的实验研究

目的 探讨不同胃癌细胞株对细小病毒细胞毒作用的敏感性差异及可能的机制。方法共选用HGC27(未分化)、BGC823(未分化)、MKN45(低分化)、AGS(低分化)、SGC7901(中分化)和MKN28(高分化)等6株不同分化状态的胃癌细胞株，用流式细胞仪分析其各自的细胞周期，H-1病毒感染后采用MTT方法检测不同胃癌细胞株对其细胞毒作用的敏感性差异，用RT-PCR来检测H-1病毒中的非结构蛋白基因(NS-1)在6株不同胃癌细胞中的表达。结果 HGC27、BGC823、MKN45、AGS、SGC7901和MKN28等不同分化状态细胞株中，S期细胞的比率分别为24．72％，30．15％，27．10％，29．03％，31．82％和33．73％。其中HGC27细胞对H-1病毒的细胞毒作用敏感；SGC7901细胞其次；MKN45、AGS细胞对H-1病毒的细胞毒作用中等敏感；MKN28细胞对H-1病毒的细胞毒作用不敏感；而BGC823则对H-1病毒的细胞毒作用抵抗。病毒NS-1的mRNA在HGC27、BGC823、MKN45和SGC7901等细胞中的表达水平较高，而在AGS和MKN28中的表达水平却较低。结论 H-1病毒的细胞毒作用在不同的胃癌细胞株中的差异显著。总体上，与高分化细胞株MKN28细胞相比，分化差的细胞对细小病毒H-1的细胞毒作用敏感性增加。其机制至少部分与分化差细胞中病毒NS-1蛋白的产生和积聚能力增高相关。未分化的BGC823细胞对H-1病毒的细胞毒作用抵抗，进一步证实并非所有的肿瘤细胞都对细小病毒的溶胞性作用敏感。     

蛋白激酶B、Caspase-9通路活化对胃癌细胞生长及化疗敏感性的影响

目的 探讨蛋白激酶B（PKB）、Caspase-9信号通路活化对胃癌细胞生长的影响及其与胃癌细胞对足叶乙甙化疗敏感性的关系.方法 分别用足叶乙甙、足叶乙甙和PKB通路特异性抑制剂Wortmannin在不同时间段处理胃癌肿瘤细胞SGC7901后,采用四甲基偶氮唑蓝法检测细胞对药物的敏感性,流式细胞仪检测肿瘤细胞的凋亡情况,非放射性免疫沉淀法检测PKB活性,Western-blot法检测Caspase-9磷酸化程度和Caspase-3蛋白的表达.结果 足叶乙甙对SGC7901有明显的增殖抑制作用,能明显诱导肿瘤细胞凋亡,但在12 h时,其增殖抑制作用和凋亡诱导作用较6 h时均明显降低,细胞对足叶乙甙敏感性降低,24 h时有所上升.足叶乙甙作用SGC7901后PKB活性逐渐增强,Caspase-9活性和Caspase-3表达12 h时明显降低.加用Wortmannin预处理后,PKB活性明显降低,Caspase-9活性和Caspase3表达呈上升趋势,12 h时上升最明显;足叶乙甙对SGC7901的增殖抑制作用和凋亡诱导作用持续增强,肿瘤细胞对足叶乙甙持续较高敏感性.结论 蛋白激酶B、Caspase-9信号通路活化可促进胃癌细胞生存,降低其化疗敏感性,特异性的PKB通路抑制剂可增强胃癌细胞的化疗效果.     

阿霉素诱导PI3'K/Akt/FKHRL1通路激活与胃癌细胞化疗耐药性的关系

目的 探讨阿霉素诱导胃癌细胞磷脂酰肌醇3’-激酶（PI3’K）／Akt／FKHRL1通路的激活对胃癌细胞SGC-7901化疗效果的影响及二者的关系。方法 阿霉素及PI3’K／Akt抑制剂Wortmannin分别作用于胃癌细胞SGC-7901，MTT比色法检测胃癌细胞的生存率，Western印迹法检测FKHRL1磷酸化表达水平。结果 阿霉素抑制胃癌细胞SGC-7901的生长，呈时间依赖性诱导FKHRL1磷酸化。Wortmannin可明显增强阿霉索的细胞生长抑制作用，同时下调阿霉素诱导的磷酸化FKHRL1表达。结论 阿霉素可能通过激活SGC-7901细胞的PI3’K／Akt通路诱导FKHRL1磷酸化，从而影响胃癌细胞的化疗耐药性。Wortmannin可以阻断PI3’K／Akt／FKHRL1通路而提高胃癌的化疗敏感性。     

