显微镜观察药物敏感度检测技术在结核分枝杆菌吡嗪酰胺耐药性检测中的应用

目的建立显微镜观察药物敏感度检测(MODS)技术快速测定吡嗪酰胺(PZA)耐药性,并探讨其在结核分枝杆菌(MTB)PZA耐药性测定中的应用价值。方法用24孔细胞培养板建立MODS技术,进行PZA耐药性检测,并对最佳检测条件进行探讨。将该技术用于112株MTB临床分离株的PZA耐药性检测,将检测结果与罗氏绝对浓度法的药敏结果进行比较分析,对不符合的菌株进行最低抑菌浓度(MIC)测定和MTB pncA基因序列测定分析。结果 MODS检测PZA耐药性的最佳测定条件为pH=5.7,药物浓度为100μg/mL。如以绝对浓度法药敏结果为判断标准,MODS检测PZA耐药性的敏感度、特异度、准确度、阳性预测值和阴性预测值分别为95.7%、88.4%、92.9%、93.0%和92.7%。MODS与绝对浓度法检测结果不符的8株菌株中,MIC和pncA基因测序结果表明,有6株的MODS结果与MIC和pncA基因测序结果相符,2株的结果不符。结论 MODS检测MTBPZA耐药性具有快速、操作简便、价廉等优点,与绝对浓度法药敏结果有较高的符合率,可作为PZA耐药性的快速筛选方法之一。     

异烟肼、利福平、吡嗪酰胺和盐酸乙胺丁醇联合治疗结核分枝杆菌的作用研究

目的 探讨临床治疗结核分枝杆菌疾病采用异烟肼、利福平、吡嗪酰胺、盐酸乙胺丁醇4种药物联合治疗的效果与价值。方法 方便选择2019年10月—2022年12月宜兴市人民医院接诊治疗的104例结核分枝杆菌阳性患者为研究对象,根据随机数表分为对照组(52例,采取常规治疗)与观察组(52例,在对照组基础上采用异烟肼、利福平、吡嗪酰胺、盐酸乙胺丁醇四药联合治疗)。比较两组治疗效果、治疗前后疾病症状评分、治疗后结核分枝杆菌转阴情况,比较两组患者治疗后不良反应情况。结果 治疗后,观察组总有效率96.15%高于对照组,差异有统计学意义(χ²=6.029,P<0.05)。治疗后,观察组患者疾病症状评分低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组患者治疗后1、2、3个月转阴率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。两组患者治疗期间不良反应发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 临床治疗结核分枝杆菌疾病可采用异烟肼、利福平、吡嗪酰胺、盐酸乙胺丁醇4种药物联合方式,具有确切疗效,能够快速改善症状,促进结核分枝杆菌转阴。     

含吡嗪酰胺抗痨治疗方案的肝毒性临床观察

对203例结核病患者用含吡嗪酰胺(PZA)方案治疗产生肝脏毒性进行分析,发生率为16.7％,较国内外报告的1～5％为高。5种含PZA方案肝毒性反应的发生率无差异(P>0.05),91％肝毒性发生在开始治疗两个月内,绝大多数预后良好。肝功能的GPT100单位以下者多在4周内恢复,100单位及以上者大多需8周以上恢复正常。如伴有黄疸个别可出现严重肝功能损害。提示含PZA方案一般较安全,但应严格掌握含PZA方案的适应症;用药早期要注意作好肝功能监测。     

住院病人结核分枝杆菌药物敏感性试验结果分析

目的：了解和分析新疆地区2001～2012年12年间结核分枝杆菌药物敏感性试验结果,为临床第一线治疗结核病提供可靠的科学依据。方法：用BACTEC MGIT-960系统对不同来源的临床标本进行药物敏感试验。结果：12年间临床送检标本共计分离出分枝杆菌6611株。药物敏感性试验以单耐链霉素S者比例最高（8.33%）,其他依次是异烟肼H（7.26%）、利福平R（4.30%）、乙胺丁醇E（4.22%）。耐多药结核（HR＋HRS＋HRE＋HRSE）菌株占11.82%,对上述四种药全耐药的有151株（2.28%）。结论：与1996年～2000年相比,2001～2012年12年间的单耐药率,除耐E基本持平外,其他三种药物（H、R、S）均有明显下降;耐多药结核与1996年～2000年16.5%相比下降了4.68%。总体耐药率呈下降趋势。     

