逆转录病毒介导的人卵巢癌 p53基因治疗体外及小鼠体内实验研究

目的 :评价人卵巢癌的 p5 3基因治疗效果。 方法 :用携带人野生型 p5 3的逆转录病毒转导 p5 3蛋白表达缺如的人卵巢癌细胞系SK OV 3,通过体外及小鼠体内实验研究转基因的表达及对肿瘤的抑制作用。结果 :逆转录病毒介导的 p5 3基因能够在体外及小鼠体内人卵巢癌细胞SK OV 3中表达 ,并对人卵巢癌生长有抑制作用。体外抑制率为 5 7%～ 88% ;对体内肿瘤抑制率为 40 %。结论 :逆转录病毒介导的外源野生型p5 3能够抑制人卵巢癌生长 ,增加病毒滴度将进一步提高体内治疗效果     

逆转录病毒介导的造血干细胞基因治疗

造血干细胞 (ＨＳＣ)作为基因治疗的靶细胞具有较大的疾病治疗潜能 ,基因治疗临床方案近 1 3涉及到ＨＳＣ[1 ] 。替换性基因转移可用于治疗造血系统遗传性疾病 ,包括血红蛋白病、免疫缺陷综合征、溶酶体贮积病和糖原贮积病等 ,也适应于造血系统的一些获得性疾病 ,包括抗癌化疗所诱导的骨髓抑制[2 ] ,由于癌基因活化所致的白血病[3 ] 和病毒诱导性疾病 ,如获得性免疫缺陷综合征[4] 。造血干细胞及其子代细胞直接与血液相接触 ,或存在于血液循环之中 ,极利于转染细胞的表达产物释放入血液。因此 ,除造血系统的遗传性和获得性疾病外 ,造血干细…     

逆转录病毒介导的野生型p53基因转入对慢粒多药耐药细胞？…

以Ｋ５６２／ＨＨＴ细胞为模型,采用重组逆转录病毒载体介导的基因转移技术,将人野生型Ｐ５３ｃＤＮＡ转入该细胞系,研究外源性野生型Ｐ５３基因在白血病多药耐经细胞表达的意义。结果显示,外源性野生型Ｐ５３基因抑制细胞增殖,一般形态学观察见细胞明显向成熟发化,流式细胞仪分析还显示Ｐ５３基因诱导Ｋ５６２／ＨＨＴ细胞死亡且伴有细胞周期Ｇ１基因的生长阻滞,结果表明,野生型Ｐ５３基因对多药耐药的白血病细胞能部分降低     

腺病毒介导的全抗体基因治疗卵巢癌的实验研究

目的　探讨应用基因治疗方法表达完全抗体的可行性及其对肿瘤的治疗作用。方法构建携带曲妥珠单抗 [Trastuzumab ,商品名 :赫赛汀 (Herceptin) ]全抗体基因的腺病毒载体 ,利用重组技术获得增殖缺陷型腺病毒Ad SG Her ,用Ad SG Her转染人正常肝细胞株L 0 2 ,判断体外肝细胞是否可以表达Herceptin抗体 ;将卵巢癌SK OV 3细胞接种于裸鼠皮下 ,3d后把 4 0只成瘤裸鼠随机分为3个治疗组和 1个对照组 ,每组各 10只。治疗组裸鼠尾静脉分别注射不同滴度的Ad SG Her :治疗A组注射 2× 10 9空斑形成单位 ( pfu) /只 ,B组注射 1× 10 9pfu/只 ,C组注射 5× 10 8pfu/只。用酶联免疫吸附试验 (ELISA)分别在体外转染Ad SG Her后的第 3天和第 7天 ,以及裸鼠接受Ad SG Her治疗后的第 3、7、10、14、2 1、2 8、35天检测Herceptin的表达量 ;通过间接免疫荧光法 (IFA)和Western印迹法分别检测血清中的抗体与Her2过表达卵巢癌细胞株SK OV 3结合的特异性以及所表达全长抗体的完整性 ;同时观察不同滴度的Ad SG Her对荷SK OV 3实体瘤裸鼠的治疗作用。结果　构建的带有全长Herceptin基因的重组腺病毒Ad SG Her ,在体外及体内均能高效表达人源化抗体Herceptin。Western印迹显示 :该人源化抗体与商品化Herceptin具有相同大小的轻链与     