Investigation of the sensitivities of distinct gastric cancer cells to parvovirus H‐1 induced cytotoxicity

OBJECTIVE: To investigate the sensitivities of distinct gastric cancer cells to parvovirus H‐1 induced cytotoxicity and the possible mechanism(s). METHODS: There were six distinct differentiated gastric cancer cell lines: HGC27 (undifferentiated), BGC823 (undifferentiated), MKN45 (poorly differentiated), AGS (poorly differentiated), SGC7901 (moderately differentiated) and MKN28 (well differentiated). The cell cycle distributions were measured by flow cytometry and the differential sensitivities of the six distinct gastric cancer cells after H‐1 virus infection were detected by MTT assay. RT‐PCR was used to detect viral NS1 gene expression in all six gastric cancer cell lines. RESULTS: The S phase ratios of HGC27, BGC823, MKN45, AGS, SGC7901 and MKN28 were 24.72%, 30.15%, 27.10%, 29.03%, 31.82% and 33.73%, respectively. HGC27 cells were sensitive to H‐1 virus induced cytotoxicity, followed by SGC7901 cells. MKN45 and AGS cells were moderately sensitive and MKN28 cells were insensitive. However, BGC823 cells were resistant to H‐1 virus induced cytotoxicity. The expressions of viral NS1 were higher in HGC27, BGC823, MKN45 and SGC7901 cells, and lower in AGS and MKN28 cells. CONCLUSIONS: The sensitivities of the distinct gastric cancer cells to H‐1 virus induced cytotoxicity were markedly different. In general, the poorly differentiated cells showed an enhanced sensitivity to H‐1 virus attack compared with well‐differentiated ones. The enhanced sensitivity of poorly versus well‐differentiated gastric cancer cells to H‐1 virus is related in part to the enhanced capacity of the former for NS1 protein production and accumulation. The undifferentiated BGC823 cells were resistant to H‐1 virus triggered cytotoxicity. It may further verify that not all tumor cells are sensitive to H‐1 virus lytic effects.     

Akt和核因子κB信号通路在胃癌细胞化学治疗耐药中的作用

目的 探讨Akt、核因子(NF)-κB信号通路在胃癌细胞化学治疗耐药中的作用,以及Akt、NF-κB信号通路的相互作用关系.方法 采用化学治疗药物阿霉素、足叶乙甙及两药联合应用Akt抑制剂(Wortmannin)或NF-κB抑制剂(MG-132)分别作用于胃癌细胞(SGC-7901).用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)检测SGC-7901细胞增长率;TUNEL法和膜联蛋白V/碘化丙啶(PI)双标法检测肿瘤细胞凋亡;免疫细胞化学法检测NF-κB/P65蛋白表达;电泳迁移率实验(EMSA)法检测NF-κB-DNA结合活性的变化;Western印迹法检测磷酸化Akt或磷酸化NF-κB抑制因子(IκB)α蛋白的表达.结果 ①阿霉素和足叶乙甙均能明显抑制SGC-7901细胞的生长,并呈时间、剂量依赖性;分别联合应用Wortmannin或MG-132后能进一步抑制其生长.②化学治疗药物剂量依赖性地诱导SGC-7901细胞凋亡和NF-κB或Akt活化,联合应用MG-132或Wortmannin均能增强化学治疗药物的诱导凋亡作用和抑制NF-κB或Akt活化作用.③Wortmannin可明显抑制NF-κB的活化,而MG-132对Akt的活化无明显影响.结论 化学治疗药物诱导SGC-7901细胞凋亡的同时诱导Akt、NF-κB活化,抑制Akt、NF-κB的活化可增加化学治疗药物的疗效.     

