磁性吉西他滨隐形纳米脂质体的制备及其理化性质

目的:研究制备磁性吉西他滨隐形纳米脂质体(MGSL)的最佳条件.并对其质量进行检测.方法:通过逆相蒸发法制备MGSL,采用扫描电镜和原子力显微镜时其形态进行观察;利用激光粒度分析仪测定MGSL粒径大小和粒度分布;通过高效液相色谱法检测药物的栽药量和包封率;使用专业磁性测试仪进行体外磁响应性测定,且对MGSL的稳定性进行评价.结果:MGSL为圆形或椭圆形,大小均匀一致,其平均粒径为206.6 nm,粒度分布窄,大小均匀.MGSL载药量为(10.4±0.7)%,包封率为(81.7±5.1)%.并具有体外磁响应性好、稳定性高等特点.结论:本法制备的MGSL符合纳米磁靶向给药系统的条件,有望成为一种有效的抗肿瘤物质.     

PEG化隐形纳米脂质体的研究进展

PEG化隐形纳米脂质体作为一种新型药物载体,由于其特殊的体内作用特点,和普通脂质体相比具有长效、靶向、高效、低毒等优点,已在靶向制剂、控释制剂等领域中得到广泛应用。本文重点围绕PEG化隐形纳米脂质体的药动学、组织分布、提高肿瘤靶向性、降低药物毒性等方面对其近年来在药物转运系统中的研究与应用做一综述。     

硬脂醇半乳糖苷修饰吉西他滨纳米脂质体的制备及处方优化

目的制备硬脂醇半乳糖苷修饰的盐酸吉西他滨纳米脂质体(18-GGNL),并采用响应面法优化其处方工艺。方法用硫酸铵梯度法制备18-GGNL,以包封率为评价指标,运用Box-Behnken响应面设计法对处方进行优化,并对其包封率、形态、粒径、稳定性和体外释放度进行综合评价。结果得到最优处方为磷脂与胆固醇的质量比为3.10︰1,硫酸铵浓度0.19 mol·L?1,脂物比为20.99︰1,所得的优化脂质体平均包封率为(70.8±0.95)%,平均粒径为(89.5±5.3)nm,粒径分布较窄,稳定性好且具有缓释特性。结论以硫酸铵梯度法制备的18-GGNL理化性质良好。     

nobiliside A隐形纳米脂质体对小鼠RM-1前列腺癌的抑制作用

目的比较nobiliside A隐形纳米脂质体(NASNL)和nobiliside A普通脂质体(NACL)对小鼠RM-1前列腺癌的抑制作用。方法 RM-1前列腺癌荷瘤小鼠随机分为6组(均n=10):阴性对照组(生理盐水)、阳性对照组(环磷酰胺20 mg·kg~(-1)·d~(-1))、NACL低、高剂量组(1 mg·kg~(-1)·d~(-1)、2 mg·kg~(-1)·d~(-1))和NASNL低、高剂量组(1 mg·kg~(-1)·d~(-1)、2 mg·kg~(-1)·d~(-1)),均尾静脉注射给予相应药物,连续7 d。通过比较各组小鼠的肿瘤生长曲线、抑瘤率、肿瘤组织的病理变化等考察2种脂质体的抑瘤效果。结果 NASNL两剂量组的肿瘤生长速度均低于相应剂量的NACL组(P<0.05)。NASNL两剂量组的抑瘤率均高于相应的NACL组,其中NASNL高剂量组的抑瘤率是NACL高剂量组的2倍。NASNL各组肿瘤细胞坏死程度高于NACL各组。结论 NASNL的肿瘤抑制作用明显优于NACL。     

紫杉醇纳米脂质体的制备及其在小鼠体内组织分布

目的制备紫杉醇新型纳米脂质体并研究其在小鼠体内组织分布。方法采用薄膜分散超声结合冷冻干燥制备紫杉醇纳米脂质体。小鼠尾静脉注射紫杉醇脂质体及市售紫杉醇注射液Anzatax,RP-HPLC检测小鼠各组织中紫杉醇浓度。梯形法计算紫杉醇在小鼠各组织的蓄积情况。结果紫杉醇纳米脂质体粒径<100 nm,药物包封率>80%。小鼠经iv给予剂量为3 mg.kg-1的紫杉醇脂质体和普通紫杉醇注射液,紫杉醇纳米脂质体在肝脾系统轻微蓄积,肝脏AUC0→8h仅仅提高34%,脾脏AUC0→8h提高6%。结论紫杉醇纳米脂质体基本没有改变紫杉醇注射液的组织分布,有望为临床提供更安全有效的紫杉醇新制剂。     