卵巢癌的p53基因治疗实验研究：人野生型p53基因真核细？…

本实验构建了人野生型Ｐ５３基因与真核表达载体ｐｃＤＮＡ３的重组体,为进行卵巢癌基因治疗研究打下基础,方法：利用分子生物学基固然我隆技术从质粒ｐＧＥＸ＾－ｐ５３中用双酶切下目的片段,挤压法回收与ｐｃＤＮＡ３构成重组体。结果成功的构建了人野生型Ｐ５３基因真核细胞表达质粒。     

卵巢癌基因治疗的研究进展

卵巢癌是妇科肿瘤中较常见的一种恶性肿瘤,也是死亡率最高的妇科肿瘤之一,其治疗是妇科肿瘤医生面临的最严峻挑战.目前临床主要采用手术切除及联合化疗,但总体疗效不理想.近年来,基因治疗作为肿瘤治疗的第4模式日益受到重视.现已发展了多种具有应用前景的治疗方案,如慢病毒载体方案、TRALL和Baxα结合基因方案、rAd/P53（SCH58500）基因替代方案、腺病毒介导的胸腺嘧啶激酶基因治疗方案及其他一些方案,     

逆转录病毒介导的vIL—10表达对小鼠MLC和心脏移植存活？…

目的：探讨逆转录病毒介导的病毒白介素１０（ｖＩＬ－１０）基因表达对小鼠混合淋巴细胞培养（ＭＬＣ）反应和心脏移植存活期的影响。方法：将ｖＩＬ－１０ ｃＤＮＡ克隆到逆转录病毒载体ｐＬＸＳＮ，取ｖＩＬ－１０重组逆转录病毒上清加入ＢＡＢＬ／ｃ和ＣＢＡ／Ｊ混合淋巴细胞中培养，液闪测量。在新生ＣＢＡ／Ｊ小鼠心脏移植时，将ｖＩＬ－１０上清１０μＬ（１０００ｐｆｕ）注入移植心脏内，观察其对心脏移植存活期的影响。结     

逆转录病毒介导HSV-TK基因治疗膀胱癌及旁观者效应的观察

目的 观察HSV—TK／GCV治疗膀胱癌的体内效果及旁观者效应。方法 用逆转录病各感染鼠源性膀胱癌细胞T739，以不同比例的T739和T739TK细胞建立膀胱癌腹腔肿瘤模型，同时，在背部皮下以母代细胞T739建立皮下肿瘤，观察GCV治疗俯后肿瘤大小变化及动物存活时间。结果 动物存活时问随基因转移效率提高而延长，腹腔肿瘤生长受到抑制，背部肿瘤在50％以上转移效率时肿瘤生长缓侵。结论 HSlV—TK／GCV对膀胱癌的体内杀伤效应随基因转移效率提高，并存在远距离旁观者效应。     

原发性肝癌基因治疗研究——含人TNF基因重组逆转录病毒转移系…

将人ＴＮＦα基因克隆到重组逆转录病毒载体ｐＲＵＦｎｅｏ，构建了含人ＴＮＦ基因重组逆转录病毒载本ＲＵＦ－ＴＮＦ。将ＲＵＦ－ＴＮＦ转染包装细胞Ｆｌｙ Ａ１３，经药物筛选获得稳定分泌含人ＴＮＦ基因重组逆转录病毒的细胞株ＦｌｙＲＵＦＮ１４。ＦｌｙＲＵＦＮ１４产生的病毒上清液能直接转染靶细胞Ｓａｏｓ－２。本研究建立的逆转录病毒介导的ＴＮＦ基因转移系统为肝癌及其他恶性肿瘤的基因治疗提供了条件。     

腺病毒介导的HSV-tk基因治疗人膀胱癌的动物实验研究

目的　探讨带有HSV -tk基因的重组腺病毒 (Ad -tk)结合GCV对人膀胱癌的治疗作用。方法　建立人膀胱癌裸鼠移植瘤模型 2 1只 ,采用肿瘤原位注射Ad -tk结合GCV治疗。结果　 5× 10 8PFU的Ad -tk肿瘤原位注射结合GCV治疗 ,能明显抑制肿瘤生长 ,肿瘤平均重量为 0 .2 1g ,病理检查表明肿瘤组织坏死、出血伴纤维组织增生 ;而 3个对照组Ad -tk/PBS组、PBS/GCV组、PBS组肿瘤平均重量分别为 1.6 0、1.5 2、1.71g。与对照组比较 ,肿瘤生长抑制率分别为 86 .9%、86 .2 %、87.7% ,有显著性差异 (均P <0 .0 1)。结论　Ad -tk/GCV系统对人膀胱癌的敏感性较高 ,疗效显著。     

