芒果苷对H_2O_2诱导的BRL细胞氧化损伤的保护作用

目的探讨芒果苷对过氧化氢诱导的正常大鼠肝BRL细胞氧化损伤的保护作用。方法选取正常大鼠肝细胞株BRL,通过过氧化氢诱导法制备细胞氧化损伤模型,实验设对照组、H_2O_2组、芒果苷组。HE染色、台盼蓝染色观察细胞形态变化和存活率变化;比色法检测细胞中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性和丙二醛(MDA)含量;Western blot检测细胞中Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白表达变化。结果对照组BRL细胞贴壁生长良好,排列紧密。H_2O_2诱导后细胞形态不规则,胞膜皱缩,贴壁能力下降;细胞存活率降低;抗氧化酶SOD、GSH-Px活性降低,MDA含量升高(P0.05);Bax和Caspase-3蛋白表达升高(P0.05)、Bcl-2蛋白表达降低(P0.05)。与H_2O_2组相比,芒果苷可显著改善H_2O_2引起的细胞形态变化,提高细胞存活率;提高SOD、GSH-Px活性,降低MDA含量(P0.05);抑制Bax和Caspase-3蛋白表达(P0.05),上调Bcl-2蛋白表达(P0.05)。结论芒果苷对BRL细胞氧化损伤具有保护作用,其作用机制可能与其提高细胞清除氧自由基能力和抑制细胞凋亡有关。     

西红花酸对H_2O_2诱导PC12细胞损伤的保护作用

目的通过H2O2诱导PC12细胞损伤,建立氧化应激损伤的体外模型,以探讨西红花酸对细胞损伤的保护作用及其相关机制。方法观察不同浓度(0、50、100、200、300、400μmol/L)H2O2损伤PC12细胞12 h,用CCK-8检测细胞活力;不同浓度(0.1、1、5、10μmol/L)西红花酸预处理PC12细胞24 h,观察西红花酸对H2O2(200μmol/L)损伤细胞后的恢复作用,CCK-8检测细胞活力;罗丹明Rh123染色,流式检测线粒体膜电位(MMP);DCF-DA染色荧光照相术检测活性氧(ROS)水平;Western blot检测磷酸化ERK1/2的表达情况。结果 H2O2(0～400μmol/L)作用PC12细胞12 h后,细胞活力分别为(100±4.1)%、(102±1.9)%、(89±11.2)%、(52±2.6)%、(42±1.6)%、(8±0.4)%,细胞损伤呈明显的浓度依耐性;西红花酸预处理后,细胞活力由(45.12±3.15)%,分别上升为(51.88±4.24)%、(65.14±8.19)%、(57.66±5.58)%、(53.61±4.57)%;西红花酸(1μmol/L、5μmol/L)预处理组减少了线粒体膜电位(MMP)的下降,有效清除活性氧(ROS),激活磷酸化ERK1/2。结论上述实验表明西红花酸能对抗H2O2诱导的氧化应激损伤,表明西红花酸有抗氧化作用。     