吡嗪酰胺临床给药方法

吡嗪酰胺是治疗结核病的一线药物,对处于酸性环境中的细胞内非繁殖期结核菌有抑制和杀灭作用,在目前结核病治疗中具有重要地位.抗结核药物如利福平、异烟肼等的临床给药方法均为每日1次顿服,然关于吡嗪酰胺的临床用法说法不一,医师由于担心吡嗪酰胺的不良反应,常嘱每日多次服用,部分医师通过个别资料认为每日应多次给药.     

吡嗪酰胺致过敏反应1例

1临床资料 患者，女，51岁，因咳嗽、咯痰1个月，伴咯血2d，于2007年5月6日入院。查体：T36．4℃、P89／min、R21／min、BP110／80mmHg，胸廓对称，两肺未闻及干湿性罗音，心率86次／min，律齐，各瓣膜区未闻及病理性杂音。X线胸片显示右肺上中野见絮状条索状模糊阴影；痰涂片抗酸杆菌（＋＋）；白细胞8．6×10^9／L、淋巴细胞0．35；红细胞沉降率87mm／1h；肝功正常；既往无过敏史。     

吡嗪酰胺敏感性检测在结核病治疗中的应用

目的：了解中国南方地区结核分枝杆菌对吡嗪酰胺（ PZA）耐药的分子特征,同时探讨PZA耐药性对菌阳肺结核治疗效果的影响。方法采用MGIT960系统检测161株结核分枝杆菌的PZA耐药性。同时对上述菌株的pncA和rpsA基因进行测序,分析PZA耐药株与敏感株的突变特征。对161例菌阳结核病患者进行回顾性分析,根据结核分枝杆菌药敏试验结果进行分组,对PZA敏感,非耐多药结核病（ MDR－TB ）患者为组1;对PZA耐药,非MDR－TB患者为组2;对PZA敏感,MDR－TB患者为组3;对PZA耐药,MDR－TB为组4。以上患者强化期均使用PZA治疗,在强化期结束后,对痰菌转阴和病灶吸收情况进行分析。结果（1）161株结核分枝杆菌中,PZA耐药52株,耐药率32.3％（52／161）,敏感109株。57例 MDR－TB 患者中, PZA 耐药39例,耐药率68.4％（39／57）,104例非MDR－TB患者中,PZA耐药13例,耐药率12.5％（13／104）。（2）52株PZA耐药株中,44株pncA基因发生突变,突变率84.6％（44／52）,109株PZA敏感株pncA基因没有发生突变;3株PZA耐药株rp-sA基因发生突变,1株敏感株发生rpsA突变。（3）强化期结束后,组1、组2、组3、组4痰菌阴转率分别为82.42％、46.15％、61.11％和33.33％,组2、组3、组4分别与组1比较,组3与组4比较,差异有统计学意义（ P＜0.05）;组2与组4比较差异无统计学意义（P＞0.05）。（4）与治疗前相比,强化期结束后,组1、组2、组3、组4病灶吸收好转率分别是84.62％、46.15％、61.10％和35.90％。组2、3、4分别与组1比较,差异有统计学意义（ P＜0.05）,组2与组4,组3与组4比较,差异均无统计学意义（P＞0.05）。结论（1）pncA基因突变是结核分枝杆菌PZA耐药的主要机制,突变特征是高度多样性。（2）使用MGIT960系统分析结合对PZA耐药相关基因进行测序分析,所得PZA敏感性结果基本与临床治疗结果一致。（3） PZA在MDR－TB患者中耐药率较高。基于其疗效较对PZA敏感的耐多药结核病差,同时鉴于PZA可导致肝毒性,应避免在PZA耐药的结核病患者中继续使用PZA。     