甲基莲心碱纳米脂质体在小鼠体内组织分布的研究

目的：考察甲基莲心碱（Nef）纳米脂质体在小鼠体内的组织分布。方法：对小鼠尾静脉注射同剂量的Nef注射液和Nef纳米脂质体,于预定时间测定血浆及心,肝,脾,肺,肾,脑组织中的药物浓度,计算相关靶向参数：TI=（AUC0→∞）lip／（AUC0→∞）inj×100％,RTE：（TElip—TEinj）／TEinj×100％。结果：Nef纳米脂质体与注射液相比,脑组织中的TI,RTE分别为298．89％,64．08％。结论：本实验割备的Nef纳米脂质体具有较好的脑靶向性,值得进一步研究。     

鬼臼毒素纳米脂质体对人白血病细胞的凋亡诱导作用

目的研究鬼臼毒素纳米脂质体对人白血病细胞K562的凋亡诱导效应。方法薄膜超声分散法制备鬼臼毒素纳米脂质体。不同浓度的鬼臼毒素和鬼臼毒素纳米脂质体分别处理K562细胞,MTT法检测细胞的增殖活性,细胞形态学改变和AnnexinⅤ/PI染色检测细胞凋亡。结果鬼臼毒素纳米脂质体对K562细胞增殖的抑制作用明显高于鬼臼毒素,24、48、72h的半数抑制浓度(IC50)分别为0.71、0.02、0.003μg·ml-1,而鬼臼毒素为1.50、0.12、0.05μg·ml-1;0.01μg·ml-1鬼臼毒素纳米脂质体处理24、72h,AnnexinⅤ/PI染色K562细胞凋亡率分别为91.1%和92.7%,但72h时以晚期凋亡为主;而0.01μg·ml-1鬼臼毒素处理的细胞凋亡率分别为63.4%和66.8%。鬼臼毒素纳米脂质体和鬼臼毒素处理后,K562细胞出现皱缩、胞膜起泡、凋亡小体等典型的细胞凋亡形态学改变。结论鬼臼毒素纳米脂质体较鬼臼毒素对白血病K562细胞具有更强的增殖抑制和凋亡诱导效应。     

用响应面法对鱼油纳米脂质体处方的优化

利用响应面法对薄膜分散法制备鱼油纳米脂质体的处方进行优化,初步测定了其理化性质。并研究了用南极磷虾卵磷脂制备鱼油纳米脂质体的影响因素,主要包括磷脂浓度、胆固醇含量、吐温-80含量和鱼油含量,并通过响应面法优化制备工艺。最终得到的最佳处方为：磷脂浓度25 mg/mL,m(磷脂)：m(胆固醇)=2.5:1,m(磷脂)：m(鱼油)=6.5:1,吐温-80含量为17%。此时鱼油纳米脂质体的粒径为21.20 nm,包封率为88.24%,zeta电位为-8.34 mV,接近于模型预测值。     

槲皮素及其纳米脂质体在Caco-2细胞的吸收特性研究

目的研究黄酮类化合物槲皮素及其纳米脂质体在Caco-2单层细胞模型中的吸收特性,探讨其纳米脂质体促进槲皮素吸收的作用及机制。方法采用乳化蒸发-低温固化法,制备槲皮素纳米脂质体;采用高效液相色谱法和酶标仪分别测定Caco-2细胞对槲皮素原料、槲皮素普通脂质体和槲皮素纳米脂质体的吸收。结果 Caco-2细胞对槲皮素纳米脂质体的吸收效果较佳,槲皮素原料和槲皮素普通脂质体吸收量均随着槲皮素浓度的增加而呈线性关系,而槲皮素纳米脂质体非呈线性关系。结论槲皮素制备成为纳米脂质体能促进槲皮素在Caco-2细胞模型中的吸收。槲皮素原料和槲皮素普通脂质体在Caco-2细胞模型上的吸收为被动扩散,而槲皮素纳米脂质体为被动扩散和主动转运混合方式。     