zeb1基因与肿瘤细胞迁移能力的关系

目的:探讨肿瘤细胞zeb1基因的表达量与肿瘤细胞的迁移能力之间的关系.方法:实时定量PCR方法检测正常胃黏膜上皮细胞GES及四种肿瘤细胞BGC823、SGC7901、A549和HeLa细胞中zeb1基因的表达量:Transwell小室检测五种细胞的迁移能力.结果:在五种细胞中,zeb1在HeLa细胞中表达量最高,BGC823及SGC7901次之,在A549及GES中表达量最低;发生迁移的细胞数目在HeLa细胞中最多,BGC823及SGC7901其次,在A549及GES细胞中最少;线性相关分析表明,zeb1基因的表达量与细胞迁移能力呈正相关(r=0.961,P<0.01).结论:zeb1基因可能促进肿瘤细胞的迁移能力.     

H3K27me3在胃癌中的表达及其临床意义

目的:研究H3K27me3在胃癌细胞和组织中的表达,并分析与临床病理因素的关系,探讨H3K27me3在胃癌发生发展中的作用和意义.方法:应用Western blot方法检测胃癌细胞系SGC7901、BGC823、AGS和正常胃黏膜上皮细胞GES-1中H3K27me3的表达;免疫组织化学方法检测61例胃癌组织及20例正常胃黏膜组织中H3K27me3的表达.结果:与正常胃黏膜细胞GES-1相比,H3K27me3在胃癌细胞SGC7901、BGC823、AGS中高表达;H3K27me3在胃癌组织中阳性表达率为80.3%,并与肿瘤大小、浸润深度、淋巴结转移、血管侵犯、临床分期、TNM分期有关(P=0.049,0.030,0.034,0.025,0.003,0.031),而与患者的性别、年龄、病变部位、分化程度、神经侵犯之间无相关性.结论:H3K27me3在胃癌中高表达,并与肿瘤的侵袭转移有关,可能是胃癌患者重要的预后因子.     

Periostin过表达诱导人胃癌细胞化疗耐药性的机制研究

背景：前期研究发现periostin过表达可增强人胃癌细胞株SGC-7901对顺铂和5-氟尿嘧啶（5-Fu）诱导的细胞凋亡的抵抗能力。目的：探讨periostin过表达诱导人胃癌细胞化疗耐药性的可能机制。方法：Periostin稳转组和空载体稳转组SGC-7901细胞分别以5μmol／L顺铂或10μmol／L5-Fu处理24h或不予化疗药物处理,其中periostin稳转组在化疗药物处理前可接受或不接受Akt特异性抑制剂MK-2206（1μmol／L）预处理30min。以蛋白质印迹法检测各组细胞的总Akt、磷酸化Akt（p-Akt）、p53蛋白表达,流式细胞术检测细胞凋亡。结果：periostin稳转组SGC．7901细胞Akt磷酸化水平明显高于空载体稳转组,两组间总Akt无明显差异。在经顺铂或5-Fu处理的各组SGC．7901细胞中,periostin稳转组p53蛋白表达和细胞凋亡率明显低于空载体稳转组,而MK-2206预处理可在一定程度上逆转periostin对p53表达的抑制作用及其诱导的凋亡保护效应。结论：通过激活Akt通路抑制p53表达可能是periostin过表达诱导人胃癌细胞化疗耐药性的机制之一,有望作为胃癌治疗的潜在靶点。     

Comparative study of the chitooligosaccharides effect on the proliferation inhibition and radiosensitization of three types of human gastric cancer cell line