脑源性神经营养因子保护H_2O_2诱导的氧化损伤血管内皮细胞

目的:研究脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)对过氧化氢(H2O2)诱导的氧化损伤血管内皮细胞的保护作用及其作用机制。方法:离体培养人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs),建立H2O2致HUVECs氧化损伤模型后,利用不同浓度(1、10和100μg/L)BDNF处理HUVECs,同时设置未损伤对照组、H2O2损伤后PBS处理组和Trk B inhibitor组(同时加入100μg/L BDNF和1∶1 000的Trk B inhibitor)。利用MTT方法检测各组细胞存活率;同时测定各组细胞中乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和还原型谷胱甘肽(GSH)水平变化;ELISA方法检测各组细胞分泌一氧化氮(NO)、内皮素1(ET-1)及细胞间黏附分子1(ICAM-1)的浓度变化;流式细胞术检测各组细胞中活性氧簇(ROS)含量及细胞凋亡的变化;Western blot检测各组细胞中Trk B、p-Trk B、cleaved caspase-3、Bcl-2及Bax的蛋白水平。结果:与未损伤组相比,经H2O2氧化损伤后,PBS处理组的HUVECs存活率显著下降,LDH和MDA含量显著上升而SOD和GSH的活性显著下降,细胞中NO分泌功能显著降低而ET-1和ICAM-1的分泌浓度则显著增加,ROS的含量和细胞凋亡率均显著上升,cleaved caspase-3和Bax的蛋白水平显著上升,Bcl-2蛋白表达则显著下降;与PBS处理组相比,不同浓度BDNF处理组中HUVECs的存活率逐渐上升,LDH和MDA含量逐渐下降,而SOD和GSH活性逐渐上升,细胞中的NO分泌量显著上升而ET-1和ICAM-1分泌量逐渐下降;ROS含量和细胞凋亡率则逐渐下降,Trk B和p-Trk B水平均显著上升,cleaved caspase-3和Bax的蛋白水平逐渐下降而Bcl-2蛋白表达逐渐上升,但BDNF的作用均受到Trk B inhibitor的抑制。结论:BDNF能够通过提高HUVECs细胞存活率,增强细胞抗氧化损伤能力,降低ROS产生和细胞凋亡率而保护氧化损伤的血管内皮细胞,并通过其与Trk B结合后激活BDNF-Trk B信号通路发挥作用。     

异丙酚对H_2O_2刺激下细胞内ASK1蛋白激活的影响

目的探讨在H2O2刺激下,异丙酚对细胞中Daxx-ASK1信号通路的影响。方法对体外培养的HEK293细胞分为对照组、H2O2刺激组以及H2O2刺激合并异丙酚处理组。采用免疫荧光、Westernblot及MTT等方法,观察异丙酚预处理对H2O2刺激下的HEK293细胞存活率以及细胞中Fas死亡结构域相关蛋白（Daxx）的亚细胞定位以及凋亡信号调节激酶1（ASK1）激活的影响。结果在200～500μmol/LH2O2刺激下,异丙酚在一定程度上能有效保护细胞,缓解抗氧化应激损伤。进一步实验发现,H2O2刺激细胞后,与H2O2刺激组相比,异丙酚处理组细胞中Daxx蛋白大部分仍然聚集在细胞核中,只有少部分移入到细胞浆中,相应ASK1的激活程度也较低。结论氧化应激刺激下,异丙酚可通过抑制细胞中Daxx蛋白的出核,进而抑制胞浆中ASK1蛋白的激活,从而起到保护细胞、抑制细胞死亡的效能。     

H_2O_2诱导的PC12应激损伤中CR及SIRT1参与的调节效应

目的研究H2O2诱导的PC12细胞（又称肾上腺嗜铬细胞瘤细胞）氧化应激损伤中,热量限制（caloric restriction,CR）参与的调控效应及SIRT1的表达变化。方法采用MTT法检测H2O2诱导的氧化应激损伤中CR对PC12细胞活力的影响;TUNEL染色法检测各实验组中PC12细胞的凋亡;免疫荧光检测PC12细胞中SIRT1的表达与定位;RT-PCR及Wester-blot检测各实验组中SIRT1、Caspase-3的表达。结果 60μmol/LH2O2作用6h后,H2O2组细胞活力可维持在70%以上,与正常对照组及CR组比较差异具有统计学意义;而120μmol/LH2O2作用下,H2O2组细胞活力显著下降。本实验选取60μmol/LH2O2浓度作为后续实验使用浓度。CR处理后PC12细胞的凋亡率较H2O2组显著降低。PC12细胞中SIRT1可于细胞浆和细胞核中表达,且主要于细胞浆中表达。H2O2作用6h后,与正常对照组相比SIRT1表达降低,Caspase-3表达上升;在CR＋H2O2组中,与H2O2组比较,Caspase-3降低,SIRT1表达上升。结论 CR具有抗应激损伤及凋亡的效应,可上调PC12细胞中SIRT1的表达,在H2O2诱导的PC12细胞应激性损伤中CR-SIRT1的调控具有保护效应。     