毛菊苣总倍半萜磁性纳米脂质体在小鼠体内组织分布和靶向效果

目的研究毛菊苣总倍半萜有效部位、脂质体和磁性纳米脂质体在小鼠体内的组织分布和靶向效果。方法采用高效液相色谱法,以山莴苣素的含量为评价指标,研究毛菊苣总倍半萜有效部位溶液组、脂质体溶液组和磁性纳米脂质体溶液组(加磁场)在小鼠体内不同组织器官的药物浓度;并以AUC0-12 h、平均滞留时间(MRT)和靶向效率(TE)、相对靶向效率(RTE)、靶向指数(TI)为指标评价不同剂型的靶向作用。结果尾静脉注射给药10 min后,磁性纳米脂质体组在心、肝、脾、肺、肾脏组织中山莴苣素浓度较有效部位组、脂质体组显著提高;在动物的肝部体外施加磁场,磁性纳米脂质体组肝部位的AUC0-12 h明显高于其他部位,MRT明显的延长,差异具有显著性(P0.01);TE仅在肝部有增加,且TI大于10。结论在外加磁场的作用下,毛菊苣总倍半萜磁性纳米脂质体可改变药物在动物体内的分布,延长药物的作用时间,提高药物在肝部位的特异性和靶向性。     

吉西他滨对人乳腺癌细胞和人胚肾细胞增殖的影响

目的:观察吉西他滨在体外对人胚肾细胞HEK293和人乳腺癌细胞MCF-7增殖的影响。方法:采用MTT法测定吉西他滨对人胚肾细胞HEK293和人乳腺癌细胞MCF-7增殖的影响,比较两者IC50值,绘制细胞生长曲线;并测定吉西他滨作用后细胞培养上清液中SOD,MDA,LDH值的变化。结果:吉西他滨在体外对人乳腺癌细胞MCF-7的增殖抑制作用较强,同时对人胚肾细胞HEK293的增殖有一定的抑制作用,两者的化疗指数为分别为26.907(24h),15.307(48h),10.264(72h)。结论:吉西他滨对人乳腺癌细胞MCF-7有明显增殖抑制作用,同时可抑制人胚肾细胞HEK293的增殖,对肾脏有一定的毒性。     

乳腺癌MCF-7细胞系中侧群细胞分选及其生物学特性

目的 分离乳腺癌MCF-7细胞系中的侧群细胞(SP)并观察其生物学特性.方法 利用流式细胞荧光分选法将乳腺癌MCF-7细胞系分成SP和非SP细胞两个亚群.对两个亚群细胞采用软琼脂克隆形成实验观察其增殖能力.结果 MCF-7细胞株中分选出SP细胞占(6.5±0.4)％;SP细胞的体外克隆形成率为(38.5±9.4)％,高于非SP细胞的(8.4±2,6)％(t=5.34,P＜0.05).结论 乳腺癌MCF-7细胞中的SP细胞富集了乳腺癌于细胞,其增殖能力强于非SP细胞,表明SP表型的肿瘤细胞在乳腺癌的生长中具有重要的地位.     

三氧化二砷逆转乳腺癌细胞株MCF-7/ADM多药耐药的研究

目的探讨三氧化二砷(As2O3)体外逆转人乳腺癌细胞多药耐药性的作用及机制。方法采用MTT法检测As2O3的细胞毒作用和处理前后耐药细胞对化疗药物的敏感性,用流式细胞仪检测细胞内阿霉素浓度,通过RT-RCR检测MDR1基因的表达。结果 As2O3在0.25mg/L以下剂量时对MCF-7和MCF-7/ADM耐药细胞株的抑制率均小于15%,半数抑制率(IC50)分别为1.01m/L和1.28mg/L,无细胞毒剂量0.2mg/L的As2O3能部分逆转MCF-7/ADM细胞对阿霉素的耐药性。同时无细胞毒剂量0.2mg/L的As2O3能使MCF-7/ADM细胞内阿霉素浓度明显增加,MDR1表达下降。结论 As2O3具有体外部分逆转人乳腺癌细胞多药耐药性的作用,可能与增加细胞内药物积累、下调MDR1表达有关。     