Objective:To observe the chitooligosaccharides(COS) effect on the proliferation inhibition and radiosensitivity of three types of human gastric cancer cell line.Mothods:CCK-8 assay was employed to obtain the inhibition ratio of COS on BGC823 cells,MKN45 cells and SGC7901 cells at 48 h after treatment and the proliferation-inhibition curve was drawn with the inhibition ratio of COS on three types of cells.The clonogenic assay was used to detect the cell viability of 0,1,2,4,6 and 8 Gy(6 dose grades) in RAY group and RAY+COS group after X-ray,and the cell survival curve was used to analyze the sensitization enhancement ratio of COS.Flow cytometry was employed to detect cell cycle and apoptosis rate in control group,RAY group and RAY+COS group after 48 h treatment.Results:COS inhibited the proliferation of three types of cells.The inhibition rate was positively correlated with the concentration of COS,and the susceptibility of MKN45 cells,SGC7901 cells and BGC823 cells to COS decreased in turn.The cell viability decreased gradually with the increasing radiation dose in RAY group and RAY+COS group(P0.01).The cell viabilities of RAY+COS group were lower than those of RAY group at all the dose grades under X-ray exposure(P0.01),and the sensitization enhancement ratios of COS on BGC823 cells,MKN45 cells and SGC7901 cells were 1.06,1.28 and 1.15 respectively.In controlled trials,apoptosis rate and percentage in the G_2/M phase of three types of cells in RAY+COS group were higher than those in control group and RAY group,and percentage in the S phase and the G_0/G_1 phase in RAY+COS group were lower than those in the other two groups(P0.01).Conclusions:COS can inhibit the proliferation of three types of human gastric cancer cells and enhance the radiosensitivity by inducing apoptosis and G_2/M phase arrest.     

hPOT1 RNA干扰对人胃癌BGC823细胞突变型p53表达的影响

目的通过RNA干扰技术抑制人胃癌细胞BGC823中人端粒保护蛋白（human protection of telomeresl，hPOTl）的表达，观察hPOTl RNA干扰对胃癌BGC823细胞突变型p53基因转录水平的影响。方法从hPOTl编码区外显子8的区域选取一段19个碱基的序列gtactagaagcctatctca为RNA干扰靶向序列，构建hPOTl的RNA干扰真核表达载体，转人体外培养的低分化人胃癌细胞BGC823，提取细胞总RNA，半定量RT-PCR检测hPOTl和突变型p53基因mRNA表达水平的改变，验证hPOTlRNA干扰载体的基因沉默效率，了解抑制hPOTl表达后突变型p53基因mRNA水平的改变。结果经DNA测序鉴定，hPOTlRNA干扰载体包含干扰序列的插入片段，插入位置正确。经半定量RT-PCR鉴定，RNA干扰组细胞的hPOTl mRNA表达水平明显下调，基因沉默效率在70％左右；突变型p53表达下调。结论通过RNA干扰技术抑制人胃癌细胞BGC823中hPOTl表达后，突变型p53表达下调，提示hPOTl与突变型p53之间有一定的相关性。     

Wortmannin对胃癌SGC7901细胞增殖及Cyclin H和Cyclin D1蛋白表达的影响

目的观察Wortmannin对胃癌SGC7901细胞增殖及细胞周期调控蛋白Cyclin H和Cyclin D1表达的影响，探讨Wortmannin抑制细胞增殖的机制。方法采用MTT法观察Wortmannin对胃癌细胞SGC7901增殖的影响，采用免疫细胞化学方法检测Cyclin H和Cyclin D1的表达。结果以不同浓度Wortmannin处理人中分化胃腺癌SGC7901细胞系48h后，该细胞的增殖受抑，呈剂量依赖性，随药物浓度的增大，OD值明显减少，同时增殖抑制率明显升高，且与对照组相比存在显著性差异（P〈0．05）；Wortmannin在下调Cyclin H同时亦可下调Cydin D1表达。结论Wortmannin有明显的抑制人中分化胃腺癌SGC7901细胞系增殖的作用，其分子机制可能是Wortmannin通过下调Cyclin H和Cyclin D1的表达，来抑制胃癌SGC7901细胞增殖，达到抗肿瘤的作用，因此该药有望成为胃癌化疗的一种新药。     