β-NGF和p75NTR在鼠胚触须隆突区的表达

目的 研究胚胎大鼠触须毛囊隆突区β-神经生长因子(β-NGF)、p75神经营养因子受体(p75NTR)与毛囊干细胞特异标志物的表达规律.方法 冰冻超薄切片,免疫组织化学方法.结果 胚胎大鼠的触须隆突区表达的β-NGF和p75NTn呈规律性变化.3种毛囊干细胞(HFSC)标志物的表达有差异,毛囊发生初期毛囊干细胞(HFSC)不仅仅定位于触须毛囊上段,整个毛囊下部3/4都有表达.结论 β-NGF和p75NTR的表达变化可能与毛囊干细胞以及毛囊的生物学特性有关.     

下调牛磺酸调节基因1减轻氧化低密度脂蛋白诱导的血管内皮细胞氧化损伤

目的研究牛磺酸调节基因1(TUG1)对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)氧化损伤的影响。方法将HUVECs分为:对照组、ox-LDL组(含有100 g/mL的ox-LDL细胞培养液)、si-NC+干预组(转染siRNA阴性对照)和si-TUG1+干预组(转染TUG1 siRNA)。实时定量PCR检测HUVECs中TUG1表达;DCFH-DA法检测细胞活性氧(ROS)水平;WST法检测细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性;TBA比色法检测培养液中丙二醛(MDA)含量;LD-P法检测培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性;硝酸还原酶法检测培养液中一氧化氮(NO)含量;流式细胞计量术检测细胞凋亡,Western blot检测细胞中c-caspase-3蛋白水平。结果 ox-LDL组HUVECs中TUG1表达水平较对照组升高(P0.05)。TUG1 siRNA转染可下调TUG1的表达(P0.05)。ox-LDL组HUVECs中的ROS水平升高(P0.05),SOD活性降低(P0.05),培养液中MDA含量升高(P0.05),LDH活性升高(P0.05),NO含量降低(P0.05),细胞凋亡率升高(P0.05),细胞中c-caspase-3蛋白水平升高(P0.05)。si-TUG1+干预组显著减轻ox-LDL组的上述变化(P0.05)。结论下调TUG1减轻ox-LDL诱导的HUVECs氧化损伤,减少HUVECs凋亡。     

补肾中药对大鼠BMSCs分泌NGFβ、BDNF、VEGF功能的影响

目的探讨不同补肾方药对大鼠BMSCs分泌NGFβ、BDNF、VEGF功能的影响作用。方法采用全骨髓贴壁法体外扩增培养BMSCs,流式细胞仪检测细胞表面抗原,ELISA法测定右归丸、左归丸、地黄饮子及中药联合RA诱导的大鼠BMSCs培养液中NGFβ、BDNF、VEGF的水平。结果第F3代BMSCs表面CD45-CD90+表达率为97%;与空白组比较,各药物组BMSCs培养液中NGFβ、BDNF、VEGF含量均明显增高(P0.01或P0.05);与RA组比较,地黄饮子组NGFβ、BDNF、VEGF含量明显增高(P0.01),左归丸组VEGF含量明显增高(P0.01);与右归丸组比较,地黄饮子组BDNF、VEGF含量明显增高(P0.01),左归丸组VEGF含量明显增高(P0.01);各中药联合RA组比单纯中药或RA单药组3种神经营养因子的含量均明显升高(P0.01)。结论右归丸、左归丸、地黄饮子、RA均能明显促进BMSCs分泌功能,并中药与RA具有协同促进作用;地黄饮子在促进BMSCs分泌BDNF和VEGF、左归丸在促进分泌VEGF功能方面优于右归丸。     