逆转录病毒载体介导的基因治疗中可复制逆病毒的检测

目的：探讨逆转录病毒载体导的基因治疗中,可复制逆转录病毒（ＲＣＲ）的检测方法,为其在应用中的安全性奠定基础。方法：构建含抗ＨＩＶ－、整合酶单链抗体基因的逆转录病毒表达载体（pＳＬＸＣＭＶ／ＩＮ－sＦv）,应用３Ｔ３放大实验继Ｓ＋／Ｌ－试验对其包装细胞（ＰＡ３１７／ＩＮ－sＦv）上清中ＲＣＲ进行了检测,并以野生型４０７０Ａ病毒为阳性对照。结果：含ＩＮsＦv的包装细胞上清中ＲＣＲ呈阴性,不同稀释度的阳性对照     

卵巢癌的基因治疗

卵巢癌的发生是多基因参与的过程,随着对癌基因、抑癌基因的深入研究,提出基因治疗是癌症治疗的最新策略。卵巢癌基因治疗的方法包括突变补偿、分子化疗、基因免疫治疗等措施,基因治疗将为临床治疗卵巢提供新的途径。     

逆转录病毒介导肿瘤坏死因子α基因修饰人胰腺癌细胞的建立

尽管胰腺癌手术、放疗和化疗有了新进展 ,但胰腺癌的预后仍很差。利用基因工程技术 ,将细胞因子基因修饰的肿瘤细胞作为瘤苗 ,已成为肿瘤生物治疗中的一项重要手段[1] 。肿瘤坏死因子 (ＴＮＦα)具有多方面的抗肿瘤效应 ,尤以激发或增强宿主抗肿瘤免疫应答最为重要。但ＴＮＦα可被机体很快清除 ,并会造成严重的全身不良反应 ,直接应用重组ＴＮＦα治疗胰腺癌的效果不理想。ＴＮＦα基因治疗胰腺癌正受到重视。我们利用逆转录病毒载体ＭｏＭＬＶ ,将ＴＮＦα基因转录致人胰腺癌细胞 ,经Ｇ418抗性筛选建立基因转导克隆后 ,在体外进行分子生物…     

逆转录病毒介导IL—2cDNA治疗小鼠淋巴瘤的研究

研究人白细胞介素－２转基因小鼠淋巴瘤体内成瘤性。方法：体外将ｈＩＬ－２基因转入小鼠淋巴瘤ｐ３８８细胞。用ＰＣＲ、ＲＴ－ＰＣＲ、ｄｏｔｂｌｏｔ法检测ｈＩＬ－２基因在细胞内的整合及表达,四甲基偶氮唑盐比色法检测转导细胞ｈＩＬ－２分泌。体内试验将动物分为Ａ９组,对照组和体内转当治疗组３组。１７ｄ后处死所有动物,观察肿瘤生长状况。结果：ｈＩＬ－２基因已成功地整合到小鼠ｐ３８８细胞基因组内。Ｐ３８８／ＩＬ－     

逆转录病毒介导白细胞介素12及白细胞介素2基因联合治疗大鼠肝癌

目的 :研究携带小鼠白细胞介素 12 (m IL- 12 )和人白细胞介素 2 (h IL- 2 )基因的逆转录病毒包装细胞株对大鼠肝癌进行联合基因治疗的可行性和疗效。 方法 :构建携带 m IL- 12基因、h IL- 2基因及 m IL- 12 +h IL- 2基因的逆转录病毒包装细胞PA317- GCIL12 EXPN、PA317- GCXEIL2 PN和 PA317- GCIL12 EIL2 PN,分别与肝癌细胞 CBRH3以 1∶ 1混合接种于大鼠腹腔。观察其生存时间。 结果 :生理盐水对照组、空载体对照组 (PA317- GCXEXPN)和 h IL - 2治疗组的平均生存时间分别为(8.5± 1.2 ) d、(8.3± 0 .9) d和 (16 .7± 1.7) d;m IL - 12治疗组和 m IL - 12 +h IL - 2治疗组均长期存活。逆转录病毒包装细胞与CBRH3的比例为 1∶ 10 0混合时 ,m IL - 12 +h IL - 2治疗组仍能长期存活 ,而 m IL - 12治疗组平均生存时间为 (15 .7± 1.8) d。腹腔接种 CBRH3后 1、3、5、7d,采用 m IL- 12 +h IL- 2治疗后 35 d生存率分别为 10 0 %、10 0 %、30 %、15 %。 结论 :携带 m IL- 12和 h IL - 2基因的逆转录包装细胞株可明显抑制肝癌细胞的生长 ,早期治疗优于晚期治疗 ,联合基因治疗比单基因治疗更有效     