人参皂苷 Rg3 对人乳腺癌 MCF-7 细胞血管生成拟态的影响

摘要： 目的 探讨人参皂苷 Rg3 对人乳腺癌 MCF-7 细胞体外血管生成拟态的抑制作用及其机制。方法 取 MCF-7 对数生长期细胞分为实验组和对照组, 实验组加入含有终浓度为 10、 20、 50、 100、 150 及 300 mg/L 的 Rg3 完 全培养基; 对照组加入含 DMSO 完全培养基。CCK-8 法分析 Rg3 对 MCF-7 细胞增殖的影响, 分析实验组各浓度下 的抑制率和 Rg3 半数抑制浓度 （IC50） 并确定实验浓度。体外管道形成抑制实验观察 Rg3 对 MCF-7 细胞血管生成拟 态的影响。实时荧光定量 PCR 法检测 Rg3 对细胞血管内皮生长因子-A（VEGF-A）和基质金属蛋白酶（MMP） 9 mRNA 的表达水平的影响。蛋白免疫印迹法检测 Rg3 对细胞低氧诱导因子 （HIF） -1α、 VEGF-A 和 MMP9 蛋白表达 的影响。双抗夹心酶联免疫法测定 Rg3 对细胞培养上清液中 VEGF-A 、 MMP9 蛋白表达的影响。结果 人参皂苷 Rg3 可以有效抑制 MCF-7 细胞增殖, 其平均 IC50为 （115.34±8.50） mg/L; 选取 50、 100 和 150 mg/L 的 Rg3 作为实验浓 度。50、 100 和 150 mg/L 组形成的管状结构数目分别为 （19.0±1.0）、（15.0±1.5）、（10.0±1.7） 个/视野, 呈逐渐降低趋势; 且均较对照组（22.0±1.8）减少（均 P < 0.05）。对照组、 50 mg/L 组、 100 mg/L 组及 150 mg/L 组细胞中的 VEGF-A 和 MMP9 的 mRNA 和蛋白表达水平、 HIF-1α 的蛋白表达水平均呈逐渐下降趋势 （P < 0.05）。对照组、 50 mg/L 组、 100 mg/ L 组及 150 mg/L 组细胞培养上清液中的 VEGF-A 蛋白呈逐渐下降趋势 （P < 0.05）; 后 3 组的 MMP9 蛋白表达水平均呈 逐渐下降趋势 （P < 0.05）, 但 50 mg/L 组与对照组的 MMP9 蛋白表达水平差异无统计学意义。结论 人参皂苷 Rg3 可以抑制 MCF-7细胞体外血管形成拟态的能力, 其分子机制可能与抑制 MCF-7细胞中 HIF-1α、 VEGF-A和 MMP9的蛋白表达有关     

铜绿假单胞茵注射液对人乳腺癌细胞的体外杀伤及促凋亡作用研究

目的研究铜绿假单胞菌（pseudo—monas aeruginosa,PA-MSHA）注射液在体外实验中对人乳腺癌细胞（MCF-7）凋亡和增殖的影响,并探讨其可能的作用机制。方法应用MTT比色法检测铜绿假单胞菌注射液对体外培养的MCF-7细胞增殖抑制作用,应用流式细胞术检测铜绿假单胞菌注射液诱导乳腺癌细胞凋亡,检测其对细胞周期的影响。用Hoechst33258染色法染色,荧光显微镜检测铜绿假单胞菌注射液诱导体外培养的MCF-7肿瘤细胞凋亡的形态学改变。结果铜绿假单胞菌注射液抑制MCK7细胞增殖,呈剂量和时间依赖性;与对照组相比,铜绿假单胞菌注射液组MCF7细胞的凋亡率明显增高（P〈0．01）、G0／G1期细胞比例明显增高、S期细胞所占百分比明显降低（P〈0．05）,染色荧光显微镜检测发现PAMSHA能诱导体外培养的肿瘤细胞呈现明显的凋亡图像。结论铜绿假单胞菌注射液可能通过对细胞周期中G0／G1期阻滞,诱导MCF-7细胞凋亡,从而抑制MCF-7细胞的增殖。     

小干扰RNA逆转人乳腺癌细胞MCF-7多药耐药的体外研究

目的研究以多药耐药相关蛋白(MRP)为靶标的小干扰RNA(siRNA)抑制相应蛋白表达,对人乳腺癌细胞MCF-7药物敏感性的影响。方法以MRP基因为靶标的siRNA转入MCF-7细胞,检测对MRP mRNA和蛋白表达水平的影响及其对抗肿瘤药物IC50的影响。结果经siRNA干扰后,MRP基因的mR-NA和蛋白的表达均有明显降低,肿瘤细胞对相关化疗药物的敏感性明显增加。结论以MRP基因为靶标的siRNA一定程度上逆转了肿瘤细胞的多药耐药性。     