amiRNA-Snail逆转人胃癌细胞株SGC7901／DDP对顺铂的耐药性及其机制研究

多药耐药是恶性肿瘤化疗失败的主要原因。研究显示锌指转录因子Snail介导肿瘤细胞发生上皮间质转化（EMT）可促成肿瘤对化疗耐药。目的：探讨人工合成microRNA．Snail（amiRNA．Snail）逆转人胃癌细胞株SGC7901／DDP对顺铂（DDP）耐药性的作用及其可能机制。方法：构建稳定转染amiRNA-Snail质粒或阴性对照质粒的SGC7901／DDP细胞株（SGC7901／DDP-amiRNA组和SGC7901／DDP-Mock组）,以蛋白质印迹法、免疫荧光法检测各组细胞中的Snail、耐药基因ERCCl、Snail下游靶基因E-cadherin蛋白表达,以CCK-8法检测各组细胞经不同浓度DDP（O．01、0．1、1．0、10．0mg／L）作用后的存活率,计算DDP对细胞的半数抑制浓度（IC。）。结果：DDP耐药SGC7901／DDP细胞中的Snail蛋白相对表达量显著高于DDP敏感亲本SGC7901细胞（尸〈0．05）。SGC7901／DDP-amiRNA组细胞Snail、ERCCl蛋白相对表达量显著低于SGC7901／DDP．Mock组细胞（P〈0．05）,荧光强度明显减弱：E-cadhehn蛋白相对表达量显著高于SGC7901／DDP-Mock组细胞（P〈0．05）．荧光强度明显增强。DDP对SGC7901／DDP．amiRNA组细胞的IC。值显著低于SGC7901／DDP．Mock组细胞（P〈0．05）。结论：以amiRNA-Snail沉默Snail基因表达可能通过下调ERCCl表达、上调E-cadherin表达而逆转人胃癌细胞株SGC7901／DDP对DDP的耐药性。     

紫杉醇增强TRAIL诱导的胃癌BGC823细胞凋亡的机制

目的 探讨紫杉醇增强TRAIL诱导的胃癌BGC823细胞凋亡的机制。方法胃癌BGC823细胞传代堵养后,取对数生长期细胞用于实验。采用MTT法测定细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡,Westernblot检测Akt、p-Akt蛋白表达。结果在胃癌BGC823细胞中,100ng／ml的TRAIL可致少量的细胞凋亡,同时检测到Akt的磷酸化。紫杉醇作用胃癌BGC823细胞24h,IC50剂量为8．97μg／ml。与单药TRAIL和紫杉醇相比,TRAIL（100ng／m1）联合紫杉醇（8．97μg／ml,24h的IC50剂量）对细胞的诱导凋亡作用明显增强（P〈0．05）。免疫印迹结果显示,TRAIL（100ng／ml）作用BGC823细胞24h,活化了Akt蛋白,而8．97μg／ml的紫杉醇抑制了Akt的磷酸化。TRAII（100ng／ml）联合紫杉醇（8．97μg/ml）作用后,TRAIL引起的Akt磷酸化被抑制。结论紫杉醇通过抑制TRAIL引起的Akt磷酸化,从而增强了TRAIL诱导的胃癌BGC823细胞凋亡。     

羟基喜树碱诱导胃癌细胞凋亡的作用机制初步研究

目的：研究羟基喜树碱（HCPT）诱导胃癌细胞的凋亡作用及对凋亡相关基因p53,c-myc,bcl-2,bcl-xl和bcl-xs表达的影响,探讨其诱导胃癌细胞凋亡的作用机制。方法：应用TUNEL染色、流式仪、免疫组化和RT－PCR技术等研究HCPT对胃细胞SGC－7901和MKN－45的诱导凋亡作用和对凋亡相关有达的影响。结果：HCPT作用于细胞后,可看到较为典型的细胞凋亡的形态学变化;细胞核固缩,染色质凝集,呈新月型紧核膜周边,核碎裂,染色质片段化,凋亡小体形成等。流式细胞仪DNA直方图上出现典型的亚二倍体的“凋亡峰”。流式细胞仪计数显示,10μg/ml的HCPT诱导胃癌细胞SGC－7901和MKN－45的凋亡率为21．88％和12．34％。TUNEL染色法显示,细胞凋亡指数在1．865－9．54％之间。免疫组化和RT－PCR结果显示：HCPT能够明显下调SGC－7901细胞的P53和bcl-2基因的蛋白和mRNA表达,对SGC－7901细胞的c-myc,bcl-xl和bcl-xs基因的蛋白表达无影响。HCPT作用后MKN－45细胞的p53蛋白和mRNA的表达增加,对MKN－45细胞的bcl-2,c-myc,bcl-xl和bcl-xs基因的表达无影响。结论：HCPT能够诱导胃癌细胞凋亡,可能是通过调控胃癌细胞的P53和bcl-2的表达而诱导胃癌细胞凋亡。     