吡嗪酰胺的毒副作用51例分析

本文 2 0 0 0年对 15 3例应用吡嗪酰胺患者进行抗结核治疗 ,在治疗过程中有 5 1例出现毒副作用 ,现分析如下。1　临床资料5 1例病人中 ,男性 2 9例 ,女性 2 2例。年龄在 14～ 75岁之间 ,平均年龄为 4 4 5岁。治疗剂量均为 2 0ｇ ,隔日顿服 ,使用时间为 5ｄ～ 3个月 ,平均为 4 7 5ｄ。所有副作用在停用吡嗪酰胺后症状均消失 ,再用吡嗪酰胺后副作用重新出现后证实 ,经对症处理后症状缓解者继续用药。5 1例患者在治疗过程中 ,有 3 4 %出现 2种或 2种以上的副作用 ,13例出现胃肠道反应 ,11例改为临睡前服 2 0ｇ/隔日 ,有所缓解 ,继续用药 ,2…     

吡嗪酰胺的研究进展

目的 介绍吡嗪酰胺的研究进展。方法 本文对吡嗪酰胺的化学合成法和微生物催化转化法进行了综述,并对两者进行了比较。同时,对吡嗪酰胺的应用也作了探讨。结果 与化学法生产吡嗪酰胺相比,微生物法催化转化2-氰基吡嗪生产吡嗪酰胺,具有反应条件温和,产物产率高和纯度高等优点。结论 吡嗪酰胺是一种重要的抗结核药物。由于在医药和化工方面的广泛应用,其研究越来越引起人们的重视。     

Performance of the microscopic observation drug susceptibility assay in pyrazinamide susceptibility testing for Mycobacterium tuberculosis

Background Drug susceptibility assay is very important in tuberculosis therapy. Pyrazinamide is a first line antituberculosis drug and diagnosis of its resistance in Mycobacterium tuberculosis （M. tuberculosis） is difficult and time consuming by conventional methods. In this study, we aimed to evaluate the performance of the microscopic observation drug susceptibility （MODS） assay in the detection of pyrazinamide resistance in M. tuberculosis relative to the conventional Wayne assay and Lowenstein-Jensen （L J） proportion method. Methods M. tuberculosis clinical isolates （n=132） were tested by the MODS and the Wayne assay： the results were compared with those obtained by the LJ proportion method. Mutations in the gene were identified by direct sequencing of the pncA genes of all isolates in which pyrazinamide resistance was detected by any of the three methods. Results Compared to the LJ results, the sensitivity and specificity of the MODS assay were 97.8% and 96.5% respectively; the sensitivity and specificity of the Wayne assay were 87.0% and 97.7% respectively. Mutations in the pncA gene were found in 41 of 46 strains that were pyrazinamide resistant （3 tests）, in 1 of the 4 strains （LJ only）, in 42 of 48 strains （at least I test）, but no mutations in 1 strain sensitive according to the MODS assay only. The MODS assay, Wayne assay and LJ proportion method provided results in a median time of 6, 7 and 26 days respectively. Conclusions MODS assay offers a rapid, simple and reliable method for the detection of pyrazinamide resistance in M. tuberculosis and is an optimal alternative method in resource limited countries.     

结核杆菌对四种二线药物的敏感性试验

目的测定结核分枝杆菌对二线药物的敏感性,为结核病的防治提供理论依据。方法采用绝对浓度法的间接法测定结核分枝杆菌对卡那霉素（KM）、（左）氧氟沙星（OFLX）、环丙沙星（CFX）、对氨基水杨酸（PAS）四种药物的耐药性。结果60株结核杆菌对单一药敏试验耐药率高低次序是：PAC（100％）、KM（39．3％）、CFX（18．3％）、OFLX（16．7％）。结论结核分枝杆菌对KM、OFLX、CFX、PAS的初始耐药率处于上升水平,必须进一步加强对耐药结核杆菌的监控。     