脊髓半横断损伤后腹角神经元神经生长因子、脑源性神经营养因子、神经营养因子-3和神经营养因子-4表达的变化

目的:探讨大鼠脊髓半横断损伤(htSCI)后脑源性神经营养因子(BDNF)、神经生长因子(NGF)、神经营养因子(NT-3、NT-4)在脊髓腹角神经元表达的早期变化。方法:免疫组织化学ABC法分别染4种神经因子并作阳性细胞计数。结果:NGF主要分布于脊髓腹角神经元的胞核,BDNF、NT-4与NT-3主要分布于胞浆。htSCI前后它们在细胞内的分布范围没有变化。BDNF、NGF与NT-3的3 d在损伤尾侧段脊髓双侧腹角阳性神经元数与对照组相比显著减少。BDNF与NGF的14 d的双侧腹角阳性神经元数量均较正常组明显增多,NT-3与NT-4的14 d~21 d的双侧腹角阳性神经元数量均较正常组明显增多,BDNF7~21 d以及NGF14 d的健侧的阳性神经元数量均分别多于相应的伤侧。结论:内源性BDNF、NGF、NT-3、NT-4增加对脊髓损伤修复具有重要作用,BDNF和NGF在健侧表达的增加说明健侧代偿功能的活跃。     

Tpc1808对H2O2诱导的C6细胞氧化应激性损伤的保护作用

目的:研究Tpc1808对H2O2诱导的C6细胞氧化应激性损伤的保护作用。方法:采用细胞培养、基因转染、MTT、LDH、免疫荧光组织化学、Western印迹等技术,以星形胶质瘤C6细胞为研究对象,以H2O2作为氧化应激刺激物,建立细胞损伤模型。结果:当终浓度为100μmol/L的H2O2作用于C6细胞24h后,MTT减小,LDH增加,细胞出现明显凋亡;转染Tpc1808基因的细胞受到保护,grp75表达量增加,与对照组相比有显著差异。结论:Tpc1808基因可以保护H2O2引起的C6细胞氧化应激性损伤,该保护作用可能是通过增加grp75表达实现的。     

CaMK Ⅱ活性对H_2O_2所致SK-N-SH细胞氧化应激损伤的影响

目的:评价钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)活性对过氧化氢所致人源性神经母细胞瘤细胞氧化应激损伤的影响。方法:SK-N-SH细胞生长至对数期时,接种于96孔培养板或6孔培养板,采用随机数字表法,将其分为4组:正常对照组,培养基中添加H_2O_2组(H_2O_2组),培养基中只添加CaMKⅡ活性抑制剂KN93组(KN93组),培养基中同时添加H_2O_2和KN93组(H_2O_2+KN93组),倒置显微镜观察细胞形态学,采用CCK-8法测定细胞活力,采用Fura-2/AM荧光法检测细胞内Ca~(2+)浓度([Ca~(2+)]_i),采用免疫印迹测定CaMKⅡ和磷酸化CaMKⅡ的表达,采用RT-PCR法检测CaMK mRNA表达。结果:与正常对照组比较,H202组细胞体呈圆形的细胞和脱落细胞增加,细胞突起长度缩短,细胞存活率降低,[Ca~(2+)]_i升高,磷酸化CaMKⅡ表达上调,CaMKⅡmRNA表达下调。与H_2O_2组比较,H_2O_2+KN93组脱落细胞明显减少,突起变长,细胞存活率增加,[Ca~(2+)]_i降低,磷酸化CaMKⅡ表达下调,CaMKⅡmRNA表达水平上调。结论:CaMKⅡ增强了H_2O_2诱导的人源性神经母细胞瘤细胞氧化应激损伤。     

系统性自身免疫性疾病的血管内皮损伤机制

<正>系统性自身免疫性疾病是免疫调节机制异常而出现的一系列临床疾病谱,可引起全身多器官和组织的病理损伤。近年来研究表明,血管内皮作为人类最大的器官,已成为自身免疫性疾病危及的部位。血管内皮细胞(En-dothelialCells,ECs)不仅是血管壁的衬里,还具有多种生理功能,除血管的保护和物质转运作用外,还参与机体的凝血、纤溶、免疫、血管的生长和血管运动的调节,并能产生和释放多种活性物质。血管内皮损伤与功能障碍可导致多种疾病的产生,特别是心血管疾病。     