PI3K/AKT信号通路在RANKL诱导的SGC-7901胃癌细胞迁移中的作用

目的文献报道RANKL/RANK/OPG途径与肿瘤细胞迁移及骨转移密切相关,但RANKL/RANK途径是否参与胃癌细胞迁移,尚无文献报道。本文拟检测RANK在胃癌细胞系SGC-7901细胞中的表达,并进一步探讨磷脂酰肌醇-3-激酶/丝苏氨酸蛋白激酶(PI3K/Akt)信号通路在RANKL诱导的胃癌细胞迁移中的作用。方法 West-ern blot检测SGC-7901细胞表面RANK蛋白的表达;RANKL刺激后磷酸化Akt(P-Akt)及Akt的表达;Transwell法测定RANKL及抑制剂刺激后细胞迁移能力的改变。结果 SGC7901细胞表达RANK蛋白。RANKL(1μg/mL)诱导SGC-7901细胞迁移能力增强,迁移增加率为57.2%±5.9%,RANKL抑制剂rOPG(5μg/mL)显著抑制RANKL诱导的细胞迁移(13.88%±3.57%,P<0.05)。RANKL刺激后30 min～3 h,SGC-7901细胞p-Akt表达升高,应用PI3K的抑制剂LY294002(50 mmol/L)显著抑制RANKL诱导的胃癌细胞SGC-7901的迁移(57.28%±5.91%vs23.18%±2.79%,P<0.05)。结论胃癌细胞系SGC-7901细胞表达受体RANK,PI3K/Akt信号通路参与RANKL诱导的SGC-7901细胞迁移。     

PPIs抑制P13K/Akt／mTOR信号通路逆转胃癌细胞的化疗多药耐药

背景：前期实验显示质子泵抑制剂（PPIs）可抑制空泡型质子泵（V-H＋-ATPases）和多药耐药蛋白P—gP、MRP1表达,增强胃癌细胞的化疗敏感性。目的：探讨PPIs抑制空泡型质子泵逆转胃癌细胞化疗多药耐药与P13K／Akt／mTOR信号通路的关系。方法：应用不同浓度埃索美拉唑或泮托拉唑预处理人胃腺癌细胞敏感株SGC7901和多药耐药株SGC7901／MDR,或以V—H＋-ATPasessiRNA干扰SGC7901／MDR细胞内的V-H＋-ATPases表达,或以雷帕霉素阻断mTOR表达,以蛋白质印迹法检测经不同方式处理的细胞内V—H＋ATPases、P—SP、MRPl蛋白表达以及P13K／Akt/mT0R／HIF—1α信号通路及其信号旁路TSCl／2-Rheb中的相关蛋白表达;以免疫荧光法检测经埃索美拉唑预处理的SGC7901／MDR细胞内的V-H＋ATPases、P—gP蛋白表达和定位。结果：PPIs可呈浓度依赖性地抑制SGC7901／MDR细胞内的V—H＋ATPases、P13K、Akt、roTOR、HIF-1仅、TSCI、TSC2、Rheb、P—gP、MRP1表达以及Akt底物和TSC2磷酸化,改变V-H＋ATPases、P—gP的胞内定位,对SGC7901细胞则无上述影响。以V—H＋-ATPasessiRNA抑制SGC7901／MDR细胞内的V—H＋-ATPases表达,作用与PPIs预处理相似。以雷帕霉素阻断mTOR可呈浓度依赖性地抑制SGC7901／MDR细胞内的HIF-1α、P—gP表达。结论：PPIs抑制空泡型质子泵逆转胃癌细胞化疗多药耐药的机制与抑制P13K／Akt／mTOR信号通路有关。