耐多药结核分枝杆菌对二线抗结核药物敏感性观察

目的：了解本地区耐多药结核分枝杆菌对二线抗结核药物耐药状况,为治疗耐多药结核病提供参考。方法：收集本院2010年1月~2012年12月来自涂阳肺结核患者的痰培养阳性、经菌种鉴定和一线药物的药物敏感性试验确定为耐多药的结核分枝杆菌株77株,采用绝对浓度法对五种二线抗结核药物：氧氟沙星、对氨基水杨酸、丁胺卡那、卷曲霉素及丙硫异烟胺进行药物敏感性检测,并对耐药状况进行分析。结果：2010~2012年本院培养分离出MDR-MTB77株,其中25株来自初治肺结核患者,52株来自复治肺结核患者,对5种二线药物的总耐药率为72.73%（56/77）,初治耐药率为60.0%(15/25),复治耐药率71.15%（37/52）;XDR-MTB21株占27.27%（21/77）,其中来自初治者1例（4%）,来自复治者20例（38.46%）。MDR-MTB对PAS、AMK、CPM、OFLX、Pto的耐药率分别为 33.77%、14.29%、19.48%、64.94%和24.68%。MDR-MTB对不同组合的二线抗结核药物（OFLX Pto、OFLX CPM Pto、OFLX AMK Pto、OFLX Pto PAS、 CPM PAS OFLX Pto、和AMK PAS OFLX Pto）分别为23.38%、10.39%、5.19%、12.99%、6.49% 和6.49%。结论：无锡地区MDR-MTB对二线抗结核药物耐药性较严重,应加强对MDR-MTB的耐药性监测,合理选择二线抗结核药物治疗MDR-TB。     

两种方法对结核杆菌耐多药性检测结果的比较

目的对照比例法,探讨线性探针技术(Genotype MTBDRplus)对耐多药结核分枝杆菌进行快速诊断的应用价值。方法收集宝鸡市2014年部分县区疾控分离培养结核杆菌阳性菌株,以传统药敏技术(比例法)作为对照参比,评价MTBDRplus法对阳性菌株的耐多药性检测以及对异烟肼和利福平耐药性检测的灵敏度、特异性。结果 MTBDRplus法和比例法对耐多药的检出率为均为46.7%,二者的耐多药检出率一致。对照比例法,线性探针技术检测出MDR-TB的敏感性和特异性分别为92.9%和93.8%,检测出异烟肼的敏感性和特异性分别为100.0%和90.9%,检测出利福平的敏感性和特异性分别为94.7%和100.0%,差异均无统计学意义(χ2=0.00,P0.05)。结论 MTBDRplus法操作简单快捷,结果准确,为耐多药性结核病的快速诊断提供有利依据。因此,该项技术可结合传统药敏在临床上推广应用。     

An explainable machine learning platform for pyrazinamide resistance prediction and genetic feature identification of Mycobacterium tuberculosis

ObjectiveTuberculosis is the leading cause of death from a single infectious agent. The emergence of antimicrobial resistant Mycobacterium tuberculosis strains makes the problem more severe. Pyrazinamide (PZA) is an important component for short-course treatment regimens and first- and second-line treatment regimens. This research aims for fast diagnosis of M. tuberculosis resistance to PZA and identification of genetic features causing resistance.Materials and MethodsWe use clinically collected genomic data of M. tuberculosis that are resistant or susceptible to PZA. A machine learning platform is built to diagnose PZA resistance using the whole genome sequence data, and to identify resistance genes and mutations. The platform consists of a deep convolutional neural network (DCNN) model for resistance diagnosis and a support vector machine (SVM) model as a surrogate to identify resistance genes and mutations.ResultsThe DCNN model achieves a PZA resistance diagnosis accuracy of 93%. Each prediction takes less than a second. The SVM has revealed 2 novel genes, embB and gyrA, besides the well-known pncA gene, and 9 mutations that harbor PZA resistance.DiscussionThe DCNN and SVM machine learning platform, if used together with the real-time genome sequencing machines, could allow for rapid PZA diagnosis, allowing for critical time to ensure good patient outcomes, and preventing outbreaks of deadly infections. Furthermore, identifying pertinent resistance genes and mutations will help researchers better understand the biological mechanisms behind resistance.ConclusionsMachine learning can be used to achieve high-accuracy resistance prediction, and identify genes and mutations causing the resistance.     