银杏素调节TGF-β1/Smad通路对ox-LDL诱导血管内皮细胞损伤的影响

目的 探讨银杏素调节转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smad信号通路对ox-LDL诱导血管内皮细胞损伤的影响。方法 将人脐静脉血管内皮细胞HUVEC分为对照组（未处理的HUVEC细胞）、模型组（50μg/mL ox-LDL处理的HUVEC细胞）、银杏素组（50μg/mL ox-LDL+12.5μmol/L银杏素处理HUVEC细胞）、SRI-011381组（50μg/mL ox-LDL+10μmol/L的TGF-β1/Smad激活剂SRI-011381处理HUVEC细胞）、银杏素+SRI-011381组（50μg/mL ox-LDL+12.5μmol/L银杏素+10μmol/L的SRI-011381共同处理HUVEC细胞）。ELISA试剂盒检测HUVEC细胞丙二醛（MDA）、谷胱甘肽（GSH）、超氧化物歧化酶（SOD）、IL-6、IL-1β、TNF-α水平;CCK-8法检测HUVEC细胞增殖;流式细胞术检测HUVEC细胞凋亡率;Western blot检测细胞上皮间质转化（EMT）、TGF-β1/Smad通路相关蛋白表达。结果 与对照组相比,模型组IL-1β、IL-6、TNF-α、M...     

神经营养因子对视网膜缺血再灌注损伤的影响

视网膜缺血再灌注损伤是由于自由基、炎性细胞因子等细胞微环境的改变引起的病理过程,能造成视网膜及神经组织严重损伤。微环境包括对细胞产生影响的周围结构和成分,如附近的神经细胞、基质细胞和结合在胞外基质上的各种生长因子和细胞因子等。这些因子有的具有保护视网膜作用,如神经生长因子、睫状神经营养因子、脑源性神经营养因子、碱性成纤维细胞生长因子等;有的具有损伤作用,如血管内皮生长因子等。本文结合文献以这些因子在视网膜缺血再灌注损伤中的作用作一综述。     

雌激素对H_2O_2所致N2a细胞损伤的保护作用

目的探讨雌激素对氧自由基(H_2O_2)所致野生型鼠成神经瘤细胞株(N2a)损伤的保护作用及机制。方法应用H_2O_2制作N2a细胞凋亡的细胞模型,采用细胞计数、酶组织化学、免疫细胞化学方法,检测在雌激素作用下,神经细胞的形态结构、细胞活性和细胞早期凋亡的相关性变化。结果细胞计数结果显示,雌激素组的细胞数量[(0.60±0.12)个/mL(×10~4)]高于其它组,雌激素加H_2O_2组的细胞数量[(0.51±0.11]×104个/mL)明显高于H2O2组[(0.30±0.09)×10~4个/mL],组间差异有统计学意义(P0.05)。免疫细胞化学染色显示,Akt1阳性反应在雌激素组最强,在H2O2组最弱,但雌激素加H_2O_2组与正常对照组Akt1的表达没有明显差别,介于两者之间。Fasl呈相反变化。Caspase3酶活性检测结果显示,H_2O_2组Caspase3酶活性最高,雌激素加H_2O_2组Caspase3酶活性明显降低,其差别有统计学意义(P0.01)。结论雌激素有促进N2a细胞生长的作用,并可保护H_2O_2对N2a细胞的损伤且可以对抗凋亡。     