盐酸青藤碱对乳腺癌MCF-7细胞增殖影响的初探

目的 研究盐酸青藤碱对体外培养乳腺癌MCF-7细胞增殖的作用.方法 体外培养人乳腺癌MCF-7细胞,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定盐酸青藤碱(SIN)、5-氟尿苷(5-FUR)、SIN+5-FUR对乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响.结果 SIN对人乳腺癌MCF-7细胞有增殖抑制作用,且呈浓度依赖性.SIN、5-FUR、SIN+5-FUR对MCF-7细胞的抑制强弱为:SIN＞SIN+5-FUR＞5-FUR.结论 SIN具有抑制人乳腺癌MCF-7细胞增殖的作用,且抑制效果强于5-FUR及SIN+5-FUR.     

人乳腺癌细胞株MCF-7及其紫杉醇耐药株中紫杉醇结合的差异蛋白质分析

目的分析人乳腺癌细胞株MCF-7及其紫杉醇耐药株MCF-7/Taxol中的紫杉醇结合的差异蛋白质,探索抗肿瘤药物新靶点。方法合成生物素化紫杉醇,HPLC-MS联用法检测合成产物。SRB法检测生物素化紫杉醇的生物活性,免疫磁珠偶联后与MCF-7及其MCF-7/Taxol的全细胞蛋白液反应,获得紫杉醇结合蛋白,SDS-PAGE电泳获得差异蛋白条带,LC-MS/MS分析,Western blot鉴定差异结合蛋白。结果成功合成生物素化紫杉醇,生物素化紫杉醇的生物活性和紫杉醇相当。经过蛋白电泳分析,MCF-7/Taxol的紫杉醇结合蛋白较MCF-7多一差异条带,LC-MS/MS分析提示数个目标蛋白,经过Western blot验证差异条带中有Heat shock protein HSP90、Dermcidin Precursor、Actinin。结论成功获得了MCF-7和MCF-7/Taxol之间的紫杉醇细胞差异结合蛋白,对这些蛋白作用机制的的深入探索,可能为抗肿瘤药物的研究寻找到新的靶点蛋白,发现新的肿瘤耐药机制。     

地塞米松预处理人乳腺癌MCF-7细胞对多西他赛抗肿瘤活性的影响

目的 探讨地塞米松预处理人乳腺癌MCF-7细胞后,对化疗药物多西他赛(艾素)抗肿瘤活性的影响.方法 以不同浓度(1×10-8～1×10-6 mol·L-1)的地塞米松预先作用于人乳腺癌MCF-7细胞后,再以艾素(5×10-6 mol·L-1)处理,在以上药物作用的相应时间段,通过流式细胞仪技术测定细胞凋亡,采用细胞计数观察细胞生长密度、形态.结果 地塞米松对MCF-7细胞增殖有抑制作用(P＜0.01),艾素能够明显抑制MCF-7细胞增殖,促进其凋亡(P＜0.01),地塞米松预处理后艾素干预MCF-7细胞的增殖抑制作用较单用艾素减弱(P＜0.01),且随地塞米松浓度的增加,其对化疗药艾素的凋亡抑制作用的影响增强.结论 地塞米松预处理对艾素诱导的人乳腺癌MCF-7细胞的凋亡具有明显的阻抑作用,抑制了多西他赛的抗肿瘤活性.     

吉西他滨联合卡培他滨治疗复发转移性乳腺癌的临床观察

目的观察吉西他滨联合卡培他滨治疗复发转移性乳腺癌的临床疗效及不良反应。方法 32例蒽环类及紫杉类药物治疗失败的复发转移性乳腺癌患者接受吉西他滨联合卡培他滨治疗：吉西他滨1 000 mg·m-2,静脉滴注第1,8天;卡培他滨1 250 mg·m-2,口服,2次/日,第1~14天,每21 d为1周期,每2个周期评价疗效,最终观察目的为PFS及药物毒副反应。结果 32例患者中完全缓解（CR）3例,部分缓解（PR）11例,ORR为43.75%;中位PFS达7.5个月。主要不良反应为血液系统毒性：Ⅲ~IV度粒细胞减少发生率为42.5%;手足综合征发生率38.2%,胃肠道反应28.3%,无化疗相关死亡病例。结论吉西他滨联合卡培他滨治疗复发转移性乳腺癌近期疗效肯定,耐受良好,远期疗效有待进一步观察。