美蓝还原法快速测定结核分枝杆菌药物敏感性

目的探讨美蓝还原法快速测定结核分枝杆菌(MTB)药物敏感性,以建立一种简单、快速、敏感和低成本的药敏方法。方法用美蓝还原法测定50株结核分枝杆菌抗结核药物的药敏性,并将结果与传统改良罗氏培养基的绝对浓度法的结果进行比较分析。结果美蓝还原法进行INH、RFP、EMB、SM、LVFX药敏试验的敏感性分别为88.2%、94.7%、90%、91.2%、85.7%;特异性分别为93.8%、93.5%、100%、93.8%、95.3%;准确性分别为90.0%、94.0%、94.0%、96.0%、94.0%。两种方法测得MIC的相同率分别为88.0%、94.0%、90.0%、96.0%、92.0%。结论通过与绝对浓度法比较,美蓝还原法快速测定结核分枝杆菌药物敏感性具有简单、快速、成本低廉且敏感性较高的优点,可以成为抗结核药物药敏试验方法之一。     

Hain和Xpert MTB/RIF技术对结核分枝杆菌药物敏感性的检测

目的应用线性探针耐多药检测技术(Hain)和利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术(Xpert MTB/RIF)分析辽宁地区耐多药结核分枝杆菌(multiple-drug resistant Mycobacterium tuberculosis,MDR-TB)的检出情况,为本地区结核病的控制及临床诊断治疗提供科学依据。方法收集193株结核分枝杆菌菌株应用Hain、Xpert MTB/RIF和比例法鉴定利福平(rifampin,RFP)和异烟肼(isoniazid,INH)的耐药性;以比例法为金标准,分析另外两种方法检测耐药结核分枝杆菌的敏感性和特异性。结果 Hain检测利福平耐药的灵敏度为81.8%(72/88),特异度为87.6%(92/105);Hain检测异烟肼耐药的灵敏度为81.2%(82/101),特异度为70.7%(65/92);Hain检测MDR-TB的灵敏度为76.7%(46/60),特异度为81.2%(108/133);Xpert MTB/RIF检测利福平耐药的灵敏度为90.9%(80/88),特异度为81.9%(86/105)。Hain、Xpert MTB/RIF两种检测方法与比例法相比差异均无统计学意义(P0.05)。结论 Hain和Xpert MTB/RIF是快速有效地检测结核分枝杆菌耐药的方法,适用于辽宁地区结核病患者耐药性检测。     

两种结核分枝杆菌药物敏感性试验室间质量评估方法评价

目的探讨药敏试验复检和熟练度测试两种方法在药敏检测实验室室间质量评估中的应用,选择适当的室间质控方法。方法湖北省结核病参比实验室转种30株国家一线药物熟练度测试菌株,下发至4个地市实验室进行熟练度测试,同时省级随机抽取4个地市已完成一线药敏检测的临床菌株各30株进行复检。实验室均按照《结核病诊断实验室检测规程》中比例法(罗氏培养基)进行药敏测试,省参比实验室将两种评估方法得到的结果进行比较分析。结果 4个实验室药敏试验复检和熟练度测试两种方法得到4种药物平均符合率分别为INH 94.8%(90.0%~100.0%)和100.0%、RFP 94.8%(92.3%~96.2%)和98.3%(96.7%~100.0%)、SM90.7%(84.6%~95.0%)和91.7%(90.0%~93.3%)、EMB 92.8%(88.5%~96.0%)和87.5%(80.0%~93.3%),符合率均达到了WHO和国家结核病参比实验室药物敏感性检测的要求。结论药敏试验复检和熟练度测试两种方法进行室间质量控制,满足对实验室能力评价的需要,质控结果可靠,达到国家要求。