复方丹参滴丸对过氧化氢损伤的血管内皮细胞的保护作用与机制

目的：观察复方丹参滴丸对过氧化氢（H202）损伤人脐静脉内皮细（HUVEC）损伤的保护作用，探讨其对心脑血管疾病治疗的机制，以及在防治心脑血管疾病中的意义。方法：用0.1mmol／L H2O2制造HUVEC损伤模型，按分组分别把不同浓度的丹参滴丸（0．5g／L、0．25g／L、0．1g/L）于损伤前、损伤后加入，分别测定细胞活力（MTT法）即观察滴丸对H2O2损伤内皮细胞活性的影响；硫代巴比妥酸法测定细胞内脂质过氧化产物丙二醛（MDA），硝酸酶还原法测定细胞培养液中一氧化氮含量；免疫细胞化学法观察内皮细胞NOS2 NOS3,NF-κB的表达情况。     

GDNF及HSV—GDNF对坐骨神经损伤大鼠脊髓运动神经元Bcl—2表达的影响

目的：观察胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）及单纯疱疹病毒（HSV）载体介导的GDNF（HSV－GDNF）对坐骨神经损伤大鼠脊髓运动神经元了Bcl-2表达的影响。方法：分别取坐骨神经损伤后4d、7d和14d大鼠（）分成对照组、GDNF组和HSV－GDNF组）的腰段脊髓）L4－6）,行石蜡包埋,切片、;用抗Bcl-2抗血清进行免疫组织化学染色,观察Bcl-2免疫反应（Bcl-2－IR）神经元数目,并在图像分析仪Bcl-2－IR阳性神经元作光密度的色谱分析。结果：1．坐骨神经损伤后4d、7d,GDNF组和HSV－GDNF组损伤侧脊髓运动神经Bcl-2－IR阳性神经元的数量和平均光密度均明显高于对照组损伤测,2．坐骨神经损伤后14d时,对照组、GDNF组和HSV－GDNF组损伤侧脊髓运动神经元对Bcl-2的表达已无明显差别。结论GDNF与HSV－GDNF能够增强坐骨神经扣内务 大鼠脊髓运动神经元Bcl-2的表达,减少神经元的退化死亡。     

内质网应激介导蜕皮甾酮对H2 O2 诱导的心肌细胞损伤的保护作用

目的:探讨蜕皮甾酮(EDS)如何通过调节内质网应激对过氧化氢(H2 O2 )诱导的心肌细胞损伤起保护作用。方法:大鼠H9c2 心肌细胞随机分为对照(Control)组,正常心肌细胞;H2 O2 组,不同浓度H2 O2(1*10-3 、1*10-4 、1*10-5 mol/ L)诱导损伤细胞;EDS 组,在H2 O2 组基础上,加入不同浓度的EDS(25、50、100 μmol/ L)处理。MTT 法和流式细胞术分别检测实验各组细胞活力及细胞凋亡率。Western blot 检测各组细胞中Bcl-2、Bax、cleaved-caspase-3、caspase-4、caspase-7、caspase-12、 GRP78 和CHOP 的蛋白水平,同时检测各组细胞中丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果:与Control 组相比,H2 O2 组的细胞活力减弱,凋亡率升高,MOD 含量升高,SOD 活性降低,GRP78 和CHOP 的表达升高(均P<0.05)。H2 O2 组加入EDS 处理后,细胞活力提升,凋亡率下降,MOD 含量降低,SOD 活性升高,GRP78 和CHOP 的表达降低(均P<0.05)。结论:通过抑制内质网的应激过程,蜕皮甾酮能减轻H2 O2 诱导的心肌细胞损伤。     

细胞色素2J3基因转染减轻大鼠胸主动脉球囊损伤后血管狭窄程度的初步机制

血管介入治疗是目前治疗外周血管阻塞性疾病和心脑血管疾病常用的方法,但术后血管再狭窄（Restenosis,RS）是血管介入治疗常见的主要问题。目前已知RS至少包括下述病理变化：（1）血管内皮细胞损伤、功能障碍;（2）血管平滑肌细胞对缩血管物质和促细胞分裂物质反应性增强而异常增殖,致增殖与凋亡调控失衡;（3）损伤局部促凝物质增加,血小板及白细胞易与血管壁发生黏附,附壁血栓形成。