逆转录病毒介导的标记基因neo导入恒河猴原代肌肉母细胞的实验研究

目的 :探索逆转录病毒介导的neo基因导入恒河猴原代肌肉母细胞的转染条件和方法。方法 :逆转录病毒上清在不同条件下与肌肉母细胞共同培养 ,观察肌肉母细胞体外增殖情况 ;用免疫荧光染色和流式细胞仪分析在转染过程中肌肉母细胞的表型Thy 1,NCAM和Desmin的变化 ;克隆PCR分析不同情况下导入基因的转染率和评价导入靶细胞标记基因的稳定性。结果 :含有 2 0 %FCS ,5 %鸡胚液的F10细胞培养液培养肌肉来源的干细胞能获得高纯度的肌肉母细胞Thy 1(85 0± 5 0 ) % ,NCAM (96 7± 5 8) % ,Desmin (95 7± 2 1) % ,而且这些表型不受转染的影响 ;持续暴露于病毒载体上清抑制肌肉母细胞的体外增殖 ;每天肌肉母细胞暴露于病毒载体上清 6h ,可获得 (6 3 9± 7 3) %的转染率 ,而且细胞体外增殖不受影响 ,转染后继续体外培养 2个月 ,转染率不下降。结论 :逆转录病毒介导的neo基因能高效率的导入肌肉母细胞 ,而且能稳定地整合到细胞DNA内 ,为在大体动物中肌肉母细胞可塑性的研究提供了工具     

逆转录病毒介导的MTS1基因在人膀胱癌细胞中的表达

逆转录病毒介导的ＭＴＳ１基因在人膀胱癌细胞中的表达袁建林１，惠宏襄２，黄斌３，柴玉波２，于茂生１，王成济２（１第四军医大学西京医院泌尿外科，西安７１００３３，２第四军医大学分子生物学和生物化学教研室３西安空军电讯工程学院医院）关键词逆转录病毒载体ＭＴ...     

p53基因治疗与放疗联合作用对卵巢癌细胞的杀伤效果

目的：探讨外源性p53基因转染与放疗联合作用对人卵巢癌细胞的杀伤效果。方法：用脂质体介导的转染技术，将人野生型p53基因的真核表达载体及不含p53基因的空载体分别导入不表达p53的卵巢癌SKOV-3细胞中，经G418筛选，Northern blot及Western blot鉴定后，观察X射线照射对其集落形成的影响。结果：外源性p53基因在转染细胞中有效表达。经X射线照射后，转染p53基因组的SKOV-3细胞的集落形成数与转染空载体组及未转染的SKOV-3细胞组相比，明显降低。结论：外源性p53基因能增加卵巢癌细胞对放射线的敏感性，2者联合作用能更有效地杀灭肿瘤细胞。     

腺病毒介导的野生型p53基因治疗肿瘤研究进展

恶性肿瘤的发生与基因突变有密切关系。抑癌基因p53编码转录因子P53蛋白在调控癌基因表达、DNA合成和损伤修复以及细胞凋亡中起关键作用。已证实50％以上肿瘤细胞存在p53基因突变，p53被认为在肿瘤形成中起非常重要作用。p53基因治疗的目的是纠正恶性细胞中突变的p53基因功能，在多种肿瘤的体内外试验中显示出明显疗效。作者就这方面研究进展作一综述，重点讨论腺病毒介导的p53基因治疗。     

RNA干扰与卵巢癌基因治疗

RNA干扰(RNAi)是由外源性或内源性双链RNA诱发的转录后基因沉默机制,能高效特异性抑制突变基因表达,恢复正常基因功能。卵巢癌的发生是多基因参与并经多阶段演进而形成的疾病,RNAi现象的发现为卵巢癌的基因治疗提供了一种新的思路。通过RNAi技术可抑制卵巢癌致癌基因的表达,阻断细胞凋亡与分裂,增强卵巢癌传统化疗药物的敏感性,抑制肿瘤的浸润与转移,RNAi可能成为卵巢癌基因治疗的新策略。本文就RNAi的分子机制、特性以及RNAi技术在卵巢癌基因治疗领域的应用进行综述。